大鼠肝微粒体酶活性的保存低温和冷冻干燥的影响
离体大鼠肝脏灌流法制备氯吡格雷活性巯基代谢物
China Pharmacy2022V ol.33No.14中国药房2022年第33卷第14期氯吡格雷活性巯基代谢物（clopidogrel active thiol metabolite，CATM，化学结构式见图1）是氯吡格雷发挥抗血小板疗效的最终活性物质[1]。
CATM化学结构复杂，C3—C16双键和C4位手性结构使其具有4种构型，分别为H1（7S，3E，4S）、H2（7S，3E，4R）、H3（7S，3Z，4S）、H4（7S，3Z，4R），其中H1和H2为反式CATM、H3和H4为顺式CATM[1]。
已有研究表明，人体内CATM的构型为顺式构型[2]。
目前市面上仅有反式CATM异构体H1、H2的标准品，使CATM的体内研究受限。
对CATM进行合成的现有技术中，常用的方法有化学合成法和生物酶肝微粒体催化法，其中化学合成法需要对C3—C16双键构型和C4位手性构型进行选择，步骤复杂[3]；生物酶肝微粒体催化法具有较高的生物选择性和转化效率，但肝微粒体成本高，酶催化反应条件严苛，同时因底物量受限难以得到足够的目标代谢产物[2]。
已有研究显示，离体大鼠肝脏灌流法被广泛用于大鼠肝脏的生理、病理生理、肝损伤及药物代谢研究，兼具体外实验和整体动物实验的优点[4－6]。
本实验拟采用（S）-2-氧氯吡格雷为底物，采用离体大鼠肝脏灌流法通过代谢途径制备CATM，旨在为顺式CATM的合成提供参考。
Cl43167NHSO OHOOC图1CATM化学结构式离体大鼠肝脏灌流法制备氯吡格雷活性巯基代谢物Δ刘艺＊，陶婷，刘云，李艳丽，胡盼盼，姜艳娇，孙增先#（徐州医科大学附属连云港医院/连云港市第一人民医院药学部，江苏连云港222002）中图分类号R914；R969.1文献标志码A文章编号1001-0408（2022）14-1724-06DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2022.14.11摘要目的建立氯吡格雷活性巯基代谢物（CATM）的制备方法，为顺式CATM的合成提供参考。
实验七探究影响酶活性的因素
实验七探究影响酶活性的因素一、实验目的：1．探究不同温度和PH对酶活性的影响；2．培养实验设计能力。
二、探究温度对酶活性的影响（一）实验原理：1．淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。
2．淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖，麦芽糖和葡萄糖遇碘后不显色。
注：市售a-淀粉酶的最适温度约600C（二）方法步骤：1、取3支试管，编上号（A、B、C），然后分别注入2mL可溶性淀粉溶液；2、另取3支试管，编上号（a、b、c），然后分别注入1mL新鲜淀粉酶溶液；3、将装有淀粉溶液和酶溶液的试管分成3组，分别放入热水（约600C）、沸水和冰块中，维持各自的温度5min；思考题1、不能只用不同温度处理淀粉溶液或酶溶液，这是为什么？4、分别将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中，摇匀后，维持各自的温度5min；5、在3支试管中各滴入1-2滴碘液，摇匀后观察这3支试管中溶液颜色变化并记录；思考题2、在试管A、B、C中分别能观察到什么现象？思考题3、通过上述实验，你能得出什么结论？思考题4、在上述实验中，自变量是什么？无关变量是什么？三、探究PH值对酶活性的影响（一）实验原理：思考题5、请依据下面所列实验操作步骤，写出该实验的实验原理。
思考题6、请在上表中填入你所观察到的实验现象。
思考题7、通过上述实验，你能得出什么结论？思考题8、在上述实验中，自变量是什么？无关变量是什么？思考题9、探究温度对酶活性的影响实验中是否可以用斐林试剂来检验实验结果？为什么？探究影响酶活性的因素四、与酶有关的曲线解读（一）表示酶高效性的曲线：1、催化剂可 化学反应速率，与无机催化剂相比，酶的催化效率更 。
2、酶只能 达到化学平衡所需时间，不改变化学反应的 。
3、酶只能催化 的化学反应。
（二）表示酶专一性的曲线：1、在A 反应物中加入酶A ，反应速率较未加酶时明显 ，说明酶A 催化底物A 参加反应。
2、在A 反应物中加入酶B ，反应速率和未加酶时 ，说明酶B 不催化底物A 参加反应。
西洋参总皂苷对大鼠肝微粒体CYP1A2活性的影响
西洋参总皂苷对大鼠肝微粒体CYP1A2活性的影响鲍珍贝;杨青;胡敏;童静玲【摘要】Objective To study the influence of total saponins from Panax quinquefolium Linne on the activity of CYP1A2 in rats.Methods Rats were randomly divided into control group,total saponins from Panax quinquefolium Linne groups [50,100 and 200 mg/(kg·d)] and positive control group.After pretreatment for 11 consecutive days,theactivity,mRNA expression and protein expression of CYP1A2 were measured.The pharmacokinetic changes of phenacetin (probe substrate of CYP1A2) in pretreatment rats were investigated.Results After pretreatment with total saponins from Panax quinquefolium Linne,the activity,mRNA expression and protein expression of CYP1A2 in rats were improved with dose increasing.The metabolic rate of phenacetin was speededup.Conclusion Total saponins from Panax quinquefolium Linne might induce the activity of CYP1A2.%目的考察西洋参总皂苷对大鼠肝微粒体CYP1A2活性的影响.