高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法
反相高效液相色谱法快速测定梨中7种有机酸含量
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反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸
反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸黄慧敏;张伟国【摘要】Reversed phase HPLC method was applied to determine organic acid in malic acid fermentation liquor in this paper. The chromatographic conditions are finally conformed to apply to all kinds of organic acid content deter-mination in the fermentation. The conditions are as follows：COSMOSIL 5C18 - PAQ column （4.6 mm I.D. × 250 mm） was used at 23℃. UV detection wavelength was 210 nm. Solution containing 1% acetonitrile and 20mmol/L KH2PO4 at pH 2.8 was used as mobile phase with flow rate of 0.5 mL/min. The seven organic acids in malic acid fermentation liquor were preferably separated under these conditions. The recovery ratio was 94.2% - 102.7% and the method had good accuracy and precision.%采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸，最终确定了适用于发酵液中各种有机酸含量测定的色谱条件，色谱柱：COSMOSIL5C18-PAQ（4．6mmI．D．×250mm）；紫外检测波长：210nm；流动相：1％乙腈-20mmol／L KH2PO4溶液（pH2．8）；流速：O．5mL／min；柱温：23℃。
高效液相色谱测定山楂中的有机酸
液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于有机化学和生物学实验中的高效分离分析技术。
它可以用于鉴定、分离和定量分析物质，并且重要的是，它可以应用于复杂混合物中的成分。
本文旨在介绍液相色谱技术
在测定山楂中有机酸的应用。
首先，根据样品的结构、水溶解性和热稳定性等，对山楂水提液样品
进行改性处理。
然后，用高效液相色谱分析水提物质中的有机酸成分，其中，在反相条件下采用阴离子交换型分离柱，使用梯度沉淀浓缩方法，改变梯度组成，优化参数，检测山楂中的有机酸的含量。
最后，使用常规的HPLC/UV检测装置测试所获得的检测数据。
本文以分析山楂有机酸为例，实验结果显示，有机酸的含量为2.3%。
因此，
可以得出结论：通过高效液相色谱可以准确地测定山楂中的有机酸含量。
总之，所述的高效液相色谱方法能够准确地测定山楂中的有机酸。
由
于它具备快速、灵敏和可重复性的优点，因此，这种技术对于工业生
产尤为重要，用于对山楂中的有机酸的含量进行快速、准确的检测。
高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法
高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法水果中的有机酸是水果特有的有机物质，它是水果的重要指标之一，因此，对于水果中有机酸的测定及其组成分析具有重要的意义。
近年来，由于分析技术的发展，液相色谱法已经成功地用于分析水果中的有机酸。
本文介绍了一种新的反相液相色谱法，即高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法，立足于该法的特点，从实验设计、仪器设备、分析步骤几个方面对该法进行了总结和分析，为工作者提供了一套实用性、稳定性较好的分析方法。
一、实验设计1、样品选取本实验中，以苹果、梨、桃和橙4种水果为样品，测试它们中的有机酸含量，选用不同种类的水果，可以获得更为准确的测定成果。
2、实验条件（1）仪器设备：采用的是Agilent 1290反相液相色谱仪，其主要由液液分配器、柱箱、检测器和电脑（专门程序）组成，但目前市场上还有其他类型的色谱仪，比如ThermoDIONEX等；（2）柱箱：石英柱，500mm×4.6mm，内核外皮材料采用C18；（3）检测器：采用高效检测器，灵敏度较高；（4）分析模式：傅里叶变换红外光谱（FT-IR）分析模式，根据不同的有机化合物的吸收特性，可以分析出不同的有机酸组成成分；（5）流动相：甲醇/水混合溶液，其分配比例根据不同的有机酸有一定的调节。
二、仪器设备1、液液分配器液液分配器是液相色谱仪的基本组成部分，是整个实验过程中最重要的组成部分，简单说，液液分配器就是以电脑控制的，它的作用就是将样品和流动相按照一定的比例，混合在一起，然后以一定的流速通过柱箱的。
2、柱箱柱箱是色谱仪的基本部件，它的作用是在实验前，使样品和流动相在此处混合，然后按照一定的流动速度，通过这里，除去有机酸外，其余物质依次被除去，最终得到纯净的有机酸溶液。
