薄层色谱参数比移值

li ls
/ l0 / l0
li ls
(3）特点
消除系统误差， 值的重复性和可靠性都比 好
Rr
Rf
3．分离度
（1)定义 衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是 指相邻两斑点中心至原点的距离之差与 两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑 点沿着展开方向的宽度）的比值
(2）计算方法
R l2 l1 2(l2 l1 ) (W1 W2 ) / 2 W1 W2
毛细管或微量注射器吸取溶液，点于点样基线上，溶液宜分 次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或经温热气 流吹干，点样直径为2 mm～4mm，点样量取决于色谱滤纸的 薄厚程度和显色剂的灵敏度，一般几到几十微克。点间距离 约为1.5cm～2.0cm，样点通常为圆形，也可点成条形。
3．展开
纸色谱下行展开
金属箔
要求 表面光滑、平整清洁
玻板处理措施 清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用 蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用
定量毛细管
手动
3．点样器
平口微量注射器
全自动点样仪
3．展 开容器
平底色谱专用展开缸
双槽薄层色谱专用展开缸
4．显色剂
显色剂
适用范围
显色方法 斑点颜色
浓硫酸乙醇溶液 碘 磷钼酸乙醇溶液 茚三酮试液 三氯化铁-铁氰化
第3节 薄层色谱分离检测技术
薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC) 将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上
形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法 可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等
一、分离原理
薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的 起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法中 又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同 组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢 ，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点
操作方法
将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠 水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去 除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀， 或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上 平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为 0.2mm～0.3 mm)，取涂好的薄层板，置 水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30 分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用 。
四、操作技术
无黏合剂
分类
自制薄
含黏合剂
层板
10%～15%煅石膏
0.2%～0.5%羧甲基纤维 素钠水溶液
1．薄层 板制备
市售薄 层板
操作方法
普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基) 分类 高效薄层板（固定相粒径为5~7 u）m
操作方法
临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活 化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁
二、仪器与材料 1．色谱滤纸
想一想:色谱滤纸如何选择?
2．展开剂
（1）纸色谱一般固定相是什么? （2）纸色谱展开剂如何选择?
3．展开容器 圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖且能密闭
下行纸色谱展开缸
三、操作技术
1．色谱滤纸的准备
（1）用于下行法的色谱滤纸 （2）用于上行法的色谱滤纸
2．点样 样品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用定量
手动涂布器
2．点样
普通板 点样基线----距底边2.0cm 圆点状---- R≤3mm 条带状-----宽度5～10mm 点或条带间距----＜8mm
点样量---- ＜10
ul
高效板 点样基线----距底边0.8~1cm 圆点状---- R≤2mm 条带状-----宽度4～8mm 点或条带间距----＜5mm
第4节 纸色谱分离技术
一、分离原理(液-液萃取 ) 利用样品中不同组分在两相溶剂中溶解性（或分配系数）不
同，当流动相携带样品流经固定相（被吸附或固定在惰性材料 上的液体）时，各组分在两相间不断进行溶解、萃取、再溶解 、再萃取，……，样品经过多次反复分配后，造成分配系数稍 有差异的组分移行的距离不同面实现分离 .
二、薄层色谱参数
1．比移值 (1）定义 组分迁移的距离与展开 剂迁移的距离之比
(2)计算方法
原点到斑点中心的距离 R f 原点到溶剂前沿的距离
R f（A）
lA l0
R
f（B）
lB l0
2．相对比移值
(1）定义 指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比
(2）计算方法
Rr

R f (i) R f (s)
分离效能
2． 鉴 别
等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽
等体积混合法----斑点单一、紧密 结构相似对比法-----Rf不同或两斑点
杂质对照品法 3．杂质检查 样品溶液的自身稀释对照法
二者合用法
4．定量方法
（1）目视比色法 -----半定量法（精度±10%） （2）斑点洗脱法
（3）薄层扫描法(正在减小使用)
钾试液
多数有机化 合物
多数有机化 合物
醛等还原性 物质
氨基酸类
含酚羟基化 合物
喷雾加热 多数加热后呈 黑色
薰蒸
多数显黄棕色
喷雾烘干 蓝色
喷雾或浸 紫色或黄色 渍
喷雾或浸 红褐色或棕红
Leabharlann Baidu
渍
色
喷雾瓶
5．显色
装置
浸渍槽
蒸气熏蒸 ----双槽展开缸
紫外分析仪(三用)
6．检 视装置 摄像设备
薄层色谱扫描仪(CS9301型）
1．吸附剂
三、仪器与材料
粒径 5~40 m
硅胶
硅胶H 硅胶G 硅胶GF254 硅胶HF254
氧化铝 常用
硅藻土 聚酰胺 微晶纤维素
想一想 H、G、F各代表何种意思？试解释硅胶HF365？
2． 载 板
种类
玻璃板 塑料膜
厚度 2mm
规格
5cm×20cm 10cm×10cm 10cm×15cm
10cm×20cm
点样量---- ＜5
ul
3. 展开
（1）展开要求 查阅 A.何为边缘效应?何因？如何防止?
B.展开剂加入量?展开剂展开距离？
（2）展开方式
上行 近水平 双向 多次
上行展开
近水平展开
有色物质斑点----目光检视
4．检视
荧光检出法
五、检测技术
无色物质斑点 化学检出法
检测灵敏度
1．系统适用性试验 比移值
纸色谱上行展开
4．斑点定位
纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱法不能使用腐 蚀性显色剂，也不能在高温下显色。
运用纸色谱进行药物的鉴别、检查和含量测定的方法、要求与薄层色 谱法一致