大鼠肝细胞微粒体及线粒体的脂肪酸组成分析
油脂氧化与蓄积的危害
120 I FOOD INDUSTRY I油脂氧化与蓄积的危害后，被结合到乳糜微粒中，经淋巴系统进入血液循环转移至肝脏，部分氧化产物在肝脏中积累；另一部分被包装为脂蛋白，这些脂蛋白将携带的氧化产物运到血浆、脂肪组织等其他组织，通过各种转运蛋白摄入胞内并进行代谢。
氧化油脂的吸收速率受多方面因素影响。
第一，不同油脂氧化产物的吸收量存在差异。
亚油酸氢过氧化物吸收率显著高于亚油酸次级氧化产物，氢过氧化物被人体代谢的比例约为70%，而次级氧化产物约为48%，两种类型氧化产物约有25%经代谢后以CO 2形式被排出。
运往大鼠肝脏的次级氧化产物可能先在线粒体中被代谢，然后转移到微粒体磷脂上进行代谢。
第二，受小肠谷胱甘肽含量的影响。
研究发现，饲喂大鼠谷胱甘肽转移酶抑制剂所导致的谷胱甘肽减少，增加了小肠对氧化脂肪的吸收。
第三，脂肪酸的水解速率是影响吸收速率的重要因素之一。
脂肪的水解速率越快，生物利用度和吸收效率越高。
第四，生物利用度取决于脂质形式，磷脂（PL ）形式＞甘油三酯（TAG ）形式＞游离脂肪酸（FFA ）。
其中PL 和TAG 形式的食物基质和结构（如SN-1，SN-2，SN-3位置）也会影响生物利用度及其在体内的分布，SN-2位置的脂肪酸更容易被人体吸收。
第五，ω-3多不饱和脂肪酸的剂量和浓度会影响其生物利用度，限制其相关健康价值的发挥。
胃的促氧化可能会促进多不饱和脂肪酸降解，降低小肠细胞的同化效率。
D H A 作为ω-3不饱和脂肪酸（ω-3PUFAs ）的热门产品，有多种不膳食是除遗传外影响健康的第一大因素，高脂肪、高能量、低膳食纤维的饮食习惯会对人体健康造成不良影响。
因此，人们应对饮食习惯予以充分重视。
食用油是人们在日常饮食中不可或缺的一部分，在为人体提供能量、帮助脂溶性维生素的吸收、提供人体必需不饱和脂肪酸等方面具有不可替代的多重作用，然而氧化后的油脂却对人体有诸多危害。
本文从油脂氧化与吸收两个方面进行阐述，总结了油脂氧化产物在体内蓄积的危害。
痰湿咳嗽
痰湿咳嗽证候咳声重浊，咳嗽痰多，痰白清稀，胸闷纳呆，困倦乏力，舌淡，苔白腻，脉滑。
辨证脾失健运，痰浊内生，痰湿渍肺，肺失宣肃，则咳嗽痰多，痰白清稀；湿浊困脾，故胸闷纳呆，困倦乏力；舌淡，苔白腻，脉滑为痰浊之象。
本证以咳声重浊，咳嗽痰多，痰白清稀，纳呆，舌淡苔白腻为特征。
痰湿咳嗽中医学对于咳嗽有很准确的命名：“有声无痰为咳，有痰无声为嗽，有声有痰为咳嗽”。
临床大多是有声还有痰，或因为有痰刺激咽喉而引起咳，很难截然分开是咳还是嗽，于是就并称为“咳嗽”。
正如《活法机要》所说“咳谓无痰而有声，肺气伤而不清也。
嗽谓无声而有痰，脾湿动而为痰也。
咳嗽是有痰而有声，盖因伤于肺气而咳，动于脾湿因咳而为嗽也。
”《黄帝内经》对于咳嗽论述很详细，还说“五脏六腑皆令人咳”。
历代对咳嗽分类、命名多又杂，到明代张景岳提出分为“外感、内伤”二类，简明扼要，又实用。
对于外感咳嗽，他提出“六气皆令人咳，风寒为主。
”以胜认为，咳嗽虽然起因是“外感、内伤”，但是直接引起咳嗽的还是“痰湿”为多，所以就特别提出“痰湿咳嗽”，加以讨论。
对于咳嗽的辨证论治，首先要知道咳嗽的时间、节律、性质、声音、加重因素等。
如咳嗽白天多于夜间，咳嗽声重、急剧、或咽痒则咳嗽，多为外感风寒或风热引起；如果咳声嘶哑、病势急而病程短，为外感风寒或风热；病势缓病程长，为阴虚或气虚。
咳嗽声粗浊者多为风热或痰热伤津。
早晨咳嗽阵发加剧，咳嗽连声重浊，痰出咳嗽减轻者，多为痰湿或痰热咳嗽。
午后、黄昏咳嗽加重，或夜间有时有单声咳嗽，咳嗽轻微短促者，多为肺燥阴虚。
夜卧咳嗽较剧，持续不已，少气或伴气喘者，多为日久咳嗽导致气喘的虚寒证。
咳嗽而声低气怯者属虚，咳嗽声音洪亮有力者属实。
饮食肥甘、生冷而加重者多为痰湿。
劳累、受凉后加重者多为痰湿、虚寒。
情志郁怒而咳嗽而加重者多因于气火。
既然讨论“痰湿咳嗽”，就必须注意痰的色、味、量、质。
咳嗽而少痰，多属燥热、气火、阴虚；痰多的大多属痰湿、痰热、虚寒；痰白而稀薄的属风、属寒；痰黄而稠者属热；痰白质粘者属阴虚、燥热；痰白清稀透明呈泡沫样的属虚、属寒；喀吐血痰，多为肺热或阴虚；如脓血都有，为痰热淤结成痈；有热腥味或腥臭气的为痰热；味甜的属痰湿，味咸的属肾虚。
内质网的结构域功能
第三节ER的化学组成
1.与氧化反应电子传递相关的酶系 NADPH-细胞色素c还原酶、Ctyb5、细胞色素P-450 2.与脂类物质代谢功能反应相关的酶类 脂肪酸CoA连接酶 3.与碳水化合物代谢功能反应相关的酶类 葡萄糖-6-磷酸酶 4.参与蛋白质加工转运的多种酶类
核糖体结合糖蛋白（ribophorin）只分布在RER，P450酶系只分布在SER。
4、环孔板（annulate lamellae）
一、AL 的形态结构及分布特征
•
AL 在形态上与内质网十分相似，其 基本结构单位类似内质网的潴泡，是 由双层膜围成的扁平囊状结构。 • 但 AL 与内质网也存在明显区别，即 双层膜上具有规律性分布的、与核孔 十分相似的膜孔结构。膜孔上常有弥 散的非膜性无定形物质分布。 •因此在形态结构上 AL 兼有内质网和 核膜的特征。
微粒体仍具 有内质网的 基本特征； 粗面微粒体 仍保留RER 所具备的功 能
常用大鼠肝细胞 ER 的微粒体 来分析其化学组成。
φ100nm
第二节内质网的种类与结构特点
3、微粒体
A B
A: 粗面微粒体(来自RER)
B: 滑面微粒体(多来自SER，部分来 自细胞膜和高尔基体或其他膜性碎片
第二节内质网的种类与结构特点
酶蛋白含量多是内质网膜区别于高尔基体膜囊和 质膜的主要标志
第四节ER的功能
一、RER的功能
1.进行蛋白质合成
2.合成蛋白的修饰与加工
3.膜的生成
4.物质运输
第四节ER的功能
一、RER的功能
（一）进行蛋白质合成
蛋白质合成两个特定区域
1、游离核糖体（合成结构蛋白）
2、RER表面的核糖体（非膜蛋白、镶嵌蛋白）
脂肪酸的分解代谢
饱和脂肪酸β-氧化的实验证据：
1904年，的标记实验：
实验前提：已知动物体内不能降解苯环 实验方案：用苯基标记的饱和脂肪酸饲喂动物
马尿酸
苯乙尿酸
•《脂肪酸的分解代谢》
2. 脂肪酸的β-氧化
（1）脂肪酸的活化
脂肪酸首先在线粒体外或细胞质中被活化，形成脂酰 CoA，然后进入线粒体或在其它细胞器中进行氧化。
饱和脂肪酸的氧化分解 ❖β-氧化作用 ❖α-氧化作用 ❖ω-氧化作用
不饱和脂肪酸的氧化分解 ❖单不饱和脂肪酸的氧化分解 ❖多不饱和脂肪酸的氧化分解
▪ 奇数C原子脂肪酸的氧化分解
•《脂肪酸的分解代谢》
㈠ 饱和脂肪酸的β-氧化作用
概念
脂肪酸的β-氧化作用
能量计算 乙醛酸循环 乙醛酸循环的生物学意义 乙酰COA的可能去路
脂肪酸的活化
COA-SH+ATP AMP+PPi
Pi
RCH2CH2CH2COOH
脂酰COA合酶 （硫激酶）
RCH2CH2CH2CO～SCOA
