细胞衰老beta-半乳糖苷酶染色试剂盒
松花粉抗成纤维细胞复制性衰老的机制
松花粉抗成纤维细胞复制性衰老的机制（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究松花粉对衰老成纤维单细胞面积、β半乳糖苷酶染色(SAβgal)阳性率、p16INK4A和p21CIP1表达以及细胞周期的影响。
方法以二倍体成纤维(2BS)细胞建立衰老细胞模型。
生物体视学法分析单细胞面积变化;免疫组化法测SAβgal阳性率;流式细胞术分析细胞周期;RT PCR法测定p16INK4A、p21CIP1基因mRNA表达量。
结果56代细胞出现典型的衰老细胞形态改变，同时SAβgal染色阳性率与G1期细胞比例均增高。
经松花粉处理后，衰老细胞的单细胞面积、SAβgal染色阳性率与G1期细胞比例均显著减少(P0.05);p16INK4A与p21CIP1mRNA的表达量均较衰老模型组明显下调(P0.05)。
结论松花粉具有改善细胞复制性衰老的作用，其分子机制可能与下调p16INK4A及p21CIP1基因mRNA的表达从而改善衰老细胞G1期阻滞有关。
【关键词】细胞衰老;松花粉;生物体视学;细胞周期;P16;P21 【Abstract】Objective To observe the effect of pine pollen on the surface area of single cell, the positive rate ofsenescence associated (SA)βgalactosidase stain, the expressions of p16INK4A and p21CIP1 and the phase of cell cycle in 2BS cells. Methods The model of aging cell were made by 2BS cells. The surface area of single cell in each groups were analyzed by the method of biological stereology, the positive rate of SAβgalactosidase stain was determined by immunohistochemistry，the phase of cell cycle was measured by flow cytometry, and the expressions of p16INK4A,p21CIP1mRNA were detected by RT PCR. Results The 56PD cell showed the typical shape changes of aging, the positive rate of SAβgal and the rate of the phase of G1 were both greatly increased (P0.05). After the treatment of pine pollen, the surface area of single cell, positive rate of SAβgal and the rate of the phase of G1 were significantly decreased (P0.05), the expressions of p16INK4A and p21CIP1mRNA were both significantly down regulated (P0.05). Conclusions Pine pollen has the anti aging effect on aging 2BS cells, and its probable molecular mechanism may be related with down regulating the expressions of p16INK4A and p21CIP1mRNA and then improving the G1 phase blocking.【Key words】Cell senescence;Pine pollen;Biological stereology;Cell cycle;p16;p21诱发细胞衰老的主要刺激信号分为端粒和非端粒信号。
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β半乳糖苷酶(βGAL)的含量。
试验原理：βGAL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知βGAL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将βGAL和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β半乳糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中βGAL的浓度呈比例关系。
试剂盒组成：自备材料蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
衰老相关β-半乳糖苷酶染色
衰老相关β-半乳糖苷酶染色细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品编号产品名称规格BL133A细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒100 T产品简介：细胞衰老时，SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平会上调，此时本试剂盒可以对衰老的细胞或组织进行染色检测。
正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂，出现不可逆的生长停滞，此时细胞仍然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化，通常表现为细胞体积变大，与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。
β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0时表现活性，但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性。
本试剂盒即是基于此现象及原理，以X-Gal为底物，衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶催化该底物生成蓝色产物，表现为细胞胞质有蓝色沉积物，在光学显微镜下即可很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
产品组成:组分名称规格BL133A-1β-半乳糖苷酶染色固定液100 mLBL133A-2β-半乳糖苷酶染色液A100 mLBL133A-3β-半乳糖苷酶染色液B 1.2 mLBL133A-4DMF（二甲基甲酰胺） 5 mlBL133A-5X-Gal（粉末）100 mg使用方法：见说明书注意事项：1、X-Gal粉末配制成溶液后，分装成小份-20℃保存，3个月内有效，X-Gal溶液需室温完全解冻混匀后再使用。
2、β-半乳糖苷酶染色液A和B需提前恢复至室温后再使用，配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用。
3、衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在CO2培养箱中进行孵育显色，否则会影响染色工作液的pH，导致染色失败。
动物细胞β半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说