方法将大鼠随机分为空白对照组(空白组)、西洋参总皂苷低剂量组[低剂量组,50 mg/(kg·d)]、西洋参总皂苷中剂量组[中剂量组,100mg/(kg·d)]、西洋参总皂苷高剂量组[高剂量组,200 mg/(kg·d)]和β-萘黄酮阳性药对照组[阳性药组,80 mg/(kg·d)],预处理11 d后,观察大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性、CYP1A2 mRNA表达和CYP1A2酶蛋白表达情况,研究CYP1A2特异性探针底物非那西丁在预处理大鼠体内的药动学变化.结果预处理后,大鼠肝微粒体CYP1A2活性、mRNA和蛋白表达随西洋参总皂苷剂量升高有增加趋势,非那西丁在预处理大鼠体内代谢速率加快.结论西洋参总皂苷对大鼠肝微粒体CYP1A2活性有一定诱导作用.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】4页(P250-253)【关键词】西洋参总皂苷;大鼠;肝微粒体;CYP1A2;非那西丁【作者】鲍珍贝;杨青;胡敏;童静玲【作者单位】台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院,浙江台州 318050;台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院,浙江台州 318050;台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院,浙江台州 318050;台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院,浙江台州 318050【正文语种】中文西洋参为五加科植物西洋参(Panax quinquefolium Linne)的干燥根，性凉，味甘微苦，归心、肺、肾三经[1-2]。
药物代谢动物实验基本操作注意事项
动物实验的基本操作
订实验动物 一般计划要做药理实验后，先订动物，饲养中心送动物 过来需要时间，如果动物供应紧张的时候，很可能等的
粪便温孵法 肠菌酶法
单一菌种温孵法
肝微粒体的制备
差速离心法
通过高速离心 使微粒体与其他成 分分离，操作简单， 无需其他试剂辅助， 但需要的时间长， 对设备的整体要求 高。
CaCl2沉淀法 制备肝微粒体， 即在离心前额外加入 CaCl2 ， 促 进 微 粒 体 的聚集和沉降。这种 方法对设备要求降低， 而且缩短了实验所需 的时间，是研究药物 体外代谢，制备微粒 体的常用方法。
药物代谢-生物转化
一相代谢
氧化，还原，水解反应； CYP450酶
二相代谢
内源性物质结合反应； UGTs，SULTs, NAT, GST, MT
药物代谢研究方法
体内代谢法 综合地考虑各种体内 因素对药物的影响,能 够真实全面地反映药 物代谢的体内整体特 征 药物在生物体内的分 布比较广，加上代谢 转化的器官和酶系的 多样性，使药物及其 代谢产物在体内的浓 度低，代谢产物的检 测具有一定的难度
要从尾部下四分之一处进针,血管表浅,好扎,而且如果 万一没打进,还可以向上找位置再打
进针后, 有没有回血很重要,回血肯定扎进了,如果没 有自动回血的话,轻轻回抽下,有回血的话就注射,扎进 血管,注射通畅,没有阻力。如果很难推进，一般是没 扎进，就不要再推了，打到组织里面会水肿，然后整 个血管就看不清了，无法注射。自己觉得没回血最好 别注射，换位置，一般是没进。 注射完毕一定要止血，不然药物可能随血流出来，给 药量不准了。
生化药物制造工艺酶类药物
生物材料的预处理
二、酶类药物的提取和纯化
动物材料的预处理 机械处理 用绞肉机绞，一般细胞并不破碎，而有的酶必须细胞破碎后才能有效地提取，因此须采用特殊的匀浆才行。
一般应避免剧烈处理，但如是结合酶，则必须进行剧烈处理。
01
工业上可用高压匀浆泵。
在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。
02
由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。
（2）反复冻融
丙酮粉 组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可减少酶的变性，同时因细胞结构成分的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中，真空干燥即得丙酮粉。 丙酮粉在低温下可保存数年。 微生物的预处理 要是酶是胞外酶，则可除去菌体后再直接从发酵液中吸附提取酶。但对胞内酶则需将菌体细胞破壁，制成无细胞的悬液后再行提取。
1
2
3
结晶的温度通常在4℃下或室温25℃下，低温条件下酶不仅溶解度低，而且不易变性。
4
时间。 结晶形成的时间长短不一，从数小时到几个月都有，有的甚至需要1年或更长时间。
pH。除沉淀一般选择在被结晶酶的等电点附近。
金属离子。许多金属离子能引起或有助于酶的结晶，在二价金属离子存在情况下，有促进结晶长大作用。
盐析法的优点是在常温下不会造成酶的失活，若分级沉淀应用得当，杂蛋白杂质也较少，适用于多种酶沉淀。
3、盐析法
2、酶液的脱色
工业上廉价的脱色剂是活性炭，用量通常为0．1％～1．5％。 目前工业上大规模使用脱色树脂国内生产的几种脱色树脂，效果都较好。
4、有机溶剂法
用有机溶剂沉淀蛋白质及用分级沉淀法纯化蛋白质。工业上通常采用乙醇作为沉淀剂。
大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响
大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响吴双;李登科;李凯明;周明;孙震晓【摘要】目的:研究大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响.方法:利用大鼠肝微粒体对何首乌水提物进行体外代谢;将经代谢前后的何首乌水提物溶液冷冻干燥,以不同浓度(相当于生药1.5、3、6、12 mg/mL)分别作用肝L02及HepG2细胞24h及48 h,MTT法检测其对两种细胞活力的影响;HPLC测定何首乌水提物溶液中3种主要成分(二苯乙烯苷、大黄素-8-0-β-D-葡萄糖苷、大黄素)的含量变化.结果:何首乌水提物代谢后,随着其剂量的增加,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,与何首乌水提物未代谢组相比,浓度为12 mg/mL的何首乌水提物代谢组毒性明显降低(P＜0.01).HPLC测定结果显示,何首乌水提物代谢组上述3种主要成分含量均有所降低.结论:何首乌水提物经大鼠肝微粒体代谢后对肝细胞毒性降低,与其主要成分含量降低之间的关系需要进一步研究.