（脂酰COA）
氧化脱H 水合 氧化脱H
FAD
FADH2
-
脂酰COA脱H酶 （3种）
RCH2C=CCO～SCOA
（△2反式烯脂酰COA）
烯脂酰COA水合酶
-
OH
HMGCOA 裂解酶
乙酰-COA
自动
丙酮
D - -羟丁酸脱氢酶
乙酰乙酸
NADH+H+ NAD+
•《脂肪酸的分解代谢》
D - -羟丁酸
一般情况：乙酰乙酸在肌肉线粒体中的分解
+
-酮酯酰COA转移酶
TCA
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA勺提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA为英文Deoxyribo nucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA勺一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA寸紫外线（260nm有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开一也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA勺结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
人教版2024年高考化学一轮复习《分层训练05 细胞器及生物膜系统》
05 细胞器及生物膜系统1．（2023·山东济宁·统考三模）酵母菌API蛋白是一种进入液泡后才能成熟的蛋白质，其进入液泡有两种途径。
途径甲是在饥饿条件下，形成较大的双层膜包被的自噬小泡，自噬小泡携带着API蛋白及部分其他物质与液泡膜融合，以单层膜泡进入液泡；途径乙是在营养充足条件下，形成体积较小的Cvt小泡，该小泡仅特异性地携带API与液泡膜融合。
下列叙述错误的是（）A．自噬小泡的内膜与液泡膜融合后，API进入液泡B．衰老的线粒体可通过类似途径甲的过程进入液泡C．自噬小泡和Cvt小泡的移动过程与细胞骨架有关D．酵母菌的液泡与动物细胞的溶酶体结构和功能相似2．（2023·山东青岛·统考三模）高尔基体对损伤的神经细胞膜有修补作用，Src蛋白分布于高尔基体等处，参与细胞内信号转导。
氧化应激是中枢神经系统损伤后产生的继发性损伤之一，科研人员使用H2O2构建氧化应激神经元模型并进行了相关实验，结果如图。
下列说法错误的是（）A．高尔基体可对来自内质网的蛋白质进行加工、分类和包装B．高尔基体可能通过形成囊泡来修补损伤神经元的细胞膜C．H2O2处理能影响神经元的正常功能，并使高尔基体平均长度增加D．注射SA激活神经元中的Src蛋白可加大氧化应激引起的继发性损伤3．（2023·全国·统考一模）信号肽假说认为，翻译时，编码分泌蛋白的mRNA首先合成信号肽，信号肽与信号识别颗粒（SRP）结合，SRP再通过与内质网上的SRP受体结合，将新生肽引导至内质网，肽链在内质网腔中继续合成并被初步加工，同时核糖体发生解聚，如图所示。
下列相关叙述正确的是（）A．图中分泌蛋白的合成及在内质网中的初步加工只有ATP供能B．过程③在信号肽酶的作用下肽链的信号肽被切除后即为成熟的分泌蛋白C．若基因中编码信号肽的序列发生改变，可能导致内质网无法对多肽进行加工D．信号肽借助信号识别颗粒将信息传至内质网膜上，体现了生物膜具有流动性4．（2023·河南·二模）细胞器间各司其职，协同细胞完成正常的生理功能。
脂肪肝的实验研究
脂肪肝的分类
根据病因分类
酒精性脂肪性肝病
（alcoholic fatty liver
disease,AFLD)
酒精性脂肪肝（AFL）
酒精性肝炎 酒精性肝纤维化 酒精性肝硬化
非酒精性脂肪性肝病 单纯性脂肪肝（NAFL）
（non-alcoholic fatty liver
脂肪性肝炎（NASH）
disease,NAFLD)
关系最密切的是高甘油三酯血症，脂肪肝发病率为 60~80%，常伴有肥胖和糖尿病
3、皮质醇增多症、妊娠等亦可导致脂肪肝
31 31
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四、生物性致病因素
肝炎病毒HBV和HCV感染可引起脂肪肝
特别是HCV感染患者中80%伴脂肪肝
五、遗传因素
先天性代谢性肝病：肝豆状核变性、半乳糖血症、
肝糖原贮积病等
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酒精性脂肪肝的发病机制
长期大量摄入酒精是导致ALD的主要原因
酒精对肝脏直接毒性作用 氧化应激和脂质过氧化的作用 细胞因子的作用
第一次打击 第二次打击
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47
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酒精对肝脏直接毒性作用 AFLD发病机制
NAD+
NADH
乙醇
乙醇脱氢酶ADH
微粒体乙醇氧化酶系
细胞因子表达增强tnfil8等脂质过氧化反应生物膜结构功能破坏抑制膜蛋白功能线粒体损伤不饱和脂肪酸logo45nafld的发病机制肝组织脂肪酸ros增多激活kupffer细胞释放大量细胞因子如tnftgf1pdgf等肝细胞炎症坏死肝纤维化logo46nafld的发病机制转化生长因子tgf1肝纤维化主要始动因子之一tgf1肝星状细胞hsc活化增殖肌成纤维细胞并分泌胶原纤维血小板衍生生长因子pdgf目前已知的hsc最强的丝裂原能刺激hsc活化增殖转化为肌成纤维细胞促进肝纤维化的发生logo47酒精性脂肪肝的发病机制细胞因子的作用第一次打击第二次打击logo48afld发病机制乙醇乙醛乙酸乙醇脱氢酶adh微粒体乙醇氧化酶系meosnadnadh乙醛脱氢酶nadnadh促进自由基产生促进膜的脂质过氧化与丙二醛mda等形成加合物损伤肝脏抑制vldl合成肝内tg转运障碍肝tg堆积乙醛nadhnad抑制线粒体三羧酸循环氧化肝内tg堆积logo49afld发病机制酒精含量高时其代谢主要由微粒体乙醇氧化酶系meos起作用meos主要成分为细胞色素p4502e1cyp2e1在酒精诱导下活化产生大量ros引发氧化应激和脂质过氧化造成肝组织炎症细胞损伤logo50afld发病机制ros等激活kupffer细胞释放大量细胞因子如tgf1pdgf等促进肝纤维化tnf在ald中占重要地位长期大量饮酒肠道菌群过度生长肠粘膜屏障通透性肠细菌移位肠源性内毒素血症激活kupffer细胞释放大量tnf组织炎症反应肝细胞凋亡坏死激活中性粒细胞增加ros的生成logo51logo52理想的实验模型造模停止后组织学病变逆转缓慢便于药物干预研究logo53afld特殊品系脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型体外诱导模型复合模型急性酒精性肝病动物模型慢性酒精性肝病动物模型体外诱导模型logo54nafld模基因突变或基因敲除1obob小鼠dbdb小鼠或fafa大鼠obob小鼠ob基因自发突变dbdb小鼠db基因自发突变fafa大鼠fa基因自发突变瘦素受体缺乏瘦素抵抗瘦素抵抗瘦素缺乏瘦素缺乏可出现与人类nafld相似的特征
