3种方法测定大鼠肝微粒体蛋白含量的比较
蛋白质含量测定方法及其比较资料2
蛋白质含量测定法（一）蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。
目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩脲法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。
另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。
其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比B iuret法灵敏100倍以上。
定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
五种蛋白质测定方法比较方法灵敏度时间原理干扰物质说明凯氏定氮法（Kjedahl法）灵敏度低，适用于0.2~1.0mg氮，误差为±2％费时8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩脲法（Biuret法）灵敏度低1～20mg中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法较为灵敏50～100μg 快速5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高≈5μg慢速40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高1～5μg快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其λmax由465nm变为强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同595nm 蛋白质变化值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。
生化综合实验报告--测定蛋白质含量的三种方法及其比较
原理：白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（O.D280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
3．实验设备及材料
（1）双缩脲法
实验器材：
①容量瓶②试管、试管架
③恒温水浴槽④吸量管
⑤分光光度计⑥电热套
⑦锥形瓶⑧比色皿
实验试剂：
一．实பைடு நூலகம்设计方案
③蛋白质样品或蛋白质样品溶液。
(2)考马斯亮蓝染色法
试剂:
①考马斯亮蓝试剂:考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中，加入100ml 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 ml。
②标准蛋白质溶液:牛血清蛋白或卵其清白蛋白等，预先测定其蛋白纯度，再根据纯度用蒸馏水或0.9％NaCl准确配制。
1．实验目的：
⑴掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和方法。
⑵掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法。
⑶掌握紫外吸收法定量测定蛋白质含量的原理和方法。
⑷比较三种定量测定方法的异同。
2．实验原理、实验流程或装置示意图
（1）双缩脲法(Biuret法)测定蛋白质浓度
原理：在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与Cu2+作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。具有两个或两个以上肽键的化合物都有双缩脲反应，因此蛋白质在碱性溶液中，也能与Cu2+形成紫红色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用比色法测定蛋白质的浓度。
考马斯亮蓝染色法
标准曲线的制作
1取12支试管，按下表加入试剂
2混匀，室温静置３min，以第１管为空白，于波长595nm处比色，测定OD值，
大鼠肝微粒体法评价20种中药有效成分对CYP2C9酶的作用
大鼠肝微粒体法评价20种中药有效成分对CYP2C9酶的作用张远冬1，刘学庆1，郭延垒2，张有金2，石亮2，王二豪2，于超 2（400016重庆，重庆医科大学：公共卫生学院生殖生物学研究室1，生命科学研究院2）[摘要]目的建立体外大鼠肝微粒体中CYP2C9酶活性测定方法，并以此方法评价20种中药有效成分单体对大鼠CYP2C9酶的作用。
方法以双氯芬酸（Diclofenac）为探针，在实验组大鼠肝微粒体孵育体系中加入20种中药有效成分单体，在37 ℃水浴温孵15 min后冰乙腈终止反应，HPLC测定各孵育体系中探针药物的代谢产物4＇-羟基双氯芬酸的转化率，并与对照组比较其差异来评价各有效成分对CYP2C9酶活性的作用。
结果4＇-羟基双氯芬酸、双氯芬酸及其内标香豆素三者分离良好且无其他内源性物质干扰；动力学考察表明双氯芬酸在0.25 mg/mL的大鼠肝微粒体体系中孵育15 min，测得酶动力学参数V max为0.1456 nmol/(min·mg)，K m为8.270 μmol/L；抑制实验考察发现：黄芩素、蛇床子素、大黄素、獐牙菜苦苷、淫羊藿苷、白藜芦醇实验组中4＇-羟基双氯芬酸转化率分别为（402.60±10.58）、（210.90±10.26）、（414.46±10.32）、（509.83±26.45）、（355.44±15.87）、（387.34±22.16）pmol/(min·mg)，显著低于对照组[（735.80±17.27）pmol/(min·mg)，P＜0.05]，其他中药成分实验组与对照组比较，其转化率无统计学差异。