%OBJECTIVE:To study the hepatotoxicity of aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix with or without incubation with the rat liver microsome.METHODS:Aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix was incubated with or without rat liver microsome in vitro and then dried by freeze drying.Liver L02 and HepG2 cells were incubated with different concentrations of the freeze-dried extract (1.5,3,6,12 mg/mL) for 24 h,48 h.Cell vitability was assayed by MTT method.In addition,contents of three main components (trans-2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-O-β-D-glucopyranoside,emodin-8-O-β-glucopy-ranoside,emodin) from aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix after incubation were quantitated by HPLC analysis.RESULTS:The aqueous extract without incubation with rat liver microsome showed more toxicityat the concentration of 12 mg/mL than that with incubation (P＜0.01).Contents of the three main components of aqueous extract incubated with rat liver microsome were lower than those without rat liver microsome.CONCLUSION:Hepatotoxicity of aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix was decreased after their metabolism by rat liver microsome.The relationship between reduced contents of the main components of the aqueous extract and the reduction of hepatotoxicity need further study for clarification.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2017(029)006【总页数】4页(P450-453)【关键词】何首乌;水提物;肝微粒体;肝细胞毒性;代谢【作者】吴双;李登科;李凯明;周明;孙震晓【作者单位】北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102【正文语种】中文【中图分类】R285.5中药何首乌(P olygoniMultifloriRadix)是蓼科植物何首乌(P olygonummultiflorumThunb.)的干燥块根，入药始载于“日华子本草”，有解毒、消痈、截疟、润肠通便之功效 [1]。
大鼠肝微粒体的制备
2.1.3 大鼠肝微粒体的制备大鼠肝微粒体制备全过程：1．购买实验动物SD 大鼠，20 只，雌雄各半，体重（180-220）g，广州中医药大学实验动物中心提供。
合格证号：00557062．大鼠肝脏灌流购买的大鼠当天腹腔注射3%戊巴比妥钠（30 mg·kg-1 ），使其麻醉，利用酒精进行常规消毒后，打开腹腔暴露肝脏，肝门静脉处进行插管并固定。
结扎上腔静脉，剪破下腔静脉用磷酸盐缓冲液进行灌流，直至肝脏颜色呈土黄色。
3．灌流好的肝脏取出后按1：4 比例放入装有磷酸盐缓冲液（含1mMEDTA ,0.25M 蔗糖）的匀浆管内，剪碎，匀浆。
4．将匀浆液倒入50mL 高速离心管中在4℃条件下9000g 离心20 min。
5．保留上清并转移到超速离心管中，在4℃条件下100000g 离心60min。
6．保留沉淀并重新混悬于磷酸盐缓冲液（含0.9%的NaCL）中, 4℃条件下100000g 再离心60 min，得到的沉淀即为肝微粒体。
7．将肝微粒体重悬于0.1M 磷酸缓冲液（PH7.4，20%甘油，1mM EDTA，0.25M 蔗糖）中于-70℃冰箱保存，其中留取一小管用于蛋白浓度测定。
8．微粒体蛋白浓度测定依据的是Lowry et. al.方法(Lowry et al.,1951)，首先用牛血清白蛋白标准溶液配置成不同浓度的蛋白标准溶液，与斐林试剂混匀发生反应后测定蛋白浓度，根据吸光度A 和蛋白浓度C 进行线性回归并绘制标准曲线。
同样的方法测定肝微粒体的吸光度，根据标准曲线线性回归方程计算肝微粒体蛋白浓度。
9．肝微粒体中P450 酶含量测定根据Omura and Sato 的方法(Omura and Sato,1964)，用Tris-HCl 缓冲液把肝微粒体样品稀释至0.3−0.5 mg/mL，取两份肝微粒体分别放于参比池和样品池，400 nm～500 nm 扫描基线；参比池和样品池都加入少量Na2S2O4，轻微搅拌，并给样品池通CO 气体30 s，再次扫描，记录450 nm 和490 nm 处的吸光度，按Beer 定律（公式2.1）计算CYP450 的含量。
执业药师之西药学专业一考试考点题型与解题方法
执业药师之西药学专业一考试考点题型与解题方法1、红外光谱特征参数归属羰基A.3750～3000cm-1B.1900～1650cm-1C.1900～1650cm-1;l300～1000cm-1D.3750～3000cm-1;l300～l000cm-1E.3300～3000cm-1;l675～1500cm-1;1000～650cm-1正确答案：B2、氟伐他汀含有的骨架结构是A.六氢萘环B.吲哚环C.吡咯环D.嘧啶环E.吡啶环正确答案：B3、药剂学的主要研究内容不包括A.新辅料的研究与开发B.制剂新机械和新设备的研究与开发C.新药申报法规及药学信息学的研究D.新剂型的研究与开发E.新技术的研究与开发正确答案：C4、以下关于栓剂附加剂的说法不正确的是A.叔丁基羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对甲酚(BHT)可作为栓剂的抗氧剂B.当栓剂中含有植物浸膏或水性溶液时，可使用防腐剂及抑菌剂，如羟苯酯类C.栓剂可选用脂溶性着色剂，也可选用水溶性着色剂D.