复方参草颗粒对大鼠酒精性脂肪肝的拮抗作用
复方参草颗粒对大鼠酒精性脂肪肝的拮抗作用李艳杰;刘智;于艳华;韩杨;许大艳【摘要】目的:探讨复方参草颗粒(CSCG)对酒精性脂肪肝大鼠血清生物化学指标及肝组织形态学变化的影响.方法:60只大鼠随机分为6组,每组10只,即正常对照组、模型组、阳性药脂可清胶囊组及CSCG高、中、低剂量组.正常对照组大鼠喂食普通饲料;其余各组大鼠喂食380 mL·L-1酒精及高脂饲料,连续15 d,制备高脂模型.第16天起,灌胃给予各实验组大鼠相应药物,连续40 d.末次给药12 h后腹主动脉取血,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)含量,计算TC/HDL-C,LDL-C/HDL-C比值及动脉硬化指数(AI);断头处死大鼠,剖取肝脏,行常规HE染色,光学显微镜下观察.结果:与模型组比较,CSCG高剂量组大鼠血清TC,TG,LDL-C、TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C及AI均有不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清HDL-C含量升高(P<0.01),AI下调(P<0.01);光学显微镜下CSCG高、中剂量组大鼠肝组织内脂滴成分明显减少,肝细胞结构及排列明显改善.结论:CSCG对酒精性脂肪肝具有一定的拮抗作用.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(036)004【总页数】5页(P717-720,后插2)【关键词】复方参草颗粒;脂肪肝,酒精性;胆固醇;天冬氨酸氨基转移酶类;丙氨酸转氨酶;大鼠,Wistar【作者】李艳杰;刘智;于艳华;韩杨;许大艳【作者单位】长春中医药大学药学院药物化学教研室,吉林,长春,130117;长春中医药大学基础医学院药理学教研室,吉林,长春,130117;白城医学高等专科学校药学系药理学教研室,吉林,白城,137000;长春中医药大学基础医学院药理学教研室,吉林,长春,130117;长春中医药大学药学院药物化学教研室,吉林,长春,130117【正文语种】中文【中图分类】R285.3随着人们生活水平的提高，喜好高脂饮食及嗜酒的人群亦逐渐增多,致使酒精性脂肪肝的发病率明显升高。
肝微粒体制备
肝微粒体制备1. 简介肝微粒体（mitochondria）是细胞中的一种细胞器，主要负责细胞内能量的产生和调节。
肝微粒体制备是一种常用的实验技术，用于研究肝脏中微粒体的结构和功能。
本文将介绍肝微粒体制备的步骤和相关实验方法。
2. 肝微粒体制备步骤2.1 器材准备•洗涤缓冲液：含有0.25 M 蔗糖、10 mM Tris-HCl（pH 7.4）、1 mM EDTA 和0.1% BSA的缓冲液。
•离心管：用于离心过程。
•显微镜滑片：用于观察制备得到的肝微粒体。
2.2 肝脏取材•将新鲜动物（如小鼠）的肝脏取出，并放入冰冻盒中保持低温。
•快速切碎肝脏组织，以避免氧化酶的活性降低。
2.3 组织匀浆•将切碎后的肝脏组织加入洗涤缓冲液中。
•使用均质机将组织匀浆，以破碎细胞膜和释放肝微粒体。
2.4 离心分离•将匀浆后的混合液离心10分钟，以去除未破碎的细胞碎片和细胞核。
•将上清液转移到新的离心管中，并进行第二次离心，以沉淀肝微粒体。
2.5 肝微粒体收集•将离心得到的沉淀用洗涤缓冲液悬浮。
•用洗涤缓冲液洗涤肝微粒体，以去除杂质。
•最后一次离心后，将上清液倒掉，保留沉淀中的肝微粒体。
3. 肝微粒体制备相关实验方法3.1 蛋白含量测定•使用Bradford方法或BCA方法测定制备得到的肝微粒体中蛋白质的含量。
•根据实验需要调整蛋白质的浓度。
3.2 肝微粒体功能检测•使用荧光探针（如JC-1）检测肝微粒体的膜电位。
•使用呼吸链底物（如琥珀酸、NADH）测定肝微粒体的呼吸功能。
3.3 肝微粒体结构观察•使用透射电子显微镜观察制备得到的肝微粒体的形态和结构。
•准备样品时要注意避免溶剂残留和样品的干燥。
4. 结论肝微粒体制备是一种重要的实验技术，用于研究肝脏中微粒体的结构和功能。
通过合理的步骤和实验方法，可以成功制备得到高质量的肝微粒体，并进一步开展相关实验研究。
了解肝微粒体的制备过程对于深入理解细胞内能量代谢和调节机制具有重要意义。
大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响
大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响吴双;李登科;李凯明;周明;孙震晓【摘要】目的:研究大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响.方法:利用大鼠肝微粒体对何首乌水提物进行体外代谢;将经代谢前后的何首乌水提物溶液冷冻干燥,以不同浓度(相当于生药1.5、3、6、12 mg/mL)分别作用肝L02及HepG2细胞24h及48 h,MTT法检测其对两种细胞活力的影响;HPLC测定何首乌水提物溶液中3种主要成分(二苯乙烯苷、大黄素-8-0-β-D-葡萄糖苷、大黄素)的含量变化.结果:何首乌水提物代谢后,随着其剂量的增加,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,与何首乌水提物未代谢组相比,浓度为12 mg/mL的何首乌水提物代谢组毒性明显降低(P＜0.01).HPLC测定结果显示,何首乌水提物代谢组上述3种主要成分含量均有所降低.结论:何首乌水提物经大鼠肝微粒体代谢后对肝细胞毒性降低,与其主要成分含量降低之间的关系需要进一步研究.