纯化与精制色谱技术资料
色谱柱制备纯化工艺
色谱柱制备纯化工艺
1. 选择合适的填料，色谱柱的填料通常是硅胶、聚合物或者其
他介孔材料。
选择合适的填料对于分离和纯化目标化合物非常重要，需要考虑填料的孔径大小、表面活性和化学稳定性等因素。
2. 色谱柱的装填，在制备色谱柱时，需要将填料均匀地装填到
柱内，以确保色谱分离的效果。
通常会使用适当的溶剂和压缩装填
的方法来实现均匀的填充。
3. 优化流动相条件，流动相的选择和优化对于色谱分离的效果
至关重要。
需要考虑流动相的极性、溶解度和流速等因素，以获得
最佳的分离效果。
4. 样品预处理，在进行色谱柱制备纯化工艺前，通常需要对样
品进行预处理，包括溶解、过滤和浓缩等步骤，以确保样品的纯度
和稳定性。
5. 分离条件的优化，在进行色谱柱制备纯化工艺时，需要对分
离条件进行优化，包括色谱柱的温度、压力和流速等参数的调节，
以获得最佳的分离效果。
总的来说，色谱柱制备纯化工艺涉及多个方面的操作和优化，需要综合考虑填料选择、装填技术、流动相条件、样品预处理和分离条件的优化等因素，以确保获得高纯度的目标化合物。
这些步骤的合理操作和优化将对实验结果产生重要影响。
制备色谱技术与操作资料
制备色谱技术与操作资料制备色谱技术与操作半制备HPLC：仪器管路粗，进样体积大（可达1mL以上），进样量大（一般可达到几十毫克），检测池大，泵耐压大，流速高（可达10mL/min甚至更高），柱子内径3cm~100cm，含馏分收集器，可以制备样品进行其它定性检测，或接分析柱也可进行HPLC分析。
制备色谱柱和填料：玻璃柱和不锈钢柱，填料可为硅胶、键合固定相（如C18）、离子交换树脂、聚酰胺、氧化铝、凝胶，对硅胶进行硝酸银（或缓冲液）处理可提高分离效果。
疏水样品选择反相固定相亲水样品选择正相固定相大分子选择离子交换色谱固定相碳水化合物选择疏水色谱固定相无机离子选离子色谱固定相合成聚合物选凝胶色谱固定相立体异构样品选环糊精固定相外消旋样品选手性固定相样品前处理：萃取、过滤、结晶、固相萃取。
装柱方法：颗粒直径小于20－30um的固定相采用湿法装填，使相对稀松的固定相悬浆以高速装入色谱柱子，从而减少空隙的形成。
柱直径大于20mm，所加压力为30－40bar时，采用柱长压缩技术，先将固定相悬浆（或偶尔是干填充物）装入柱中加压，利用物理方法将其压紧，如径向压缩和轴向压缩。
流动相：色谱分离后要旋转蒸发溶剂，不宜采用高毒性溶剂，少用多元溶剂，溶剂的纯度也要考虑。
碱性流动相不能用于硅胶柱，酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统，离子交换树脂＆排阻色谱遇到某些有机溶剂会膨胀或收缩，从而改变柱床的性质。
流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。
流动相选择方法（1）由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
（2）三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
（3）粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
生物大分子色谱分离及纯化
3、 AFC--亲合色谱（Affinity Chromatography）
AFC是利用配体与目标蛋白间的特异性 的亲和作用，使变性蛋白分子保留在柱的 顶端从而与变性剂分离的方式，使变性蛋 白在洗脱过程中进行复性。
生物大分子色谱分离及纯化
4、 HIC--疏水作用色谱 （Hydrophobic Interaction
生物大分子色谱分离及纯化
色谱分类(按照进样量)
1、分析色谱（10mg） 2、中等规模制备色谱或半制备色谱（10-50mg） 3、制备色谱（0.1-1g） 4、工业生产规模色谱（大于20g/d）
生物大分子色谱分离及纯化
第一节 基本理论
一、计量置换保留理论
(1)溶质计量置换吸附理论。
它的核心是，当一个溶质被吸附剂吸附时， 在溶质分子和吸附剂接触表面处必然会释放出一 定数目的溶剂分子。
第七章 生物大分子的色谱分离 和纯化
生物大分子色谱分离及纯化
分离方法
➢从现在分离科学理论计算得出，色谱和电泳是 目前所知最好的两种分离方法，其理论塔板数可 达百万数量级。
➢但是，因受各种因素的限制，电泳目前尚不能 用于生产规模的生物大分子的分离纯化，这就是 人们把分离和纯化生物大分子（包括蛋白质、酶、 核酸和多糖等，以下简称蛋白）的研究重点放在 色谱上的原因。
和回收率 3、复性同时达到纯化目的 4、便于回收变性剂，生物以大分降子色低谱分废离及水纯化处理成本
1、 SEC---空间排阻色谱或尺寸排 阻 色 谱 （ Size Exclusion Chromatography）
生物大分子色谱分离及纯化