常用作栓剂增稠剂的物质有氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯、没食子酸酯类E.起全身治疗作用的栓剂，为增加全身吸收，可加入吸收促进剂正确答案：D5、6α，9α位双氟取代的药物是A.醋酸氢化可的松B.醋酸地塞米松C.醋酸泼尼松龙D.醋酸氟轻松E.醋酸曲安奈德正确答案：D6、药物在一定比例混合溶剂中溶解度大于在单一溶剂中溶解度的现象称为A.絮凝B.增溶?C.助溶D.潜溶?E.盐析正确答案：D7、制备水不溶性滴丸时用的冷凝液A.PEG6000B.水C.液状石蜡D.硬脂酸E.石油醚正确答案：B8、以上辅料中，属于缓（控）释制剂溶蚀骨架材料的是A.乙基纤维素B.蜂蜡C.微晶纤维素D.羟丙甲纤维素E.硬脂酸镁正确答案：B9、下列属于阳离子型表面活性剂的是A.卵磷脂B.苯扎溴铵C.吐温80D.十二烷基苯磺酸钠E.泊洛沙姆正确答案：B10、大于7μm的微粒可被摄取进入（）（）A.肝脏B.脾脏C.肺E.骨髓正确答案：C11、（2019年真题）阿司匹林遇湿气即缓慢水解，《中国药典》规定其游离水杨酸的允许限度是0.1%，适宜的包装与贮存条件规定（ ）。
Ames
点试法
掺入法
背景菌生长良好受试物 将受试物0.1ml、菌液0.1ml分别加入 每皿回变菌落数增加一 顶层培养基中，倒入底层培养基中， 倍以上并有剂量-反应 凝固后37℃培养48h观察结果 关系，试验结果具有重 现性即可认为该受试物 为诱变阳性。
毒理学基础实验课
七、溶剂的选择 如果受试物为水溶性，可用灭菌蒸馏水作为溶剂； 如为脂溶性，应选择对试验菌株毒性低且无致突 变性的有机溶剂，常用的有二甲基亚砜（DMSO）、
丙酮、95%乙醇。
一般操作中，为了减少误差和溶剂的影响，常按
每皿使用剂量用同一溶剂配成不同的浓度，固定
加入量为100l。
滤纸片（有结晶紫） 抑菌环
0.1ml菌液
37℃24h
顶层
普通培养基
毒理学基础实验课
3、紫外线敏感特性
原理：具有△uvrB突变的菌株对紫外线敏感，当受到紫外线照射后，不能生长， 而具有野生型切除修复酶的菌株，则能照常生长。 鉴定方法：用灭菌牙签分别将菌株划线接种于普通培养基上，打开平皿盖，用 灭菌黑布盖住一半培养基，用15W紫外灯在距离33cm处照射8s，37℃温箱培养 18h~24h。 结果判断：具有△uvrB突变的菌株对紫外线敏感，经辐射后细菌不生长，而具 有完整的切除修复系统的菌株，则照常生长。
诱导 －最广泛应用的大鼠肝微粒体酶的诱导剂是多氯 联苯（PCB混合物），
－选择健康雄性大鼠体重200g左右，
－一次腹腔注射诱导剂，剂量为500mg/kg体重。
诱导剂溶于玉米油中，浓度为200mg/mL。
桑黄对肿瘤作用的研究进展
著优势。2003 年，Shon 等 研究表明桑黄提取物培养
论在胞内或者胞外都能提高 S180、H22 荷瘤小鼠中
性地对大鼠肝微粒体 cyp 同工酶活性有很强的抑制
细胞提高最突出。丁云云等［14］在 2016 年针对桑黄
［8］
液和菌丝体中的多糖可以作为化学预防剂，能特异
作用，具有抗细胞诱变功能，使其能够发挥抑瘤的
物均有明显抗肿瘤活性的作用。2017 年，
刘燕琳等［15］
到提高的作用，同时发现多糖的添加量与一氧化氮、
分别采用了体内、外实验，观察桑黄多糖的抑制肿
肿瘤坏死因子的产生有一定的相关依赖性，但桑黄多
瘤生长的作用，实验结果表明，通过影响 PTEN 与 C-
糖没有对活性氧自由基产生任何影响。推断桑黄多
糖是通过提高组织相容性复合体分子、各种免疫识别
多糖能够分离纯化出自身具活性的均一多糖。孙军
比较明显；其次，在动物试验中发现，无论多糖剂量
德等［19］针对桑黄液体发酵菌丝体多糖提取的方法进
高低与否，都会对抑制肿瘤生长产生影响，实验数据
行进一步探索，他们根据单因子试验和正交试验发现
对比发现其最佳剂量为 500 mg/kg 时抑制肿瘤生长作
其提取桑黄菌丝体多糖的最佳温度 70 ℃、料水比 1∶
表达发生了变化，不能正常地调控细胞的正常分化和
96.7％，该实验也证实桑黄提取物对正常小鼠细胞无
毒性。Kim 等［4］研究发现，针对小鼠肉瘤 S180 采用人
工培养的桑黄菌丝体多糖进行试验，发现其同样能够
抑制 S180 的瘤细胞生长。1996 年，Kim 等［5］研究观察
桑黄菌丝体外胞多糖的纯化多糖对正常小鼠体内、体
覃酸、
三萜类和黄铜等。桑黄具有多种生理功能，
黄连黄芩及配伍诱导对大鼠肝微粒体5种CYP450亚酶活性的影响
黄连黄芩及配伍诱导对大鼠肝微粒体5种CYP450亚酶活性的影响[通信作者] *张玉杰，研究方向为生物药剂学与药代动力学，Tel：（010）84738618，Fax：（010）84738611，Email：zhyj227@近来对黄连黄芩药对的研究发现二者主要成分在药代动力学方面有明显的相互作用[1]。
作者前期研究发现，黄连提取液连续ig大鼠后可增加肠黏膜上Pgp 的活性，而黄芩对Pgp的活性具有一定的抑制作用，合煎液与黄芩相似，但抑制作用更强[2]。
为进一步探讨黄连黄芩配伍的代谢性相互作用产生原理，本试验研究通过大鼠连续ig黄连、黄芩提取液和黄连黄芩不同配比合煎液7 d，采用cocktail探针药物肝微粒体体外温孵法[3]，以探针底物的代谢消除百分率为指标，评价各给药组对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的影响，探讨黄连黄芩配伍代谢性相互作用的规律。
1 材料美国Agilent1100高效液相色谱仪；F8型超细匀浆机（德国FLUKO）；Biofuge stratos台式高速冷冻离心机（德国Heraeus）；CU420电热恒温水浴箱（上海一恒）。
黄连、黄芩均为市售，经北京中医药大学生药系张贵君教授鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis的干燥根茎及唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis的干燥根；美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、NADPNa2（氧化型辅酶Ⅱ）、D葡萄糖6磷酸二钠、葡萄糖6磷酸脱氢酶V均购于北京拜耳迪生物技术有限公司；五味子醇甲（内标）（110857201010，中国食品药品检定研究院）；考马斯亮蓝G250（Sigma公司）；乙腈、甲醇为色谱纯（美国Fisher公司）；其余试剂均为国产分析纯试剂。
SD雄性大鼠，体重（250±10）g，北京维通利华实验动物中心，动物饲养生产合格证号SCXK（京）20021003。
2 方法2.1 溶液制备2.1.1 中药提取液的制备黄连称重后加8倍量蒸馏水，浸泡30 min后煎煮，煮沸60 min。
(完整版)食品卫生学复习题
食品卫生学复习题食品污染及其预防一、填空1.食品的污染按其性质可分成( 生物性污染 )、( 化学性污染 )和(物理性污染 )三大类。