%OBJECTIVE:To study the hepatotoxicity of aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix with or without incubation with the rat liver microsome.METHODS:Aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix was incubated with or without rat liver microsome in vitro and then dried by freeze drying.Liver L02 and HepG2 cells were incubated with different concentrations of the freeze-dried extract (1.5,3,6,12 mg/mL) for 24 h,48 h.Cell vitability was assayed by MTT method.In addition,contents of three main components (trans-2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-O-β-D-glucopyranoside,emodin-8-O-β-glucopy-ranoside,emodin) from aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix after incubation were quantitated by HPLC analysis.RESULTS:The aqueous extract without incubation with rat liver microsome showed more toxicityat the concentration of 12 mg/mL than that with incubation (P＜0.01).Contents of the three main components of aqueous extract incubated with rat liver microsome were lower than those without rat liver microsome.CONCLUSION:Hepatotoxicity of aqueous extract of Polygoni Multiflori Radix was decreased after their metabolism by rat liver microsome.The relationship between reduced contents of the main components of the aqueous extract and the reduction of hepatotoxicity need further study for clarification.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2017(029)006【总页数】4页(P450-453)【关键词】何首乌;水提物;肝微粒体;肝细胞毒性;代谢【作者】吴双;李登科;李凯明;周明;孙震晓【作者单位】北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102;北京中医药大学,北京100102【正文语种】中文【中图分类】R285.5中药何首乌(P olygoniMultifloriRadix)是蓼科植物何首乌(P olygonummultiflorumThunb.)的干燥块根，入药始载于“日华子本草”，有解毒、消痈、截疟、润肠通便之功效 [1]。
肝细胞
线粒体
线粒体
肝细胞的线粒体的大小 和形态不完全一致，在正常生理条件下，多为圆形和卵圆形，直径0.4-0.8μm。线粒体的共同基本形态结构特征 是外被双层界膜--外界膜和内界膜，内界膜向线粒体内部伸展转折，形成许多嵴。内界膜将线粒体分隔为内、外 两室，外室介于内、外界膜之间，内室则围于内界膜之间，其中充满基质。
微体
微体
微体是肝细胞内最小的细胞器，为由单层界膜包绕的圆形或卵圆形小体。在肝细胞内，微体与线粒体的比例 近乎1：4。微体基质内含有过氧化氢酶和多种氧化酶，如D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶及L-2-羟基酸氧化酶 等，故微体又称过氧体（peroxisome）。
过氧体来源于粗面内质，形成迅速，从粗面内质转运出来大约只需一小时便可完成，在细胞内可存在5天， 并在4分钟内通过自噬或自溶过程而解体。也能从已有微体分裂产生。 从微体的发生及其所含酶的特点看，可视 为一种特殊类型的溶酶体。从种系发生史上看，微体可被视为一种古老的氧化微器官的遗迹，在细胞生物进化过 程中逐渐被线粒体所取代。微体内含有对长链脂酸进行β氧化降解的酶系，故能参与脂代谢。微体内的过氧化氢 酶能降解细胞内的H2O2以防止氧化氢引起细胞中毒。微体内的过氧化氢酶和L-2-羟基酸氧化酶能将NADH再氧化， 并通过过氧体的α-甘油磷酸脱氢酶，支持果糖的降解。因此，微体和线粒体是协同参与细胞呼吸的细胞器。微体 与微粒体（microsome）很易混淆，但这是两个完全不同的概念。微体是细胞内固有的细胞器，而微粒体则系缀 有大量核糖体的内质碎片，是组织匀浆超速离心后的产物。在病理情况下，可见有肝细胞内微体数目的增多或减 少。微体增多可由甲状腺索引发，因而在甲状腺功能亢进患者的肝细胞内，常见有微体数量的增多；反之，甲状 腺功能低下时，肝细胞内微体数目则减少。此外，慢性酒精中毒及肝癌时亦均见有肝细胞内微体数目的增多，其 意义尚不清楚。
砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分中砷的分布
砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分中砷的分布杨瑞瑛;王生玲;张玲;林勤;张智勇;马品江;朱殿志;王连方【期刊名称】《中华地方病学杂志》【年(卷),期】2003(022)005【摘要】目的研究砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分(细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体及胞液)中砷的分布,为地方性砷中毒的治疗提供科学依据.方法用亚砷酸钠(NaAsO2)诱导出大鼠亚急性砷中毒模型,采用差速离心生化分离技术与超热中子活化分析相结合,测定大鼠肝脏亚细胞组分中砷的含量.结果中毒组大鼠肝脏中各亚细胞组分中砷的含量均极显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.001);且砷在各亚细胞组分中的浓度并非均匀分布,在中毒组肝脏亚细胞中的浓度遵循微粒体>胞液>线粒体>细胞核.结论砷在微粒体、胞液和细胞核中的大量蓄积,可能导致肝细胞损伤.【总页数】2页(P387-388)【作者】杨瑞瑛;王生玲;张玲;林勤;张智勇;马品江;朱殿志;王连方【作者单位】中国科学院,高能物理研究所,核分析技术重点实验室,北京,100039;新疆疾病预防控制中心,新疆,乌鲁木齐,830002;新疆疾病预防控制中心,新疆,乌鲁木齐,830002;新疆疾病预防控制中心,新疆,乌鲁木齐,830002;中国科学院,高能物理研究所,核分析技术重点实验室,北京,100039;新疆疾病预防控制中心,新疆,乌鲁木齐,830002;新疆疾病预防控制中心,新疆,乌鲁木齐,830002;新疆疾病预防控制中心,新疆,乌鲁木齐,830002【正文语种】中文【中图分类】O613.63【相关文献】1.