3、检测器检测器是液相色谱仪的核心部分，它可以根据不同的物质的光谱或者振动特征，将其信号转化为电子信号，在检测到的物质分子能够经过形态转换而被分解之前，都可以被检测器检测到。
反相高效液相色谱法测定西番莲中的有机酸
反相高效液相色谱法测定西番莲中的有机酸王琴飞;李莉萍;高玲;王明;应东山;张如莲【摘要】采用Waters Atlantis C18色谱柱(150 mim×4.6 mm,5μm),以2％甲醇-98％ 0.01 mol/LK2HPO4溶液(用H3PO4调节pH2.8)作为流动相,流速为0.6 mL/min,柱温为30℃,进样量为10 μL,检测波长为210 nm,建立高效液相色谱同时分析西番莲中10种有机酸的方法.结果表明:该方法相对标准偏差为0.22 ％-4.00％,平均回收率在88.0％～109.6％,各种酸的线性相关系数r＞0.999 2,检测限为0.001-0.22 μg/mL;采用外标法定量.在紫果和黄果西番莲中检测到7种有机酸,其含量趋势呈现为柠檬酸＞L-苹果酸＞L-乳酸＞琥珀酸＞L-抗坏血酸＞酒石酸＞富马酸.该方法具有灵敏度高、测试组分多、速度快等优点,适用于西番莲中多种有机酸的测定.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2015(036)008【总页数】7页(P1511-1517)【关键词】反相高效液相色谱法;西番莲;有机酸【作者】王琴飞;李莉萍;高玲;王明;应东山;张如莲【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与品种创制重点实验室农业部热带作物种子种苗质量监督检验测试中心海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与品种创制重点实验室农业部热带作物种子种苗质量监督检验测试中心海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与品种创制重点实验室农业部热带作物种子种苗质量监督检验测试中心海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与品种创制重点实验室农业部热带作物种子种苗质量监督检验测试中心海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与品种创制重点实验室农业部热带作物种子种苗质量监督检验测试中心海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与品种创制重点实验室农业部热带作物种子种苗质量监督检验测试中心海南儋州571737【正文语种】中文【中图分类】TS255.7doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.08.025西番莲（Passiflora edulis）俗称鸡蛋果，由于有浓郁而特殊的香味，也称为“百香果”，属西番莲科西番莲属，热带多年生草质至半木质藤本攀附果树，原产于澳大利亚和南美洲的巴西，现广泛分布于热带和亚热带地区。
反相高效液相色谱法测定苹果醋中的有机酸
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利用反相高效液相色谱法测定梨汁中有机酸的种类和含量_高海燕
有机酸是果汁中主要的风味营养物质 ,其 含量高低与果汁制品的品质有密切的关系 。此 外 ,果汁中的有机酸还可促进消化腺的活动 ,有 助于食物的吸收 ,改善患者的食欲 。天然果汁 营养丰富 ,深受消费者青睐 ,然而 ,由于水果原 料和生产成本的限制 ,果汁的掺假现象时有发 生 。在一定条件下 ,可以用测定各种有机酸含 量的方法来鉴别果汁饮料是否掺假 ,因此果汁 中有机酸含量的测定是国内外关注的问题之 一[1～3 ] 。梨是我国继苹果 、柑橘之后的第三大 水果 ,我国的梨品种资源非常丰富[4 ] , 但文献 中有关梨汁有机酸的组成及含量却未见有报 道。
21113 精密度与回收率试验 取同一梨汁样品 3 份 ,其中 1 份作本底 (梨
汁样品色谱图见图 2) ,另外 2 份分别添加一定 量的 11 种有机酸标品溶液后测定各成分含量 , 每份样品进行 6 次平行测定 ,考察测定方法的 回收率和精密度 ,结果表明本方法回收率高 ,重 现性好 (见表 2) 。 212 利用 HPLC 法测定梨汁中有机酸的种类及
C = - 010891 + 11846 ×10 - 5A C = - 010879 + 1114 ×10 - 4A C = 010568 + 4107 ×10 - 4A C = - 012998 + 21983 ×10 - 4A C = - 010036 + 51469 ×10 - 6A C = - 010019 + 21464 ×10 - 5A C = 013574 + 61898 ×10 - 4A C = - 010345 + 41915 ×10 - 4A C = 010158 + 41936 ×10 - 4A C = - 010007 + 41164 ×10 - 6A C = 01225 + 1105 ×10 - 3A
采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸
采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸刘文静;潘葳【摘要】采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究了杨梅果实中有机酸的成分和含量,在C18柱(4.6mmID×250mm,4μm)上,采用紫外检测器(波长214 nm)进行检测,其流动相为0.04moL/L的KH2P04-H3P04缓冲液,nH2.4,流速0.8 ml/min,柱温35℃.检测所得7种有机酸标准曲线相关系数达0.999 0以上,平均回收率在88%～101%之间;变异系数RSD<3.06%.%A RP-HPLC method with a UV detector was established to determine the organic acids from the fruit of Myrica ruba.The chromatographic conditions were: Waters PhenomenexM C18(4.6 mmID×250 mm, 4 μm)used for the column(at 35 ℃)with0.04mol·L-1 KH2PO4-H3PO4 buffer(pH2.4)as the mobile phase, and the flow rate 0.8 mL·min-1,detector wavelength UV-214 nm.The correlation coefficient of the calibration graphs was 0.999 0-0.999 9.The recovery was 88％～101％, RSD＜3.06％.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2011(032)001【总页数】4页(P172-175)【关键词】反相高效液相色谱法;杨梅;有机酸【作者】刘文静;潘葳【作者单位】福建省农业科学院中心实验室,福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003;福建省农业科学院中心实验室,福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003【正文语种】中文【中图分类】S667.6杨梅果肉中富含有机酸、蛋白质、维生素和果胶等营养成分，其中有机酸的种类和含量与果实品质密切相关[1]。
高效液相色谱法测定果汁中的有机酸—样品测定-教学设计(精)
讲授
多媒体课件
听讲、思考
引入（任务）
处理好的样品怎样检测
案例引入
课件、视频
听讲、思考、讨论
实施
学生操作实训：装色谱柱、放置流动相和样品、管路脱气、建立方法、平衡系统、设置批处理表、运行样品批处理、设置冲洗程序冲洗系统、关机
任务化（加深对基本能力的认识与体会）
《仪器分析》课程教学设计
项目
高效液相色谱法
学时
12学时
任务
高效液相色谱法测定果汁中的有机酸
学时
6学时
知识点（技能点）
样品的分析测定
学时
2学时
教学内容
1．准备及开机。
2．设置分析条件，平衡系统。
3．设置样品序列并测定样品。
4．冲洗系统，关机。
教学目标
技能目标
能正确进行色谱柱安装，管路排气操作。
能正确设置分析方法，并平衡系统。
教学条件要求
教材、视频、PPT、理实一体化教室、高效液相色谱仪
教学方法与手段
任务驱动、启发引导、实训等教学方法
参考资料
《高效液相色谱法测定果汁中的有机酸——样品的测定》电子教材；国家标准GB/T 5009.157-2003《食品中有机酸的测定》。
教学内容设计
步骤
教学内容
教学方法
教学手段
学生活动
告知（教学内容、目的）
能正确进行样品批处理表的设置并运行。
能正确进行冲洗系统和关机操作。
知识目标
理解高效液相色谱法分析条件对样品分析的影响
掌握有机系流动相和缓冲盐溶液流动相替换时的注意事项。
态度素质目标
积极进取，勤于思考，乐于探究、科学严谨
反相高效液相色谱法测定果汁中11种有机酸条件的优化
3
3. 1
结果与讨论
检测波长的确定
用 200~ 350 nm( 紫外) 光对 11 种有机酸的标准溶液进行扫描 , 结果表明 11 种有机酸均在 210 nm 附近 有较大的吸收, 重复性好, 不受流动相中其他物质的干扰, 故以下实验均采用 210 nm 波长进行检测。 3. 2 流动相浓度的选择
2003 10 08 收稿 ; 2004 03 29 接受 本文系国家 十五 科技攻关课题基金资助项目 ( No. 2001BA501A07)
表 1 回归分析和检出限 Table 1 Regression analysis and detection limit
有机酸 Organic acid 草酸 Oxilic acid 酒石酸 Tartaric acid 奎宁酸 Quinic acid 苹果酸 Malic acid 莽草酸 Shikimic acid 抗坏血酸 A scorbic acid 乳酸 Lactic acid 醋酸 Acetic acid 柠檬酸 Citric acid 富马酸 Fumaric acid 琥珀酸 Succinic acid 回归方程 Regression equation C = - 0. 0891+ 1. 846 10- 5 A 相关系数 Correlation coef ficient 0. 9999 0. 9996 1. 0000 0. 9999 1. 0000 0. 9998 1. 0000 A A 1. 0000 0. 9999 0. 9999 1. 0000 检出限 Detect ion limit ( mg/ L) 0. 04 0. 09 0. 30 0. 50 0. 01 0. 03 0. 54 0. 73 0. 50 0. 02 2. 00 RSD ( %) 0. 97 1. 43 0. 87 0. 31 0. 89 1. 59 1. 16 1. 10 0. 96 0. 79 1. 53 回收率 Recovery (%) 102. 0 98. 8 99. 4 100. 1 100. 1 96. 8 98. 2 97. 9 99. 5 99. 2 99. 6
高效液相色谱法测定银杏果中有机酸的含量
