pET-44a(+)大肠杆菌表达载体说明

pET-44a(+)

编号 载体名称

北京华越洋生物VECT5250 pET-­‐44a(+)

pET44a载体基本信息

别名: pET44a, p ET 44a

质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达

表达水平: 高

克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶

载体大小: 7311 b p

5' 测序引物序列: T7: 5'-­‐TAATACGACTCACTATAGGG-­‐3'

3' 测序引物序列: ColiDOWN: 5'-­‐TTCACTTCTGAGTTCGGCATG-­‐3' 载体标签: C-­‐HSV, N-­‐His, C-­‐His, N-­‐Thrombin, N-­‐Nus, N-­‐EK 载体抗性: 氨苄

备注: 载体同时含有N端及C端His标签; 含有N端Thrombin和EK蛋白酶酶切位点; p ET44a,b,c 载体的差异主要是在多克隆位点.

稳定性: 瞬时表达

组成型: 组成型

病毒/非病毒: 非病毒

pET44a载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET44a载体简介

pET44系列载体是设计用来克隆和高水平表达含有495个氨基酸的Nus标签的蛋白表达载体。与pET-­‐43.1系列载体相比，pET44系列载体额外编码一个N端的His蛋白纯化标签。pET42a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。

注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面 是反向的。T7 R NA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。对pET44a载体的单链测序可以使用COLIDOWN primer. 把表达的基因插入到载体的PshAI或者SmaI限制性内切酶位点时，可以通过EK蛋白酶或者Thrombin 蛋白酶将融合表达的Nus标签完全切除。

pET44a载体序列

ORIGIN

1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGATA CATATTTGAA TGTATTTAGA AAAATAAACA 121 AAAGAGTTTG TAGAAACGCA AAAAGGCCAT CCGTCAGGAT GGCCTTCTGC TTAATTTGAT 181 GCCTGGCAGT TTATGGCGGG CGTCCTGCCC GCCACCCTCC GGGCCGTTGC TTCGCAACGT 241 TCAAATCCGC TCCCGGCGGA TTTGTCCTAC TCAGGAGAGC GTTCACCGAC AAACAACAGA 301 TAAAACGAAA GGCCCAGTCT TTCGACTGAG CCTTTCGTTT TATTTGATGC CTGGCAGTTC 361 CCTACTCTCG CATGGGGAGA CCCCACACTA CCATCGGCGC TACGGCGTTT CACTTCTGAG 421 TTCGGCATGG GGTCAGGTGG GACCACCGCG CTACTGCCGC CAGGCAAATT CTGTTTTATC 481 AGCCTAGGAA CGCCCAACTT AATTAACATT AGTGGTGGTG GTGGTGGTGC TCGAGATCCT 541 CTGGGTCTTC AGGAGCGAGT TCTGGCTGGC TTGCACGTGT ATACAGCTGT GCGGCCGCAA 601 GCTTCGAACG CGTATCGATG GTACCGTCGA CGTCCTGCAG GCGCGCCTGT ACAGAATTCG 661 GATCCACGAG CTCCCGGACT CTTGTCGTCG TCATCAATCG TACCAGAACC CGCGCTGCCC 721 CGGGGGACCA GACCAGTTGG CGGTGGCGAG TCCATGTGCT GGCGTTCAAA TTTCGCAGCA