动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法，快速有效地裂解动物细胞，通过高速离心，获得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反应体系里，以人工合成的二恶二酮类化合物作为发光底物，水解所产生的发光产物，通过发光探测仪（Luminometer）测定其相对冷光单位（RLU）的变化，以此进行测算酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。
其适用于转基因后的活体细胞外源性以及衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。
产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便、高度敏感。
技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ；β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。
β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。
因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。
在衰老细胞内，显示β-半乳糖苷酶活性。
甲氧基二恶二酮氯代金刚烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside），是一种二恶二酮（dioxetane）类发光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，产生二恶二酮，进而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化铵和荧光素钠（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的启动反应作用下，同时pH调整到12，由此二恶二酮分解，发出冷光，在冷光仪（475nm波长）下，检测发光信号，来测定β-半乳糖苷酶的活性。
细胞衰老检查的实验技术及原理
细胞衰老检验试验技术及原理（一）关键词: 细胞色素成纤维细胞酶磷酸试剂标准物质北京标准物质网衰老细胞形态改变关键表现为形状变大、变平、胞核增大、核膜内陷、染色质固缩、胞内溶酶体变多等。
衰老细胞中细胞器数量尤其是线粒体数量降低, 胞质内有色素堆积和空泡形成, 最终造成细胞死亡。
总体来说衰老细胞多种结构呈退行性改变。
依据其特征, 现在常见于检测衰老方法以下:一、β-半乳糖苷酶活性1995年, Dimiri等发觉体外培养二倍体成纤维细胞在培养基pH值为6时, 其β-半乳糖苷酶染色阳性率随代龄增加而逐步上调, 她们把这种中性β-半乳糖苷酶定义为SA-β-gal, 即衰老相关β-半乳糖苷酶。
衰老细胞或组织产生β-半乳糖苷酶能够催化底物X—Gal, 生成深蓝色产物, 从而在光学显微镜下很轻易观察到(图5-5-1)。
在人体表皮角质层细胞中, 也能够发觉SA-β-gal随年纪增加而增加。
而且, SA-β-gal不依靠于DNA复制, 能够区分衰老细胞与静止期细胞。
SA-β-gal是一个体内体外都适用检测衰老生物标识物。
因为检测SA-β-gal方法简单易行, 其在检测衰老细胞方面有很广泛应用, 现在已经有2400多篇论文应用了这种方法。
二、端粒长度检验端粒是位于真核细胞染色体末端顶部核蛋白结构, 由高度保守TTAGGG反复序列组成, 其存在能够保护染色体末端, 是维持染色体稳定关键原因。
鉴于端粒特殊结构, 端粒长度会伴随每次细胞分裂而缩短, 所以, 端粒长度是衰老一个关键生物标志。
这里我们关键讨论端粒限制性片段(TRF)分析及荧光原位杂交(FISH)法。
端粒限制性片段分析: TRF分析也称作端粒Southern印迹法, 是应用针对端粒反复序列探针来检测限制性酶切后所保留端粒方法。
限制性酶会将基因组DNA消化为短片段, 留下大量完好端粒, 即所谓端粒限制性片段。
以凝胶电泳分离基因组片段, 经过放射性探针(CCCTAA)。
β-半乳糖苷酶染色(组织染色)
β-半乳糖苷酶染色（组织）检测原理：一般认为绝大多数正常细胞仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变大，并表达在pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
由此以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。
从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。
操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。
（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。
（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
注：对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。
（4）加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于 15min。
（5）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（6）加入适当量的染色工作液。
（7）37℃孵育过夜，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
（8）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（9）脱水：梯度酒精（由低到高）各5min → 二甲苯I 10min→ 二甲苯 II 10min。
（10）加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。
（11）普通光学显微镜下观察。
光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。
注：所用试剂按照β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明配制。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒市面上有很多种，但检测方法几近相同，具体还是要参照相应的试剂说明书来操作。
ZSCI整理6种常见细胞实验原理与方法描述
2018科域培训课程实战技能6：6种常见细胞实验原理与方法描述主讲人：茜细胞功能05细胞迁移和侵袭01细胞增殖04细胞衰老02细胞凋亡03细胞自噬06血管形成目录16种常见细胞实验原理2方法描述案例分析3归纳与总结PART 01 知其然而知其所以然6种常见细胞实验原理1. 细胞增殖的定义细胞以分裂的方式进行增殖。
单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。
多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
一、细胞增殖2. 细胞增殖的检测方法1）对活细胞的代谢活性的检测（基于MTT 、CCK-8等）2）DNA 合成的检测（基于BrdU 的免疫法或EdU 的点击化学法），可通过体内成像、微孔板或流式细胞术检测等多种技术进行细胞示踪。
1. 细胞代谢活性检测MTT（噻唑蓝）：通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。
活细胞能将四咪唑盐（如MTT、XTT、WST-1）还原成蓝紫色的甲瓒或甲瓒盐（Formazan），可通过分光光度计或酶标仪进行检测。
Cell Counting Kit–8 （CCK-8）中的WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。
基于CCK-8（WST-8）的试剂盒能高度准确地检测细胞增殖，比MTT法及XTT法的灵敏度高5倍，能检测更低的细胞数目。