该法的复性机理为：
在变性蛋白进入柱顶端时，因有高浓度变性 剂的存在，变性蛋白质分子有一个随机的构象状 态和大的动力学水和半径，不能进入柱的空隙， 蛋白质在SEC柱上不保留。当受到复性的缓冲溶 液洗脱时，因其逐步取代变性剂并使蛋白质浓度 降低，使变性蛋白质分子处于热力学不稳定的高 能状态，这些蛋白质分子就会自发地向热力学稳 定的低能态-即蛋白质的天然状态转化，从而使变 性蛋白质开始复性。
纯化与精制- 色谱技术讲解共111页文档
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
蛋白纯化方法—凝胶过滤色谱
活性蛋白整体方案凝胶过滤色谱摘要：本文主要讲解了凝胶过滤色谱法（分子筛）在蛋白纯化实验中的应用，包括纯化原理、实验方案设计、技术操作以及相关案例介绍和问题分析。
基本原理凝胶过滤色谱蛋白纯化法，又称为空间排阻色谱，分子筛等。
其原理是应用蛋白质分子量或分子形状的差异来分离。
当样品从色谱柱的顶端向下运动时，大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒从而被迅速洗脱；而较小的蛋白质分子能够进入凝胶颗粒中，且进入凝胶的蛋白在凝胶中保留时间也不同，分子量越大，流出时间就越早，最终分离分子大小不同的蛋白质。
凝胶过滤色谱原理通常，多数凝胶基质是化学交联的聚合物分子制备的，交联程度决定凝胶颗粒的孔径。
常用的色谱基质有：葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、聚丙烯酰氨凝胶（Bio-Gel P）等。
高度交联的基质可用来分离蛋白质和其他分子量更小的分子，或是除去低分子量缓冲液成分和盐，而较大孔径的凝胶可用于蛋白质分子之间的分离。
选用合适孔径的凝胶很大程度取决于目标蛋白的分子量和杂蛋白的分子量。
实验方案设计1.凝胶介质的选择凝胶介质的选择主要是根据待分离的蛋白和杂蛋白的分子量选择具有相应分离范围的凝胶，同时还需要考虑到分辨率和稳定性的因素。
比如，如果是要将目的蛋白和小分子物质分开，可以根据他们分配系数的差异，选用Sephadex G-25和G-50；对于小肽和低分子量物质的脱盐，则可以选用Sephadex G-10、G-15以及Bio-Gel P-2或P-4；如果活性蛋白整体方案是分子量相近的蛋白质，一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。
具体凝胶过滤色谱介质应用如下：常用凝胶过滤色谱介质的分离范围凝胶介质蛋白质的分离范围/103凝胶介质蛋白质的分离范围/103Sephadex G25 Sephadex G50 Sephadex G100 Sephadex G200 Sepharose6B Sepharose4B1~51.5~304~1505~60010~400060~20000Sepharose2BBio-Gel P-4Bio-Gel P-10Bio-Gel P-60Bio-Gel P-150Bio-Gel P-30070~400000.5~45~1730~7050~150100~4002.凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀（胶：水=1：10），自然溶胀的耗时较长，可采用加热的方法使溶胀加速，即在沸水浴中将凝胶升温至沸，1~2h即可达到溶胀。
色谱法分离纯化流程及注意事项
色谱法分离纯化流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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制备色谱技术与操作资料
制备色谱技术与操作1 制备色谱到底是什么？请介绍一下制备色谱？答；有些搞分析色谱的朋友，对制备色谱这个名词比较陌生。
其实，在化学化工医药等广泛采用的层析法以及薄层色谱就是最为典型的制备色谱。
下面对制备色谱中的一些常用概念做一下介绍。
（1）分析色谱的目的，是分析出混合物中一个（或者几个）纯物质的含量。
制备色谱的目的，是从混合物中得到纯物质。
为了加快分离的时间与提高分离的效率，制备色谱的的进样品量很大，导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱的直径和长度，使用的相对多的流动相。
然而，当色谱柱上样品负载加大的时候，往往导致柱效急剧下降而得不到纯的产品。
制备色谱，要解决容量与柱子效果之间的矛盾，对重现性也要考虑。
从经济上来说。
制备色谱要争取少用填料，少用溶剂，要尽可能多的得到产品。
（2）样品的前处理：制备色谱柱子由于处理的样品多，比分析柱子更容易受污染，所以，必要的前处理就显得非常的必要。