高效液相色谱法测定银杏果中有机酸的含量有机酸在自然界中广泛存在，它是各种植物的果实酸味的主要来源。
一些有机酸还是生物体重要的代谢中间产物，具有重要的生理功能。
有机酸的分析方法主要包括气相色谱法和高效液相色谱法等。
气相色谱法需对有机酸进行皂化衍生，操作繁琐；高效液相色谱法可同时测定多种有机酸，具有操作简单、准确度高、重现性好的优点，是目前应用广泛的方法。
本研究建立了反相高效液相色谱测定银杏果中有机酸的方法，并对银杏果中几种有机酸进行了分析。
方法分析速度快，灵敏度高，结果准确。
１实验部分１．１仪器、试剂与材料Ｗａｔｅｒｓ６００－２４８９型高效液相色谱仪（美国，Ｗａｔｅｒｓ公司），配备四元梯度泵，在线真空脱气机，紫外－可见检测器，手动进样器；数显酸度计（梅特勒－托利多仪器有限公司）。
准确称取草酸、抗坏血酸各５ｍｇ，酒石酸２５ｍｇ，苹果酸、柠檬酸各５０ｍｇ，乳酸、乙酸各１００ｍｇ，用水溶解并定容至５ｍＬ容量瓶中作为标准储备液，保存于冰箱中（４°C）。
实验用标准溶液由储备液混合稀释而得。
草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸（分析纯，）；甲醇（色谱纯）；其他试剂均为分析纯；纯水由Ｍｉｌｌｉ－Ｑ超纯水系统制备。
１．２色谱条件色谱柱：ｕｌｔｉｍａｔｅ－Ｃ１８柱（３００×４．６ｍｍ×５μｍ，美国月旭公司）；柱温为室温；流动相：３％甲醇－０．０１ｍｏｌ／ＬＫ２ＨＰＯ４溶液，用磷酸调节ｐＨ＝２．０，流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ；进样体积：２０μＬ；检测波长：２１０ｎｍ。
２结果与讨论２．１色谱条件的优化有机酸的分离一般以水加入适量甲醇作为流动相，但有机酸在水中能发生电离，造成色谱峰变宽且对称性变差。
为抑制有机酸的解离，需加入酸抑制剂调节流动相的ｐＨ值。
由于实验采用２１０ｎｍ的波长作为检测波长，为避免干扰有机酸的检测，选择在紫外区几乎无吸收的磷酸盐缓冲溶液作为调节剂。
实验考察了流动相ｐＨ为３．０、２．８、２．６、２．４、２．２、２．０时的分离结果，发现随ｐＨ的降低，有机酸的分离度和峰的形状越好，但过低的ｐＨ对色谱柱有很大损害，因此选择流动相的ｐＨ为２．０，并加入３％的甲醇。
高效液相色谱法测定乌梅有机酸
高效液相色谱法测定乌梅有机酸郭 瑛1,2 肖朝萍1 王 红1 黄天宝311(中国科学院成都有机化学研究所,成都610041) 2(中国科学院研究生院,北京100039)摘 要 采用K romasil C 18为分析柱,0.01m ol/L 磷酸盐缓冲溶液(pH 2.7)为流动相,紫外215nm 检测,建立了乌梅中草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸等多种有机酸的高效液相色谱方法。
方法的回收率为98%～105%;RS D 为2.26%～7.82%;检出限为10～75ng (S/N =3)。
测定了4种不同产地和种类的乌梅中的苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸的含量。
关键词 反相高效液相色谱法,乌梅,有机酸 2003207230收稿;2004207216接受本文系四川省乐山市科技孵化基金资助项目(N o.200204)1 引 言乌梅始载《神农百草经》,是由蔷薇科植物梅(Armencaca mume sieb .)的成熟或未成熟果实经熏制和烘制等方法加工而成,富含多种营养成分,不仅能敛肺、涩肠、生津、安蛔,还具有抗病毒性肝炎、抗肿瘤、抗疲劳等功效1,2。
乌梅以酸味著称,含有大量有机酸。
目前仅见乌梅中总酸度和酸的定性分析研究工作3～5,而尚未见定量分析的报道。
本研究建立了测定乌梅果肉中多种有机酸的高效液相色谱方法,为乌梅的进一步开发提供可靠依据。
有机酸测定的传统化学法易受干扰,误差大,且每次只能测一种有机酸。
薄层色谱法定量精度差;气相色谱法往往需要衍生步骤,不仅繁琐,而且影响分析结果。
高效液相色谱测定方法简便,特别是对于芳香族有机酸和多元酸,已被广泛用于各种食品和天然物中有机酸的测定6,7。
本实验利用反相高效液相色谱法,对乌梅中多种有机酸进行分析,取得较好的结果。
2 实验部分2.1 仪器和试剂高效液相色谱系统由Waters 6000A 输液泵、Waters 481紫外检测器、Rheodyne 7725进样阀和HW 色谱工作站组成;AS3120超声波振荡器(Autoscience 公司);pHS 23C 酸度计(上海雷磁仪器厂)。
高效液相色谱法同时测定果汁中13种有机酸和白藜芦醇_陈意光
Determination of 13 Kinds of Organic Acids and Resveratrol
in Fruit Juice by HPLC
CHEN Yi-guang, DENG Sui-xing, KE Zhen-hua, QIN Fang-fang, YE Jia-rong, ZOU Shu-dan, GUO Ke-wen (Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute, National Centre for Quality Supervision and Testing of Processed
1388
现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2010, Vol.26, No.12
分开，但当流动相中有机溶剂超过 50%时，基线快速 线性回归，线性方程、线性范围、相关系数和方法检
升高，保留时间在 30 min 之后的化合物的色谱峰严重 出限（以 S/N=3 计）见表 2。混合标准工作液色谱图