该试剂盒可适用于96孔板培养的贴壁或悬浮细胞。
细胞增殖的检测方法2. DNA的合成的检测DNA 的新组装合成是细胞生长的必要条件，故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。
BrdU 及EdU ，都是胸腺嘧啶的非放射性类似物，能掺入增殖细胞的DNA 中，可通过对BrdU 及EdU 的检测，从而对DNA 的合成量进行测定。
EdU （5-Ethynyl-2’- deoxyuridine ）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T ）渗入正在复制的DNA 分子中，通过基于EdU 与Apollo®荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA 复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA 修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA 、miRNA 、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
抗氧化测定和细胞衰老相关
一、中药中的抗氧化成分1.黄酮类黄酮类化合物的抗氧化作用主要通过直接捕捉和清除氧自由基来实现，另外其抗氧化活性也与调节和提高体内抗氧化酶活性相关。
其抗氧化作用与3,7位羟基密切相关，其化学性质主要是具有还原性和捕获自由基的特性；能与多种金属离子发生络合或静电作用；能与蛋白质结合；具有两亲结构和诸多衍生化反应活性。
其中淫羊霍、黄芬、桔皮、雪莲等提取物中分离的黄酮类物质均具有较强的清除自由基能力。
2.酚类植物多酚以大量的酚羟基作为氢供体，对多种活性氧具有清除作用，对于氧化酶存在的系统不但可以清除.OH和脂质自由基，还能抑制NO和O2.-反应形成过氧亚硝酸的氧化活性。
茶多酚与自由基反应形成比较稳定的半醌自由基，且部分可进一步演化成无毒的聚合物。
茶多酚还可激活SOD/CAT/GSH-Px的活性，起到抗氧化，防衰老的功效。
具有很强的抗氧化能力。
白藜芦醇（Resveratrol，RES）是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，具有较弱的抗氧化能力。
Sgambato 等的研究表明白藜芦醇可通过上调活性氧（ROS）清除剂和第二阶段酶的表达发挥抗氧化性能，其中第二阶段酶包含超氧化物歧化酶，过氧化氢酶，谷胱甘肽过氧化物酶，谷胱甘肽还原酶，硒磷酸合成酶2，硫氧还蛋白还原酶和NAD（P）H：醌氧化还原酶1。
Robb 等发现RES 长期作用可诱导线粒体MnSOD的表达和活性。
3.皂苷类皂苷类物质对氧自由基本身影响较少，大多能提高体内SOD CAT(过氧化氢酶)等抗氧化酶的活性，从而增强机体抗氧化系统功能。
皂苷类的抗氧化活性较弱。
人参皂苷可显著抑制由乙醇所引起的小鼠肝脏内脂质过氧化反应、抑制脂褐素的形成和堆积。
抗氧化性皂苷包括五科皂苷:人参、西洋参、党参、竹节参、三七等此外，Vc是活细胞氧化还原的催化剂，参与体内多种代谢，具有促进体内多种激素合成的作用。
Vc具有很强的还原性，捕获自由基的能力极高。
富含生物碱类、蛋白质和酶类以及微量元素的一些中草药也有抗氧化作用.石斛的抗氧化作用于其富含微量元素硒有关,硒作为抗氧化酶GSH-Px的活性结构组成部分，通过该酶催化过氧化氢或过氧化脂质的生成及破坏作用，保护细胞膜和DNA。
β-半乳糖苷酶β-galELISA试剂盒使用方法
β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。
用纯化的β-半乳糖苷酶（β-gal）体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal），再与HRP标记的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性检测试剂盒说明书
β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2585规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2支-20℃保存试剂二液体4 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体15 mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用取1支加入1.25mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融（1瓶粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1瓶粉剂）。
2、标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
产品说明：β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β-半乳糖苷化合物中β-半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。
β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
p-Nitrophenol(400nm)p-Nitrophenyl β-D-Galactopyranoside需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），15000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。
GDF11_通过AKT_通路抑制骨骼肌细胞分化
2023 ，43（2） : 092J.SHANXI AGRIC, UNIV . （ N atural Science Edition ）学报（自然科学版）04185GDF11通过AKT 通路抑制骨骼肌细胞分化张鹏翔，吴佳豪，冀云燕，薛霖莉，董亚洁，宫泽恩，郝晓静，曹校瑞，赫晓燕*（山西农业大学 动物医学学院，山西 晋中 030801）摘要：［目的］探究骨骼肌GDF11（生长分化因子11，Growth and differentiation factor 11）在生长发育过程中的表达情况及其作用，明确GDF11在骨骼肌细胞中激活的非SMAD 调控通路，为抵抗骨骼肌衰老、促进骨骼肌损伤修复，探究肌肉发育调控的相关机制提供理论参考。
［方法］以不同发育阶段小鼠和C2C12细胞为材料，取不同发育阶段小鼠腓肠肌、使用分化培养基诱导细胞分化、使用D⁃半乳糖诱导C2C12细胞衰老，分别探究GDF11在个体层面和细胞层面骨骼肌生长发育和衰老中的表现和作用；通过构建GDF11的过表达载体和siRNA 载体，观察GDF11对C2C12细胞成肌分化的影响，并检测了在这一过程中细胞内相关基因的变化，探究GDF11在骨骼肌细胞发育中影响；通过对AKT 信号通路的抑制，明确GDF11在骨骼肌细胞分化过程中激活的非SMAD 调控通路。
［结果］（1）在小鼠腓肠肌中，GDF11蛋白表达量随着年龄的增长呈现出先下降后上升的趋势。
（2）在细胞分化前期GDF11表达量逐渐升高，并在3 d 时细胞开始分化时达到最高，随后逐渐降低，7 d 时恢复到与初始相似的水平。
（3）随着D⁃半乳糖浓度的增加，细胞衰老程度逐渐增加，同时细胞GDF11表达量逐渐增加。
（4）过表达GDF11使细胞分化进程推迟，但抑制GDF11的表达对细胞分化进程并没有影响。
过表达GDF11上调了AKT 的磷酸化水平。
（5）过表达GDF11的C2C12细胞中阻断AKT 通路能够逆转GDF11造成的分化抑制。
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书(中文版)
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于细胞生物学研究。
