竹叶提取物清除DPPH自由基的测定方法

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竹叶柴胡总黄酮提取及抗氧化作用研究

竹叶柴胡总黄酮提取及抗氧化作用研究
陈桐;侯林清;覃凡倚;甘鑫睿;叶峻
【期刊名称】《辽宁化工》
【年(卷),期】2023(52)2
【摘要】为探究竹叶柴胡的药效机理,采用超声辅助法提取了竹叶柴胡中总黄酮,并确定了最佳工艺如下:提取剂为40%乙醇,料液比为1∶55,超声功率为200 W,温度为70℃,时间为50 min。

所测样品中总黄酮质量分数为46.45 g·kg^(-1),且竹叶柴胡提取液对DPPH和羟基自由基均有较好的清除率。

研究表明,竹叶柴胡有较好的抗氧化活性,具有抗病毒、抗衰老、抗癌等药效作用。

【总页数】4页(P187-189)
【作者】陈桐;侯林清;覃凡倚;甘鑫睿;叶峻
【作者单位】成都师范学院化学与生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
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2.大蒜皮总黄酮的提取及其抗氧化作用的研究
3.超声波辅助法提取假苹婆树皮总黄酮及其抗氧化作用研究
4.款冬总黄酮提取优化及其降脂抗氧化作用研究
5.水城小黄姜总黄酮提取工艺优化及抗氧化作用研究
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竹叶多糖提取分离及体外抗氧化自由基的研究

第49卷第6期2021年3月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.49No.6Mar.2021竹叶多糖提取分离及体外抗氧化自由基的研究周先泰陈蓉1,齐娜▽(1桂林医学院药学院，广西桂林541000；2南方医科大学中西医结合医院，广东广州510315)摘要:探讨竹叶多糖含量及体外抗氧化能力。

水提醇沉法得到竹叶粗多糖。

Sevag法脱蛋白和D101大孔树脂分离纯化, DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯脐)法和邻苯三酚法对粗多糖抗氧化性进行研究。

研究发现粗多糖收率0.525%,蛋白含量占粗多糖37.71%。

0.66mg/mL对DPPH自由基清除效果最大，清除率55.23%。

多糖浓度0.107-0.301mg/mL范围，对超氧自由基的清除效果逐渐提升。

结果表明水提醇沉法提取竹叶粗多糖产率较好，具有较好的体外抗氧化活性。

关键词：竹叶多糖；水提醇沉法；抗氧化；DPPH法；邻苯三酚法中图分类号：R285.5文献标志码：B文章编号：1001-9677(2021)06-0080-05Extraction and Separation of Polysaccharides from Bamboo andStudy on Antioxidant Free Radicals in Vitro*ZHOU Xian-tai1,CHEN Rong1,QI Na12(1College of Pharmacy,Guilin Medical University,Guangxi Guilin541000；2Integrated Hospital ofTraditional Chinese Medicine,Southern Medical University,Guangdong Guangzhou510315,China)Abstract:The content of polysaccharide and antioxidant capacity in vitro were studied.The crude polysaccharide of bamboo was obtained by water extraction and alcohol precipitation.Sevag method was used to take off the protein and D101 macroporous resin to purification,the antioxidant activity of crude polysaccharides was studied by DPPH(1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine)and o-phenylene three phenol method.The yield of bamboo polysaccharide by water extraction and alcohol precipitation was0.525%,and protein content accounted for37.71%of crude polysaccharide.When the solubility of crude polysaccharide was0.66mg/mL,the scavenging effect of DPPH radical was the highest,which was55.23%. When the solubility of crude polysaccharide was in the range of0.107~0.301mg/mL,the scavenging effect on superoxide radical was gradually improved.The results showed that the yield of crude polysaccharide from bamboo leaves was better by water extraction and alcohol precipitation,and crude polysaccharides had good antioxidant activity in vitro.Key words：Lophatherum Gracile Brongn polysaccharide;water extraction and alcohol precipitation；antioxidant; DPPH method；0-phenylene three phenol method竹子为禾本科(Gramineae)植物B,广泛分布于亚非大陆、南北美洲及太平诸岛地区，我国竹林资源占世界竹林资源的3%⑵。

清除DPPH自由基能力检测方法

清除DPPH自由基能力检测方法清除DPPH自由基能力是用来评价化合物在体外是否具有抗氧化活性的一种常用方法。

DPPH自由基是一种常用的自由基模型，其具有紫色，可通过其吸收峰的变化来反映清除能力。

以下是常用的几种用于检测清除DPPH自由基能力的方法：1.分光光度法分光光度法是一种常用的检测方法，基本原理是通过测量化合物与DPPH反应后的溶液吸光度的变化来评估清除DPPH自由基能力。