叶酸（97.0%）、绿原酸(95.0%)、白藜芦醇（98%）、 滤膜过滤，滤液待测。市售果汁及果汁饮料取 0.5 mL
DL-苹果酸(≥99%)、L-抗坏血酸（>99%）、酒石酸 用 0.5 mL 水稀释后，经 0.22 µm 水性滤膜过滤，滤液
（>99%）、草酸（>99%）、柠檬酸（>99%）、苯甲酸 待测。
（>99%）分别购自 Alfa-1esar、Fluka、Sigma、国药 集团化学试剂厂和广州化学试剂厂。
猕猴桃中的有机酸高效液相色谱法分析_周元
设置柱温 30 ℃，以 10 mmol/L 硫酸溶液为流动
1.4 样品处理
相，考察流速分别为 0.3、0.4、0.5、0.6 mL/min 时的分离
参考文献[8-10]方法，选取熟软完好的果实，手工 情况，发现流速越低，分析时间延长，对分离度的影响
去皮，准确称取 25.00 g 新鲜果肉，加入 100 mL 蒸馏 不明显；随着流速的升高，发现柱子柱压增高，但是分
液相图谱见图 1。
吸光/mAU
200
100
0 0
7 1
2
3
4
6 5
9 10 8
5
10
15
20
时间/min
1.草酸；2.酒石酸；3.奎宁酸；4.苹果酸；5.抗坏血酸；6.乳酸； 7.乙酸；8.柠檬酸；9.富马酸；10.琥珀酸 图 1 有机酸标品高效液相色谱图
10 mmol/L，调 pH 为 2.6。结果表明：以 10 mmol/LK2HPO4 和 KH2PO4 缓冲液做流动相，草酸和酒石酸，奎宁酸和 苹果酸等有机酸的分离度较差；以硫酸溶液做流动相
周元，等：猕猴桃中的有机酸高效液相色谱法分析
86
检测分析
酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸：阿拉丁公司；色谱纯 酸溶液作流动相，测定各有机酸的保留时间，结果显
甲醇：美国天地 TEDIA。
示流动相 pH 对有机酸的分离影响很大。当 pH 为 2.0
1.2 仪器与设备
时，琥珀酸和富马酸分离效果差。逐步提高 pH，pH 为
Fig.1 HPLC chromatographam of organic acid standards
2.6 标准曲线、检出限、精密度及回收率 取配制好的 10 种有机酸标准溶液，采用优化的
采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸
“ ’Ｆｊｕ ３ ０ ０ ， ｆ“ ｕｉ ｌ ５ ０ ３ 。 ｃ ’
“８ ｎ
Ａｂｓｒ ｃ Ａ ＲＰ— ｔａ ｔ ＨＰＬＣ ｅｈ ｄ ｍ ｔｏ ｗｉｈ ＵＶ ｔ ｃｏ ｓ ｓａ ｉｈｅ ｔ ｔｒ ｆｎ ｔ ｅ ｒ ａ ｉ ａ ｉｓ ｒ ｍ ｔ ｒ ｔｏ ｔ ａ ｄｅｅ ｔｒ ｗａ ｅ ｔｂｌｓ ｄ ｏ ｄｅｅ ｎ ｅ ｈ ｏ ｇ ｎ ｃ ｃｄ ｆｏ ｉ ｈｅ ｆｕｉ ｆ
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杨梅果 肉中富含有机 酸 、蛋 白质 、维生 素和果
搅 拌机 （ 海经 济特 区 飞利 浦 家庭 电器有 限公 司 ） 珠 ，
胶等 营养成 分 ．其 中有机 酸 的种 类和含 量与果 实 品
Ｍｙｉａ ｒｂ ． ｈ ｈｏ ｔｇａ ｈｃ ｃｎ ｉ ｏ ｓｗｅｅ ｒ ｕ ａ Ｔ ｅ ｃ ｒｍａｏ ｒｐ ｉ ｏ ｄｔ ｎ ｒ ：ＷａｅｓＰ ｅ ｏ ｎ ｘ Ｃｌ ４６ｍｍｌ ｘ ５ ｎ ｃ ｉ ｔｒ ｈ ｎ ｍｅ ｅ Ｍ ８ ． （ Ｄ ２ ０ｍｉ，４￣ｍ） ｓｄ ｆｒｔｅ ｕ ｅ ｏ ｈ ｃ ｌｍｎ ａ ５℃） ｔ ．４ｍｏ・－ ｏｕ （ｔ３ ｗｉ ００ ｌＬ ＫＨ２Ｏ － Ｐ ４ｔ ｆ ｒｐ ．）ｓ ｔｅ ｍｏ ｉ ｈ ｓ ，ａ ｄ ｔｅ ｆ ｗ ｒｔ ０８ ｍＬ ｍｉ ， ｈ Ｐ ａＨ３ Ｏ ｍｆ （Ｈ２ ａ ｈ ｂｌ ｐ ａ ｅ ｎ ｈ ｏ ａｅ ． ｅ ４ ｅ ｌ ・ ｎ
高效液相色谱法对蓝莓果实中8个有机酸含量的测定
Ｄａ ｌ ｉ ａ ｎ １ １ ６ ６ ２ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ３ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ｌ ａ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ， Ｄａ ｌ ｉ ｎ ａ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｓ ｒ ｉ ｙ， ｔ Ｄａ ｌ ｉ ｎ １ ａ １ ６ ６ ２ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
８ ｏ ｒ ｇ ｎｉ ａ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｉ ｎ ｂ ｌ ｕ ｅ ｂ ｅ ｒ ｒ ｙ ｆ ｒ ｕ ｉ ｔ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ． Ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｈｏ ｔ ｄ ｗａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｎ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｈｅ ｔ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ ｏ ｒ ｇ ｎｉ ａ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｉ ｎ ｂ ｌ ｕ ｅ ｂ ｅ ｒ ｒ ｉ ｅ ｓ
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※成分分析