其适用于各种人体和动物细胞或活体内（in vivo）检测。
产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳。
技术背景细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。
衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。
产品内容清理液（Reagent A）毫升固定液（Reagent B）毫升酸性液（Reagent C）毫升稀释液（Reagent D）毫升染色液（Reagent E）毫升产品说明书 1份保存方式保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月用户自备2毫升离心管：用于配制染色工作液15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液恒温培养箱：用于染色孵育光学显微镜：用于观察染色后的细胞实验步骤操作一、25cm2细胞培养瓶染色实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。
然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。
然后进行下列操作：1．小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面3．小心抽去清理液4．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面5．在室温下孵育5分钟6．小心抽去固定液7．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面8．小心抽去酸性液9．重复实验步骤7和8一次10．小心加入xx毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。
C0602 细胞衰老beta-半乳糖苷酶染色试剂盒
表1. 染色工作液的配制方法。
β-半乳糖苷酶染色液A
10 μl
β-半乳糖苷酶染色液B
10 μl
β-半乳糖苷酶染色液C
930 μl
X-Gal溶液
50 μl
说明：对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合
高温高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。
聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。 需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 对于贴壁细胞： a. 对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 15分钟。对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。 b. 吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3分钟。 c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器 配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
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产品名称 β-半乳糖苷酶染色固定液
贝塔半乳糖苷酶染色
贝塔半乳糖苷酶染色贝塔半乳糖苷酶染色引言：贝塔半乳糖苷酶是一种重要的酶类，在医学、生物学和食品工业等领域都有广泛应用。
本文将介绍贝塔半乳糖苷酶染色的方法、原理和应用。
一、贝塔半乳糖苷酶染色方法1. 材料准备（1）1% 贝塔半乳糖苷酶溶液（2）1% 尼龙紫染液（3）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）（4）细菌培养物（5）显微镜玻片和盖玻片（6）恒温箱和定时器2. 操作步骤（1）在显微镜玻片上滴加几滴细菌培养物。
（2）将细菌培养物预处理：先在60℃下加热5分钟，然后在4℃下冷却5分钟。
（3）将滴加后的细菌培养物在恒温箱中置于37℃下孵育4小时。
（4）将孵育后的细菌培养物倒入1% 贝塔半乳糖苷酶溶液中。
（5）在37℃下孵育2小时，使细菌中含有的酶分解成糖和半乳糖。
（6）将细菌培养物洗净，即用蒸馏水或缓冲液洗去贝塔半乳糖苷酶和糖分子。
（7）在洗净后的细菌培养物上滴加1% 尼龙紫染液，静置5分钟。
（8）用缓冲液清洗玻璃片上的细菌培养物，除去多余的染色剂。
（9）将盖玻片盖在玻璃片上，用显微镜观察。
二、贝塔半乳糖苷酶染色原理贝塔半乳糖苷酶染色原理是将含有半乳糖苷键的多糖或蛋白质在酶的作用下分解成糖和半乳糖。
将分解产物的半乳糖与紫色染料反应形成紫色物质。
三、贝塔半乳糖苷酶染色应用1. 菌群分析：贝塔半乳糖苷酶染色方法用于菌群分析，能够较为准确地分析不同菌群中的贝塔半乳糖苷酶的表达情况。
2. 疾病诊断：贝塔半乳糖苷酶染色方法用于某些疾病的辅助诊断，如肝硬化、白内障等。
3. 食品检测：贝塔半乳糖苷酶染色方法用于食品检测中，能够快速检测出含有蔗糖的食品是否掺假。
结论：贝塔半乳糖苷酶染色方法操作简单，结果可靠。
在医学、生物学和食品工业等领域中都有广泛应用。
β-半乳糖苷酶染色原理
β-半乳糖苷酶染色原理嘿，朋友们！今天咱来唠唠β-半乳糖苷酶染色原理。
你说这β-半乳糖苷酶染色啊，就像是一场奇妙的化学反应大冒险！咱可以把细胞想象成一个小小的世界，β-半乳糖苷酶呢，就是这个世界里的一个神秘小精灵。
当我们进行染色的时候呀，就好像是给这个小精灵发出了一个特别的信号。
它呢，就会乖乖地出来，然后和我们准备好的染色试剂来个亲密接触。
这一接触可不得了，就会发生一系列神奇的变化，让我们能够清楚地看到它的存在。
这不就跟我们找东西一样嘛，本来那东西藏得好好的，我们不知道它在哪。
但一旦有了合适的方法，就像有了一把神奇的钥匙，一下子就能把它给找出来啦！β-半乳糖苷酶染色不就是这样的一把“钥匙”嘛！你想想看，如果没有这个染色方法，我们怎么能知道这个小精灵在细胞世界里干了些啥呢？它是不是在努力工作，还是在偷偷偷懒呢？通过染色，我们就能一目了然啦！而且啊，这个染色过程就像变魔术一样。
本来普普通通的细胞，经过这一番操作，就变得五彩斑斓，有了特别的标记。
这多有意思呀！就好像给细胞穿上了一件漂亮的花衣服，让它们一下子就变得与众不同了。
咱再打个比方，β-半乳糖苷酶染色就像是给细胞画了个独特的画像。
让我们能清楚地认出它们，了解它们的特点和状态。
这对于研究细胞的各种活动和功能，那可真是太重要啦！要是没有这个染色原理，我们对细胞的了解可就大打折扣了呀！那我们怎么能更好地研究疾病的发生和发展呢？怎么能找到更好的治疗方法呢？所以说呀，β-半乳糖苷酶染色原理真的是太神奇，太重要啦！总之呢，β-半乳糖苷酶染色原理就是这样一个充满魅力和神奇的东西。
它让我们能更深入地探索细胞的奥秘，为医学和生物学的发展做出巨大的贡献。
咱可得好好珍惜和利用这个神奇的原理呀，让它为我们的科学研究和人类健康发挥更大的作用！。
β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase）活性的整体封片免疫组化检测实验
β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase）活性的整体封片免疫组化检测实验β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）是一种水解酶，催化β-半乳糖苷水解成单糖。
使β-半乳糖苷酶作用的底物包括神经节苷脂GM1、乳糖苷、乳糖、各种糖蛋白。