萃取、过滤、结晶、固相萃取等简单的分离方法，如果用得上，而且还不是很麻烦，就要尽可能多的采用以去掉杂质。
（3）制备色谱柱的材质及其特点。
下面介绍一下，制备色谱柱常用的材质及其特点。
各种规格的玻璃柱子在实验室里头很容易得到，而且价格低廉，但玻璃柱子致命的弱点是它能承受的压力很小，且非常容易破碎。
当由于压力太小而导致流动相流速很慢的时候，高位液面或加高压空气（或者氮气）的采用是一个简单的解决办法。
在底下加真空，也能在一定程度上解决这个问题。
不锈钢柱子具有良好的耐腐蚀、抗压力性能，但其价格相对很贵。
如果，只有很小的分离任务且经费也允许，市面上直径为1cm的小型制备柱就是首选。
有机玻璃柱子也能抗压力耐腐蚀，相对不锈钢柱子而言，它是半透明的，可以看到液体的运行状态，对有色的物质其特点就更为突出。
（4）固定相的选择：硅胶、键合固定相（如C18）、离子交换树脂、聚酰胺、氧化铝、凝胶等都可以作为色谱柱的填料。
纯化与精制- 色谱技术讲解
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（8）色谱柱的理论塔板：流动相与固定相平均浓度 达传质平衡时的一段柱高（塔板高度）
反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与 柱高之间的关系
理论塔板数的计算方法：
N 5.54( tR )2 W1/ 2
N---理论塔板数
N 16( tR )2 Wb
tR---保留时间
W1/2---半峰宽
Wb---峰底宽度
理论塔板高度：H
L---柱长
L
H
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N
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6.色谱分离操作
（1）装柱 （2）上样 （3）淋洗 （4）洗脱方法 按操作方式 a 恒定洗脱 b 分步洗脱 c 梯度洗脱 按洗脱机理 专一性洗脱（specific elution） 非专一性洗脱（nonspecific elution）
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（1）装柱
装柱的质量直接影响到分离的效 果，因而装柱是分离成功的最关键的 一步。
目前，装柱的方式主要采用自然 沉降法、加压法等。
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自然沉降法装柱的要点
1.先在柱内注入约1/3柱高的起始缓冲液，并排除好 气泡；
2.将填充层析介质慢慢地、连续不断地添加到装有缓 冲液的柱中，确保装柱均匀、不断层、无气泡；
（2）基线：在操作条件下，色谱柱出口没有 组分流出，仅有流动相流过监测器，此时流 出的曲线。
（3）色谱峰：当样品中的组分随流动相流入 监测器时，监测器的响应信号随时间变化所 形成的峰形图形。
201（9/6/94）峰形：对称于峰尖的正态分布曲线。 12
洗脱曲线
返回
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色谱技术在复杂混合物的分离和纯化中的应用
色谱技术在复杂混合物的分离和纯化中的应用随着化学、生物学、医学等领域的发展，对于复杂化合物的分离和纯化的需求越来越高。
为了满足这个需求，色谱技术被广泛应用于分离和纯化的过程中。
色谱技术通过不同的物理化学性质来分离混合物的不同组分，可以应用于从纯化生物大分子（如蛋白质、核酸和多糖等）到分离有机合成小分子化合物（如药物、天然产物和农药等）。
该技术的灵活性和高效性有助于提高纯度和产量，使其成为分离和纯化的选择之一。
1. 色谱技术的种类色谱技术分为数十种，包括气相色谱、液相色谱、离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和层析色谱和超高效液相色谱等。
它们都是基于样品组分的物理或化学差异来实现分离，因此能够分离很多不同类型的混合物。
不同类型的色谱技术在分离目标组分方面各有不同的优势。
例如，气相色谱适用于分离揮发性小分子化合物；液相色谱适用于分离相对较大或极性化合物。
2. 色谱技术的原理色谱技术的操作原理基于物理和化学原理。
通常，混合物被载入到色谱柱中，然后在柱壳中进行分离。
每个组分会按照其物理化学性质在柱上发挥作用，并随着柱壳逐渐被分离出来。
混合物中的各个组分在柱内相互作用，从而导致分离。
例如，气相色谱是基于挥发性化合物在某气体载流剂下分离。
其工作原理是通过在分离柱中增加特殊的固定相来分离各种气体组分。
在高温和低压的情况下，组分在柱上通过物理和化学作用进行分离，并逐渐释放出来。
从而达到单独分离和纯化的效果。
3. 色谱技术的应用色谱技术被广泛应用于生命科学、化学和医学等领域的分离和纯化过程中。