实验过程如下：1）准备1mM的DPPH乙醇溶液。

2）将待测化合物按一定浓度体系添加到相应的试管中。

3）将相同体积的DPPH溶液加入到每个试管中，混匀。

4）放置在室温下，静置反应30分钟。

5）使用紫外可见分光光度计测量反应体系的吸光度，计算清除率。

2.电子顺磁共振法（EPR）电子顺磁共振法是另一种常用的方法，通过测量化合物对DPPH自由基的清除能力，进而评估其抗氧化活性。

实验过程如下：1）准备含有DPPH和待测化合物的溶液。

2）使用电子顺磁共振仪测量样品的EPR信号，同时测量含有DPPH和不含DPPH的样品作为参比。

3）通过比较样品与参比的EPR信号来计算清除率。

3.原子力显微镜方法（AFM）原子力显微镜方法是一种非常灵敏的方法，可以用于直接观察化合物对DPPH自由基的清除作用。

实验过程如下：1）制备DPPH自由基薄膜。

2）将待测化合物沉积到DPPH自由基薄膜上。

3）使用原子力显微镜观察样品的表面形态变化。

4）通过观察DPPH颜色的变化和表面形态的变化来评估清除率。

4.荧光法荧光法是一种快速、灵敏且简便的检测方法，利用化合物与DPPH反应后荧光上转换的变化来评估清除DPPH自由基能力。

实验过程如下：1）制备DPPH乙醇溶液。

2）将待测化合物与DPPH溶液混合。

3）使用荧光光谱仪测量样品的荧光强度的变化。

4）通过荧光强度的变化来计算清除率。

总结：以上所述是几种常用于检测清除DPPH自由基能力的方法，分别基于吸光度、EPR、AFM和荧光等原理。

DPPH自由基清除测定

DPPH法测定黄苓黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。

目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。

DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。

它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。

向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH •使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。

即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH •的效果，来计算抗氧化能力。

实验研究表明，黄苓黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄苓苷[1]，黄苓苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：O2NN02 NO2DPPH与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（ 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇;仪器：分光光度计1. DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3 . 5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol / L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。

2. 试液的制备（只作参考）准确称取5.2mg干燥的黄酮提取物（32.75%）,用无水乙醇溶解，并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol/L 试液。

3. DPPH-清除率的测定在10mL比色管中依次加入 4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值（A），吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。

DPPH自由基清除与普用自由基清除实验（水溶液）-实验流程图-操作..

DPPH·自由基清除法(修改版)李熙灿（广州中医药大学中药学院, 2019.6）【原理】1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基, 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical, 简称为DPPH·自由基。

由于分子中存在大π键，所以，该自由基能稳定存在。

且在519nm处，有最大吸收波长。

当DPPH·自由基被清除时，其在519nm处的吸光度（A519nm），会相应地减少。

因此，通过检测A519nm值，可以判断DPPH·是否被清除。

如果某个样品能清除DPPH·，就具有一定的自由基清除活性（或称“抗氧化活性”）。

【操作图解】【计算公式】【说明】1. 样品溶液的浓度，也是可以调整的。

不过，为了方便实验，宜配高浓度（如3mg/mL）。

2. 操作图解中的用量，都是可以调整的，需要自行摸索。

3. 当样品溶液的加入量为0 μL 时，所测得的A值即为A0。

4. 实验最好做三个平行样，以减少误差。

【实例】二氢杨梅素的DPPH清除实验的结果二氢杨梅素样品：浓度：0.1mg/ml 溶剂：95%乙醇数据整理：二氢杨梅素原始数据：水溶液中“普用”自由基清除的实验操作图2019.6 【参考文献】Xican Li. 2-Phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-oxide (PT IO•) Radical-scavenging: A New and Simple Antioxidant. Journal of Agricultural & Food Chemistry. 2017, 65, 6288−6297.【简介】“普用”自由基，原名是PTIO自由基。

