酵母菌种群数量的测定ppt课件

温度 /℃ 28
5
28
C
为什么第3天后A组培养液中酵母菌数目减缓
甚至不增加？
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血球计数板的清洗
• 血球计数板使用结束后，应用清水浸泡、 冲洗，不能用刷子等硬物洗刷，自然晾干 或吹风机吹干后，镜检每个小格中是否存 有污物、残菌，如不清洁，需重新清洗直 至洁净。
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无菌操作
• 要防止杂菌污染给实验结果带来影响。 每次抽样检测用到的蒸馏水、玻璃器皿、 滴管等要事先经无菌化处理，血球计数板、 载玻片、盖玻片等必需保持洁净。
计数
对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻
两边及顶角计数。
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(6)怎样进行酵母菌的计数?
以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设 五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么， 一个大方格中的总菌数：
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染色
• 美蓝是无毒性染料，碱性条件下，用美 蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞 的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原 能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色 的还原型，因此，具有还原能力的酵母活 细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱 的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可 对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
酵母菌数量的测定
• 显微镜直接计数法：使用血球计数板等计 菌器进行酵母菌的计数。
优点：直观、快速、 操作简单。
缺点：所测得的结 果是死菌体与活菌 体的总和。
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2
取样与滴加培养液
• 取样前需摇匀 • 向计数室添加样品向计数室加样品时，先
将计数室盖上盖玻片，用无菌细滴管沿盖 玻片边缘滴入少量菌液，菌液自行沿边缘 缝隙渗入计数室。计数室要充满菌液，不 能存有气泡。
• 每次取样观察要规范，实验用过的器材 要清洗干净，需灭菌的器具则一定要灭菌。
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3
稀释
• 小方格内酵母菌数量过多，难以计数，就 要对菌液进行适当稀释后再计数。一般样 品稀释后适宜范围是少于 10 个菌体/每小格。 根据需稀释的倍数，精确算出应加入的无 菌水量，
• 如lmL 菌液欲稀释100 倍，则需向lmL 菌液 中加入99mL 无菌水，而不是加入100mL 无 菌水。
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7
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8
• 如果将染液直接滴在血球计数板上，菌液浓度改 变，无法对实验结果精确计算。
• 正确的做法应是另外制作装片，通过染色对活菌
和死菌加以区分，算出两者比例，进一步换算出
总菌体数中的活菌数。
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死亡
第7天
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进一步探究：
(1)在不同温度（以及通氧、通CO2等）条 件下酵母菌种群数量增长的情况如何？
(2)不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母 菌种群数量增长的情况如何？
试管编号 A B C
培养液/mL 无菌水/mL
10
—
10
—
—
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酵母菌母液/mL 0.1 0.1 0.1
温度/℃ 28 5 28
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试管编 号 A
B
C
培养液 /mL 10 10 —
无菌水 /mL — — 10
酵母菌母液 /mL 0.1 0.1 0.1