例如，在药物研究中，化学家通常需要从复杂混合物中纯化合成化合物。
以期获得高纯度的药物，并便于其进一步研究。
在这种情况下，液相色谱和超高效液相色谱是首选的技术，因为它们可以快速、高效地分离小分子化合物。
在生命科学中，色谱技术也被广泛应用。
例如，纯化人类蛋白质以发现新的抗癌治疗药物。
又如氨基酸和多肽的纯化，需要使用亲和层析色谱。
此外，色谱技术也被用于食品和环境领域，比如剩余农药的检测和金属离子浓度的检测。
色素 精制纯化方法
色素精制纯化方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：色素是一种广泛存在于植物、动物和微生物中的天然化合物，它们赋予生物体色彩并具有重要的生物学功能。
色素的提取和精制纯化是许多行业和领域的重要技术之一，比如食品、医药、化妆品等。
本文将介绍一些常用的色素精制纯化方法，帮助读者更好地了解色素的提取和利用。
一、色素的提取方法1. 溶剂提取法：溶剂提取法是一种常见的色素提取方法，通过溶剂与生物材料进行浸提、浸泡等操作，使色素溶解于溶剂中，然后分离得到色素溶液。
常用的有乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等。
这种方法简单易行，但对溶剂的选择和分离工艺要求较高。
2. 超临界流体提取法：超临界流体提取法是一种利用超临界流体对生物材料进行提取的方法，适用于一些热敏性色素的提取。
超临界流体具有介于液体和气体之间的特性，具有较高的溶解力，可提高提取效率。
3. 超声波提取法：超声波提取法是利用超声波的机械振动和热效应对生物材料进行提取的一种方法，通过超声波的作用，使得生物材料组织破碎，色素释放到提取液中，提高了提取效率和速度。
4. 微波辅助提取法：微波辅助提取法是利用微波能量对生物材料进行加热，使得色素得到释放的一种方法，具有加热速度快、效率高的特点。
二、色素的精制纯化方法1. 降低pH值法：色素的溶解度和稳定性受pH值的影响较大，通过调节溶液的pH值，可以使色素得到溶解或沉淀，实现色素的分离和纯化。
2. 柱层析法：柱层析法是一种分离和纯化化合物的常用方法，通过在柱中填充吸附剂，如硅胶、分子筛等，根据不同化合物在吸附剂上的相亲性差异，实现色素的分离和纯化。
3. 结晶法：结晶法是一种常见的色素精制纯化方法，可将色素沉淀、结晶，并通过重结晶等操作，得到较高纯度的色素产品。
4. 色谱法：色谱法是一种用于分离和分析复杂混合物的方法，包括薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱等，可实现色素的分离和纯化。
色素的提取和精制纯化方法有多种，每种方法都有其适用的情况和特点。
色谱分离纯化与分析技术
色谱分离示意图 色谱法的特点是： ① 高分离效能：能分离分析性质相近的混合组分，如：同系物、同位素、同分异构 体、空间异构体等。能高效分离沸点相近或组成复杂的多组分混合物。 ② 高灵敏度：样品用量小，可分析 10-14 ～10-7 克数量级的物质，用于痕量分析。 ③ 分析速度快：可实现分离、分析一次完成，自动化程度高。 ④ 应用广泛：无论是无机物、有机物、高分子化合物，还是具有生物活性的生物大 分子，都可以选择不同的色谱方法进行分离和分析。普遍应用于化学、化工、医 学、环境、生命科学等多学科领域。 色谱法是 20 世纪初发展起来的一种分离分析方法，经过多年的发展，目前已经有多种 分离类型和操作方法。人们从不同角度，对色谱分离方法进行了如下分类： (1) 按两相的物理状态分类： 以气体为流动相的色谱称为气相色谱(gas chromatography, GC)：根据固定相是固体吸附 剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体），气相色谱又可分为气固色 谱(gas-solid chromatography, GSC)和气液色谱(gas-liquid chromatography, GLC)。 以液体为流动相的色谱称液相色谱(liquid chromatography, LC)：同理液相色谱也可分为 液 固色谱 (liquid-solid chromatography, LSC) 和液 液色谱 (liquid-liquid chromatography, LLC)。 以超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱 (supercritical fluid chromatography, SFC)。 以化学反应将固定液键合到载体表面， 这种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱 （bonded phase chromatography, BPC）。 (2) 按固定相的外型分类: 将固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，根据材质的不同又分为纸色谱 (paper chromatography, PC)和薄层色谱(thin layer chromatographu, TLC)。 将固定相装于色谱柱内的色谱法，称为柱色谱(column chromatography, CC)。色谱柱又 分为空心柱，填充柱或毛细管柱等等。