结论建立了中药有效成分对CYP2C9酶作用的体外大鼠肝微粒体研究方法，并初步评价了黄芩素、蛇床子素、大黄素、獐牙菜苦苷、淫羊藿苷、白藜芦醇对CYP2C9具有抑制作用，在临床联合用药中需注意其可能引起的药物-药物相互作用。
最新[医学]Western blot法检测大鼠肝组织清蛋白的表达实验-药学医学精品资料
![最新[医学]Western blot法检测大鼠肝组织清蛋白的表达实验-药学医学精品资料](https://img.taocdn.com/s3/m/3d63b0c4b0717fd5370cdc06.png)
蛋白含量的测定及上样量的计算 考马斯亮蓝法（Bradford法）
H+
考马斯亮蓝G-250 + 蛋白质
蓝色
595nm
14
操作：
蒸馏水(ml)
空白管 标准管 测定管 0.05
标准蛋白液(ml)
0.05
样品(ml)
(适当稀释)
显色剂(ml)
(5倍稀释)
0.05 3.0 3.0 3.0
混匀，静置10min，于595nm处，以空白管 调零，测定各管吸光度
25
凝胶成分：
丙烯酰胺和N,N’-甲叉双丙烯酰胺 3M Tris缓冲液(pH=8.8) 2M Tris缓冲液(pH=6.8) N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED) 10%过硫酸铵(APS) 10%SDS ddH2O
26
装置：
27
SDS-PAGE电泳操作：
① 安装制胶装置，检查是否漏水 ② 配制10％分离胶（灌胶约2/3体积），蒸馏水液封 ③ 胶凝后倾去蒸馏水 ④ 配制4％堆积胶，灌满，插入梳子 ⑤ 胶凝后拔出梳子
40
▪ DAB显色操作：
按试剂盒说明配制显色剂
（按照1ml双蒸水中滴加A、B、C液各一滴的比例）
将NC膜置于配制好的显色液中
室温条件下显色约15分钟
（视显色的情况而定）
蒸馏水洗膜，并可进行结果的分析 41
结果分析
根据结合于膜上的预染Marker确定目的条带 可根据条带光密度扫描积分值进行定量分析 42
PP间期：并不绝对匀齐，但PP间期的互差<0.12 秒。
心房频率：60～100次/分。小儿不超过正常相应 年龄组心率95％或不低于正常相应年龄组的5％。
窦性心动过缓诊断要点
大鼠肝微粒体的制备教学文稿
2.1.3 大鼠肝微粒体的制备大鼠肝微粒体制备全过程：1．购买实验动物SD 大鼠，20 只，雌雄各半，体重（180-220）g，广州中医药大学实验动物中心提供。
合格证号：00557062．大鼠肝脏灌流购买的大鼠当天腹腔注射3%戊巴比妥钠（30 mg·kg-1 ），使其麻醉，利用酒精进行常规消毒后，打开腹腔暴露肝脏，肝门静脉处进行插管并固定。
结扎上腔静脉，剪破下腔静脉用磷酸盐缓冲液进行灌流，直至肝脏颜色呈土黄色。
3．灌流好的肝脏取出后按1：4 比例放入装有磷酸盐缓冲液（含1mMEDTA ,0.25M 蔗糖）的匀浆管内，剪碎，匀浆。
4．将匀浆液倒入50mL 高速离心管中在4℃条件下9000g 离心20 min。
5．保留上清并转移到超速离心管中，在4℃条件下100000g 离心60min。
6．保留沉淀并重新混悬于磷酸盐缓冲液（含0.9%的NaCL）中, 4℃条件下100000g 再离心60 min，得到的沉淀即为肝微粒体。
7．将肝微粒体重悬于0.1M 磷酸缓冲液（PH7.4，20%甘油，1mM EDTA，0.25M 蔗糖）中于-70℃冰箱保存，其中留取一小管用于蛋白浓度测定。
8．微粒体蛋白浓度测定依据的是Lowry et. al.方法(Lowry et al.,1951)，首先用牛血清白蛋白标准溶液配置成不同浓度的蛋白标准溶液，与斐林试剂混匀发生反应后测定蛋白浓度，根据吸光度A 和蛋白浓度C 进行线性回归并绘制标准曲线。
同样的方法测定肝微粒体的吸光度，根据标准曲线线性回归方程计算肝微粒体蛋白浓度。
9．肝微粒体中P450 酶含量测定根据Omura and Sato 的方法(Omura and Sato,1964)，用Tris-HCl 缓冲液把肝微粒体样品稀释至0.3−0.5 mg/mL，取两份肝微粒体分别放于参比池和样品池，400 nm～500 nm 扫描基线；参比池和样品池都加入少量Na2S2O4，轻微搅拌，并给样品池通CO 气体30 s，再次扫描，记录450 nm 和490 nm 处的吸光度，按Beer 定律（公式2.1）计算CYP450 的含量。
大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究
大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究朱曼;王睿;张永青;梁蓓蓓【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2004(9)5【摘要】目的 :建立大鼠肝微粒体蛋白含量以及肝微粒体细胞色素P4 5 0酶系含量与活性测定的紫外和荧光分光光度方法。
方法 :应用差速离心法提取大鼠肝微粒体 ,Lowery法测定肝微粒体蛋白浓度 ,应用紫外和荧光分光光度法测定肝微粒体细胞色素P4 5 0酶系含量及活性。