它是一种能溶于水的自由基，所以，可以在水溶液中进行自由基的清除实验。

这比DPPH自由基清除实验更合理；因为DPPH自由基清除只能是有机溶剂（如乙醇、甲醇）中进行。

2024DPPH清除自由基方法

2024DPPH清除自由基方法2024年，一种新的清除自由基的方法被引入，该方法使用DPPH试剂。

DPPH（1,1-二苯基-2-三甲基-苦基-2-脒基），是一种广泛应用于生物医学研究中的人工氧化剂。

DPPH试剂呈紫色，并且可与捕获自由基反应后转变成无色。

因此，通过测量DPPH试剂的颜色变化，可以评估抗氧化物质对自由基的清除能力。

DPPH清除自由基方法是一种简单、快速且经济的方法。

它适用于各种类型的样品，包括天然产物、食品、药物和化妆品。

使用DPPH试剂测定抗氧化能力的方法主要有两种：溶液试剂法和固相试剂法。

溶液试剂法是最常用的DPPH清除自由基方法之一、在这种方法中，首先将DPPH试剂以适当浓度溶解在溶剂中，通常使用甲醇或乙醇。

然后，将样品与DPPH溶液混合，反应一定时间。

在反应过程中，DPPH试剂将与样品中的抗氧化物质反应，使DPPH试剂转变为无色。

通过测量反应溶液的吸收光谱或测定其吸光度的变化，可以计算出样品的清除自由基能力。

固相试剂法是一种近年来发展起来的新方法。

在这种方法中，固定DPPH试剂在固相载体上，通常使用硅胶或其他吸附剂。

样品溶液被滴加到载体上，自由基会与固相DPPH试剂发生反应，并转变成无色。

然后，通过测量吸附剂的颜色变化或对比吸附剂的吸光度，可以确定样品的清除自由基能力。

DPPH清除自由基方法的优点之一是它不需要复杂的仪器设备，因此可以应用于各种实验室条件。

此外，DPPH试剂的制备相对简单，价格也相对较低。

这使得DPPH清除自由基方法成为研究抗氧化剂的吸引人选择。

然而，DPPH清除自由基方法也存在一些限制。

首先，DPPH试剂只能评估清除自由基的能力，而不能提供有关抗氧化物质的详细信息。

此外，该方法不能区分不同类型的自由基，因此不能用于研究具体自由基类型的清除能力。

最后，溶液试剂法和固相试剂法都需要一定时间的反应才能得到准确的结果，这可能会造成实验中的误差。

总的来说，DPPH清除自由基方法是一种简单有效的方法，用于评估样品的抗氧化能力。

竹醋液及其提取物清除DPPH·自由基活性的研究

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第２卷７
第６期
浙
江
林
业
科
技
ＴＥＣＨ
Ｖｏ．７Ｎｏ６１２．
２年１月７００１
ＩＣＩＪＵＲ．ＯＦＺＨＥＪＡＮＧＦＯＲ．Ｓ．＆Ｏ
Ｎｏ．２００７ｖ，
文章编号：１０ —７６（０７）０ —０４００１３７２０６０２ —５
加入７８ｎ浓度为０２ｇｍｌＤＰ・．ｒＪ．５ｍ／的ＰＨ甲醇溶液，０立即混匀，５７ｎ处测吸光度，同时用溶剂甲醇作于１ｎｌ
参比测定其吸光度Ａ。按照下列公式计算清除率，清
除率越大抗氧化能力越强。
ＤＰＨ・Ｐ剩余率＝Ｃｐ．／Ｏ０％ＤｐｎＣ ×１０
目前，苯代苦味酰肼（ＰＨ・）自由基被广泛应用于天然物质的抗氧化力评价［】ＰＨ・二ＤＰ】。ＤＰ自由基是一种很稳定的自由基，在乙醇溶液中呈深紫色，在紫外可见分光光度计５７ｎ处有最大吸收峰，当有自由基清除１ｎｉ剂存在时其颜色减退，褪色程度与清除剂的清除能力及数量呈定量关系。因此，可用分光光度法进行定量分析，
１抗氧化性测定．４
１．标准曲线制作．１４
准确称取ＤＰ・准品２ｇＰＨ标５ｍ，用甲醇定容至５０ｍ，得浓度为００ｇｍ的标准溶０ｌ．ｍ／ｌ５
液，再用甲醇倍比稀释成浓度为０２０．１０．６２、００３１、００５／￣的溶液，用７２．５０、０２５、００５．３．１６ｎ０００００ｍｇ５型紫

DPPH自由基清除实验教学(详细版)

DPPH实验步骤一、原理：DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。

作为一种稳定的自由基，DPPH可以捕获("清除")其他的自由基。

因此通过加入DPPH后观察某一化学反应的速率是否减慢，来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。

由于DPPH自由基在以520nm为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。

DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。

有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。

此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

二、实验步骤：1.配制0.1mM的DPPH溶液：配两次，每次取0.002gDPPH溶于50mL乙醇，避光保存。

2.配制0.5mg/mL的Vc溶液，至少2mL（设为阳性对照，选择性做）3.配制一定浓度的样品溶液，至少2mL母液（也可以配制不同溶度梯度样品，计算IC50）4.上板（避光操作，上完板后，室温避光30分钟，测吸光度）96孔板，三组，每组设3个复孔，每孔加入量及96孔板分布如下：sample（样品组）：样品溶液100uL+ DPPH醇溶液100uL (每个浓度3个孔)blank（空白组）：样品溶液100uL+无水乙醇100uL （每个浓度3个孔）control（对照组）：DPPH 醇溶液100uL+水100uL （一块板可共用一个对照组,3个孔）样品VC浓度 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 sampleblankcontrol5.检测并计算清除率测517nm处的吸光度，取平均値，计算每个浓度的DPPH清除率，做出折线图。

用清除有机自由基评价竹叶提取物抗氧化能力

第28卷,第7期光谱学与光谱分析Vol 128,No 17,pp1578215822008年7月 Spectroscopy and Spectral Analysis J uly ,2008　用清除有机自由基DPPH 法评价竹叶提取物抗氧化能力郭雪峰,岳永德3,汤　锋,王　进,姚　曦国际竹藤网络中心,国家林业局竹藤科学与技术重点开放实验室,北京　100102摘　要　通过对1,12二苯基苦基苯肼(DPP H )溶液吸收光谱、DPP H 溶液反应体系的研究,得出以下结论,分光光度法测定DPP H 溶液反应体系的测定波长为51814nm ,反应体系为4100mL 25717mg ・L -1的DP 2P H 溶液中加1mL 不同浓度的抗氧化剂,反应体系加入抗氧化剂后反应时间为40min ;用上述方法研究评价合成抗氧化剂叔丁基对苯二酚(TB HQ )和2,62二叔丁基对甲酚(B H T )对DPP H 自由基清除率和浓度的关系,以IC 50值(清除率为50%时,抗氧化剂的浓度值)作为评价指标,测得合成抗氧化剂和效果最好竹叶提取物样品IC 50值分别为,TB HQ (21114mg ・L -1),B H T (42109mg ・L -1),M40(108140mg ・L -1),M40等竹叶提取物可以作为天然抗氧化剂进行开发。