凝胶色谱层析纯化技术
凝胶色谱层析纯化技术
凝胶色谱层析纯化技术是一种常用的分离和纯化生物分子的方法，主要用于分离和纯化蛋白质、多肽、核酸和其他生物大分子。
凝胶色谱层析技术根据分离物质的尺寸和形状选择合适的凝胶材料，通过分子在凝胶孔隙中的扩散速率以及与凝胶之间的亲疏水性质之间的交互作用来实现分离。
凝胶色谱层析纯化技术主要分为两种类型：分子筛层析和配体亲和层析。
在分子筛层析中，分离物分子根据其尺寸通过凝胶层析柱，大分子在凝胶中的扩散速度较慢，因此会稍微滞留，而小分子则通过凝胶层析柱较快。
这种方法可以实现按分子大小分离的纯化。
而在配体亲和层析中，凝胶上有特定的配体，可以与目标分子的特定结构或动力学性质发生特异性结合，从而达到分离和纯化的目的。
凝胶色谱层析纯化技术在生物分离纯化领域具有广泛的应用，例如可以用于蛋白质的分离与纯化，并能够提供高纯度、高稳定性的蛋白样品。
此外，凝胶色谱层析还可以用于核酸纯化、多肽纯化等生物大分子的纯化工作。
凝胶色谱层析技术具有操作简单、分离效果好、灵活性高等优点，因此被广泛应用于生物学研究和生物工程领域。
制药工艺中的纯化技术应用
制药工艺中的纯化技术应用第一章：引言制药行业是医药行业的一个重要分支，其目标在于生产符合严格标准的药品。
为了保证药品质量，制药工艺需要经过多个工序，其中纯化技术是制药工艺中的一个重要环节。
本文将介绍制药工艺中纯化技术的应用。
第二章：制药工艺中的纯化技术纯化技术是指通过物理、化学、生物等多种手段将药品中的杂质分离，从而提高药品的纯度、效价和稳定性。
纯化技术在制药工艺中有着广泛的应用，其中比较常见的有以下几种：1.溶剂萃取技术溶剂萃取技术是制药工艺中常用的纯化技术之一。
其原理是利用溶剂的疏水性来分离出不同极性的化合物。
此技术在提取天然药物中的有效成分方面应用最为广泛。
2.色谱技术色谱技术是制药工艺中最常用的分离技术之一。
它通过对药品中分子级别的分离，来达到提高纯度的目的。
常用的色谱技术包括气相色谱、高效液相色谱、离子交换色谱等。
3.膜分离技术膜分离技术是制药工艺中的一种新型分离技术，其包括微滤、超滤、逆渗透等不同类型。
此技术在制药中广泛应用于药物分离、杂质去除、浓缩等方面。
4.离子交换技术离子交换技术在制药工艺中的应用主要是通过离子交换树脂将带电离子的药品分离开来。
此技术广泛应用于药品的制备和纯化过程。
第三章：制药工艺中纯化技术的应用案例1.利用色谱技术提高药品纯度对于一些需要高纯度的药品，色谱技术可以用来提高它们的纯度。
比如，利用高效液相色谱技术对阿司匹林中的不纯物进行分离，可以得到高品质的阿司匹林原料。
2.利用离子交换技术分离药品一些药品中存在带电离子，需要通过离子交换技术将其分离开来。
比如，对于一些含有铁离子的药品，通过离子交换技术可以分离出无铁离子的药品。
3.利用膜分离技术浓缩药品对于一些需要浓缩的药品，可以使用膜分离技术来实现。
比如，利用超滤膜可以将含有蛋白质的药物浓缩到所需浓度。
第四章：结论纯化是制药工艺中的一个重要环节，其主要目的在于提高药品的质量和稳定性。
制药工艺中常用到的纯化技术包括溶剂萃取技术、色谱技术、膜分离技术和离子交换技术等。
药物分离纯化技术-制备色谱分离技术
适用范围广
制备色谱分离技术适用于各种类型的 混合物，包括有机物、无机物、生物 大分子等。
可重复性高
制备色谱分离技术具有较高的可重复 性，能够保证分离结果的稳定性和可 靠性。
制备色谱分离技术的缺点
01
02
03
成本较高
制备色谱分离技术需要使 用专门的仪器和耗材，成 本较高。
需要专业操作
制备色谱分离技术需要专 业人员进行操作和维护， 操作难度较大。
适用范围广
制备色谱分离技术适用于各种 类型的药物，包括小分子化合 物、大分子蛋白质、多糖等。
操作简便
制备色谱分离技术的操作相对 简单，易于实现自动化和规模
化生产。
制备色谱分离技术的未来展望
新型材料的研发
随着材料科学的不断发展，未来将会有更多新型的色谱填 料和介质被研发出来，进一步提高制备色谱分离技术的效 果和效率。
可能造成样品损失
在制备色谱分离过程中， 可能会造成目标成分的损 失或降解，影响产物的纯 度和产量。
制备色谱分离技术的发展趋势
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新型固定相的开发