用超热中子活化法测定大鼠肝脏亚细胞组分中的砷 [J], 杨瑞瑛;张永保;王生玲;张智勇;王珂;张玲;林勤;马品江;朱殿志;王连方2.砷在砷中毒性肝脏内的亚细胞水平分布 [J], 朱建华;王翔朴3.砷胁迫对狭叶香蒲生理生态及砷亚细胞分布的影响 [J], 张晋龙;黄颖;吴丽芳;龚云辉;刘云根;王妍;杨思林4.砷超富集植物蜈蚣草中磷和钙的亚细胞分布及其与耐砷毒的关系 [J], 肖细元;廖晓勇;陈同斌;阎秀兰;谢华;翟丽梅;武斌5.富集稳定同位素示踪研究钐、镱在大鼠肝脏中的亚细胞分布 [J], 李福亮;王玉琦;张智勇;孙景信;柴之芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
非酒精性脂肪肝动物模型研究纂要[1]
![非酒精性脂肪肝动物模型研究纂要[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/d1892e7302768e9951e73881.png)
收稿日期:2004-10-21作者简介:杨英昕(1970-),男,2003级博士研究生。
文章编号:1009-5276(2005)04-0647-05非酒精性脂肪肝动物模型研究纂要杨英昕1,毕秀丽2 指导:朱培庭1教授(11上海中医药大学附属龙华医院,上海200032;21沈阳药科大学,辽宁沈阳110016) 关键词:非酒精脂肪肝;实验研究中图分类号:R26619 文献标识码:B 脂肪肝病理上主要包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化三种类型(阶段),临床上则有酒精性脂肪性肝病(AF LD )和非酒精性脂肪性肝病(NAF LD )之分。
为了阐明疾病的发病机制、筛选有效的防治措施,除了通过临床研究对人类患者直接观察外,采用动物模型开展实验研究已成为科研攻关不可缺少的手段。
兹介绍如下。
1 营养性脂肪肝模型111 大 鼠 大鼠大多为二级(清洁级)动物,根据造模饲料不同又分为:高脂饲料诱发肥胖、高脂血症性脂肪肝 常用高脂饲料的组成有以下几种:范建高等[1]用1%胆固醇、5%猪油、10%玉米油,大鼠自由饮水和进食。
食用该高脂饲料3个月时出现轻度肝脂肪变性,体重显著高于正常组。
6个月时脂肪肝进展为中度,但未出现肝纤维化,肝组织内甘油三酯的含量显著高于正常对照组。
配方中添加玉米油是因为它是一种多不饱和脂肪酸,易发生过氧化反应产生含氢的自由基和醛类等产物,而醛类等可与谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的活性部位结合,减少对自由基的清除,加重脂质过氧化损伤。
此模型的缺点是造模时间长,病变轻。
王志平等[2]与此相同的基础饲料基础上加1%胆固醇,5%猪油110%玉米油,连续饲喂4～6周龄,体重为180～200g 雄性S D 大鼠,8周后在形态学上和血浆中检测的TG 、T C ,肝组织中TG 含量明显增高,造模成功。
钟岚,范建高等[3～6]用普通基础饲料加2%胆固醇、10%猪油给雄性S D 大鼠食用,12周后。
其体重较正常组超重20%以上、肝指数(肝湿重/体重×100%)均显著高于正常组,出现高胆固醇血症,血清转氨酶显著升高。
细胞生物学3内膜系统(1)
小泡
vesicle
小管
tubule
一、内质网的形态结构和类型
(二) 内质网的类型：有两种类型
• 粗面内质网 (rough endoplsmic reticulum, RER) 又称为颗粒内质网(granular endoplasmic reticulum GER) • 滑面内质网(smooth endoplsmic reticulum, SER) 又称为无颗粒内质网(agranular endoplasmic reticulum AER)
– 胰腺细胞中，内质网占整个细胞体积的3/4，其中大部 分是粗面内质网。 – 在睾丸间质细胞中，主要是滑面内质网 。 – 肝细胞例外，两种类型的内质网都很丰富，且分区存 在，有时可以相互转化。
胰腺细胞 粗面内质网
睾丸间质细胞 滑面内质网
肝脏细胞 粗面和滑面内质网
内质网的透射电镜照片
第一节 内质网 (endoplastic reticulum, ER)
César Milstein & G.Blobel、B.Dobberstein、P.Walter
IgG轻链合成免疫球蛋白多肽
•
• •
1、信号肽(signal peptide)
☆
信号肽假说（signal peptide hypothesis）
• 分泌蛋白质的合成起始于细胞质中的游离核糖核蛋白体； • 合成的N-端信号序列露出核糖核蛋白体后，通过N-端信号 序列的疏水性氨基酸残基插入到内质网膜； • 蛋白质继续合成，并以袢环形式穿过内质网膜；
透射电镜照片 (TEM) 扫描电镜照片(SEM) 胰腺细胞的粗面内质网
线粒体
RER 肝脏细胞SER和RER
1、粗面内质网的特点
大鼠肝微粒体的制备
2.1。
3 大鼠肝微粒体的制备大鼠肝微粒体制备全过程：1．购买实验动物 SD 大鼠，20 只，雌雄各半，体重（180—220)g，广州中医药大学实验动物中心提供.合格证号：00557062．大鼠肝脏灌流购买的大鼠当天腹腔注射3%戊巴比妥钠(30 mg·kg-1 ），使其麻醉，利用酒精进行常规消毒后,打开腹腔暴露肝脏，肝门静脉处进行插管并固定。
结扎上腔静脉，剪破下腔静脉用磷酸盐缓冲液进行灌流，直至肝脏颜色呈土黄色.3．灌流好的肝脏取出后按1：4 比例放入装有磷酸盐缓冲液（含1mMEDTA ,0。
25M 蔗糖）的匀浆管内，剪碎，匀浆。
4．将匀浆液倒入50mL 高速离心管中在4℃条件下9000g 离心20 min.5．保留上清并转移到超速离心管中,在4℃条件下100000g 离心60min。
6．保留沉淀并重新混悬于磷酸盐缓冲液(含0.9%的NaCL）中, 4℃条件下100000g 再离心60 min,得到的沉淀即为肝微粒体。
7．将肝微粒体重悬于0.1M 磷酸缓冲液（PH7。
4，20%甘油，1mM EDTA，0.25M 蔗糖）中于-70℃冰箱保存，其中留取一小管用于蛋白浓度测定。
8．微粒体蛋白浓度测定依据的是Lowry et。
al。
方法(Lowry et al.,1951），首先用牛血清白蛋白标准溶液配置成不同浓度的蛋白标准溶液,与斐林试剂混匀发生反应后测定蛋白浓度，根据吸光度A 和蛋白浓度C 进行线性回归并绘制标准曲线。
同样的方法测定肝微粒体的吸光度,根据标准曲线线性回归方程计算肝微粒体蛋白浓度。