2.食品的生物性污染包括( 微生物 )、寄生虫、昆虫及( 病毒 )的污染。
3.化学性污染主要包括来自生产、生活和环境中的污染物；食品容器、包装材料、运输工具等接触食品时溶入食品中的( 有害物质 )；( 滥用食品添加剂 )；在食品加工、贮存过程中产生的物质及掺假、制假过程中加入的物质。
4.在常见的食品细菌中，( 假单胞 )菌属是食品腐败性细菌的代表。
5.霉菌产毒的条件主要包括( 基质 )、( 水分 )、湿度、温度以及空气流通情况。
6.黄曲霉毒素的基本结构是都有（二呋喃环）和香豆素，在紫外线照射下都发生( 荧光 )。
7.动物实验表明，赭曲霉毒素A中毒的靶器官为( 肾脏 )和( 肝脏 )。
8.目前已知在谷物中存在的单端孢霉烯族化合物主要有( T-2毒素 )、二醋酸藨草镰刀菌烯醇、( 雪腐镰刀菌烯醇 )和脱氧雪腐镰刀菌烯醇。
9.玉米赤霉烯酮可表现出( 生殖系统 )毒性作用。
猪为敏感动物。
该毒素主要污染（玉米），其次是小麦、大麦、大米等粮食作物。
10.在食品腐败变质过程中，起重要作用的是细菌、（酵母）和（霉菌），尤其是细菌更占优势。
11.脂肪分解的早期主要是脂肪的( 过氧化值 )上升，其后由于形成各种脂酸而使（酸价）升高。
12．常见的食品保藏方法有化学保藏、（低温保藏）、高温保藏、干燥保藏和( 辐照保藏 )。
13.奶的消毒方法有：巴氏消毒法、（超高温保藏）、煮沸消毒法和蒸气消毒法。
14.食品冷冻过程的原则是( 急速冷冻 )和( 缓慢溶解 )。
15.食品的高温灭菌方法有（巴氏杀菌）、高温杀菌法、超高温杀菌法和（微波加热法）。
16.在食品中常见的细菌称为食品细菌，其中包括（致病性细菌）、相对致病性细菌和（非致病性细菌）。
17.我国食品卫生标准(GB 2762-1994)规定鱼和其它水产品中汞容许限量为( ≤0.3mg/kg )。
栀子苷对大鼠肝指数、肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2的影响
任公司产品 ；Ａ Ｔ Ｆ ＩＨ一１０ ００全 自动生化 分析仪 ， 南京劳 拉电子有限公 司产 品 ； Ｌ １８ Ｕ Ｔ ３６—３一Ｖ １ 低温冷 冻 ４超 柜， 产地美 国； Ｐ Ｕ Ａ— Ｌ Ｓ恒温振荡摇床 ， 产地美 国。
１４ ． 分 组 与 给 药 、
细胞 色 素 Ｃ Ｐ Ａ Ｙ ３ ２含量 ， 通过 红霉 素 Ｎ 一去 甲基 反 应 评 价 酶 活 性 。结果 ： 苷 大 剂 量组 对 大 鼠肝 功 能 有 损 害 ； 酶 活性 方 栀子 在 面 ， 子 苷小 、 大 ３个 剂量 组均 高 于空 白对 照 组 ， 有 统 计 栀 中、 差别
族 占 Ｐ５ ４ ０酶总 含量 的 ２ ％ ， Ｙ ３ ５ Ｃ Ｐ Ａ对 外 源性 物 质
代谢 ， 尤其是 对 药 物 代 谢 最 为 重 要 ， 临床 上 ６ ％ 的 ０ 药 物需 经 Ｃ Ｐ Ａ代 谢 以排 出体 外 。Ｃ Ｐ Ａ Ｙ３ Ｙ ３ ２是 存 在于 大 鼠肝 脏 中的重 要 药 物代 谢 酶 ， 大 鼠肝脏 内 在
主要表 达 Ｃ Ｐ Ａ 。Ｃ Ｐ Ａ在许 多 内源性 和外 源性 Ｙ３２ Ｙ３ 化合 物的氧化 与还 原代谢 中起 重要 作用 。本文 旨在 研究栀 子苷对 大 鼠肝脏 Ｃ Ｐ Ａ Ｙ ３ ２的影 响 ， 以期 为 进
一
冰 浴 ５ｒ ｎ 轻轻 搅拌 数次 ， ｉ， ａ 混合 液在 低 温 高速 离 心
中医 研 究
２１ ０ ０年 ３月 第 ２ ３卷 第 ３期
Ｔ Ｍ Ｒｅ． ｒｈ２ １ ｏ．３Ｎ ． Ｃ ｓＭａｃ ０ ０Ｖ １２ ｏ３
文章编号：０ １ ６ １ （０ ０ ０ ０ ２ ０ １０ — ９ ０ ２ １ ） ３— ０ ０— ３
・实 验 研 究
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鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验
鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验1 主题内容与适用范围本标准规定了Ames试验的基本技术要求。
本标准适用于检测环境有害物质的致突变作用。
2 原理鼠伤寒沙门氏菌的突变型(即组氨酸缺陷型)菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸的培养基上可以正常生长。
但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌突变型可回复突变为野生型(表现型)，因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落形成数量，检查受试物是否为致突变物。
某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变型产生回复突变，代谢活化系统可以用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆(S－9)制备的S－9混合液。
3 仪器3.1 实验室常用设备。
3.2 低温高速离心机，低温冰箱(－80℃)或液氮罐，洁净工作台，恒温培养箱，恒温水浴，蒸气压力锅，匀浆器等。
4 培养基制备及试剂的配制培养基成分或试剂除说明外至少应是化学纯，无诱变性。
避免重复高温处理，选择适当保存温度和期限，如肉汤保存于4℃不超过六个月，其他详见下述各培养基及溶液说明。
4.1 营养肉汤培养基牛肉膏 2.5g胰胨(或混合蛋白胨) 5.0g氯化钠 2.5g磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)1.3g蒸馏水500mL加热溶解，调PH至7.4，分装后0.103MPa20min灭菌，普通冰箱保存备用，保存期不超过半年。
4.2 营养肉汤琼脂培养基：用作a.基因型鉴定的结晶紫敏感试验，抗氨节青霉素和四环素试验，紫外线敏感性试验。
b.细菌活力鉴定。
琼脂粉 1.5g营养肉汤培养基100mL加热融化后调pH为7.4，0.103MPa 20 min灭菌。
4.3 底层培养基所需试剂及配制方法如下：4.3.1 磷酸盐贮备液磷酸氢钠铵(NaNH4HPO4·4H2O) 17.5g柠檬酸(C6H8O7·H2O) 10.0g磷酸氢二钾(K2HPO4) 50.0g硫酸镁1)(MgSO4·7H2O) 1.0g加蒸馏水至100mL，0.103MPa 20min灭菌。
HPLC-QTOF MS和MS／MS分析鉴定PF573228肝微粒体体外代谢产物