随着材料科学的不断发展，新型固定相的研发和 应用将进一步提高制备色谱分离技术的效率和纯 度。
连续色谱分离技术
连续色谱分离技术能够实现连续进样和分离，提 高分离效率，是未来发展的重要趋势。
智能化和自动化
未来制备色谱分离技术将更加智能化和自动化，能够实现 实时监测、自动控制和调整，提高生产效率和产品质量。
绿色环保
随着环保意识的不断提高，未来制备色谱分离技术将更加 注重绿色环保，减少对环境的污染和资源消耗。
联合应用
未来制备色谱分离技术将与其他分离技术联合应用，形成 多级分离流程，进一步提高药物的纯度和收率。
生物分离工程124纯化与精制-色谱技术
凝胶色谱
原理
应用
利用凝胶颗粒的孔径大小对不同大小分子 进行分离。
常用于蛋白质、多糖等生物大分子的分离 。
优点
操作简便，分离效果好。
缺点
对高分子量物质有局限性，且凝胶需定期 更换。
03 色谱技术在生物分离纯化 中的应用
蛋白质分离纯化
蛋白质分离纯化是色谱技术的重要应 用之一，通过色谱分离技术，可以将 蛋白质混合物中的各个组分进行分离， 得到高纯度的蛋白质。
色谱技术在蛋白质分离纯化中具有分 离效果好、操作简便、可重复性好等 优点，是生物制品制备过程中不可或 缺的重要环节。
常用的色谱分离方法包括凝胶色谱、 离子交换色谱、亲和色谱等，这些方 法可以根据蛋白质的大小、电荷和亲 和力等性质进行分离。
酶的分离纯化
酶是一种具有催化功能的生物大分子，酶的分离纯化 也是色谱技术的重要应用之一。
应用领域的拓展
生物医药领域
利用色谱技术分离和纯化 生物药物，提高药物质量 和产量。
食品安全领域
用于食品中添加剂、农药 残留等的检测和分离。
环境监测领域
用于空气、水体等环境样 品中污染物的分离和检测。
未来挑战与机遇
挑战
随着分离物种类和分离要求的不 断增加，色谱技术面临的挑战也 越来越大。
机遇
随着科技的不断进步和应用领域 的拓展，色谱技术将迎来更多的 发展机遇。
核酸的分离纯化
核酸是生物体中的重要遗传物 质，核酸的分离纯化也是色谱
技术的一个重要应用方向。
通过色谱技术可以将核酸混合 物中的各个组分进行分离，得
到高纯度的核酸。
常用的色谱分离方法包括离子 交换色谱、凝胶色谱、亲和色 谱等，这些方法可以根据核酸 的大小、电荷和亲和力等性质 进行分离。
药物分离纯化技术-制备色谱分离技术
亲疏水性选择，一般分离大分子时，选 择疏水性的基质，活性易保持；
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制备色谱技 术
常规柱色谱的操作
(1)装柱：干法和湿法；
(2)上样：液体上样和拌样上样，样品带尽 可能窄；
(3)洗脱：始终保持洗脱剂液面高于柱床表 面，可梯度洗脱；
(4)流分收集：常采用固定体积收集法，结 合TLC检验；
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(6)
网吸 酰极 中 或非 骨 和
制
状附 结和 构分 ，子 大筛 比分 表离 面相 积结
合 ：
胺性 基、 、强 氮极 氧性 等 基 团含 ；氧
硫 基
----
----
等 极 性 甲 基 丙 烯 酸 酯
二极 乙性 烯、 基弱 苯极 聚性 合 而 成苯 ；乙
烯
----
架 结 构 决 定 树 脂 的 极 性 ：
R
制备色谱技术 Si O H+R O H
Si O R
Si OH + SOCl2
Si Cl
(2) 健合硅胶
Si Cl + RNH2
Si NHR
Si Cl + RX M g
Si R
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制备色谱技术
(3) 氧化铝 碱性氧化铝：其水提取液为pH9-10，常用于碳氢化合物的分离，从碳氢化
合物中除去含氧化合物。 中性氧化铝：5%乙酸处理，水提取液为pH7.5，适用于醛、酮、醌、某些
切割谱带更加方便；
a. 自动化：自动点样仪、自动程序 展开仪、薄层扫描仪、多种强制 流动技术、多种联用技术如傅立 叶变换红外、拉曼、质谱等。
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制备色谱技术
常规制备薄层色谱PTLC 薄层板制备 为了增大上样量，增加了吸附剂用量。 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、
药物分离纯化技术制备色谱分离技术
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集成化：将多个色谱单元集成在一 个系统中实现连续高效的分离过程。
应用领域：药物分离纯化、食品安 全、环境保护等领域。
色谱分离技术的智能化和自动化
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智能化色谱分离技术：利用人工智能和机器学习算法优化分离过程提高分离 效率和准确性。