关键词　竹叶提取物;1,12二苯基苦基苯肼;清除率;IC 50值中图分类号:TS20112 文献标识码:A 文章编号:100020593(2008)0721578205　收稿日期:2007209208,修订日期:2007212218　基金项目:国家“十一五”科技支撑项目(2006BAD19B08)和国际竹藤网络中心基本科研业务费专项资金(06/072B14)资助　作者简介:郭雪峰,1972年生,国际竹藤网络中心讲师 3通讯联系人 e 2mail :yueyd @引　言竹叶作为一种“药食两用的天然植物”已被广大消费者所接受,竹叶提取物主要功能性成分为竹叶黄酮糖苷,具有抗氧化和抑菌活性,可以作为一种生物黄酮类保健营养素进行开发,前景广阔。

2012.9.17 DPPH清除自由基试验计划与报告(修改)

DPPH 自由基清除实验1 试剂与仪器DPPH的乙醇溶液，本科女生做的，0.04 mg/ml （应该冰箱保存，低温，避光）糖膏：本科女生的一份，还有鲁小静的一份紫外可见分光光度计三楼一台。

四楼一台2 实验方法糖膏配置成为固定浓度溶液水溶液，按照2 ml：4 ml或者2 ml：2 ml混合，橱柜内黑暗室温放置30 min之后再316 nm左右波长测量吸光度。

应该是516 nm分别测量三个吸光度值（每组三个平行），可以根据文献中公式计算自由基清除率，另外根据不同浓度糖的吸光度或者不同浓度糖对于自由基的清除能力得到一条曲线。

糖溶液+DPPH水/乙醇+DPPH糖溶液+乙醇3 现已经得到数据3.2 女本科生第二次数据结论：可能是糖溶液的浓度不够高，DPPH与糖反应后基本没有吸收3.3 鲁小静师姐样品结论：DPPH可能浓度偏大，与相应的DPPH相比，10 mg/ml浓度糖溶液与DPPH反应刚刚合适，按照网上公示计算，大概清除率为48 %4 试验计划4.1 存在问题：DPPH浓度太高了，吸光度太高，需要降低DPPH浓度，或者是改变糖溶液与DPPH配比。

糖溶液的浓度需要重新调节。

使之差不多能达到3.3中A=0.509的比例10 mg/ml 糖溶液，吸光度A=0.509时溶液具体分析：4.2 试验计划10mg/ml浓度的糖与DPPH混合得到吸光度大概0.509，相对应如果按照2 ml加入2 ml 可能需要糖的浓度降低一倍。