9．肝微粒体中P450 酶含量测定根据Omura and Sato 的方法（Omura andSato,1964）,用Tris—HCl 缓冲液把肝微粒体样品稀释至0。
3−0.5 mg/mL,取两份肝微粒体分别放于参比池和样品池， 400 nm~500 nm 扫描基线；参比池和样品池都加入少量Na2S2O4，轻微搅拌，并给样品池通CO 气体30 s，再次扫描,记录450 nm和490 nm 处的吸光度,按Beer 定律（公式2。
栀子苷对大鼠肝指数、肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2的影响
任公司产品 ；Ａ Ｔ Ｆ ＩＨ一１０ ００全 自动生化 分析仪 ， 南京劳 拉电子有限公 司产 品 ； Ｌ １８ Ｕ Ｔ ３６—３一Ｖ １ 低温冷 冻 ４超 柜， 产地美 国； Ｐ Ｕ Ａ— Ｌ Ｓ恒温振荡摇床 ， 产地美 国。
１４ ． 分 组 与 给 药 、
细胞 色 素 Ｃ Ｐ Ａ Ｙ ３ ２含量 ， 通过 红霉 素 Ｎ 一去 甲基 反 应 评 价 酶 活 性 。结果 ： 苷 大 剂 量组 对 大 鼠肝 功 能 有 损 害 ； 酶 活性 方 栀子 在 面 ， 子 苷小 、 大 ３个 剂量 组均 高 于空 白对 照 组 ， 有 统 计 栀 中、 差别
族 占 Ｐ５ ４ ０酶总 含量 的 ２ ％ ， Ｙ ３ ５ Ｃ Ｐ Ａ对 外 源性 物 质
代谢 ， 尤其是 对 药 物 代 谢 最 为 重 要 ， 临床 上 ６ ％ 的 ０ 药 物需 经 Ｃ Ｐ Ａ代 谢 以排 出体 外 。Ｃ Ｐ Ａ Ｙ３ Ｙ ３ ２是 存 在于 大 鼠肝 脏 中的重 要 药 物代 谢 酶 ， 大 鼠肝脏 内 在
主要表 达 Ｃ Ｐ Ａ 。Ｃ Ｐ Ａ在许 多 内源性 和外 源性 Ｙ３２ Ｙ３ 化合 物的氧化 与还 原代谢 中起 重要 作用 。本文 旨在 研究栀 子苷对 大 鼠肝脏 Ｃ Ｐ Ａ Ｙ ３ ２的影 响 ， 以期 为 进
一
冰 浴 ５ｒ ｎ 轻轻 搅拌 数次 ， ｉ， ａ 混合 液在 低 温 高速 离 心
中医 研 究
２１ ０ ０年 ３月 第 ２ ３卷 第 ３期
Ｔ Ｍ Ｒｅ． ｒｈ２ １ ｏ．３Ｎ ． Ｃ ｓＭａｃ ０ ０Ｖ １２ ｏ３
文章编号：０ １ ６ １ （０ ０ ０ ０ ２ ０ １０ — ９ ０ ２ １ ） ３— ０ ０— ３
・实 验 研 究
－
生物化学新题库(含答案)
第28章脂代谢一、判断题（每小题1.0分）1．脂肪酸合成的碳源可以通过酰基载体蛋白穿过线粒体内膜而进入胞浆。
（ F ）2．甘油在生物体内可转变为丙酮酸。
（ T）3．在脂肪酸合成中,由乙酰辅酶A生成丙二酸单酰辅酶A的反应需要消耗两个高能键。
（ F）4．只有偶数碳脂肪酸氧化分解产生乙酰辅酶A。
（ F ）5．酮体在肝内产生,在肝外组织分解,是脂肪酸彻底氧化的产物。
（ F ）6．胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物。
（ T）7．脂肪酸的合成是脂肪酸ß-氧化的逆过程。
（ F）8．用乙酰辅酶A合成一分子软脂酸要消耗8分子ATP。
（ F ）9．脂肪酸合成的每一步都需要CO2参加，所以脂肪酸分子中的碳都来自CO2。
（ F ）10．ß-氧化是指脂肪酸的降解每次都在α和ß-碳原子之间发生断裂，产生一个二碳化合物的过程。
（T ）11．磷脂酸是三脂酰甘油和磷脂合成的中间物。
（T ）12．CTP参加磷脂生物合成，UTP参加糖原生物合成，GTP参加蛋白质生物合成(T）13．在动植物体内所有脂肪酸的降解都是从羧基端开始。
（ F）14．不饱和脂肪酸和奇数脂肪酸的氧化分解与ß-氧化无关。
（ F ）15．胆固醇的合成与脂肪酸的降解无关。
（ F ）16．植物油的必需脂肪酸含量较动物油丰富，所以植物油比动物油营养价格高。
( T ）17．ACP是饱和脂肪酸碳链延长途径中二碳单位的活化供体。
（ F ）18．人可以从食物中获得胆固醇，如果食物中胆固醇含量不足，人体就会出现胆固醇缺乏症。
（ F ）19．脂肪酸β—氧化是在线粒体中进行的，其所需的五种酶均在线粒体内。
（ F ）20．细胞中酰基的主要载体一般是ACP。
（ F ）21．脂肪酸的从头合成与其在微粒体中碳链的延长过程是全完相同的。
（F）22．脂肪酸的分解与合成是两个不同的过程，所以它们之间无任何制约关系。
（ F ）23．脂肪酸的彻底氧化需要三羧酸循环的参与。
健脾活血方对大鼠24h急性酒精中毒的保肝效应及机制研究
健脾活血方对大鼠24h急性酒精中毒的保肝效应及机制研究徐琳;冯琴;彭景华;傅琪琳;黄甫;李晓飞;赵瑜;胡义扬【摘要】目的:研究健脾活血方对大鼠24h急性酒精中毒的保肝效应及作用机制.方法:28只SD大鼠随机分为正常组(8只)、模型组和健脾活血方组(各10只).予相应饮用水或健脾活血汤1.0 mL/100 gwt,连续3d,2次/d.第3天末次给药后,禁食禁水16 h,再次灌胃饮用水或健脾活血汤1.0 mL/100 gwt.1h后,予等剂量56％乙醇灌胃模型组和健脾活血方组大鼠复制酒精中毒模型.24 h后麻醉,留取血清及肝组织标本,检测相关指标.结果:与模型组比较,健脾活血方组血清ALT活性显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01)HE染色见肝细胞胞质内小空泡状改变减轻,库普弗细胞减少,肝组织GSH活性显著升高(P＜0.01),肝组织TNOS、iNOS活性显著降低(P ＜0.05).结论:健脾活血方通过提高24 h急性酒精中毒大鼠肝脏GSH含量,降低iNOS水平,起到抗氧化应激损伤保护肝脏的作用.%Objective:To explore the mechanism of hepatoprotective effect of Jianpihuoxue Decoction on 24 hours acute alcohol intoxication rats and to discuss its mechanism of anti-oxidative stress.Methods:Twenty-eight Sprague Dawley rats were allocated to the normal group (8 rats),acute alcoholism model group (10 rats) and the jianpihuoxue decoction group (10 rats).Each group was given the jianpihuoxue decoction or water 1.0 mL/100 gwt twice a day for three days.The water and food were forbidden for 16 hours after the last administration three days later.,then rats