结果 :牛血清白蛋白标准曲线的线性范围为 2 5～2 5 0mg·L-1,最低检测限为2 5mg·L-1,相关系数r为 0 .9975 ;紫外分光光度法测定细胞色素P4 5 0和细胞色素b5含量及NADPH CytC还原酶活性的结果显示方法灵敏 ;测定氨基比林N 脱甲基酶、红霉素N 脱甲基酶活性的甲醛标准曲线 ,线性范围为 0 .0 5～0 .5mmol·L-1,最低检测限为0 .0 5mmol·L-1,相关系数r为0 .9988;测定 7 乙氧基香豆素脱烃酶活性的resorufin标准曲线线性范围为 1～8μmol·L-1,最低检测限为1μmol·L-1,相关系数r为 0 .9998。
结论 :紫外和荧光分光光度方法测定大鼠肝微粒体细胞色素P4 5 0酶系中 6种酶的含量及活性的灵敏可靠 ,重复性较好。
【总页数】4页(P500-503)【关键词】紫外分光光度计;荧光分光光度计;肝微粒体细胞色素P450【作者】朱曼;王睿;张永青;梁蓓蓓【作者单位】解放军总医院临床药理药学研究室【正文语种】中文【中图分类】R965.2【相关文献】1.联合诱导法对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 汪希兰;谢金才;王翠芬;2.氟喹诺酮类药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 张沂;于春令;邸秀珍;赵猛;米媛媛3.甲磺酸加替沙星对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 张沂;邸秀珍;任婷麟;王大鹏4.联合诱导法对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 汪希兰;谢金才;王翠芬5.凹土玉米芯垫料对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 [J], 舒畅;张延英;吴建军;陶维天;蔺兴遥;朱建坤;康万荣;李存祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠肝微粒体孵育体系中2种成分的测定及其代谢
大鼠肝微粒体孵育体系中2种成分的测定及其代谢邓少东;王颖;赵文昌;肖凤霞;林靖然;段倩倩【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2017(039)005【摘要】目的测定大鼠肝微粒体孵育体系中2种成分的含有量,并考察其在不同时间点(0、20、40、60、80、100、120 min)的代谢情况.方法 UPLC分析采用Waters BEH C1s色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.7 μm);流动相甲醇-0.1％醋酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;检测波长338 nm.结果野漆树苷和芹菜素分别在3.714 ～37.143μg/mL(r=0.999 0)和3.729～37.286 μg/mL(r=0.999 6)范围内线性关系良好,方法回收率(RSD)分别为89.44％～ 93.75％ (0.78％～1.59％)和88.06％～93.98％ (0.91％～2.14％).两者在体外肝微粒体孵育体系的Ⅰ相代谢均呈线性消除,其中芹菜素更为显著.结论该方法简单、快速、可靠,可用于测定大鼠肝微粒体孵育体系中野漆树苷和芹菜素的含有量和代谢情况.【总页数】4页(P1002-1005)【作者】邓少东;王颖;赵文昌;肖凤霞;林靖然;段倩倩【作者单位】广东医科大学第二临床医学院科研平台,广东东莞523808;广东医科大学第二临床医学院科研平台,广东东莞523808;广东医科大学药学院,广东东莞523808;广州中医药大学中药学院,广东广州510006;广州中医药大学中药学院,广东广州510006;广州中医药大学中药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.三物黄芩汤组分(群)配伍在大鼠肝微粒体孵育模型中的相互作用 [J], 周杰;商雪莹;杜慧琴;卢丽萍;张蕾2.LC-MS/MS定量测定大鼠和人肝微粒体孵育液中丁苯酞浓度方法的建立 [J], 赵芊;李燕;江骥;胡蓓3.大黄5种蒽醌类成分在大鼠肝微粒体中的代谢及酶促反应动力学 [J], 冯素香;王蒙蒙;吴兆宇;李先;郝蕊;徐艳华4.肝微粒体孵育体系中大黄酸及其代谢活化产物的检测方法研究 [J], 李恩泽;袁媛;邵华5.东莨菪内酯在大鼠肝微粒体孵育体系中的代谢产物分析及其含药血清对大鼠肝星状细胞的影响 [J], 杨增艳; 张颖; 李嘉; 陈少锋; 黄鑫; 靳洪涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
注射用苯巴比妥钠
小鼠肌内注射苯巴比妥钠引起局部皮肤改变的护理对比观察摘要：观察肌内注射苯巴比妥钠引起小鼠局部皮肤改变的疗效与护理。
方法：将小鼠随机分为两组，对照组采用50% 的硫酸镁湿热敷；观察组肌内注射苯巴比妥钠，当发现局部皮肤有改变时，用统计学处理疗效对照得出结论。
关键词：苯巴比妥钠；局部皮肤改变；护理苯巴比妥钠是一种镇静催眠抗惊厥药物。
临床上，常用苯巴比妥钠治疗新生儿脑病、新生儿颅内出血、新生儿高胆红素血症等疾病，以防治惊厥的发生，降低耗氧，保护脑细胞。
在使用苯巴比妥钠特别是首次使用时，常采用肌内注射，以尽快达到治疗目的。
而新生儿皮肤娇嫩，脂肪组织比肌肉组织多，体温调节中枢发育不完善，皮肤温度易受外界温度影响。
如果注射过浅，药物在脂肪层内，不但药物吸收差，还会引起注射部位局部皮肤改变。
如处理得当、及时，可以防止发生坏死。
一、苯巴比妥钠目前的主要研究方向目前常见的苯巴比妥钠研究多为对新生儿脑的影响与保护或对惊厥的影响、对肝的微粒酶影响。