计划：每个浓度要测三组吸光度值，每组三个重复A0:水（2mL）+DPPH（2mL）A1：糖（2mL）+DPPH（2mL）A2：糖（2mL）+水（2mL）。

竹叶提取物清除DPPH自由基的测定方法

收稿日期:2003-11-06 修回日期:2004-12-05基金项目:福建省林业厅基金资助项目(闽林[2000]08).作者简介:郑德勇(1966-),男,副教授.研究方向:树木提取物、林产化工工艺与设备.竹叶提取物清除DPPH 自由基的测定方法郑德勇1,安鑫南2(1.福建农林大学材料工程学院,福建福州350002;2.南京林业大学化学工程学院,江苏南京210037)摘要:确定了以光度计比色法测定天然抗氧化剂清除二苯基苦基苯肼(DPPH )自由基能力的条件.通过测定抗坏血酸、槲皮素、硫脲和芦丁的DPPH 自由基清除率曲线,提出以IC 50值作为评价试样清除DPPH 自由基能力的指标,并将此应用于21种丛生竹竹叶提取物清除DPPH 自由基能力的测定.关键词:竹叶提取物;光度计比色法;清除能力;二苯基苦基苯肼中图分类号:Q946文献标识码:A 文章编号:100627817(2005)0120059204D eterm i n i n g m ethod of D PPH free rad i ca l scaveng i n g acti v ity of bam boo leaf extracti ves ZHENG De 2yong 1,AN Xin 2nan 2(1.College of Materials Engineering,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou,Fujian 350002,China;2.College of Che m ical Engineering,Nanjing Forestry University,Nanjing,J iangshu 210037,China )Abstract:A s pectr ophot ometric method f or deter m ining 1,12di phenyl 222p icryl 2hydrazyl (DPPH )free radical scavenging activity of natural anti oxidants was put f or ward .The evaluating criteri on of DPPH free radical scavenging activity was regarded as “I C 50”by deter m ining the scavenging rate curves of ascorbic acid,quercetin,thi ocarba m ide and rutin .The DPPH free radical scavenging ac 2tivity of extractives fr om 21s pecies of cluster 2ba mboo ′s leaf were deter m ined by this method .Key words:leaf extractive of cluster 2ba mboo;s pectr ophot ometry;scavenging activity;1,12di phenyl 222p icryl 2hydrazyl植物抗氧化剂广泛应用于食品、医药、保健品和化妆品等行业[1-4].竹叶抽提物含有黄酮、苷类、活性多糖及特种氨基酸等[5,6],具有显著的抗氧活性、防腐性能和抑菌作用[7-9].竹叶提取物中的抗氧化有效成分主要是水溶、醇溶性物质,可通过测定二苯基苦基苯肼(DPPH )自由基的清除能力进行抗氧化活性研究.清除自由基的检测方法有许多种[10,11],体内试验比较灵敏、繁琐,周期较长,费用高,不适于大量样品的测定.大量样品的抗氧化活性筛选需采用体外实验法[12-15],其中电子自旋共振波谱法(ESR )是测定自由基的最直接而有效的体外试验技术,但需要昂贵的仪器和复杂的自由基捕集技术.DPPH 检测法[16,17]是通过DPPH 分子中1个稳定的自由基与抗氧化剂提供的1个电子配对结合,使DPPH 的特征紫色消失,因此可用于抗氧化剂清除自由基能力的评价.1　材料与方法1.1　仪器与试剂HP1100高效液相色谱仪(DAD 检测器)为美国安捷伦公司产品;UV2000型紫外分光光度计为上海光谱仪器厂产品.DPPH 的质量分数≥95%(Sig ma 产品).配制6.5×10-4mol ・L -1乙醇贮备液,置于冰箱,临用前用体积分数为50%的乙醇稀释.槲皮素、芦丁的质量分数≥95%.其他试剂均为分析纯.1.2　试样的制备竹叶采集于福建农林大学南平校区校园和南平市城郊林场丛生竹种源地.取约500g 竹叶,用清水洗净晾干,用微波炉加热30s 杀青,取出风干,破碎,并过20-80目筛,备用.取2份各5.0g 竹叶试样,分别经20mL 石油醚脱脂处理后,加入100mL 体积分数为60%的乙醇50℃提取10h (2次),倒出提取液,抽福建农林大学学报(自然科学版)第34卷第1期Journal of Fujian Agriculture and Forestry University (Natural Science Editi on )2005年3月滤,离心分离,提取液50℃真空浓缩,体积分数为50%的乙醇定容25.0mL,得到测试液.1.3　清除自由基能力的测定在试管中依次加入2.5mL 6.5×10-5mol ・L -1DPPH 溶液和1.5mL 体积分数为50%的乙醇,总体积为4.0mL,混匀20m in 后,于1c m 比色皿中测定D (517n m ),记为D 0;加入2.5mL 6.5×10-5mol ・L -1的DPPH 溶液和1.5mL 待测试样溶液,测定值记为D s ;加入2.5mL 体积分数为50%的乙醇和1.5mL 待测试样溶液,测定值记为D r .按式(1)计算DPPH 自由基清除率[18,19].清除率/%=1-D s -D r D 0×100(1)　抗氧化剂清除自由基能力采用清除DPPH 的I C 50值表示.将待测抗氧化剂配制成系列溶液,测定抗氧化剂质量与DPPH 自由基清除率,并绘制曲线,由曲线读取DPPH 自由基清除率为50%时所需抗氧化剂质量,按式(2)计算IC 50值.重复测定2次,平均值即为测定结果.因此,IC 50的物理意义为:当达到50%清除率时,单位质量抗氧化剂所清除的DPPH 质量.I C 50=50%×加入的DPPH 质量试样溶液中溶质质量(2)　1.4　提取物成分的测定取5.0mL 试液用烘干法测定固含物.采用按亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量[20].采用HP LC 法测定芦丁含量,色谱条件为L i Chr os pher 100RP 28色谱柱(长100mm ,直径3.9mm ),甲醇∶磷酸(质量分数为0.3%)=65∶35,流速为0.8mL ・m in -1,进样6μL,检测波长为256nm.2　结果与分析图1　D PPH 紫外吸收光谱图　Fig .1　UV s pectrum of DPPH2.1　D PPH 紫外吸收光谱与测定波长的确定每个DPPH 分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基,具有典型紫色,当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时,生成无色产物,使溶液的典型紫色变浅.