were given jianpihuoxue decoction or water 1.0 mL/100 gwt by gavage again.One hour later,acute alcoholism model group and the jianpihuoxue decoction group were given the same amount of 56％ alcoholl 1.5 mL/100 gwt by gavage to reproducethe model of acute alcoholism.The serum and hepatic tissues were taken after 24 h to detected the related indexes.Results:Compared with the model group,Jianpihuoxue decoction reduced activities of serum ALT(P ＜0.01),alleviated microvesicular steatosis obviously and kupffer cells in the hepatocytes reduced,observed by H&E staining.The content of GSH of liver tissue increased significantly (P ＜ 0.01) while the expression of TNOS and iNOS lowered (P ＜ 0.05).Conclusion:Jianpihuoxue decoction protects the 24 hours acute alcoholism rats' livers and resists the oxidative stress damage by increasing the level of hepatic GSH,decreasing the level of hepatic iNOS.【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2017(012)007【总页数】4页(P1616-1619)【关键词】健脾活血方;急性酒精中毒;氧化应激;肝损伤【作者】徐琳;冯琴;彭景华;傅琪琳;黄甫;李晓飞;赵瑜;胡义扬【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院肾病科/上海中医药大学肾病研究所,上海,201203;上海市中医临床重点实验室(14DZ2273200),上海,201203;上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海市中医临床重点实验室(14DZ2273200),上海,201203;上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海市中医临床重点实验室(14DZ2273200),上海,201203;上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海市中医临床重点实验室(14DZ2273200),上海,201203;上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海,201203;上海中医药大学附属曙光医院/上海中医药大学肝病研究所,上海,201203;上海市中医临床重点实验室(14DZ2273200),上海,201203;上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海,201203;上海市高校中医内科学E-研究院,上海,201203【正文语种】中文【中图分类】R256.4流行病学调查发现,酒精性肝病(Alcoholic Liver Disease,ALD)在我国的发病率呈逐年上升趋势[1]。
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为丰富。 线粒体是细胞能量代谢的中心， 是细胞有氧
呼吸 的基 地和供 能的场 所 ， 细胞 生命活 动 中需 要的 能量 ， 约有 ９％由线 粒体 供应 。 ５ 微粒 体 （ ｃ ｓｍ ） ｍｉｏｏ ｅ ｒ
主要是细胞质内一些微细的内质网多能性结构， 它
与肝脏 的解毒 功能有关 。 脂肪 酸是 微粒体及线粒 体中重要 的化学组成之 一， 对维持其正常 的生理功能有 着重要 的意 义〔。 １有 〕 关肝 细 胞微粒体及 线粒 体的脂 肪酸组 成分 析， 目前
酸 含量的 １％。 细胞微 粒体 中脂肪酸 含量若 以碳 ０ 肝
物的新鲜肝组织混合制成匀浆后进行测定的。 从测
定结 果看 ， 肝细 胞微粒体 和线 粒体 中多不饱和 脂肪
酸含量较多， 分别占全部脂肪酸含量的４．６ ９７％和
链的长度来分配， 则其浓度分别为１Ｃ（１６ 、 ６ ２．％） １Ｃ ４．％）２Ｃ（６１ 和２Ｃ ６４ 。 ８ （５９ ０ ２．％） ２ （．％）据文献 ［］ １报道， 大鼠肝细胞微粒体脂肪酸组成为１Ｃ ６
［］ １ 王
Ａ ｗ， ｉｐｅ ａｃｒｔ ａｄ ｓｉ ｍ ｔ ｄ ｎ ｅ ｓ ｌ， ｃ ａ ｎ ｓｎｉｖ ｅｈ ｍ ｕ ｅ ｅ ｔ ｅ ｏ ｆ ｔｅ ｅｍ ｎｔｎ ｐｏｅｈｌ ｌ Ｎ －０ ｏ ｈ ｄｔ ｉ ｉ ｏ ｈｓｔｙ Ａ ａｄ ９１ ｒ ｅ ｒ ａ ｏ ｆ － ｎ Ｄ ｂ ｈａｓａｅ ｏ ａｏｒ ｈ ｈｓ ｎ ｖｌ ｅ ． ｙ ｄｐｃ ｃｒｍ ｔｇａ ｙ ｂｅ ｄ ｅ ｐｄ ｅ ｈ ｐ ａ ｅ ｅ ｏ
顶空气谱 法的定量基础要求标样和试 样混合液
［］ ４ 化工部 化工 产品标准审 查委员会编 ，农药标准汇编 《 （９０ ）， １９年 罚中国标准 出版社 ， 京，．７ ，９１ 北 Ｐ ４３１９． （ 收稿 日期 ：９２ 月１ 日， １９年４ ７ 修回 日 ：月１ 日） 期 ８ ８
中的溶质、 介质必须一致（， ３ 因此， ） 为分析三乙膦酸
间（ 单位 ： ｉ） ｍ ｎ分别 为 ： ． ２ （ ０ ： ４ １ Ｃ ６）Ｃ ６３９ ）Ｃ６ ５ １ （．２ １： ０ （．４ 、 １０ ６２ ） Ｃ８ （．９ 、 １２ ８１ ） ４４ ） Ｃ８ （ ．４ 、 １ ６８ ） Ｃ８ （．８ 、 ： ： １ ：
Ｃ ８ ｎ （． ８ ２４－ １ ． ２ ２６－ １． ６ 。 １３６ ９３ ）Ｃ ０ ｎ （４ ２ ）Ｃ２ ｎ （８ ９ ） ： ：６ ：３
色谱 柱 。 肝细胞 微粒体 及线粒 体 内的 脂肪酸经 定性
Ａ 压 ｋ ， 温 ８ ４ｎ ８ ２ ｉ 力０ ａ １ ｍ ） ／ｉ ２ ｒ Ｐ 柱 ０（ ｉ ０
（ｍｎ ， 测 器及 汽 化室 温度 ２０ ， ８ ｉ）检 ４ 纸速 ２５ ｍ／ ．ｍ
ｍ 。