张素培研究了苯巴比妥干预对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护及对脑组织中的影响，并对苯巴比妥的脑损伤保护作用机制进行了初步探讨。
凡守金等人通过研究通过腹腔注射苯巴比妥钠溶液建立惊厥保护模型，检测腹腔注射硝酸士的宁后，苯巴比妥钠的保护作用是否存在，以探讨苯巴比妥钠保护作用的调控机制，为临床对抗药物惊厥提供有效实用的药物，并为苯巴比妥钠保护士的宁所致惊厥提供了理论和实验基础。
高梅等人通过用苯巴比妥钠比较4种方法诱导制备的大鼠肝微粒体酶(S9)的蛋白含量及活化效果，来探讨有效的肝微粒体酶诱导方法。
得出以多氯联苯、苯巴比妥联合β-萘黄酮、注射用苯巴比妥钠联合β-萘黄酮作为诱导剂可以成功制备大鼠肝S9，并具有较好的活性，联合诱导法可替代多氯联苯诱导法。
二、小鼠肌内注射苯巴比妥钠的反应研究。
测量蛋白质含量的方法
测量蛋白质含量的方法
一、测量蛋白质含量的方法
1、溶解液稀释法
溶解液稀释法是指在特定的pH和特定浓度的溶解液中，将待测样品稀释至一定浓度，然后通过测定溶解液的比容量或浊度来估算样品中蛋白质的含量。
2、硫代乙酰胆碱法
硫代乙酰胆碱法是指用硫代乙酰胆碱作为蛋白质染料，通过蛋白质染色的深度来估算样品中蛋白质的含量。
此方法也可以用于检测双肽类和多肽类蛋白质。
3、 Lowry比容量法
Lowry比容量法是使用Lowry比容量试剂检测样品中蛋白质的含量，其原理是将蛋白质在碱性溶液中溶解，然后用Lowry比容量试剂滴定，通过滴定值来估算样品中蛋白质的含量。
4、Bradford表观比容量法
Bradford表观比容量法是使用Bradford表观比容量试剂检测样品中蛋白质的含量，其原理是将蛋白质在碱性溶液中溶解，然后用Bradford表观比容量试剂滴定，通过滴定值来估算样品中蛋白质的含量。
5、BCA酶法
BCA酶法是利用蛋白质被BCA酶分解的过程，将BCA酶与待测样品混合，通过分光光度计法测定BCA酶催化后溶液的分光度值，
从而估算样品中蛋白质的含量。
western blot 法检测大鼠肝组织血清蛋白的表达变化
Western-blot一、实验目的1、用于目的蛋白的表达特性分析2、目的蛋白与其他蛋白的相互作用二、实验原理在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测的一项技术。
与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
Western Blot显色的方法主要有以下几种：i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。
只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
三、实验器材及试剂1、器材：（1）可调移液器P1000、P200和P20，经消毒的相应的盒装吸头（2）经消毒的1.5ml Eppendorf管、试管架及水浴锅用试管架（3）定时器，记号笔，一次性口罩和筒纸（4）于冷室中预冷的1.4万转台式离心机（5）PH试纸（6）分光光度仪，石英比色杯（7）烧杯，量筒，棕色试剂瓶（8）0.45um滤纸2、主要试剂(1)一抗：小鼠抗大鼠多克隆抗体（清蛋白，分子量66kD）(2)二抗：羊抗小鼠IgG-HRP(3)定蛋白试剂盒：南京建成生物工程研究所。
非那西丁体外温孵实验
HPLC
四、建立标准曲线与测定非那西丁体外温 孵液代谢速率。
建立对乙酰氨基酚标准曲线
取对乙酰氨基酚储备液，已含有失活微粒体的 甲醇水溶液( 1∶ 1) 稀释成0. 2，1，2，5，10， 20 μmol/L 的系列标准微粒体样品，分别加入 等体积的内标( 10 μmol/L间乙酰氨基酚) ，取 20 μL 按照色谱条件进行HPLC 分析，测定对 乙酰氨基酚含量。
以对乙酰氨基酚与内标峰面积比值( Y) 为纵坐 标，对乙酰氨基酚浓度( X，μmol/L ) 为横坐标， 绘制标准曲线。
数据处理
记录HPLC中对乙酰氨基酚和间乙酰氨基酚的 峰面积，通过标准曲线计算出产物中对乙酰氨 基酚浓度，以非那西丁浓度与对乙酰氨基酚的 生成速率绘制曲线。
通过米氏方程V=Vmax· [S]/(Km+[S])，采用双 倒数作图法，计算大鼠肝微粒体中非那西丁脱 乙基化反应的Vmax和Km。
实验过程
2.重悬沉淀 将沉淀物悬浮于含20%甘油的磷酸钾缓冲 液中（1g组织加入1ml含20%甘油的磷酸 钾缓冲液），反复在冰水浴中吹打均匀， 冻存管分装后置-80℃冰箱内保存待用。 3.蛋白定量 采用BCA法测定肝微粒体蛋白浓度。
实验过程
二、温孵实验。
肝微粒体（0.2mg/mL,80μL），非那西丁溶液 （5，7. 5，10，15，20，25，30，40，60，80， 100μmol/L ）,100 mmol/L 磷酸钾缓冲（pH7.4） 37℃水浴预温孵5min。 加入NADPH体系溶液（10 mmol/L 葡糖－ 6 － 磷酸、1 U· m/L 葡糖－ 6 － 磷酸脱氢酶， 4mmol/L氯化镁，启动剂，40μL），在37℃水浴 温孵30min后， 加入冰甲醇（终止试剂， 100μL），终止温孵。
蛋白质含量测定方法研究
蛋白质含量测定方法研究蛋白质含量测定方法研究引言：蛋白质是生物体中起着重要功能的一类生物大分子，广泛存在于细胞、组织和各种生物液体中。
蛋白质的含量测定对于生物学、医学、农学等领域的研究具有重要意义。
目前，常用的蛋白质含量测定方法包括比色法、光谱法、浊度法等。
本文将对这几种方法进行详细介绍和分析。
一、比色法比色法是一种常用的蛋白质含量测定方法。