食 品 科 学
２ ０ １ Ｖ ｏ １ ． ３ ６ ， Ｎ ｏ ． １ ８ １ ２ ７
高效 液相色谱 法对蓝莓 果实 中８ 个 有机酸 含量 的测 定
徐 玉 涛 ，李珂 珂 ，王贺 新 ，陈 丽荣。 ， 弓晓杰
（ １ ． 大连大学 医学 院，辽宁 大连 １ １ ６ ６ ２ ２ ：２ ． 大连大学现代化农业研 究院，辽宁 大连 １ １ ６ ６ ２ ２ ：
反相高效液相色谱法测定荔枝肉中10种有机酸
反相高效液相色谱法测定荔枝肉中10种有机酸
黄桂颖;白卫东;杨幼慧;马应丹
【期刊名称】《现代食品科技》
【年(卷),期】2009(25)5
【摘要】提出了一种利用高效液相色谱同时分析荔枝肉中10种有机酸的方法.在ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6×250 mm,5 μm)色谱柱上,0.01mol/L磷酸氢二铵溶液(pH3.00)作为流动相,流速为1.00mL/min,紫外检测波长为213nm,柱温20℃时,能较好地分离和检测荔枝肉中的10种有机酸.该方法回收率为91.6%～109.3%,相对标准偏差为0.14%～1.72%,具有较好的准确度和精密度,方法简便,可应用于水果等的有机酸检测.
【总页数】3页(P568-570)
【作者】黄桂颖;白卫东;杨幼慧;马应丹
【作者单位】仲恺农业工程学院轻工食品学院农产品加工与贮藏重点实验室广东广州 510225;仲恺农业工程学院轻工食品学院农产品加工与贮藏重点实验室广东广州 510225;华南农业大学食品学院广东广州 510642;仲恺农业工程学院轻工食品学院农产品加工与贮藏重点实验室广东广州 510225
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定新疆不同品种葡萄干中的有机酸 [J], 袁辉;远辉;王建玲
2.反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸 [J], 黄慧敏;张伟国
3.反相高效液相色谱法测定宜宾芽菜中的有机酸研究 [J], 何义国;赵兴秀;邓静;吴华昌
4.反相高效液相色谱法测定苹果醋中的有机酸 [J], 赵芳;孙国伟;郭志伟
5.采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸 [J], 刘文静;潘葳
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反相高效液相色谱法测定葡萄中的有机酸
反相高效液相色谱法测定葡萄中的有机酸崔婧; 段长青; 潘秋红【期刊名称】《《中外葡萄与葡萄酒》》【年(卷),期】2010(000)005【总页数】6页(P25-30)【关键词】反相高效液相色谱; 有机酸; 葡萄【作者】崔婧; 段长青; 潘秋红【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院北京 100083【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2葡萄果实中的有机酸主要是苹果酸、酒石酸和柠檬酸，一些葡萄品种还含有少量的草酸、琥珀酸等[1]。
有机酸的组成与含量是决定葡萄果实风味和品质的重要因素之一，果实的味感大部分取决于甜味和酸味、苦味之间的平衡，味感质量则取决于这些味感之间的和谐程度，有机酸的种类及其浓度调节着“酸碱的平衡”，必然会影响葡萄酒的酸味。
酿酒葡萄中的有机酸对葡萄酒的组成成分、稳定性和感官品质也起着重要的作用，尤其是葡萄中的酒石酸，决定了葡萄酒pH值，进而影响了葡萄酒的微生物和物化稳定性，而且还影响其颜色和陈酿潜力。
因此，有机酸的积累与调控是葡萄品质控制的关键因素之一[2-4]。
基于有机酸对葡萄和葡萄酒风味品质的贡献，有机酸的定量分析受到关注。
目前，检测有机酸的方法有分光光度法、酶法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
分光光度法是以有机酸和一些特定物质的反应为机理，能够生成在一定波长下有最大吸收峰的有色物质。
但该法易受其他物质的干扰，通常需要将提取液进行沉淀、离子交换树脂等前处理纯化，因此步骤繁冗。
酶法虽然特异性较强，能够测定有机酸的构型，但是每次只能测定一种有机酸，比较耗时。
气相色谱法的灵敏度和选择性相对较好，但是由于主要的短链有机酸是非挥发性酸，需要将有机酸衍生化，步骤较为繁琐，且常因为衍生化反应不易定量而直接影响测定结果的准确性[5]，因而使气相色谱法的应用受到限制。
高效液相色谱法是目前普遍采用的分析有机酸的方法，常用的是反相高效液相色谱法（RT-HPLC）和离子交换色谱法。
这两种方法中前者是用C18色谱柱，后者是用离子交换树脂柱[6-9]。
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供试品溶液的制备 :榨汁法制样(选果2削皮2切片2榨汁2过滤) ,所得果汁准确称取 3 g 左右 ,加入适量流动相 缓冲溶液后 ,加入 Carrez 试剂Ⅰ和Ⅱ各 0. 1 mL ,再用流动相缓冲溶液定容于 25 mL 容量瓶中 ,静置. 1. 3 色谱条件
色谱柱 : Eclipse XDB2C8柱 (4. 6 ×150 mm ,5μm) ;流动相 A :甲醇 ,流动相 B :0. 01 mol·L - 1磷酸二氢钠 2磷酸缓冲液 (p H = 2. 6) ;梯度洗脱程序 :0～2. 4 min 内 ,由 7. 5 % A 变化为 1. 5 % A ,此后流动相 A 的比例 不变. 流动相流速 :0. 5 mL·min - 1 ;进样体积 :20μL ;紫外检测波长 :214 nm ;柱温 :25 ℃.