分别测定加入适量芦丁和槲皮素后的DPPH 溶液于280-600n m 的紫外光谱图.由图1可知,DPPH 溶液在320和517n m 的光密度都具有极大值,加入芦丁和槲皮素后这2个极大值都降低了,且517nm 处的极大值降低较显著,故选用D (517nm )表示DPPH 含量的变化可提高测定灵敏度.2.2　D PPH 溶液稳定性试验为了了解DPPH 自由基测定体系在天然抗氧化剂作用下光密度值随时间的变化规律,在DPPH 溶液中加入3种不同含量的槲皮素,每隔5-10m in 测定D (517nm ).结果表明在最初20m in 内,光密度下降较快;在20-40m in 内,反应体系的光密度基本保持不变;而50m in 后光密度的下降也有加快趋势.故测定时选定反应时间为20-30m in 较适宜.2.3　D PPH 溶液光密度曲线的测定在1.0×10-6-634×10-6mol ・L -1内按一定浓度间距配制18个系列DPPH 标准溶液,测定溶液的D (517n m ).结果发现,在1.0×10-6-200×10-6mol ・L -1范围内DPPH 溶液浓度与其光密度基本呈线性关系.线性方程为y =7116x +0.0035,R =0.9995,F =7281>F 0.01(1,8)=11.3(y 表示光密度值,0.05≤y ≤1.5;x 表示DPPH 含量).说明DPPH 溶液的光密度在一定范围内可表示为溶液中DPPH 的浓度,相应DP 2PH 溶液浓度的线性范围为1.0×10-5-20×10-5mol ・L -1. 抗坏血酸、槲皮素、芦丁和硫脲等在2.0×10-6-2000×10-6mol ・L -1内按一定浓度间距用体积分数・06・福建农林大学学报(自然科学版)第34卷为50%的乙醇配制成13个系列标准溶液,测定其DPPH 清除率.各抗氧化剂的DPPH 清除率与各抗氧化剂浓度均呈近似指数关系,在抗氧化剂浓度较低时,DPPH 清除率迅速上升,抗氧化剂浓度与DPPH 清除率之间接近线性关系;DPPH 清除率达到极大值时,继续提高抗氧化剂浓度,其DPPH 清除率不再上升.2.4　几种抗氧化剂的DPPH 清除率曲线研究各种抗氧化剂清除DPPH 的能力中发现,抗氧化剂浓度在4.0×10-6-40×10-6mol ・L -1范围内抗氧化剂浓度与DPPH 清除率之间基本呈线性关系.线性方程分别表示如下.抗坏血酸:y 1=16302x +0.2586,R =0.999,F =1884>F 0.01(1,3)=34.1;槲皮素:y 2=7471.3x +0.0675,R =0.977,F =64.2>F 0.01(1,3)=34.1;芦丁:y 3=5488.5x +0.118,R =0.986,F =104.7>F 0.01(1,3)=34.1;硫脲:y 4=7330.5x +0.1154,R =0.989,F =130.4>F 0.01(1,3)=34.1.其中:y 为DPPH 清除率,x 为抗氧化剂浓度.可见,在一定范围内,可以用DPPH 清除率表示抗氧化剂的自由基清除能力.　图2　几种抗氧化剂的D PPH 清除率曲线　Fig .2　Rates of scanvenging DPPH free radical activity of anti oxidants2.5　D PPH 清除能力的表示方法由于采用的DPPH 试液与试样溶液的浓度不同,不同试验测得的自由基清除率难以比较,造成测定资源浪费;此外,当抗氧化剂浓度较高时,其浓度与DPPH 清除率不成线性关系.因此“清除率”不能很好地表示抗氧化剂的活性.从图2中曲线形状可以看出,采用清除率极大值点或其他特征点所对应的抗氧化剂含量比较合理.由于极值点的测定较困难,误差也较大,而I C 50较易在曲线上准确标定,因此选择抗氧化剂的自由基清除能力为测定指标.采用该法测定的抗坏血酸、槲皮素、硫脲和芦丁的IC 50分别为8.31、1.00、3.82、0.41.IC 50值越高,抗氧化剂的自由基清除能力越强,可见抗坏血酸是较强的抗氧化剂.2.6　竹叶提取物清除D PPH 能力的测定选择抗氧化剂的自由基清除能力为测定指标,测定了21种丛生竹竹叶提取物的DPPH 清除率,并绘制曲线,计算出黄酮和固形物的IC 50.每种竹叶提取物均具有一定的清除自由基能力.与2.5节的测定结果相比,竹叶提取物以黄酮计算的IC 50与以槲皮素计算的比较接近,而以固形物计算的I C 50约为芦丁的50%.但竹叶提取物中不仅含有具有清除自由基能力的黄酮类,活性多糖类、特种氨基酸、植物内部的活性氧代谢、抗氧化酶活性[21,22]和各种微量元素、叶绿素等物质,也可能对IC 50的测定造成影响,因此究竟哪些成分对清除自由基能力贡献较大,尚需进一步研究.3　小结通过研究DPPH 溶液紫外光谱、浓度与光密度的关系,以及在DPPH 溶液中加入槲皮素和芦丁后的光密度特性等,认为采用比色法测定天然抗氧化剂清除自由基能力的条件是:波长517nm ,反应时间20-30m in .通过测定抗坏血酸、槲皮素、芦丁和硫脲的DPPH 清除率曲线,提出以IC 50值作为评价试样清除自由基能力的指标,抗坏血酸、槲皮素、硫脲和芦丁的I C 50分别为8.31、1.00、3.82、0.41.进而测定21种丛生竹竹叶提取物清除自由基的能力,分别以黄酮和固形物计算的I C 50值分别为1.07和0.19.致谢:丛生竹试样采集得到福建农林大学林学院陈世品和南平市城郊林业站吴丽华的大力支持和帮助,特此致谢|・16・第1期郑德勇等:竹叶提取物清除DPPH 自由基的测定方法参考文献:[1]郑德勇,安鑫南.植物抗氧化剂研究展望[J ].福建林学院学报,2004,24(1):88-91.[2]李清禄,林新华.增效脂溶性茶多酚溶液的制备及其在食用植物油中的抗氧化性能[J ].福建农业大学学报,2001,30(2):244-249.[3]林河通,邹日娥.延长冷藏龙眼果实货架寿命的技术[J ].福建农业大学学报,1997,26(1):113-118.[4]郑宝东,陈丽娇.几种抗氧化剂对余甘汁抗氧化的影响[J ].福建农业大学学报,1994,23(3):347-350.[5]陆志科,谢碧霞.竹叶化学成分的分析与资源的开发利用[J ].林业科技开发,2003,17(1):6-9.[6]许钢,张虹,胡剑.竹叶中的黄酮的提取研究[J ].分析化学研究简报,1999,27(7):857-859.[7]唐莉莉.竹叶多糖的分离提取及活性研究[J ].食品研究与开发,2000,21(1):8-10.[8]郑德勇,安鑫南.丛生竹叶提取物的成分与清除自由基的能力[J ].福建林学院学报,2004,24(3):193-196.[9]姚志湘,粟晖,韦建平,等.竹叶中有效成分的提取条件及抗氧化的活性研究[J 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4种竹叶营养成分分析及其黄酮提取物体外抗氧化活性研究