其基本原理是利用蛋白质与某些化学试剂形成复合物，产生颜色，并通过比色计测定复合物的吸光度，进而确定蛋白质的含量。
常用的比色试剂有布拉德福德试剂、比西酮试剂等。
比色法简单易行，灵敏度高，测定结果准确可靠，被广泛应用于各种实验室及工业生产中。
二、光谱法光谱法是利用蛋白质溶液在一定波长范围内的吸光特性，通过测定吸光度的变化来确定蛋白质的含量。
常用的光谱测定方法有紫外吸收光谱法和荧光光谱法。
紫外吸收光谱法是基于蛋白质中的芳香性氨基酸分子具有较高的吸收特性。
荧光光谱法则是利用蛋白质在特定激发波长下，发生荧光自发射，通过测定荧光强度来确定蛋白质的含量。
光谱法无需标定试剂，操作简便，灵敏度高，但对于特定结构的蛋白质，其吸光特性可能受到其他分子的影响。
三、浑浊度法浑浊度法是基于蛋白质在酸或碱条件下溶解度发生变化的原理，通过测定溶液的浑浊度来确定蛋白质含量。
在测定过程中，常使用专用的浑浊度计或离心计来测定样品的浑浊度。
浑浊度法操作简单，无需复杂的仪器设备，而且结果与实际含量相符度较高。
但由于浑浊度法测定的是蛋白质的总含量，因此无法区分出各个蛋白质组分的含量。
四、测定方法的选择根据实验目的、样品特点和可用设备等因素，选择合适的蛋白质含量测定方法是十分重要的。
如果样品含有多种蛋白质组分且需要快速测定总含量，可以选择比色法或浑浊度法。
如果需要对特定蛋白质组分进行定量分析，光谱法可能更为合适。
同时，比色法和光谱法需要标定试剂，因此在实验中应注意选择合适的标定试剂和标准曲线。
结论：蛋白质含量测定是生物学、医学等领域研究的重要内容。
测量蛋白质含量的方法
测量蛋白质含量的方法
测量蛋白质含量的常用方法有以下几种：
1. 线性尺度（光密度法）：使用紫外光谱仪或近红外光谱仪测量蛋白质溶液在特定波长下的吸光度，根据吸光度与蛋白质浓度之间的线性关系来计算蛋白质含量。
2. 琼脂糖凝胶电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶孔中，通过电场作用使蛋白质迁移，根据迁移距离和蛋白质标准品的迁移距离进行比较，计算蛋白质含量。
3. BC Assay：利用蛋白质与染料（如Bradford染料）的结合来测量蛋白质含量，通过比色法将标准蛋白质溶液和待测蛋白质溶液的吸光度进行比较，计算蛋白质含量。
4. BCA Assay：利用蛋白质与染料（如BCA染料）的还原反应来测量蛋白质含量，通过比色法将标准蛋白质溶液和待测蛋白质溶液的吸光度进行比较，计算蛋白质含量。
5. 钛试剂法：利用蛋白质中的酪氨酸与钛试剂在酸性条件下发生反应生成紫色络合物，通过比色法测量络合物的吸光度来计算蛋白质含量。
以上方法各有优缺点，选择适合的方法需要根据实验目的、样品特性和实验条件等因素综合考虑。
实验五.大鼠肝S9的制备和蛋白含量测定
院系：理学院专业：农药学学号：0931******* 姓名：王熠大鼠肝S9的制备和蛋白含量测定1 实验目的学会大鼠肝S9的制备及其蛋白含量的测定。
2 实验材料与方法2.1实验动物大鼠：健康、雄性、成年，SD或Wistar ，5~6 周龄，150g左右2.2试剂1.17% （0.15M） KCl、苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、多氯联苯、β-萘黄酮Tris-HCl缓冲液：6.05g Tris加约800ml蒸馏水溶解，用HCl溶液调pH值至7.4，最后用蒸馏水定容至1000ml2.3器材低温高速离心机、洁净工作台、匀浆器、注射器、手术剪、低温冰箱、液氮罐等2.4 实验操作2.4.1试剂的配制（1）Tris-HCl缓冲液：6.05g Tris加约80ml蒸馏水溶解，用HCl溶液调pH值至7.4，最后用蒸馏水定容至1000ml（2）考马斯亮兰G-250染料：称100mg考马斯亮兰G-250，溶于50ml 95％的乙醇后，再加入120ml 85％的磷酸，用蒸馏水稀释至1升，滤纸过滤。
2.4.2肝S9的制备（1）诱导苯巴比妥钠80mg/kg，腹腔注射，连续3～5d，最后一次给药后24h后采样。
（2）采样采样前禁食24h，但可以自由饮水；断头处死；无菌取出肝脏，置平皿中称重，用预冷的0.15M KCl溶液淋洗数次，以便除去能抑制微粒体酶活性的血红蛋白。
（3）肝匀浆的制备弃去淋洗液，将肝脏转入小烧杯，加 Tris-HCl缓冲液溶液3mL/g （肝湿重），转入冰浴，用剪刀剪碎肝脏，转入匀浆器匀浆。
（4）制备S9 将肝匀浆于低温高速离心机0～4℃ 000g 离心 10min上清液即为S9。
（5）分装保存将制备好的S9于无菌冷冻管或安瓿中保存，每个安瓿2mL左右。
于液氮速冻后置-80℃低温保存。
深低温或冰冻干燥，保存期不超过一年。
2.5蛋白含量测定（考马斯亮兰染色法）2.5.1测定原理考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质（主要是碱性氨基酸，特别是精氨酸和芳香族氨基酸残基）结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm 变为595nm ，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。
大鼠肝微粒体法测定3种中药对CYP3A4亚型的作用