HPLC-QTOF MS和MS／MS分析鉴定PF573228肝微粒体体外代谢产物王献;王玲【摘要】To study the in vitro metabolic characteristics of PF573228 with rat liver microsomes, HPLC-ESI-MS/MS was applied and elucidated three metabolites of PF 573228 based on the chromatographic retention times , accurate ion mass and fragmentation pattern .Three biotransformation pathways , i.e., dehydrogenation , N-dealkylation and oxidation metabolism were suggested for the 3 metabolites.%为研究PF573228的大鼠肝微粒体体外代谢特点，采用高效液相色谱-电喷雾-串联质谱（ HPLC-ESI-MS/MS）的方法，结合检测的保留时间、精确质量数和特征碎片离子，鉴定了PF573228体外的3种代谢产物分子的结构，推断体外代谢产物的生物转化有3个主要途径：脱氢，N-脱烷基和氧化。
【期刊名称】《中南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】4页(P9-12)【关键词】PF573228抑制剂;液质联用( LC-MS/MS);大鼠肝微粒体;体外代谢【作者】王献;王玲【作者单位】中南民族大学化学与材料科学学院，武汉430074;中南民族大学化学与材料科学学院，武汉430074【正文语种】中文【中图分类】TQ028;O657.63黏着斑激酶(FAK)是一种细胞质酪氨酸蛋白激酶，在正常细胞和癌细胞中均发挥着关键的调控作用，与细胞的黏附、伸展、迁移、增殖和凋亡等行为密切相关[1].FAK的抑制剂分子能够有效抑制FAK活性，对肿瘤细胞增殖和迁移有明显的抑制效果[2].PF573228是一种有效的、高选择性的FAK蛋白抑制剂，它是ATP与FAK蛋白特异性结合的竞争性抑制剂[3].本文采用高效液相色谱和四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-QTOF-MS/MS)技术[4]，建立了一种简单、快捷、高效的方法，分离检测了PF573228与肝微粒体体外代谢物，通过二级质谱MS/MS鉴定了PF573228的代谢产物的结构并推测了其代谢裂解途径.1 实验部分1.1 仪器及试剂高效液相色谱仪(Agilent 1200，美国)，四极杆飞行时间质谱仪(Agilent 6520 Q-TOF MS，美国)，超纯水机(Molelement 1815a 摩尔元素型,上海摩勒科学仪器有限公司)，高速冷冻离心机(GL-20M, 上海卢湘仪离心机仪器有限公司)，色谱柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18, 美国Agilent)，高精度数控摇床(SH2-03, 上海堪鑫仪器设备有限公司),水浴氮吹仪(CM-12, 北京成萌伟业科技有限公司),色谱柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18, 美国Agilent).SD雌大鼠肝微粒体(20 mg/mL, 广州诺嘉生物科技有限公司)，超纯水(18.25MΩ)，PF573228(纯度>98%)，6-磷酸葡萄糖(纯度≥98%)，6-磷酸葡萄糖脱氢酶(200～400 U/mg)，NADP(纯度≥98%)，磷酸钾缓冲盐(纯度≥98%, Sigma-Aldrich公司)，甲醇、乙腈(色谱纯, 美国Waltman)，氯化镁(分析纯)，乙酸乙酯(色谱纯, 天津科密欧化学试剂有限公司).1.2 PF573228在大鼠肝微粒体系中的代谢反应PF573228在大鼠肝微粒体系中的代谢反应孵育方法参照文献[5～8]进行了优化，PF573228用DMSO溶解后用超纯水稀释，用200 mL超纯水溶解磷酸钾缓冲盐药片，完全溶解后，磷酸盐缓冲液浓度为0.1 mol/L(pH 7.4)，用超纯水配制浓度为5.0×10-3 mol/L氯化镁溶液，6-磷酸葡萄糖浓度为0.1 mol/L，6-磷酸葡萄糖脱氢酶浓度为10 U/mL，NADP浓度为2.0×10-2 mol/L.向1.5 mL的EP管中加入磷酸盐缓冲液200 μL，PF573228溶液20 μL，肝微粒体40 μL，氯化镁40 μL，6-磷酸葡萄糖40 μL，6-磷酸葡萄糖脱氢酶20 μL，混匀后置于37 ℃恒温水浴摇床中预孵育5 min后加入40 μL NADP启动代谢反应，37 ℃孵育30 min后，加入乙酸乙酯共计600 μL终止反应并萃取，静止萃取10 min后经10000 r/min离心10 min，取上清液经40 ℃氮气流吹干，所得残余物质用1 mL乙腈溶解，完成后进样检测.1.3 色谱-质谱条件在ESI-Q-TOF MS的正离子模式下进行PF573228原药和代谢产物检测.待测样品由自动进样器以标准进样方式进样.液相色谱的流动相A为超纯水，B为乙腈，流速为0.2 mL/min，梯度洗脱条件：0～8 min 20%～45% B，8～20 min 55% B，20～24 min 80% B，24～30 min 20% B.电喷雾质谱的条件：干燥气温度为300℃；干燥气流速为11 L/min；喷雾器压力为35 Psig；毛细管电压为3500 V；碎裂电压为125 V，质谱采集范围为50-1000 m/z，碰撞电压为40 eV、35 eV.2 结果与讨论2.1 PF573228经大鼠肝微粒体体外代谢产物鉴定在肝微粒体CYP450酶的作用下，PF573228经一相代谢反应采用HPLC/Q-TOF MS和MS/MS二级质谱分析得到分子离子及其特征碎片离子峰，结果见图1.由图1可见，在ESI离子源作用下，m/z 492经初步碰撞诱导解离，产生的m/z 169的碎片离子峰和m/z 323(-C8H9SO2)的碎片离子峰是C-N键断裂产生，裂解产生的m/z 251(-C3H5ON)碎片离子峰是m/z 323的碎片离子苯环旁边五元环断裂得到，而碎片离子m/z 90(-C5H2N3F3)则是m/z 251的碎片离子中间环上C-N 键断裂产生的.a)原药PF573228 LC-MS提取离子(EIC)流图;b)PF573228的ESI-MS质谱图; c)PF573228在40 eV下的碰撞诱导解离二级质谱图(ESI-MS/MS)图1 PF573228提取离子流图(TIC)和质谱图Fig.1 Extracted ion chromatogram(EIC) and mass spectra of PF573228根据PF573228的结构特点和肝微粒体的代谢规律，推断PF573228经肝微粒体体外代谢产物的可能结构和保留时间(见表1).根据精确质量数、同位素分布、二级质谱图特征碎片离子等信息对可能的代谢物进行了定性分析，鉴定了PF573228在体外经肝微粒体的I相代谢途径和代谢产物结构[9-12].