4种竹叶营养成分分析及其黄酮提取物体外抗氧化活性研究欧阳吾乐; 雷福红; 杨亚晋; 刘莉莉; 李青青; 郭爱伟【期刊名称】《《天然产物研究与开发》》【年(卷),期】2019(031)010【总页数】7页(P1669-1674,1830)【关键词】竹叶; 营养成分; 黄酮提取物; 抗氧化【作者】欧阳吾乐; 雷福红; 杨亚晋; 刘莉莉; 李青青; 郭爱伟【作者单位】西南林业大学生命科学学院; 云南省高校林木生物技术重点实验室昆明650224【正文语种】中文【中图分类】R284.2竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，全世界记载的竹子约有60属1 200多种，广泛分布于东南亚、印度、中国、日本和南美等地[1]。

我国约有30属300余种[2]，而云南有“竹类故乡”之誉，是公认的竹类植物的起源地和现代分布中心之一，有29属220种，特有种在100种以上[3]。

竹叶具有一定的药用功效，中国古代许多药典都记载了竹子的药用价值，在《中华本草》中收录了紫竹(Phyllostachys nigra)、淡竹 (Phyllostachys glauca)、苦竹(Pleioblastus amarus)、毛竹(Phyllostachys heterocycla)、慈竹(Neosinocalamus affinis)、刺竹(Bambusa blumeana Schult.f)和桂竹(Phyllostachys bambusoides)等竹，竹叶具有清热除烦、消痰、止咳、健脾、生津利尿等功效，主治热病、烦渴、小儿惊痫、舌疮等[4]。

近年来竹子植物化学方面的研究表明，竹叶中含有许多天然活性成分如黄酮类、生物碱、有机酸、萜类、酚类、蒽醌、鞣质、皂甙、多糖等化合物[5]，其中黄酮类化合物是竹叶中重要的活性物质，竹叶中黄酮含量较高的有麻竹(Dendrocalamus latiflorus)为2.02%，毛金竹(Phyllostachys nigra)为1.98%，毛竹为1.70%，高节竹(Phyllostachys prominens)为1.55%，较低的有四季竹(Oligostachyum lubricum)(1.18%)和苦竹(1.35%)等[6]。

用清除有机自由基DPPH法评价竹叶提取物抗氧化能力

１３溶液配制．
１３１样品试液的配制．．
法ｌ等，＿４还有很多清除自由基的检测评价方法ｌ］这些方５，
法都有各自的不足之处。１１二苯基苦基苯肼（，－ｉｈｎｌ，－１１Ｄｐｅｙ一
２ｐｃｙｈｄａｙ，ＤＰ检测法是通过分子中１个稳定的－ｉｌｙｒｚｌＰＨ）ｒ
分光光度法测定ＤＰＨ溶液反应体系的测定波长为５８４ｎｎＰ１．ｒ，反应体系为４０５．．０ｍＬ２７７ｍｇ・的ＤＰＬ — ＰＨ溶液中加１ｍＬ不同浓度的抗氧化剂，反应体系加入抗氧化剂后反应时间为４ｎ０ｍｉ；用上述方法研究评价合成抗氧化剂叔丁基对苯二酚（ＢＴＨＱ）２６￣叔丁基对甲酚（ＨＴ）ＤＰ自由基清除率和浓度的关和，－－Ｂ对ＰＨ
毛竹（ｈｌｓｃｙｕｉ）ｐｙｌｔｈｓｄｌ叶于２０ｏａｅｓ０６年９月采自江苏南
京林业大学竹种园。取６００ｇ毛竹叶粉，９％乙醇，度６０５温Ｏ
℃ ，回流提取４次，取液过滤浓缩得竹叶提取物浸膏。竹提叶提取物浸膏溶解于９乙醇后过Ａ－５Ｂ８大孔树脂柱，分别
用纯水、２乙醇、Ｏ乙醇、Ｏ乙醇、８乙醇、酮洗Ｏ４６Ｏ丙
脱，洗脱组分弃用，他洗脱组分浓缩得干膏，备用。各水其
洗脱组分分别简称如下：Ｍ２，毛竹叶提取物浸膏过Ａ８０Ｂ－大孔树脂柱，水洗脱后，Ｏ乙醇洗脱下组分；０２乙２Ｍ４，０醇洗脱后，Ｏ乙醇洗脱下组分；Ｍ６，４％乙醇洗脱后，４％００６乙醇洗脱下组分；Ｍ８，６乙醇洗脱后，８乙醇洗Ｏ００Ｏ脱下组分；ＭＡ，８乙醇洗脱后，０丙酮洗脱下组分。

