标准血清及标准红细胞的制备
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标准血清及标准红细胞的制备
一、标准A 、B 、O 血清的制备
选择A 型、B 型、O 型的健康青、壮年，无菌操作采取静脉血液，使其在37 ℃凝固，待血清开始出现后，放冰箱内12 小时或24 小时，使冷凝素被自身红细胞吸收。取出离心沉淀分离血清，再将分离出来的血清置于56 ℃水浴中30 分钟或60 ℃5 分钟灭活补体，然后测定其效价和凝集力，符合规定要求时，即成标准血清。各级血站亦可将试验后的无异常、无乳糜的A 、B 、O 血型管分别抽出，按以上步骤处理，即成标准血清。
（一）凝集效价的测定
1．取小试管20 支，分两排放置于试管架上，前排标明A ，后排标明B ，再将各排由左而右注明号码。
2．各管均加生理盐水0．2 ml 。
3．吸取A 型被测血清0．2 ml ，加入A 排第1 管中，混匀，吸出0．2 ml 加入第2 管中，如此稀释至第10 管，从第10 管吸出的0．2ml 弃掉，用同样的方法取B 型被测血清在B 排中稀释，最后两排管的血清稀释倍数分别为1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶64 、1∶
128 、1∶256 、1∶512 、1∶1024 。
4．A 排管各加B 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml；B 排管各加A 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml，混匀。
5．放置室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果，以稀释倍数最高而又显凝集者为其凝集效价。上述操作过程见表20 －2 和表20 －3 。
表20 －2 A 型标准血清效价测定
管
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
生理盐水（ml）
A 型血清（ml）
2 ％B 型红细胞（ml）稀释倍数0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
0．2
0．2
0．2
0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
0．
2
0．
2
0．
2
0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
表20 －3 B 型标准血清凝集效价测定
管
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
生理盐水（ml）
B 型血清（ml）
2 ％A 型红细胞（ml）稀释倍数0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
0．2
0．2
0．2
0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
0．
2
0．
2
0．
2
0．2
0．2
0．2
0．
2
0．
2
0．
2
混匀后，放室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果。
如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为1∶128 。如第八管仍显凝集则其凝集效价为1∶256 。O 型标准血清抗A 、抗B 的凝集效价测定，可参照上述方法进行。
（二）标准血清的质量要求
A 型（抗B）效价应在1∶64 以上，
B 型（抗A）效价应在1∶128 以上，如果低于上述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，重新制备，如果效价太高，可按效价规定加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价＜
1∶4 。
（三）亲和力的测定
所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小而言。测定方法如下：
取待测血清0．1ml 放于玻片或瓷板上，取对应的10 ％红细胞生理盐水悬液0．05 ml ，加于血清中混匀并涂成直径约1cm 的圆形，立即记时。观察出现凝集的时间。并继续转
动玻片或瓷板，至3 分钟时观察凝集块的大小。
标准血清亲和力的质量要求，在15 ～30 秒以内应出现凝集，3 分钟时凝集块应在
1m- m2 以上，标准血清中不应含脂肪（脂肪可使效价迅速降低），不可污染细菌。
（四）标准血清的保存方法
合格的标准血清每50ml 加1ml1 ％硫柳汞水溶液防腐。再于A 型血清中加入1 ％的伊红水溶液；B 型血清中加入1 ％的煌绿水溶液，以识区别。最好小量分装，冰箱保存。用时拿出放置室温融化后再使用。
二、标准红细胞悬液的制备
2 ％标准红细胞悬液的制备：按需要型别，取全血1ml，加等渗盐水2 ～3ml，充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水2 ～3ml 按上述方法洗涤，共三次，最后取压积红细胞2 滴，加新鲜等渗盐水4 ml ，轻轻摇动，即成所需2 ％的标准红细胞悬液。
取压积红细胞5 滴，加新鲜等渗盐水4 ml ，即成5 ％红细胞悬液。取压积红细胞5 滴，加新鲜等渗盐水2 ml ，即成10 ％红细胞悬液。标准红细胞盐水悬液临用前制备，最多存放3 天，用ACD 溶液保存最长可保存1