表1 PF573228经肝微粒体体外代谢产物相关信息Tab.1 Information of metabolites of PF573228 in liver microsome in vitro原药和代谢产物代谢途径m/z分子式质量偏差/10-6保留时间/minM0PF573228492.1312C22H20F3N5O3S8.1314.94M1加单氧508.1261C22H20F3N5O4S8.8612.88M2脱氢490.1155C22H18F3N5O3S-4.9314.12M3N-脱烷基324.1067C14H12F3N5O-9.6812.21代谢产物M1保留时间和碎片离子质谱分析结果如图2a，2b，2e和图3所示.由图可见，M1分子离子峰m/z 508裂解去一分子水，产生m/z 490(-H2O)碎片离子峰，与代谢产物M2结构一样，进一步裂解去酰胺基产生m/z 450(-NCO)碎片离子峰，旁边苯环C-N断裂产生m/z 169(-C8H9SO2)碎片离子峰与原药M0的特征峰是一样的.a) PF573228三种代谢产物LC-MS提取离子流图(EIC); b～d) 代谢产物M1、M2、M3的ESI-MS质谱图; e) M1在35 eV下的碰撞诱导解离二级质谱图(ESI-MS/MS)图2 PF573228代谢产物的提取离子流图(EIC)和质谱图Fig.2 The extracted ion chromatogram(EIC) and mass spectra of the metabolites of PF573228代谢产物M2的EIC图和分子离子峰的质谱分析结果如图2a, 2c所示，对代谢产物M1结构分析可知M1脱去一分子的水后结构和代谢产物M2是一样的，其特征离子峰m/z 450、m/z 320、m/z 169与M2的特征离子峰是一样，裂解去酰胺基产生m/z 450(-NCO)碎片离子峰，旁边苯环C-N进一步断裂产生m/z 169的碎片离子峰和m/z 282的碎片离子峰.图3中也说明了代谢产物M2的裂解途径. 代谢产物M3的EIC图和分子离子峰的质谱分析结果如图2a, 2d所示，代谢产物M3是N-脱烷基化得到的代谢产物，其分子离子峰m/z 324二级质谱图的特征碎片离子m/z 162是中间N与嘧啶环上的C裂解产生的.在药物PF573228的二级质谱图1c中可见此类C-N的断裂.图3 代谢产物M1的ESI-MS/MS的裂解途径Fig.3 The ESI-MS/MS fragmentation of the metabolite M12.2 PF573228在肝微粒体体外代谢的代谢途径根据HPLC-ESI-TOF MS和MS/MS分析结果推测，PF573228在大鼠肝微粒体P450酶系的作用下的转化如图4所示.肝微粒体中细胞色素P450酶系在转化阶段起着非常重要的作用，药物在实验对象体中发生生物转化，根据药物Ⅰ相代谢反应有氧化、还原或水解等类型.说明PF573228经肝微粒体体外代谢产物的生物转化有3个主要途径：脱氢，N-脱烷基和加氧.a) 羟基化; b) 脱氢; c) N-脱烷基作用图4 PF573228肝微粒体体外代谢的代谢途径示意图Fig.4 The schematic diagram for the metabolic pathway ofPF573228 with liver microsome in vitro参考文献【相关文献】[1] Li S F, Hua Z C , FAK expression: regulation and therapeutic potential[J]. Adv Cancer Res, 2008, 101: 45-61.[2] Hao H, Naomoto Y, Bao X, et al. Focal adhesion kinase as potential target for cancer therapy (Review)[J]. Oncol Rep, 2009, 22(5): 973-979.[3] Slack-Davis J K, Martin K H, Tilghman R W, et al. Cellular characterization of a novel focal adhesion kinase inhibitor[J]. J Biol Chem, 2007, 282(20):14845-14852.[4] Raju B,Ramesh M,Borkar R M,et al.In vivo metabolic investigation of moxifloxacin using liquid Chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry in combination with online hydrogen/deuterium exchange experiments[J]. Rapid Commun Mass Spectrom, 2012, 26(16): 1817-1831.[5] Lu X, Zhao X J, Bai C ,et al. LC-MS-based metabonomics analysis[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2008, 866(1/2):64-76.[6] Liu H, Wang K, Tang Y, et al. Structure elucidation of in vivo and in vitro metabolites of mangiferin[J]. J Pharmaceut Biomed, 2011, 55(5): 1075-1082.[7] Qi P, Fan M, Li Z, et al. In vivo metabolism study of vaccarin in rat using HPLC-LTQ-MSn[J] . Biomed Chromatogr, 2013, 27(1): 96-101.[8] Yang J, Qian D W, Jiang S, et al. Identification of rutin deglycosylated metabolites produced by human intestinal bacteria using UPLC-Q-TOF/MS[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2012, 898: 95-100.[9] Beuck S, Schänzer W, Thevis M. Investigation of the in vi tro metabolism of the emerging drug candidate S107 for doping-preventive purposes[J]. J Mass Spectrom, 2011, 46(2): 112-130.