781 GCGGTTTCTT TACCCGCGGA GTGATGGTGA TGGTGATGAC CAGAACCACT AGTCGCTTCG 841 TCACCGAACC AGCAAATATT ACGGGCAGCC ATAATCAGTG CTCCGGCTTT TTCGTCGGTC 901 AACCCTTCGA TATCAGCCAG ATCATCAATG CCCTGTTCGG CGAGATCTTC CAGCGTACAA 961 ACGCCACGGG CGGCCAGTTT GAATGCCAAA TCACGATCTA CCCCTTCAAG GTTCAGCAGA 1021 TCGTCAGCCG GTTTGTTATC ACCGAGGCTT TCTTCCTGGG CCTGTGCAAT GGTGGCCAGT 1081 GCATTTTTAG CACGCTCGCG CAGTGCTTCA ACGGTCGGCT CATCAAGGCC TTCGATTTCC 1141 AACAGCTCTT TCATCGGCAC ATAGGCCAAT TCTTCCAGCG TCGAGAAGCC TTCTTCTACC 1201 AGAACAGTCG CGAAGTCTTC GTCGATGTCG AGATATTTGG TGAAGGTGTC GATCGCTGCG 1261 TGCGCTTCCG CCTGATGCTT AGCTTGCAGG TCGTCAACGG TCATCACGTT GAGTTCCCAA 1321 CCGCTCAGTT GCGAAGCCAG ACGCACGTTC TGACCGTTAC GGCCAATCGC CTGCGCCAGA 1381 TTACCGGCTT CAACGGCGAT GTCCATGGTG TGTTTATCTT CATCCACCAC GATAGAAGCA 1441 ACGTCTGCCG GTGCCATTGC GTTAATCACG AACTGCGCCG GGTTATCATC CCACAGGACG 1501 ATATCGATAC GCTCGCCACC CAGTTCAGTA GACACCGCCT GAACACGCGC GCCACGCATA 1561 CCTACGCAAG CACCTACCGG ATCGATACGT TTATCGTTGG TTTTCACCGC GATTTTCGCA 1621 CGAGAACCCG GATCGCGAGC CGCTGCTTTA ATTTCAATCA CTTCTTCGCC GATTTCTGGC 1681 ACTTCAATAC GGAACAGTTC GATCAGCATT TCCGGCTTGG AACGAGTGAC GAACAGTTGC 1741 GCGCCACGCG CTTCCGGGCG AACGGAATAG AGCACGCCAC GAACGCGGTC GCCAGGGCGG 1801 AAGTTTTCAC GCGGCAGCAT ATCTTCGCGC AGGATCACGG CTTCAGCGTT GTTGCCCAGA 1861 TCCAGAGAGA TGTTGTCGCG GTTTACTTTT TTCACCACGC CGGTGATGAT TTCACCTTCG 1921 TGTTCACGGA ACTGATCAAC CACCATCGCA CGTTCGGCTT CACGCACTTT CTGCACGATA 1981 ACCTGTTTTG CCGTCTGGGT AGTGATACGG TCAAAGGTAA CAGACTCAAT CTGATCTTCA 2041 ACGTAATCGC CCAGGTTCAG GCTTTCATCT TCATAACGTG CGGCTTCAAG GGTGATTTCC 2101 TTGGTCGGCT GGGTGACTTC ATCAACAACT AACCAGCGAC GGAAAGTGTC AAAATCACCG 2161 CTTTTGCGAT CGATCTGTAC GCGGACGTCG ATCTCTTGTT CATATTTTTT CTTTGTTGCT 2221 GTCGCCAGCG CGCTTTCCAA TGCTTCGAAA ATCTTCTCGC GAGGTAGCGC CTTTTCATTG 2281 GATACGGCTT CAACTACAGC CAAAATTTCT TTGTTCATAC TAGAATGGTG ATGGTGGTGA 2341 TGGCTGCTGC CCATATGTAT ATCTCCTTCT TAAAGTTAAA CAAAATTATT TCTAGAGGGG 2401 AATTGTTATC CGCTCACAAT TCCCCTATAG TGAGTCGTAT TAATTTCGCG GGATCGAGAT 2461 CGATCTCGAT CCTCTACGCC GGACGCATCG TGGCCGGCAT CACCGGCGCC ACAGGTGCGG 2521 TTGCTGGCGC CTATATCGCC GACATCACCG ATGGGGAAGA TCGGGCTCGC CACTTCGGGC 2581 TCATGAGCGC TTGTTTCGGC GTGGGTATGG TGGCAGGCCC CGTGGCCGGG GGACTGTTGG 2641 GCGCCATCTC CTTGCATGCA CCATTCCTTG CGGCGGCGGT GCTCAACGGC CTCAACCTAC 2701 TACTGGGCTG CTTCCTAATG CAGGAGTCGC ATAAGGGAGA GCGTCGAGAT CCCGGACACC 2761 ATCGAATGGC GCAAAACCTT TCGCGGTATG GCATGATAGC GCCCGGAAGA GAGTCAATTC 2821 AGGGTGGTGA ATGTGAAACC AGTAACGTTA TACGATGTCG CAGAGTATGC CGGTGTCTCT 2881 TATCAGACCG TTTCCCGCGT GGTGAACCAG GCCAGCCACG TTTCTGCGAA AACGCGGGAA 2941 AAAGTGGAAG CGGCGATGGC GGAGCTGAAT TACATTCCCA ACCGCGTGGC ACAACAACTG 3001 GCGGGCAAAC AGTCGTTGCT GATTGGCGTT GCCACCTCCA GTCTGGCCCT GCACGCGCCG 3061 TCGCAAATTG TCGCGGCGAT TAAATCTCGC GCCGATCAAC TGGGTGCCAG CGTGGTGGTG 3121 TCGATGGTAG AACGAAGCGG CGTCGAAGCC TGTAAAGCGG CGGTGCACAA TCTTCTCGCG 3181 CAACGCGTCA GTGGGCTGAT CATTAACTAT CCGCTGGATG ACCAGGATGC CATTGCTGTG 3241 GAAGCTGCCT GCACTAATGT TCCGGCGTTA TTTCTTGATG TCTCTGACCA GACACCCATC 3301 AACAGTATTA TTTTCTCCCA TGAAGACGGT ACGCGACTGG GCGTGGAGCA TCTGGTCGCA 3361 TTGGGTCACC AGCAAATCGC GCTGTTAGCG GGCCCATTAA GTTCTGTCTC GGCGCGTCTG