准备大组织的厚切片进行β-半乳糖苷酶染色材料：小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂（盒）：磷酸盐缓冲液（PBS) 冰冷β-半乳糖苷酶固定剂β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液β-半乳糖苷酶染色液仪器、耗材：5毫升或10毫升的聚苯乙烯或聚丙烯帽盖的试管或1.5~2 毫升的离心管;转动平台;染色用密闭箱;附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片;纤光照明的解剖显微镜;照相显微镜步骤⑴在冰冷的PBS里解剖胚胎或组织。
置β-半乳糖苷酶固定剂，室温至合适的时间。
固定小鼠胚胎和组织：外植体和E 6.5~E 7.5胚胎5~10 分钟；E 8~E 9.5胚胎或尾巴切面 15~30 分钟；E 10 ~ E 12.5 胚胎 30 ~90分钟;E 13~ E 14.5 胚胎 2 小时;E 15.5 或更大的组织则需要解剖出来或切一半，然后固定2小时。
新生幼鼠或更大的小鼠的灌注需要在解剖特定组织染色之前进行。
⑵用β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液室温洗涤3次，每次15 分钟 (针对小胚胎或尾巴切面），或每次30分钟(针对Ell胚胎和大组织），头尾相接地轻柔转动。
⑶将组织置于β-半乳糖苷酶染色液中（室温，30℃或37℃取决于β-半乳糖苷酶表达丰度），在5 毫升或10 毫升的帽盖的试管或1. 5~2毫升的离心管中孵育，以防蒸发。
可用肉眼或解剖显微镜调节染色程度。
⑷得到预期的信号背景比之后（1~48 小时)，在PBS中洗涤组织3次，每次30 分钟。
⑸通过解剖镜观察和拍摄样本染色的组织，使用低功率的物镜和来自侧面和顶端的光纤照明。
为了得到最好的结果，将组织放置在附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片，用足够的PBS覆盖组织。
不同类型标本的衰老相关β-半乳糖苷酶染色方法
β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase）是一种常见的酶，它在细胞和组织的老化过程中起着重要作用。
研究β-半乳糖苷酶在不同类型标本的衰老过程中的表达和活性对于理解衰老的机制具有重要意义。
在实验室研究中，需要使用染色方法来检测β-半乳糖苷酶的活性和表达情况。
本文将介绍几种常用的β-半乳糖苷酶染色方法，并比较它们在不同类型标本的应用效果。
一、X-gal染色法X-gal（5-溴化-4-氯-3-吲哚乙酸甲酯）是一种常用的β-半乳糖苷酶底物，可以被β-半乳糖苷酶水解成产生蓝色沉淀物。
X-gal染色方法简单、快速，被广泛应用于细胞和组织的β-半乳糖苷酶活性检测。
然而，X-gal染色对于一些类型的标本，如皮肤和硬组织，染色效果不佳，可能出现背景染色。
二、ONPG染色法ONPG（2-硝基苯基-β-D-半乳糖苷）也是一种常用的β-半乳糖苷酶底物，它与β-半乳糖苷酶发生反应生成黄色产物。
相比于X-gal染色，ONPG染色对于硬组织和皮肤等类型标本的染色效果更好，且背景染色较少。
然而，ONPG染色方法需要较长的反应时间，且操作相对复杂。
三、Elderly染色法Elderly染色法是一种相对较新的β-半乳糖苷酶染色方法，它以Elderly底物与β-半乳糖苷酶发生反应产生紫色产物。
Elderly染色方法在对皮肤和硬组织等类型标本的染色效果较好，且背景染色较少。
Elderly染色法还可以在镜下观察β-半乳糖苷酶活性的分布情况，对于研究β-半乳糖苷酶与细胞老化的关系具有重要意义。
不同类型标本的衰老相关β-半乳糖苷酶染色方法各有优劣。
研究者在选择染色方法时需要根据标本类型和研究需求进行选择，以获得准确的实验结果。
随着科学技术的不断进步，相信在未来会有更多更高效的β-半乳糖苷酶染色方法出现，为衰老研究提供更多的可能性。
β-Galactosidase (β-Galactosidase) is amon enzyme that plays an important role in the aging process of cells and tissues. Therefore, studying the expression and activity of β-Galactosidase in the aging process of different types of specimens is of great significance for understanding the mechanism of aging. In laboratory studies, staining methods are required to detect the activity and expression of β-Galactosidase. This article will in troduce severalmonly used β-Galactosidase staining methods andpare their application effects in different types of specimens.I. X-gal StainingX-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) is amonly used substrate for β-Galactosidase, which can behydrolyzed by β-Galactosidase to produce a blue precipitate. X-gal staining method is simple and quick, and is widely used for the detection of β-Galactosidase activity in cells and tissues. However, X-gal staining may not be effective for some types of specimens, such as skin and hard tissues, and background staining may occur.II. ONPG StainingONPG (o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) is also amonly used substrate for β-Galactosidase, which reacts with β-Galactosidase to produce a yellow product. Compared to X-gal staining, ONPG staining has better staining effects on hard tissues and skin specimens, with less background staining. However, ONPG staining method requires a longer reaction time and is relatively moreplex to perform.III. Elderly StainingElderly staining is a relatively new β-Galactosidase staining method, which uses Elderly substrate to react with β-Galactosidase to produce a purple product. Elderly staining method has good staining effects on skin and hard tissue specimens, with less background staining. In addition, Elderly staining method allows for the observation of the distribution ofβ-Galactosidase activity under the microscope, which is of great significance