[10] Dai H X, Wang M M, Li X R, et al. Structural elucidation of in vitro and in vivo metabolites of cryptotanshinone by HPLC-DAD-ESI-MSn [J]. J Pharmaceut biomed , 2008, 48(3): 885-896.[11] Zhu Y Q, Zhou J. Identification of the Significant involvement and mechanistic role of CYP3A4/5 in clopidogrel bioactivation[J]. ACS Med Chem Lett, 2012, 849(3) : 844-849. [12] Anari M R, Sanchez R I, Bakhtiar R, et al. Integration of knowledge-based metabolicpredictions with liquid chromatography data-dependent tandem mass spectrometry for drug metabolism studies: application to studies on the biotransformation of Indinavir [J]. Anal Chem, 2004, 76(3): 823-832.[13] Lopez L L, Yu X, Cui D, et al. Identification of drug metabolites in biological matrices by intelligent automated liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Rapid Commun Mass Spectrom, 1998, 12(22): 1756-1760.。
实验五.大鼠肝S9的制备和蛋白含量测定
院系：理学院专业：农药学学号：0931******* 姓名：王熠大鼠肝S9的制备和蛋白含量测定1 实验目的学会大鼠肝S9的制备及其蛋白含量的测定。
2 实验材料与方法2.1实验动物大鼠：健康、雄性、成年，SD或Wistar ，5~6 周龄，150g左右2.2试剂1.17% （0.15M） KCl、苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、多氯联苯、β-萘黄酮Tris-HCl缓冲液：6.05g Tris加约800ml蒸馏水溶解，用HCl溶液调pH值至7.4，最后用蒸馏水定容至1000ml2.3器材低温高速离心机、洁净工作台、匀浆器、注射器、手术剪、低温冰箱、液氮罐等2.4 实验操作2.4.1试剂的配制（1）Tris-HCl缓冲液：6.05g Tris加约80ml蒸馏水溶解，用HCl溶液调pH值至7.4，最后用蒸馏水定容至1000ml（2）考马斯亮兰G-250染料：称100mg考马斯亮兰G-250，溶于50ml 95％的乙醇后，再加入120ml 85％的磷酸，用蒸馏水稀释至1升，滤纸过滤。
2.4.2肝S9的制备（1）诱导苯巴比妥钠80mg/kg，腹腔注射，连续3～5d，最后一次给药后24h后采样。
（2）采样采样前禁食24h，但可以自由饮水；断头处死；无菌取出肝脏，置平皿中称重，用预冷的0.15M KCl溶液淋洗数次，以便除去能抑制微粒体酶活性的血红蛋白。
（3）肝匀浆的制备弃去淋洗液，将肝脏转入小烧杯，加 Tris-HCl缓冲液溶液3mL/g （肝湿重），转入冰浴，用剪刀剪碎肝脏，转入匀浆器匀浆。
（4）制备S9 将肝匀浆于低温高速离心机0～4℃ 000g 离心 10min上清液即为S9。
（5）分装保存将制备好的S9于无菌冷冻管或安瓿中保存，每个安瓿2mL左右。
于液氮速冻后置-80℃低温保存。
深低温或冰冻干燥，保存期不超过一年。
2.5蛋白含量测定（考马斯亮兰染色法）2.5.1测定原理考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质（主要是碱性氨基酸，特别是精氨酸和芳香族氨基酸残基）结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm 变为595nm ，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。
黄芪甲苷对大鼠肝微粒体酶活性影响
黄芪甲苷对大鼠肝微粒体酶活性影响目的：研究黄芪甲苷对CYP450酶的影响，为制定合理用药方案提供科学依据。
方法：以甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素、硝苯地平、非那西丁为探针药，HPLC测定探针药与相应代谢产物的浓度，在体外的孵育体系中研究黄芪甲苷对CPY2C9，CPY2E1，CPY2A6，CPY3A4和CPY1A2酶活性的影响。
结果：黄芪甲苷对CYP1A2，CYP2A6，CYP2E1酶的活性没有明显的影响，而对CYP2C9和CYP3A4酶的IC50分别为35.40，88.22 μmol·L-1。
结论：黄芪甲苷对CYP2C9和CYP3A4酶有明显的抑制作用，在与经由CYP2C9，CYP3A4酶代谢的药物合用时，可能会产生药物相互作用。
标签：黄芪甲苷；肝微粒体；甲苯磺丁脲；硝苯地平4 讨论药物对CYP450的抑制情况主要有4种类型：竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制、混合型抑制[10]。
本研究显示，黄芪甲苷对CYP2C9和CYP3A4有一定的抑制作用，其IC50分别为35.40，88.22 μmol·L-1。
根据Dixon-Plot图可知，前者为竞争性抑制，后者为反竞争性抑制。
抑制常数Ki分别为42.88，33.31 μmol·L-1。
合并用药是临床用药的常见形式，药物之间可能发生一些相互作用，从而引起药效的变化，有时甚至会引起严重的毒副作用[11]。
近年来，文献报道了一些药物对CYP450的影响[12-13]，氯霉素、西米替丁、安替比林、磺胺[14]等药物对CYP2C9都有一定的抑制作用。
而槲皮素、山柰酚、桑黄素[15]等化合物，则是对CYP3A4有一定的抑制作用。
Zhao X P等[16]发现，长春氟宁是经由CYP3A4代谢的，而原儿茶醛对CYP3A4有较弱的抑制作用，丹参素和隐丹参酮则是对CYP2C9都有一定的抑制作用[9]。
因此，在临床用药过程中，当黄芪甲苷或含黄芪中药制剂与这些药物合用时，有可能发生一些相互作用，导致这些药物的代谢速率变化，影响药效，甚至可能引发一些不良反应。