大鼠肝微粒体法测定3种中药对CYP3A4亚型的作用刘艳;王海霞;黄丽军;张一飞;徐静;田玮【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2011(30)3【摘要】目的建立肝微粒体测定法,观察中药制剂对CYP3A4 亚型的作用.方法取大鼠肝脏,制备肝微粒体,分别优化肝微粒体体外温孵系统的反应时间、蛋白浓度及探针药物咪达唑仑的浓度;高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS-MS)法测定大鼠肝微粒体中咪达唑仑的浓度,计算咪达唑仑的活性;在肝微粒体体外温孵系统中分别加入不同浓度的血脂康胶囊、通心络胶囊、枣仁安神胶囊内容物及对照药物酮康唑,测定其半数抑制浓度(IC50)及抑制常数(Ki).结果肝微粒体体外温孵系统的反应条件为0.4 g·L-1大鼠肝微粒体,4 μmol·L-1咪达唑仑溶液,37 ℃温育5 min.酮康唑、血脂康胶囊、通心络胶囊的IC50分别为(3.4±0.2),(25.1±0.3),(56.2±0.3) mg·L-1,枣仁安神胶囊的IC50﹥150 mg·L-1;酮康唑、血脂康胶囊、通心络胶囊的Ki分别为(1.7±0.1),(25.0±0.2),(50.0±0.3) mg·L-1.结论建立了中药制剂对CYP3A4亚型作用的大鼠肝微粒体研究模型.血脂康胶囊和通心络胶囊对大鼠CYP3A4亚型有较弱的抑制作用.%Objective To investigate the influence of traditional Chinese medicine preparations on rat liver CYP 3A4 activity in vitro. Methods The rat liver microsomes were prepared from rat livers. The reaction time, protein content and midazolam concentration in the microsomal incubation was optimalized respectively ; the metabolism of midazolam and activity were measured by HPLC-MS-MS;IC50 and Ki of ketoconazole , xuezhikang ,tongxinluo and zaoren ansheng capsule in microsomalincubated system were determined after incubation with the midazolam ( CYP3A4 ). Results The optimum protein content of rat liver microsomes for kinetic analysis was 0.4 g·L-1 with 4 [junol· L midazolam at 37 ℃ for incubation up to 5 min. The IC50 of ketoconazole, xuezhikang and tongxinluo was (3.4±0.2) ,(25.l±0.3) , (56.2±0.3) mg» L ,respectively,but t he IC50 of zaoren ansheng capsule was greater than 150 mg · L ; The Ki of ketoconazole, xuezhikang and tongxinluo was ( 1.7 ±0.1) , (25.0 ±0.2),(50.0 ±0.3) mg · L , respectively. Conclusion The model of liver microsomes for evaluation of the influence of traditional Chinese medicine preparations on CYP 3A4 activity is established. xuezhikang and tongxinluo have weak inhibitory effect on rat CYP3A4 in vitro.【总页数】5页(P285-289)【作者】刘艳;王海霞;黄丽军;张一飞;徐静;田玮【作者单位】哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所/黑龙江省高校重点实验室,150086;哈尔滨医科大学实验动物中心,150086;哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所/黑龙江省高校重点实验室,150086;哈尔滨医科大学附属第二医院药学部,150086;哈尔滨医科大学附属第二医院药学部,150086;辽宁济康医药有限公司,沈阳,110015【正文语种】中文【中图分类】R286;R285.5【相关文献】1.丹参注射液对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶体外抑制作用 [J], 叶娜;罗红丽;李容;王春燕;杨楸楠;万丽2.探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用 [J], 郑造乾;骆瑾瑜;陈燕华;王小军3.褪黑素对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4活性的影响 [J], 刘明远;杨光远;王跃新;张春斌;白雪;张建华4.消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂对人肝微粒体中CYP450酶7种亚型的体外抑制作用研究 [J], 刘丽雅;韩永龙;余奇;朱金辉;郭澄5.乙酰肼对大鼠肝微粒体细胞色素P450及亚型的作用 [J], 朱大岭;孟宪清;李玉兰;高颖;房德元;宋春方;许评;许军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