0. 999 8 0. 999 6 0. 999 7 0. 999 9
0. 004 20 0. 004 23 0. 000 01 0. 008 40
3. 27 0. 64 0. 33 3. 71
96. 57 101. 03 101. 79
99. 18
由表 1 可知 , 有机酸回归方程的相关系数大于 0. 999 5 , 线性良好. 本法的回收率在 93. 01 %～ 101. 79 %之间 ,变异系数在 4 %以内 ,精密度较高 ,结果准确. 2. 3 样品制备方法的探讨 2. 3. 1 关于榨汁制样法与水果中维生素 C 含量的测定
考虑到水果机体成分复杂 ,从保护色谱柱及提高分离效果的目的出发 ,本文将卡瑞 (Carrez) 试剂作为 水果样品净化剂应用于水果中有机酸的测定.
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂 Agilent 1100 高效液相色谱仪 (含四元泵 、柱温箱 、可变波长紫外检测器 、手动进样器 、定量环等) . 水
甲醇2水系统或甲醇2磷酸盐缓冲系统是在 C8或 C18柱中应用最广的流动相 ,经实验发现用甲醇2磷酸盐缓 冲系统更适合使用 C8柱分析有机酸. 由于流动相的 p H 值对有机酸的保留时间有较大影响 ,因此 ,通过调节流 动相的 p H 值 (p H 2. 3 ,2. 5 ,2. 6 ,2. 7 ,2. 8) 对 8 种有机酸进行检测 ,当 p H 值较小时草酸与酒石酸分离效果很 好 ,但富马酸和琥珀酸分离效果不佳 ;当 p H 值较大时结果相反. p H 值为 2. 6 时分离效果较好. 2. 1. 3 流动相流速
2 结果与讨论
2. 1 色谱条件的优化 2. 1. 1 检测波长的确定
对每种有机酸的吸光度进行波长扫描 ,发现这 8 种有机酸的最大吸收波长在 204～243 nm 之间. 参考 文献[ 2～4 ] ,并经实验确定 214 nm 为检测波长. 2. 1. 2 流动相的选择及其 p H 值的确定
张晋芬1 ,袁 冰1 ,徐华龙1 ,沈 伟1 ,冷 平2
(1. 复旦大学 化学系 ,上海 200433 ; 2. 中国农业大学 果树学系 ,北京 100083)
摘 要 : 应用卡瑞 (Carrez) 试剂处理水果样品 ,采用反相高效液相色谱法 ( RP2HPLC) 测定了梨 、苹果 、草莓 、油桃 等水果中维生素 C 及其他共 8 种有机酸成分. 在以 C8为色谱柱 、紫外检测器 (波长 214 nm) ,甲醇和磷酸盐缓冲 液 (p H = 2. 6) 作为流动相梯度洗脱 ,流速为 0. 5 mL·min - 1 ,柱温为 25 ℃的色谱条件下 ,1 次同时分析水果中 8 种有机酸仅需 6 min ,有机酸标准曲线相关系数均在 0. 999 5 以上 ,回收率在 93. 01 %～101. 79 %之间 ,变异系数 小于 4 %. 该方法简便 、准确 、快速 ,样品制备方法独特 、有效 ,可应用于水果中常见有机酸的高效检测. 关键词 : 反相高效液相色谱法 ; 有机酸 ; 水果 ; Carrez 试剂 中图分类号 : O 652. 63 文献标识码 : A
Y = ax + b Y = 24 487 x - 38. 944 Y = 4 411. 1 x + 1. 637 3 Y = 31 292 x - 7. 309 Y = 2 081. 5 x - 2. 990 4
r ρ检出限/ ( mg·mL - 1) RS D/ % ( n = 3)
0. 999 5 0. 000 21
Carrez 试剂[7 ] Ⅰ:将 3. 6 g 六氰合铁 ( Ⅱ) 酸钾{ K4 [ Fe (CN) 6 ]·3 H2O} 用 100 mL 蒸馏水溶解. Carrez 试剂 Ⅱ:将 7. 20 g 硫酸锌 ( ZnSO4·7 H2O) 用 100 mL 蒸馏水溶解. 1. 2 对照品及供试品溶液的制备 对照品溶液的制备 :分别称取适量各有机酸对照品 (0. 5～1. 5 g ,精确至 0. 1 mg) ,分别用流动相缓冲
进样 20μL ,采集数据. 分别以各组分的峰面积 y 对标准工作溶液的浓度 x ( mg·mL - 1) 进行线性回归分 析 ,8 种有机酸的回归方程 、相关系数及检出限见表 1.