分析， 有九种主要脂肪酸得到了确认， 它们的保留时
国内尚未见报道。 我们应用Ｏ －７填充柱对大鼠肝 Ｖ ２５
细胞微粒体及线粒体 中的脂肪酸 组成进行 了气相 色 谱分 析 ， ２ｍｉ 内各主要 脂 肪酸均 得 到 比较 满 在 ０ ｎ之 意的分离 。
（Ｈ７４中制成１６ ｐ ．） ：匀浆， 然后采用差速离心法以 ６０ 离心５ ｎ去除结缔组织、 ０ ｍｉ， 完整细胞和胞核，
硫酸钠脱水 。 不澄 清 ， 入１ 滴 无水乙醇（ 如 可加 －２ ５ ）
用面积归一化法直接计算各组分在脂肪酸总量中所
占的重量百分 比（。 ）
（ 仪器和实验条件 五）
１Ｇ －Ａ ． Ｃ ７ Ｇ气相色 谱仪 （ｈ ａｚ 产 品）检 测 Ｓ ｉ ｄｕ ｍ ， 器 ＦＤ， － ２ Ｘ数 据处 理机 ，．ｍ ３２ ｍ 玻璃 Ｉ ＣＲ Ａ ２１ ．ｍ 柱， 固定液 为 １ Ｏ －７ （ 兰 Ｃ ｒｍ ａｋ产品 ） ０ Ｖ ２ ５荷 ｈｏ ｐｃ ， 担 体 为 Ｃ ｒｍ ｏｂ Ａ ｉ Ｗａｈｄ– ． ． 口分 ｈｏ ｓｒ Ｗ ｃ ｄ ｓｅ Ｃ Ｎ 进 装 ）载气 （ ， 高纯 Ｎ ） 前压 力８ｋ ａＨ 压力 ６ｋ ａ ２柱 ５Ｐ ， ２ ５Ｐ ，
酸（１ ｎ） Ｃ８ －购自Ｆｕａ ３３ ｌ 公司， ｋ 所有标准品均为甲酯，
纯度 为９－ ９ ％。 ０ ９ （ 线粒 体及 微粒体 的制备 二） 将 Ｗｉａ 大 鼠断头处死 ， 新鲜肝组 织加入 冰 ｓｒ ｔ 取 冷 的 ０１ｍ ｌ Ｋ ｌ ．２ ｏ Ｌ ｉ Ｈ ｌ 冲液 ．５ ｏ／ Ｃ－ ０ｍ ｌ Ｔ ｓ Ｃ 缓 Ｌ ０ ／ ｒ－
１， ０ 离心１ ｉ， ２０ ｇ ０ ０ ｎ将线粒体分离出来备用。 ｍ 再将
上清液采用钙沉淀法［，５０ｇ 离心１ｍｎ制成 ２ ２．０ ］ ５ ｉ， 微粒体备用。 以上操作均在０ ４ 下 进行。 ｏ ｒ 以Ｌｗ ｙ
氏法 〔测定线粒及微粒体的蛋 白含量 。 ３ 〕 （ 脂质 的 三） 提取 取 含 有４ ｇ 白的线 粒 体或 微粒 体 ， ｍ 氯 ｍ 蛋 用３ ｌ
铝 及其混剂做 了各种 测定和 校正 。 分析 误 差主要来 源 于采样 ， 要 防止液化 又要 保持 反应瓶 内压 力的 既 恒 定。 同一温度 下 ， 压力 降低 ， 乙醇和 叔丁醇 的汽 化
Ｑ ａ ｔａｉ Ａ ａ ｓ ｏ Ｐ ｏｅ ｙ Ａ ａｄ － ｕｎｉ ｔｅ ｌ ｉ ｆ ｓｔ ｌ １ Ｎ ｔ ｖ ｎ ｙ ｓ ｈ ｈ － ｎ Ｄ ９１（ ｈｓ ｈ ｌ ｌ Ｍａｃｚｂ ｂ ａ ｅｄｐｃ ０ Ｐ ｏｅ ｙ Ａ ＋ ｔ － ｎｏｅ ） ｙ Ｈ ａｓａｅ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｐｙ ｎ ｉｉ ，Ｓｎ Ｓ ｕａ ，Ｍａ ｈｏ ａｏ ａｈ Ｆ Ｚ ｘａ ｇ ａ ｈ ｎ ｏｇ ｙ ｏ ｈ Ｆ ｎｕ ｄ ｎ Ｚｑ ｎ ，Ｊｌ Ａ ｒ ｕｔ ａ Ｕ ｉ ａ ｒ ａ Ｌ ｇ ｉ ｇ ｉｎ ｉ ｌ ｒｌ － ｎ ｏ ｉａ ｉ ｇｃ ｕ ｎ
成熟红细胞外 ， 遍存在于各种细 胞中 ， 细胞 内尤 普 肝
脂酸（１ ）花生酸（２ ） Ｃ８ 、 ： ０ Ｃ０ 购自上海试剂一厂， ： ０ 软脂 油酸 （ ６ 、－ 麻酸 （ １３ ） 花生 四烯 酸 Ｃ１） 亚 ： Ｃ８ｎ 、 ：６
（２ ４）二十碳五烯酸 （２５３、 Ｃ０ － 、 ： 烯 酸 （ ２６３ 购 自 ＳＧ Ｃ２ｎ） ：－ Ｉ ＭＡ 公 司 ， 酸 油 （ １１、 Ｃ８）亚油酸 （１２购 自 Ｅ Ｍｅｃ 公 司， ： Ｃ８） ： ． ｒｋ 次亚麻油
ｖ ｒｉ Ｃ ａ ｇ ｈ ｎ １ ０１ ｅｓｙ， ｈ ｎ ｃｕ ， ３ １ ８ ｔ
率提高， 峰高明显增加， 从而影响定量的准确性。
（ 小结 六） 本 法简便 、 、 快速 经济可靠 、 灵敏度 高、 线性 范围
宽， 除用于原药、 制剂分析外， 还可用于三乙膦酸铝
的残留分析和作用机制 、 导代谢等研 究工作。 输 致谢 本文 由刘伊玲教授 审阅 ， 深表谢意 。 在此 参
实验部分
（ 脂肪 酸标 准 品 一） 月桂酸 （ １ ）豆蔻酸（ １０、 Ｃ２ 、 ： ０ Ｃ４）软脂酸 （ １０、 ： Ｃ６）硬 ：
仿 甲醇－ Ｃ （ ： ：．２Ｖ Ｖ） 合 液 ， 烈 振 摇 Ｈ ｌ２ １ ００ ， ／ 混 猛
标准 品制备成 定性溶 液 ， 分别与 样品 中各组分 的保 留时 间进 行比较 。） ２加标准物 ， 其相应的峰增 高且峰 宽保持不变 。） ３用不同的柱温相结 合（ 恒温和 程序升 温） 进行 定性 。 定量分 析 在 Ｃ Ｒ Ａ 数据处 理机上进 行 ， － ２Ｘ 采
（６８ 、１Ｃ （ ８６ ， ０ （ ３６ １． ％） ８ ４． ％） ２Ｃ ２． ％）和 ２Ｃ ２
６ ４ １８ ） ４ （９ ４ ．
（．％）我们的结果与其基本一致。 ８０ 。 从我们测定的 结果（ ） 表１可见， 肝细胞微粒体及线粒体的脂肪酸组
成及含量 比较相近 。
表 １ 脂 肪 酸 的 组 成 及 百分 含量 （ 甲 酯 总 量 以 １０ ０计 ）
［］ ２ 肖功华 国外医学卫生学分册 ，，７（９１． ５２３１８） ［］ ３ Ｌ ｗｙ ａ ， ． ｉ．Ｃ ｅ ， ９ ，６ ．Ｈ．ｏ ｒ ｅ ｌ ＪＢｏ ｈｍ １３２５ ｔ ． ｌ
（９ ） １ ５１ ．
［ ］ ．． ａ ｄ ｎ ａ． ｉｃ ｅ ４ Ｆ ＪＬ ｎ ｏ ｅ ｌ，Ｂｏｈ ｍ．Ｐ ａｍａｏ． ３３ ５ ｔ ｈ ｒ ｃｌ，３ ， ５ ３ （９ ４ ． １８）
２Ｌ－超速离心 机（Ｅ Ｋ Ｎ产 品） ．７ ５ ５ Ｂ Ｃ ＭＡ 。
（ 定性和定量 六）
定性分析 １比较 保留时间 （）将脂 肪酸 甲酯 ） ｔ： ｒ
表１ 显示出正常大鼠肝细胞微粒体及线粒体脂
肪酸 的组成 及含量 。 中所列 数据是将 九 只实验动 表
５．０ ； ３７ 单不饱和脂肪酸含量较少， 约占全部脂肪
结果与讨论 用上述方法测定了正常大鼠肝细胞微粒体及线
粒体的脂肪酸组成 ， 见图２３图１ 。 为十三种脂肪酸 的 标准 色谱 图 。 由图１２ ３ 见 ， Ｏ －７填 充 柱在 可 用 Ｖ ２５ ２ｍ ｎ内即 可将 Ｃ２ Ｃ２ 之 间各主要脂 肪酸进行 ０ｉ １０ ２ ： ：
满意地分离， 这是一种比较理想的脂肪酸分离填充
ｄｆｅ ｅ ｔ ｏ ｅｈ ｎ ｌ ｓ ｌ ｅｆｃｓ Ｔｈ ｒｃ ｖ ｒ ｉｆｒ ｎ ｆ ｍ ｔ ａ ｏ ｉ ａｔ ｅ ｔ． ｒ ｎ ｆ ｅ ｏ ｅ－ ｅ
考
文
献
仪等， 农药 ，０６ ，２１９） ３ （）２（９１．
［ ］ ． ． ｌｎｗ ｒ ｅ ａ ，Ｊ Ｆ ｏ Ｓｉ，４ ，９ ２ Ｔ Ａ Ｈｏｉｇ ｏｔ ｔ ｌ ｈ ｌ ． ｏ ｄ ． ８ ２０ ． ｃ
ｔｃ ｏ ｄ ｉ ａ ｄ ｉｒ ｓ ｍｅ ｆ ｖ ｒ ｅｌ Ｒａｓ ｏ ｈ ｎ ｒａ ｎ Ｍ ｃ ｏ ｏ ｏ Ｌｉｅ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｔ