检本16高效薄层色谱法
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仪器分析—第16章
第一节 概 述
薄层色谱法 (TLC) 是将固定相均匀涂布在表面光滑 的平板上形成薄层，而进行分离和分析的色谱方法。
高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由 厂家生产，使用更细的吸附剂制板，板 层更薄更均匀、致密；点样、展开、测 定实现仪器化操作。具有更高的分离效 率和检出灵敏度。
B A
薄层板浸入展开剂深度0.51.0cm；展开至整板3/4
距离，标记前沿。
前沿
•
2.0cm
1
•
2
•
3
四、显色定位
紫外光照射法：
HF254、GF254 、HF365
蒸气显色法：
碘、挥发性酸碱(HCl、HNO3、NH3H2O等)
1
2
喷洒显色法：
浓H2SO3、茚三酮、三氯化铁-铁氰化钾
生物自显影法
五、定性分析
在一块薄层板上，与标准 品的Rf值对照定性。
在没有标准品的情况下， 也可采用Rst定性。
•
1
•
2
•
3
1, 2 样品 3 标准品
六、定量分析
洗脱法：将组分斑点全部取下，用适当 的溶剂进行洗脱，再选用适当的方法(如紫 外分光光度法、荧光分光光度法等)进行定 量测定。 目视比色法：一种半定量分析方法 。 薄层扫描法：用薄层扫描仪对组分斑点 进行扫描，直接测定斑点的含量。
R st 亮
P288-习题7
d i 9 . 0 cm R fi R fs R st di dm ds dm di ds
d s 7 . 5 cm 9 . 0 cm 15 cm 7 . 5 cm 15 cm 9 . 0 cm 7 . 5 cm 1 .2 0 .5 0 .6
时间：10mimHale Waihona Puke Baidu风吹干燥
位臵：
•
1
•
2
•
3
2.0cm
1.5-2.0cm
1, 2 样品 3 标准品
三、展开
展开就是让溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载带 被分离组分向前移动过程。 展开方式有：上行展开 倾斜上行展开 下行展开 ( R 小 )
f
展开方法：在密闭的层析缸进行，层析缸内被溶剂 蒸气预饱和(防止边缘效应)
第三节 TLC 的固定相与流动相
一、固定相(吸附剂)
要求：纯度高、粒度小（10~40 um）、均匀 种类： 硅胶
氧化铝：中性、碱性和酸性 纤维素
聚酰胺
硅胶的型号
G—自含粘和剂(石膏)
CMC—自含粘和剂(羧甲基纤维素) H—不含粘和剂 HF254—含荧光剂，254nm光照发绿光 HF365—含荧光剂，365nm光照发光 GF254—含粘和剂\荧光剂
1, 2 样品 3 标准品
薄层色谱的塔板数、塔板高度、分离度
n H R
d1 W
d1 n W
2
n 16 (
) 16 (
2
R f dm W
W
1
)
2
2
2
H
dm
d2 d1
16 d 1
16 R f d m
R
2(d1 d 2 ) W1 W 2
W1 W 2
R
d W
P288-习题6
二、流动相(展开剂/溶剂)
常用的有： 环己烷<二硫化碳<苯<四氯化碳<二氯甲烷<乙醚< 氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水
溶剂极性↑，展开能力↑，k↓， Rf↑ ，因此， 调节溶 剂极性，可以控制组分的比移值。
多用混合溶剂
三角形优化法
最佳范围是0.3～0.5
三、吸附剂与展开剂的选择原则
d m 15 . 0 cm R f丙 R f缬 R f亮 R st 丙 d丙 dm d缬 dm d亮 dm d丙 d缬 d亮 d缬 d 丙 1 . 2 cm 1 . 2 cm 15 . 0 cm 3 . 0 cm 15 . 0 cm 5 . 4 cm 15 . 0 cm 1 . 2 cm 3 . 0 cm 5 . 4 cm 3 . 0 cm 1 . 80 0 . 40 0 . 36 0 . 20 0 . 08 d 缬 3 . 0 cm d 亮 15 . 4 cm
第五节 高效薄层色谱法
高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由厂 家生产，使用更细的吸附剂制板，板层 更薄更均匀、致密；点样、展开、测定 实现仪器化操作。具有更高的分离效率 和检出灵敏度。
B A
第六节 薄层扫描定量方法
一、薄层扫描仪
二、扫描方式
本章结束! 谢谢!
第二节 薄层色谱法的原理
一、薄层色谱法的原理
分离机制：吸附色谱法、分配薄层法、…
固定相：吸附剂 移动相(展开剂)：混合有机溶剂
溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载 带被分离组分向前移动(展开) ，展开 过程中，组分不断被吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附…，
B A
二、Rf 及分离度
比移值(Rf)：
溶剂前沿
定性分析—2×8cm
定量分析—10×20cm
软板—不加粘合剂，用干吸附剂铺成的薄层板
特点：简单、展开速度快、但不牢固、分离效果差 硬板—吸附剂加粘合剂，用湿涂法铺成的薄层板 活化处理（高温去水） 硅胶G—自含粘和剂
二、点样
将试液滴加到薄层板上
方法：用平整的毛细管或微量注射器
浓度：0.1%~1%，几微升
d m 15 cm
P288-习题8
d A 7 . 6 cm Rf dA dm
d m 16 . 28 cm 7 . 6 cm 16 . 28 cm 0 . 47
d 14 . 3 cm d d m R f 14 . 3 cm 0 . 47 6 . 72 cm A
吸附剂的选择：（选择合适的吸附力） 根据被测物极性与吸附剂的活性 被测物极性强—活性小的吸附剂 被测物极性弱—活性大的吸附剂 展开剂的选择： “相似相溶”原则
P288-习题2、5
第四节 TLC 的实验技术
操作可分四个步骤
铺板 →点样 → 展开 →显色定位(定性/定量)
B A
一、铺板—薄层板的制备
Rf 原点到斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
Rf
di dm
Rf
1 1 k
dm di
Rf与组分性质、吸附剂、展开
剂性质和展开条件等有关。
Rf是定性参数
取值范围是0～1
可用范围是0.2～0.8 最佳范围是0.3～0.5
相对比移值
R st Rf R
i
di d
s
1
2
3
f s
•
•
•
Rst可以大于1，也可以小于1。
第一节 概 述
薄层色谱法 (TLC) 是将固定相均匀涂布在表面光滑 的平板上形成薄层，而进行分离和分析的色谱方法。
高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由 厂家生产，使用更细的吸附剂制板，板 层更薄更均匀、致密；点样、展开、测 定实现仪器化操作。具有更高的分离效 率和检出灵敏度。
B A
薄层板浸入展开剂深度0.51.0cm；展开至整板3/4
距离，标记前沿。
前沿
•
2.0cm
1
•
2
•
3
四、显色定位
紫外光照射法：
HF254、GF254 、HF365
蒸气显色法：
碘、挥发性酸碱(HCl、HNO3、NH3H2O等)
1
2
喷洒显色法：
浓H2SO3、茚三酮、三氯化铁-铁氰化钾
生物自显影法
五、定性分析
在一块薄层板上，与标准 品的Rf值对照定性。
在没有标准品的情况下， 也可采用Rst定性。
•
1
•
2
•
3
1, 2 样品 3 标准品
六、定量分析
洗脱法：将组分斑点全部取下，用适当 的溶剂进行洗脱，再选用适当的方法(如紫 外分光光度法、荧光分光光度法等)进行定 量测定。 目视比色法：一种半定量分析方法 。 薄层扫描法：用薄层扫描仪对组分斑点 进行扫描，直接测定斑点的含量。
R st 亮
P288-习题7
d i 9 . 0 cm R fi R fs R st di dm ds dm di ds
d s 7 . 5 cm 9 . 0 cm 15 cm 7 . 5 cm 15 cm 9 . 0 cm 7 . 5 cm 1 .2 0 .5 0 .6
时间：10mimHale Waihona Puke Baidu风吹干燥
位臵：
•
1
•
2
•
3
2.0cm
1.5-2.0cm
1, 2 样品 3 标准品
三、展开
展开就是让溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载带 被分离组分向前移动过程。 展开方式有：上行展开 倾斜上行展开 下行展开 ( R 小 )
f
展开方法：在密闭的层析缸进行，层析缸内被溶剂 蒸气预饱和(防止边缘效应)
第三节 TLC 的固定相与流动相
一、固定相(吸附剂)
要求：纯度高、粒度小（10~40 um）、均匀 种类： 硅胶
氧化铝：中性、碱性和酸性 纤维素
聚酰胺
硅胶的型号
G—自含粘和剂(石膏)
CMC—自含粘和剂(羧甲基纤维素) H—不含粘和剂 HF254—含荧光剂，254nm光照发绿光 HF365—含荧光剂，365nm光照发光 GF254—含粘和剂\荧光剂
1, 2 样品 3 标准品
薄层色谱的塔板数、塔板高度、分离度
n H R
d1 W
d1 n W
2
n 16 (
) 16 (
2
R f dm W
W
1
)
2
2
2
H
dm
d2 d1
16 d 1
16 R f d m
R
2(d1 d 2 ) W1 W 2
W1 W 2
R
d W
P288-习题6
二、流动相(展开剂/溶剂)
常用的有： 环己烷<二硫化碳<苯<四氯化碳<二氯甲烷<乙醚< 氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水
溶剂极性↑，展开能力↑，k↓， Rf↑ ，因此， 调节溶 剂极性，可以控制组分的比移值。
多用混合溶剂
三角形优化法
最佳范围是0.3～0.5
三、吸附剂与展开剂的选择原则
d m 15 . 0 cm R f丙 R f缬 R f亮 R st 丙 d丙 dm d缬 dm d亮 dm d丙 d缬 d亮 d缬 d 丙 1 . 2 cm 1 . 2 cm 15 . 0 cm 3 . 0 cm 15 . 0 cm 5 . 4 cm 15 . 0 cm 1 . 2 cm 3 . 0 cm 5 . 4 cm 3 . 0 cm 1 . 80 0 . 40 0 . 36 0 . 20 0 . 08 d 缬 3 . 0 cm d 亮 15 . 4 cm
第五节 高效薄层色谱法
高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由厂 家生产，使用更细的吸附剂制板，板层 更薄更均匀、致密；点样、展开、测定 实现仪器化操作。具有更高的分离效率 和检出灵敏度。
B A
第六节 薄层扫描定量方法
一、薄层扫描仪
二、扫描方式
本章结束! 谢谢!
第二节 薄层色谱法的原理
一、薄层色谱法的原理
分离机制：吸附色谱法、分配薄层法、…
固定相：吸附剂 移动相(展开剂)：混合有机溶剂
溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载 带被分离组分向前移动(展开) ，展开 过程中，组分不断被吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附…，
B A
二、Rf 及分离度
比移值(Rf)：
溶剂前沿
定性分析—2×8cm
定量分析—10×20cm
软板—不加粘合剂，用干吸附剂铺成的薄层板
特点：简单、展开速度快、但不牢固、分离效果差 硬板—吸附剂加粘合剂，用湿涂法铺成的薄层板 活化处理（高温去水） 硅胶G—自含粘和剂
二、点样
将试液滴加到薄层板上
方法：用平整的毛细管或微量注射器
浓度：0.1%~1%，几微升
d m 15 cm
P288-习题8
d A 7 . 6 cm Rf dA dm
d m 16 . 28 cm 7 . 6 cm 16 . 28 cm 0 . 47
d 14 . 3 cm d d m R f 14 . 3 cm 0 . 47 6 . 72 cm A
吸附剂的选择：（选择合适的吸附力） 根据被测物极性与吸附剂的活性 被测物极性强—活性小的吸附剂 被测物极性弱—活性大的吸附剂 展开剂的选择： “相似相溶”原则
P288-习题2、5
第四节 TLC 的实验技术
操作可分四个步骤
铺板 →点样 → 展开 →显色定位(定性/定量)
B A
一、铺板—薄层板的制备
Rf 原点到斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
Rf
di dm
Rf
1 1 k
dm di
Rf与组分性质、吸附剂、展开
剂性质和展开条件等有关。
Rf是定性参数
取值范围是0～1
可用范围是0.2～0.8 最佳范围是0.3～0.5
相对比移值
R st Rf R
i
di d
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1
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Rst可以大于1，也可以小于1。