for studying the relationship between β-Galactosidase and cell aging.In summary, there are advantages and disadvantages to the different β-Galactosidase staining methods for aging-related specimens. Researchers should choose a staining method based on the specimen type and research requirements to obtain accurate experimental results. With the continuous advancement of scientific technology, it is believed that more efficient β-Galactosidase staining methods will emerge in the future, providing more possibilities for aging research.Expanding on the current information, further detail on the significance of β-Galactosidase in the aging process and the potential implications of studying its activity in different tissues can be provided.β-Galactosidase is an enzyme that is involved in the breakdown of lactose, which is a sugar found in milk and dairy products. In addition to its role in lactose metabolism, β-Galactosidase has been implicated in the aging process of cells and tissues. As we age, the activity of β-Galactosidase may change, leading toalterations in cellular function and contributing to the aging phenotype.Studying the expression and activity of β-Galactosidase in different tissues can provide valuable insights into the mechanisms underlying aging. For example, in skin tissue, changes in β-Galactosidase activity may be associated with the breakdown of extracellular matrixponents, leading to decreased skin elasticity and wrinkle formation. In muscle tissue, alterations in β-Galactosidase activity may impact the turnover of cellularponents, affecting muscle function and strength.Furthermore, β-Galactosidase activity has been linked to cellular senescence, a state of irreversible cell cycle arrest that is associated with aging. By examining the distribution and activity of β-Galactosidase in senescent cells, researchers can gain a better understanding of the molecular pathways involved in the aging process. This information may have implications for the development of novel therapies aimed at mitigating age-related changes in tissues and organs.In addition to its role in aging, β-Galactosidase has been studied in the context of various diseases, including lysosomal storagedisorders and cancer. Understanding how β-Galactosidase activity is altered in these pathological conditions can provide important insights for the development of targeted therapies.Overall, the study of β-Galactosidase in the context of aging and disease holds promise for uncovering novel mechanisms underlying tissue dysfunction and age-related pathologies. By leveraging the different staining methods available, researchers can gain aprehensive understanding of β-Galactosidase activity in various tissues, paving the way for the development of interventions to improve healthspan and quality of life in aging populations.。
重组CC16蛋白质抑制香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞衰老的初步研究
重组CC16蛋白质抑制香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞衰老的初步研究李婷;杨晓雪;高睿;栗馨洋;王海龙;庞敏【期刊名称】《陆军军医大学学报》【年(卷),期】2024(46)12【摘要】目的探讨重组人CC16蛋白质(rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)衰老的抑制作用及机制。
方法CCK-8法检测CSE(0%、1%、2.5%、5%、7.5%和10%)及rhCC16(0、10、100、250和500 ng/mL)对HBECs细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测对照组、CSE组以及CSE+rhCC16组细胞β-半乳糖苷酶活性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞P16、P21 mRNA 表达水平;Western blot检测各组细胞P16、P21、p-P53、P38、p-P38、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。
结果与对照组相比,5%CSE刺激细胞72 h对HBECs细胞活力无显著影响;500 ng/mL及以下浓度rhCC16对HBECs细胞活力无显著影响;与对照组相比,5%CSE刺激HBECs细胞72 h致β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率明显升高(P<0.05),且P16和P21蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05),p-P53、p-P38与p-ERK1/2蛋白表达量显著增加(P<0.05);与CSE组相比,250 ng/mL rhCC16干预下,HBECs细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率显著下降(P<0.05),P16和P21蛋白和mRNA表达水平显著下降(P<0.05),p-P53、p-p38和p-ERK1/2的表达量降低(P<0.05)。
结论rhCC16蛋白质抑制香烟烟雾诱导的HBECs衰老,抑制P38 MAPK和ERK1/2信号通路可能是其作用机制。
骨关节炎软骨中衰老相关β-半乳糖苷酶和c-Fos蛋白的表达
骨关节炎软骨中衰老相关β-半乳糖苷酶和c-Fos蛋白的表达李良军;雷光华;涂敏;程超;陈霞光;高曙光;曾凯斌【摘要】背景:文献在对软骨细胞衰老的研究中,常以衰老相关β-半乳糖苷酶的表达作为其细胞老化的一个指标,而c-Fos在骨关节炎软骨中表达情况罕见报道.目的:观察β-半乳糖苷酶、c-Fos蛋白在正常关节软骨和骨关节炎不同退变程度关节软骨中表达水平的差异.方法:选取正常关节软骨标本10个,骨关节炎软骨标本26个,根据大体观察凿取正常和骨关节炎不同退变严重程度软骨块50个,再根据关节软骨改良Mankin病理评分法分为正常关节软骨组、轻度退变组、中度退变组、重度退变组.采用免疫组织化学SABC法,计算各组标本中软骨细胞β-半乳糖苷酶、c-Fos蛋白染色阳性细胞率,比较各组中二者阳性细胞率的差异性并分析其与关节软骨不同退变程度之间的相关性.结果与结论:随着衰老软骨细胞阳性率逐渐增加,软骨退变程度逐渐加重,提示软骨细胞衰老与骨关节炎病程进展有关,软骨细胞衰老是骨关节炎可能的发病机制之一.c-Fos蛋白与骨关节炎软骨退变严重程度和软骨细胞衰老均无直接相关性,但可能在软骨退变早中期促进软骨细胞代偿性分裂增殖活跃.%BACKGROUND :The expression of enescence-associated β-galactosidase (SA-β-gal) serves as a marker of cell senescence,while the expression of c-Fos in cartilage of osteoarthritis is rare.OBJECTIVE:To study expression differences of SA-β-gal and c-Fos protein in normal and impaired cartilage of osteoarthritis.METHODS: Ten normal cartilages and 26 cartilage of osteoarthritis were selected. On the basis of improved Mankin pathological score, 50 cartilage specimens to divide into normal, mild impaired, medium impaired and severe impaired groups. The expression of SA-β-gal and c-Fos protein in the cartilage specimens weredetected by SABC method. The difference and correlation between the percentage of the positive chondrocytes and the different impaired cartilage were analyzed.RESULTS AND CONCLUSION:The cartilage degeneration aggravated with increasing of SA-beta-gal positive chondrocytes,suggesting that chondrocyte senescence has contacted with osteoarthritis. The expression of c-Fos protein shows no direct correlation with the severity of osteoarthritis and chondrocyte senescence. The findings demonstrated that chondrocyte senescence may be one of pathogenesis of osteoarthritis, which promotes compensate for cell division in the early and medium stage of osteoarthritis.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)002【总页数】5页(P196-200)【关键词】骨关节炎;软骨细胞;衰老相关β-半乳糖苷酶;c-Fos蛋白;原癌基因c-fos 【作者】李良军;雷光华;涂敏;程超;陈霞光;高曙光;曾凯斌【作者单位】长沙市中心医院骨科,湖南省长沙市,410004;中南大学湘雅医院骨科,中南大学骨科研究所,湖南省长沙市,410008;中南大学湘雅医院骨科,中南大学骨科研究所,湖南省长沙市,410008;中南大学湘雅医院骨科,中南大学骨科研究所,湖南省长沙市,410008;中南大学湘雅医院骨科,中南大学骨科研究所,湖南省长沙市,410008;中南大学湘雅医院骨科,中南大学骨科研究所,湖南省长沙市,410008;中南大学湘雅医院骨科,中南大学骨科研究所,湖南省长沙市,410008【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言骨关节炎是一种退行性疾病，其发病率随年龄的增加而增加。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书
细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品简介：细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞细胞通常体积变大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
碧云天生产的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。
从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
如果使用6孔板检测，足够测定100个样品；使用24孔板测定，足够测定400个样品；使用96孔板测定，足够测定1000个样品。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定。
对于普通的切片也至少足够检测100个样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项：β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。
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产品名称 β-半乳糖苷酶染色固定液
X-Gal溶液 β-半乳糖苷酶染色液A β-半乳糖苷酶染色液B β-半乳糖苷酶染色液C
说明书
包装 100ml
5ml 1ml 1ml 100ml 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项：