联合诱导法制备大鼠肝S9及蛋白含量的测定
联合诱导法制备大鼠肝S9及蛋白含量的测定摘要】目的测定联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的大鼠肝S9的蛋白含量并对这两种方法进行比较。
方法采用苯巴比妥与β—萘黄酮合并诱导所获S9作为诱导剂制备大鼠肝S9,并采用Bradford法测定所制备的S9蛋白含量。
结果成功制得大鼠肝S9,并测定其蛋白含量为26.73 mg/ml。
结论联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。
【关键词】联合诱导法 S9制备蛋白含量测定Preparation of rat liver S9 by combination inducing method and determination of protein in the prepared S9Yu Dawei, Houyandong*,(Gansu Provincial Center for Disease Control ＆ Prevention, Lanzhou 730000)【ABSTRACT】 Objective: To determine the content of protein in rat liver S9 prepared by combination inducing method and PCB inducing method and compare the two methods. Methods: Rat liver S9 was prepared using S9 obtained by combination inducing method with phenobarbital and β-naphthoflavone as the inducer and the content of protein in the prepared S9 was determined by Bradford method. Results: Rat liver S9 was successfully prepared and the protein content was 26.73 mg/ml. Conclusion: Combination inducing method may supersede PCB inducing method for preparation of liver homogenate S9.【Key words】 combination inducing method S9 preparation protein determination 多氯联苯(Polychlorinated biphenyls , PCBs)是一种极其稳定的致癌剂，目前环境中所存在的10亿多磅多氯联苯已引起人们的关注。
肝脏蛋白的提取和浓度测定.2013
结合具有高敏感性，考马斯亮兰G-250的最大光吸收峰
在 465nm ，当它与蛋白质结合形成复合物时，其最大 吸收峰改变为 595nm。在 595nm下，光密度与蛋白质
含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定。
实验步骤
1. 取试管7支，编号，按下表加入试剂:ห้องสมุดไป่ตู้
试剂(ml)
空白管 管号 0 1 标准管 2 3 4 5 测定管 6
肝脏蛋白的提取 和浓度测定
医学基础实验室
了解并掌握 蛋白质的提 取方法
了解掌握考 马斯亮蓝法 （Braford法） 测定蛋白质 含量的原理 和方法
实验目的
实验内容
◆肝脏组织蛋白 的提取 ◆蛋白的浓度测 定
1.肝脏组织的提取
原理：
RIPA裂解液是一种传统的细胞组 织快速裂解液，主要裂解成分含1% Triton X-100, 0.5% 胆氧胆酸钠 （sodium deoxycholate）, 0.1% SDS， 得到的蛋白样品可以用于常规的 Western。
1.肝脏组织的提取
组织取材 超声匀浆
操作 步骤
冰上放置 4度离心 吸取上清
1.肝脏组织的提取 （1）组织取材：
左旋氧氟沙星对大鼠肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响
左旋氧氟沙星对大鼠肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响张沂;鲍燕燕;王洪武;王大鹏【期刊名称】《海军总医院学报》【年(卷),期】2004(017)001【摘要】目的研究和比较不同剂量左旋氧氟沙星对大鼠肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量的影响.方法将大鼠分成空白对照组和给药组.采用连续给予不同剂量左旋氧氟沙星后,测定大鼠的肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量.给药方案为每组80 mg/kg、160 mg/kg、240 mg/kg,腹腔注射给药1/d,连续给药7 d.结果给予不同剂量的左旋氧氟沙星后,大鼠的肝重及细胞色素P450含量均明显降低,中剂量组及高剂量组分别与对照组及低剂量组比较有极显著性差异(P＜0.01).微粒体蛋白质含量各组间比较无差异(P＞0.05).结论左旋氧氟沙星的这种作用可能引起肝药酶对某些药物代谢的改变.