血清载脂蛋白B检测操作规程

血清载脂蛋白B检测操作规程

1. 检测原理

APO A-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。通过测定标准品，建立一个吸光度对APO A-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APO A-1浓度。

2．标本采集与处理

2.1 受检者的准备：

病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：

除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：

血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。

2.4 标本处理：

血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3．试剂

3.1 试剂：

本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司APOA1试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：

3.2：校准血清

使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。

校准频次：

空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。

3.3 试剂与校准血清的稳定性：

原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。

试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。

项血脂类标准液或APOA/B标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，2-8℃储存可稳定一周，参见校准血清说明书。

4．仪器

KONELAB 30型号仪器。

性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。

5．操作

样品为血清。本法为终点法。参数见后附，附录A。

试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。

6．计算

△A测定

C = ————×C0

△A标准

式中：c——测定血清载脂蛋白A1浓度，g/L；

△A测定——标本管吸光度；

△A标准——标准管吸光度；

C O——校准血清中载脂蛋白浓度，g /L；

△A ＝A2－A1

7．操作性能

7.1 精密度：

批内CV< 1.78，批间CV< 3.65。

7.2 准确度：

检测结果的相对不准确度≤±10%。

7.3 灵敏度：

载脂蛋白A1浓度为：1.1g/L时，浊度吸光度A340nm约1.151~1.256。

7.4 可报告范围：

血清与试剂用量之比为2:260:65时，测定上限为2.4g/L。

7.5 特异性：

测量值在给定值的90%-110％范围内。

7.6 干扰：

内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。

8．参考值

1.2-1.8 g/L

9．临床意义

载脂蛋白A1 测定试剂盒用于定量测定血清中载脂蛋白A1的含量。

ApoA可分为ApoAⅠ，AⅡ, AⅣ。ApoAⅠ和AⅡ大部分分布在HDL中，是HDL的主要载脂蛋白。

ApoAⅠ主要存在于HDL中，在HDL3中ApoAⅠ占载脂蛋白的65％，在HDL2中ApoAⅠ占载脂蛋白的62％，在CM、VLDL和LDL中也有少量存在。血浆中呈现β迁移率的一种β-HDL，其内80％为Apo AⅠ。

ApoAⅠ的生理功能有：①组成载脂蛋白并维持其结构的稳定性与完整性。实验表明，纯化的ApoAⅠ在水溶液中可以自发地和脂类结合。用CNBr法将ApoAⅠ裂解成四个肽段，发现仅有羧基末端的肽段可自发和磷脂结合。后来进一步确认这一段是ApoAⅠ224-242段，这一段既可维持双性螺旋的结构，又可以维持和脂质结合所具备的疏水性。②ApoAⅠ可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的活性。已经证实，ApoAⅠ是通过激活LCAT，再催化胆固醇酯化。ApoAⅠ肽段Ⅲ（肽段116-151）是激活作用的中心。③A poAⅠ可作为HDL受体的配体，含ApoAⅠ脂蛋白可以和转铁蛋白及铜蓝蛋白形成大分子复合物以运输铁和铜离子。

载脂蛋白A1是抗动脉搏粥样硬化的指标，检测血清中载脂蛋白的主要用于诊断冠心病。

附录A: 参数