分离纯化蛋白质样品的方法

分离纯化蛋白质样品的方法

蛋白质的分离纯化是研究蛋白质结构、化学组成和生物功能的基础。蛋白质在自然界中存在于复杂的混合体系中，而且许多重要的蛋白质在细胞中含量极低。要把蛋白质从复杂的体系中分离出来，同时又要防止其组成、结构的改变和生物活性的丧失，显然啊是有相当难度的。下面简要介绍一些常用的蛋白质纯化分离方法。

1.离心法

蛋白质分子在其溶液中能够运动和扩散，同时受重力场的作用还有沉降的趋势，分子越大越重，扩散越慢而沉降越快。因此可借助离心力场，外加各种密度的介质使蛋白质沉淀，以达到分离目的。

如果两种蛋白质的沉降系数相差一个数量级（10倍）以上，可用差速离心反复多次达到分离效果。如果两种蛋白质的沉降系数相差不到一个数量级，那么应使用密度梯度技术。

密度梯度离心，是指离心时离心管中的介质是不均一的，从近中心到远中心密度不断增加形成梯度。常用的密度梯度介质有甘油、蔗糖、溴化钾、氯化铯。选用介质要注意福利密度范围，被分离的蛋白质密度不能大于介质的最大密度，而且所选介质不能影响蛋白活性。2.沉淀法

沉淀是溶液中溶质由液相变成固相析出的过程。它的原理是根据不同物质在溶剂中的溶解度不同而达到分离目的。它是分离纯化蛋白质最常用的方法，通过沉淀，将目的蛋白转入固相沉淀或留在液相中，与杂质分离。

3.透析法

透析是利用蛋白质大分子对半透膜的不可透性而使其与其他小分子分开的方法。透析的动力是扩散压，透析的速度与膜的厚度成反比，而与欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯

度及膜的温度和面积成正比。透析膜可以用玻璃纸/火棉胶和动物膀胱等，但应用最多的还是纤维制成的透析膜。膜孔径是透析膜的关键。

4.过滤法

过滤法是利用不同孔径的介质，截留一定大小的颗粒。按截留能力可分为过滤、微过滤和超滤。超滤技术是近年发展能起来的分析蛋白质的新方法。其原理是里用一种特制的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤。当溶液在一定压力下（外源氮气压或真空泵压）通过膜时，溶液和小分子透过，大分子受阻截留于原来的溶液中，从而使大分子物质得到纯化。