清除DPPH自由基能力检测方法

DPPH自由基清除法[文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.[原理] DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。

分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。

N22当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。

DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。

[实验步骤]1.1 DPPH测试液的配制取DPPH 1mg溶于约20mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。

取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。

该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。

1.2 样品液的配制样品用合适的溶剂溶解，为便于计算，可配成1mg/mL浓度。

溶剂根据样品的极性进行选择，首选95乙醇或无水乙醇，如不溶可用DMSO。

1.3 预试取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。

此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。

【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则100μL为该样品液的最大用量。

其用量梯度宜设为40、80、120 、160、200μL。

1.4测量A0值的测量：取DPPH溶液2 mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，加95乙醇（或无水乙醇）1mL，充分混合，测A值（519nm），此A值为A0（A0多在0.7-0.9之间）。

dpph自由基清除实验

DPPH自由基清除实验引言自由基是一类具有不成对电子的化学物质，它们高度活跃且能够引发细胞氧化损伤。

因此，寻找有效的抗氧化剂来清除自由基对细胞和健康的影响至关重要。

DPPH（2，2-二苯基-1-苦味肼）是一种常用的化学试剂，被广泛用于评估抗氧化剂的活性。

本实验旨在使用DPPH自由基清除实验来评估抗氧化剂的抗氧化性能。

实验步骤1.准备实验样品，可以选择不同的抗氧化剂，如维生素C、维生素E等。

2.准备DPPH溶液，将适量的DPPH溶解在乙醇中，摇匀使其充分溶解，最后得到0.1 mM的DPPH溶液。

3.取一定量的DPPH溶液（如2 mL），加入试管中。

4.分别将不同浓度的抗氧化剂溶液（如0.1 mM，0.2mM，0.3 mM等）加入不同的试管中。

5.快速摇匀试管，使DPPH和抗氧化剂充分接触。

6.将试管放置在室温下静置15分钟，使反应充分进行。

7.使用分光光度计测定每个试管中溶液的吸光度，记录下数值。

数据处理1.计算抗氧化剂的清除率，清除率的计算公式为：（A₀ - A₁）/ A₀ × 100%。

其中，A₀为对照组（只有DPPH 溶液）的吸光度，A₁为实验组的吸光度。

2.绘制抗氧化剂浓度与清除率之间的曲线图，以展示不同浓度下清除率的变化趋势。

结果与讨论根据实验数据绘制的曲线图，可以看出抗氧化剂的清除率随着浓度的增加而增加。

这说明抗氧化剂对DPPH自由基具有较好的清除能力。

其中，浓度为0.3 mM的抗氧化剂表现出最大的清除率，清除率超过90%。

而浓度较低的抗氧化剂，如0.1 mM的清除率较低，仅为50%左右。

通过本实验可以初步评估抗氧化剂的抗氧化性能。

然而，需要注意的是实验中使用的DPPH自由基只是模拟体内自由基的一种方式，实际中还需要进一步研究抗氧化剂在体内的表现和效果。

结论本实验使用DPPH自由基清除实验评估了不同浓度抗氧化剂的抗氧化性能。

结果表明抗氧化剂的清除率随浓度的增加而增加，0.3 mM浓度的抗氧化剂表现出最佳的清除能力。

竹醋液及其提取物清除DPPH·自由基活性的研究

竹醋液及其提取物清除DPPH自由基活性的研究
钱华;王衍彬;张邦川;许炯;柏明娥;蒋应梯
【期刊名称】《浙江林业科技》
【年(卷),期】2007(27)6
【摘要】用DPPH·法测定了竹醋液及其提取物的抗氧化活性.结果表明,竹醋液及其提取物对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)具有较强的清除能力,但其提取物清除自由基能力(APR)是竹醋液的6.27倍;其反应动力学方程不符合线性关系.
【总页数】5页(P24-28)
【作者】钱华;王衍彬;张邦川;许炯;柏明娥;蒋应梯
【作者单位】浙江省林业科学研究院,浙江,杭州,310023;浙江省林业科学研究院,浙江,杭州,310023;浙江省云和县林业局,浙江,云和,323600;浙江省林业科学研究院,浙江,杭州,310023;浙江省林业科学研究院,浙江,杭州,310023;浙江省林业科学研究院,浙江,杭州,310023
【正文语种】中文
【中图分类】S789.2
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华;章卫民;陈玉婵;高晓霞;严寒静
5.地生枝顶孢液体培养物不同溶剂提取物清除DPPH自由基活性的研究 [J], 吴海亮;徐娟娟;单淑芳;耿德贵;樊美珍
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