准确称取相同样品 (水晶梨) 两份 ,其中 1 份加入已知量有机酸标样 ,另一份不加 ,每份样品平行测定 3 次 ,利用增量法计算回收率 ,并计算变异系数.
表 1 8 种有机酸的回归方程 、相关系数 、检出限 、变异系数及回收率
Tab. 1 Regression equation ,correlation coefficient ,detection limit ,variation coefficient and recovery ratio
有机酸 草酸 酒石酸 维生素 C 苹果酸
由于维生素 C 有较强的还原性 ,在通常情况下不稳定 ,因而需要单独测定 ,操作繁琐费时 ,且测定值 往往偏低[6 ] . 我们以梨为对象研究了利用反相高效液相色谱法 ,分析时间在 6 min 以内 、一次同时测定水 果中包括维生素 C、草酸 、酒石酸 、L2苹果酸 、乳酸 、柠檬酸 、富马酸 、琥珀酸共 8 种有机酸含量的方法. 结果 稳定 、可靠. 进而将这种方法推广到其他水果品种 ,比如苹果 、草莓 、油桃等.
实验分别考察了 0. 2 ,0. 5 ,0. 8 ,1. 0 mL·min - 1 4 个条件. 流速为 0. 5 mL·min - 1时 ,色谱分离效果最好. 2. 1. 4 流动相的配比
分别考察了等度洗脱 (甲醇含量分别为 1 % ,2 % ,3 % ,5 % ,6 %) 及梯度洗脱两种情况. 发现在等度洗 脱中 ,当甲醇比例较大时草酸与酒石酸分离较好 ,但柠檬酸与乳酸 、富马酸和琥珀酸分离效果不佳 ;当甲醇 比例较小时分离情况相反. 且每种甲醇比例均不能使维生素 C 与 L2苹果酸得到有效分离 ,说明等度洗脱 不能满足分离要求. 根据上述经验 ,经多次实验尝试了各种梯度后 ,发现当梯度为 0～2. 4 min 内 ,流动相 中甲醇的比例由 7. 5 % 变化为 1. 5 % ,此后流动相 A 的比例不变时 ,维生素 C 与 L2苹果酸分离较好并能 够进行定量分析 ,其他有机酸也能达到分离的目的.
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第 4 期
张晋芬等 :高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法
47 5
2. 2 线性关系 、检出限 、精密度及回收率 将混合标准有机酸的系列工作溶液 ,按上述色谱条件依次由低浓度向高浓度经 0. 45μm 针头过滤后
在以上优化所得色谱条件下对照品及样品的色谱图见图 1.
图 1 有机酸对照品 (a) 与水晶梨供试品 (b) 的色谱图 Fig. 1 Chromatograms of standard solutions of organic acids (a) and sample solution extracted from pear (b)
1. 98
0. 999 7
0. 002 10
Hale Waihona Puke 1. 300. 999 9
0. 000 25
0. 15
0. 999 8
0. 001 18
0. 14
η回收率/ % 93. 01
98. 02 98. 98 100. 83
乳酸 柠檬酸 富马酸 琥珀酸
Y = 2 031. 5 x + 1. 564 3 Y = 2 311. 1 x - 1. 539 4 Y = 258 446 x - 2. 750 1 Y = 1 063. 5 x - 1. 778 7
收稿日期 : 2007211229 基金项目 : 北京市科技计划资助项目 (D 0706002000091) 作者简介 : 张晋芬 (1962 —) ,女 ,高级工程师 , E2mail :jfzhang @fudan. edu. cn ;通讯联系人 徐华龙教授 , E2mail : shuhl @
水果中相当部分的干物质是有机酸 ,它往往比许多其他物质更多地决定水果的特殊味道 ,并在食品营 养学中占有重要位置[1 ] ,不同种类的水果中有机酸的种类和含量差别很大 ,故在现代食品工业中对有机 酸的研究已愈加重视和普及. 有机酸的分析方法主要有 :酸碱滴定法 、薄层色谱法 、气相色谱法 、离子色谱 法及高效液相色谱法等[2 ] . 高效液相色谱法操作简便 、准确度高 、重现性好 ,可同时定量测定多种有机酸 , 但高效液相色谱法测定水果中有机酸的报道中有机酸种类及水果品种相差较多[325 ] ,尤其是草莓与油桃 这两类水果未见报道.