β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。用于细胞培养的二氧化
c. 用PBS浸泡洗涤组织3次，每次不少于5分钟。
d. 吸除PBS，加入适当量的染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
e. 37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。最好把整个切片浸泡在染色工作液中。注意：37℃孵育不能
在二氧化碳培养箱中进行。
f. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察，加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。
如果使用6孔板检测，足够测定100个样品；使用24孔板测定，足够测定400个样品；使用96孔板测定，足够测定1000个样 品。对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定。对于普通的切片也至少足够检测100个样品。
包装清单：
产品编号 C0602-1 C，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存数天。如果离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存
较长时间。
3. 对于组织切片：
a. 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。
b. 加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15分钟。
碧云天生产的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产 物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
2. Wang YN, Wu W, Chen HC, Fang H. Genistein protects against UVB-induced senescence-like characteristics in human dermal fibroblast by p66Shc down-regulation. J Dermatol Sci. 2010;58(1):19-27. Epub 2010 Feb 16.
定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。
b. 离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3分钟。
c. 离心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
d. 37℃孵育过夜。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
e. 取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以离心，去除
3. Zhong W, Zou G, Gu J, Zhang J. L-arginine attenuates high glucose-accelerated senescence in human umbilical vein endothelial cells. Diabetes Res Clin Pract. 2010;89(1):38-45. Epub 2010 Apr 15.
产品编号 C0602
细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒
产品名称 细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒
包装 >100次
产品简介：
细 胞 衰 老 β- 半 乳 糖 苷 酶 染 色 试 剂 盒 (Senescence β-Galactosidase Staining Kit) 是 一 种 基 于 衰 老 时 SA-β-Gal (senescenceassociated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测 到细胞或组织的衰老情况。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
使用本产品的文献：
1. Tao Q, Lv B, Qiao B, Zheng CQ, Chen ZF. Immortalization of ameloblastoma cells via reactivation of telomerase function: Phenotypic and molecular characteristics. Oral Oncol. 2009 Dec;45(12):e239-44.
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。此时细胞仍然是存活的，但 细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰 老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞细 胞通常体积变大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是 生物体老化(aging)的一种潜在原因。
聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。 需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 对于贴壁细胞： a. 对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 15分钟。对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。 b. 吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3分钟。 c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器 配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
表1. 染色工作液的配制方法。
β-半乳糖苷酶染色液A
10 μl
β-半乳糖苷酶染色液B
10 μl
β-半乳糖苷酶染色液C
930 μl
X-Gal溶液
50 μl
说明：对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合
高温高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。
碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值，而导致染色失败。 β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或Vortex后，沉淀会全部溶解。作为常规，
试剂使用前必须确保沉淀全部溶解，并且混匀。 配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色时可以在
d. 37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
e. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存数天；或者加上
封片液封片后，4℃可以保存较长时间。
2. 对于悬浮细胞：
a. 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15分钟。固