【总页数】3页(P6-8)【作者】张沂;鲍燕燕;王洪武;王大鹏【作者单位】海军总医院药剂科,北京,100037;海军总医院药剂科,北京,100037;海军总医院药剂科,北京,100037;海军总医院药剂科,北京,100037【正文语种】中文【中图分类】R961【相关文献】1.左旋氧氟沙星对大鼠肝重肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响 [J], 张沂;翟淮敏;鲍燕燕;王洪武;王大鹏2.细胞色素P450诱导剂对大鼠肝微粒体内HP450的影响 [J], 杨秀芬;王乃平3.雷诺嗪对大鼠肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响 [J], 叶亚琳;张贞良;曹洋;金星4.大鼠肝微粒体细胞色素b5对细胞色素P450在体温调节中作用影响的探讨 [J], 狄军艳;冯甲棣;张玉霞;王常慧5.反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷对大鼠肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响[J], 李雪;宋卉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠肝微粒体中葛根素的液相色谱-质谱测定法及药物代谢动力学
大鼠肝微粒体中葛根素的液相色谱-质谱测定法及药物代谢动力学崔升淼;赵春顺;高坤;毛晶晶;何仲贵【期刊名称】《沈阳药科大学学报》【年(卷),期】2007(24)1【摘要】目的建立大鼠肝微粒体中葛根素及其代谢物的液相色谱一质谱测定法。
并研究葛根素在大鼠肝微粒体中的药物代谢动力学。
方法色谱柱为Waters C18柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（体积比为50：50），通过电喷雾电离源（ESI），以正离子方式进行检测。
结果方法的回收率为95．6％～96．8％。
其日内、日间的RSD分别为4．9％～7．6％和3．7％～6．2％，葛根素的质量浓度在0．5～20mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系。
在温孵时间0-40min内、微粒体蛋白质量浓度在0．5～2．0g·L^-1内，葛根素呈线性消除，随着肝微粒体蛋白质量浓度的增大，葛根素呈线性消除。
葛根素可被肝微粒体代谢成大豆苷元。
其代谢机理为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）依赖性的氧化代谢。
还原型烟酰胺二核苷酸（NADH）对葛根素代谢基本没有催化作用。
结论葛根素在大鼠肝微粒体内被迅速代谢，大鼠肝微粒体P450酶参与了葛根素的代谢。
【总页数】5页(P32-36)【关键词】葛根素;液相色谱-质谱联用法;肝微粒体;代谢;药物代谢动力学【作者】崔升淼;赵春顺;高坤;毛晶晶;何仲贵【作者单位】广东药学院中药系;中山大学药学院;沈阳药科大学药学院【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R917【相关文献】1.高效液相色谱和液相色谱-电喷雾质谱联用法鉴定辛硫磷在鲫鱼肝微粒体中代谢产物及途径 [J], 刘荣飞;刘幸;刘晓宇;范雯婷;赵冬冬;石旺荣;朱雨田;李宏2.液相色谱-质谱联用法测定人混合肝微粒体中去甲右美沙芬浓度 [J], 郑艳;吴东方3.CBN中葛根素、人参皂苷Rg1的高效液相色谱测定法及其在脑缺血再灌大鼠体内的药代动力学 [J], 卢弘;邢东明;孙立红;杜力军4.基于液相色谱-质谱联用的肝微粒体中药物代谢酶定量方法研究进展 [J], 王欢欢;吕雅瑶;彭博;钱小红;张养军5.超高效液相色谱-高分辨质谱分析大鼠肝微粒体中厚朴酚与和厚朴酚的体外代谢[J], 黄彧;刘春明;吴桐;王乐奇;侯万超;李赛男因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
万方数据
万方数据
万方数据
万方数据
3种方法测定大鼠肝微粒体蛋白含量的比较
作者：简暾昱， 徐帆， 廖春龙， 徐贵丽， Jian Tunyu， Xu Fan， Liao Chunlong， Xu Guili 作者单位：简暾昱,Jian Tunyu(昆明医学院成都军区昆明总医院第一临床学院,昆明,650032)， 徐帆,徐贵丽,Xu Fan,Xu Guili(成都军区昆明总医院)， 廖春龙,Liao Chunlong(大理学院)
刊名：
中国药师
英文刊名：CHINA PHARMACIST
年，卷(期)：2011,14(3)
1.金科涛;王宇光;徐彭HPLC测定大鼠肝微粒体P450活性方法学研究进展[期刊论文]-药物分析杂志 2006(03)
2.孙忠实;朱珠药物代谢性相互作用研究进展 2000(01)
3.李海玲;彭书明;李凛4种常用蛋白浓度测定方法的比较[期刊论文]-中国生化药物杂志 2008(04)
4.许家喜蛋白质的检测方法与乳制晶中蛋白含量测定[期刊论文]-大学化学 2009(01)
5.Cinti DL;Moldeua P;Schenkman JB Kinetic parametera of drug-metabolizing enzymes in Ca2+-sedimented microsomea from rat liver[外文期刊] 1972(24)
1.LI Hai-ling.彭书明.LI Lin.张雪梅.LI Hai-ling.PENG Shu-ming.LI Lin.ZHANG Xue-mei4种常用蛋白浓度测定方法的比较[期刊论文]-中国生化药物杂志2008,29(4)
本文链接：/Periodical_zgys201103012.aspx。