单击此处添加标题
自动化色谱分离技术：通过自动化设备实现分离过程的连续化和远程控制提 高生产效率和降低人为误差。
药物分离纯化技术中的色谱分 离技术
汇报人：
单击输入目录标题 色谱分离技术概述 色谱分离技术的原理 色谱分离技术的操作流程
色谱分离技术在药物分离纯化中的应用 色谱分离技术的最新进展和未来发展方向
添加章节标题
色谱分离技术概述
定义和原理
定义：色谱分离技术是一种基于不同物质在固定相和流动相之间分配 平衡的差异实现混合物中各组分分离的物理分离方法。
新型色谱材料的研发和应用
新型色谱材料的种类和特点 新型色谱材料的制备方法和工艺 新型色谱材料在药物分离纯化中的应用实例 新型色谱材料的未来发展方向和趋势
色谱分离技术的联用和集成化
联用技术：将两种或多种色谱技术 联用提高分离效果和分离效率。
优势：提高分离纯度、分离效率和 分离范围降低能耗和试剂消耗。
THNK YOU
汇报人：
在疫苗的分离纯化中色谱分离技术可以根据疫苗成分的大小、电荷、疏水性等性质进行分离从而 实现高效、高纯度的分离效果。
色谱分离技术可以去除疫苗中的杂质和有害物质提高疫苗的安全性和有效性。
在疫苗的分离纯化中色谱分离技术可以与其他技术结合使用如离心、过滤、超滤等进一步提高疫 苗的纯度和质量。
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柱色谱法
薄层色谱法
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（3）根据流动相的物态不同的分类 ：
液相色谱（LC）：LLC、LSC 气相色谱（GC）：GLC、GSC （4） 根据流动相与固定相的极性分类 ： 正相色谱：固定相极性大于流动相 反相色谱：固定相极性小于流动相
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5.色谱分离的基本原理
任何色谱分离过程实质上都是溶质随流动相流动而迁 移的过程，不同溶质在流动相和固定相中的分配比例 不同，因而随流动相迁移的速度不同，从而使不同物 质分离开来。
峰高：峰顶点与峰底的垂直距离。
峰面积：峰与峰底之间的面积。 标准偏差（σ）：0.607h峰高处的峰宽的1/2 区域宽度（峰宽、半高峰宽、标准偏差） W=4σ
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（8）色谱柱的理论塔板：流动相与固定相平均浓度 达传质平衡时的一段柱高（塔板高度） 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与 柱高之间的关系 理论塔板数的计算方法：
相对保留值（r2，1）： 在相同操作条件下，待测组分与参 比组分的校正保留值之比。
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(7)分离度：相邻两色谱峰保留值之差与两组色谱峰 峰底宽度平均值之比。
R tR 2 tR1 (W 2 W 1) / 2
1完全分离
峰宽（W）：两侧拐点处所作的切线与峰底相交于两点， 此两点的距离。（见图） 半高峰宽（W1/2)：1/2峰高处的峰宽。
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3.色谱系统的基本组成
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Pharmacia
Ä KTA 层析系统
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4.色谱的分类
（1）根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同的分类
离子交换色谱分离法
吸附色谱法 分配色谱法 亲和色谱
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凝胶色谱
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（2）根据固定相的形状不同的分类：
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（1）装柱
装柱的质量直接影响到分离的效 果，因而装柱是分离成功的最关键的 一步。 目前，装柱的方式主要采用自然 沉降法、加压法等。
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自然沉降法装柱的要点
1.先在柱内注入约1/3柱高的起始缓冲液，并排除好 气泡； 2.将填充层析介质慢慢地、连续不断地添加到装有缓 冲液的柱中，确保装柱均匀、不断层、无气泡； 3.控制好流速和操作压，出水口不能降得太低； 4.层析柱一定要垂直，以免填充层析介质歪斜； 5.在柱的表面始终要保持一层溶剂，不能“流干”； 6.添加的填充层析介质不宜过稀； 7.装好柱后，应在柱的表面放一张滤纸片、尼龙纱或 人造丝网
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（3）上样
上样量的多少和上样体积大小是影响分离 效果的关键因素。上样量越少和上样体积越 小，则分离效果越好
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（2）平衡
平衡：用起始缓冲液溶液流经（浸泡）层 析介质，使层析介质颗粒四周和内部处于相同 pH和离子强度状态的过程。 层析柱正式使用前，必须平衡至所需的pH和 离子强度 一般用起始缓冲溶液在恒定压力下走柱 平衡液用量一般为相当于3~5倍床体积，使 层析介质充分平衡、柱床稳定
tR 2 N 5.54( ) W1/ 2
tR 2 N 16( ) Wb
tR---保留时间 Wb---峰底宽度 L---柱长
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N---理论塔板数 W1/2---半峰宽 理论塔板高度：H
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L H N
6.色谱分离操作
（1）装柱 （2）上样 （3）淋洗 （4）洗脱方法 按操作方式 a 恒定洗脱 b 分步洗脱 c 梯度洗脱 按洗脱机理 专一性洗脱（specific elution） 非专一性洗脱（nonspecific elution）
洗脱曲线
返回
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（5）洗脱体积 色谱柱中，使溶质从柱中流出所需流动相体积， 为洗脱体积
不同的溶质，由于和固定相的亲和力的不同，洗 脱体积也有所差异
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（6）保留值
保留值：混合物中各组分在色谱柱中停留的时间或将组分 带出色谱柱所需流动相体积的数值 保留时间（tR）：从开始进样至出口处被测组分出现浓度 最大值所需要的时间。 死时间（t0）：不被固定相滞留的组分（空气等），从开 始进样至出口处被测组分出现浓度最大值所需要的时间。 校正保留时间（tR’） ：扣除死时间后的保留时间。 （ t R ’＝ t R - t 0 ） 保留体积（VR） 、死体积（V0） 、校正保留体积（VR’）
溶质的迁移距离 Rf 流动相在色谱系统中的迁移距离
意义：在于体现某一种溶质与固定相之间的亲和 力大小
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5.2色谱图及基本概念
（1）色谱图：混合液中各组分经色谱柱分离 后，随流动相依次流出色谱柱进入监测器， 监测器的响应信号－时间（或流动相体积） 曲线，称为色谱图或色谱流出曲线。 （2）基线：在操作条件下，色谱柱出口没有 组分流出，仅有流动相流过监测器，此时流 出的曲线。 （3）色谱峰：当样品中的组分随流动相流入 监测器时，监测器的响应信号随时间变化所 形成的峰形图形。 （4）峰形：对称于峰尖的正态分布曲线。 12 2018/12/5
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5.1色谱分离的基本原理
（1）分配系数：溶质在固定相与流动相浓度比值 可由Langmuir方程得出
q Kd c
Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度
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（2）阻滞因子Rf 定义：阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度 和标准物（与固定相没有亲和力的流动相 Kd=0） 的迁移率之比
1.2.4纯化与精制- 色谱技术
概述 吸附色谱
离子交换色谱
凝胶过滤
亲和色谱
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第一节 色谱分离技术概述
1.色谱技术概念：色谱技术是一组相关分离方法的 总称，色谱柱的一般结构含有固定相和流动相，根
据物质在两相间的分配行为不同，经过多次分配
（吸附-解吸-吸附-解吸…），达到分离的目的。 2.特点： （1） 纯化倍数高 （2） 操作规模小，放大困难 （3） 终产品纯化 （4） 适用于价格昂贵的产品