人体外周血淋巴细胞培养和染色体标本制备的几点体会

表4关联系数表

N1(k)1013657014099017400013978013993013333017198

N2(k)1016674017472016985017439016446015066014891

N3(k)1019643016928018139017930017347015890018469

计算关联度:

C1=1

8

(1+013657+014099+017400+013978+013993+ 017198)=015457

C2=016872,C3=018043。

根据关联度排序,各因素对合格率的关联程度依次为:体检率X3>发证率X2>食具合格率X1。

3讨论

灰色关联分析是探讨灰色系统内部各因素之间发展变化的关联程度的一种新方法。通过对随机时间序列进行处理,明确各因素对系统的关联程度,从不完全的信息中找出影响系统的主要因素[1],为有关工作提供科学依据。近年来,国内一些学者采用此方法对妇幼保健内新法接生比[3]和医院门诊量[4]影响因素进行了分析,得到了这些内部各因素之间的关联程度,找出了影响系统的主要因素,明确了其工作的重点。

关联度表示比较数列与参考数列之间的关联程度,关联度愈接近1,说明关联程度就越大。本文采用灰色关联分析法对某市1987~1994年食品卫生合格率的影响因素进行了分析,结果关了分别为:食具合格率C1=015457,发证率C2= 016872,体检率C3=018043。表明体检率与食品合格率的关联程度最高,所起作用就越大,发证率次之,食具合格率为第三。

灰色关联分析具有所需样本小,原理简单,容易理解,计算简便,不受概论分布的限制,结果直观,适用范围广泛,易被基层防疫人员所掌握等优点,是食品卫生监测研究中的有用工具。

参考文献

1.邓聚龙1灰色预测与决策1武汉:华中理工大学出版社119861104 ~110

2.林祥1运用模糊综合评判法评价梧州市近年食品卫生状况1中国卫生统计,1998,15(1):43

3.王增珍,李群荣1关联度分析及其与相关分析的比较1中国卫生统计,1991,8(6):22

4.马立军1关联度分析在医学研究中的应用1中国卫生统计,1992, 9(1):47

(收稿日期2003-11-20)

人体外周血淋巴细胞培养和染色体标本制备的几点体会

关晶田现书耿进妹

(济宁医学院生物学教研室)

为了研究人的染色体组成,所选用的组织细胞必须处于增殖状态,我们才能获得适于观察和分析的染色体标本。在人类,除少数组织(骨髓和睾丸组织)始终处于不断分裂之中外(但取材较困难,且不易为人们所接受),其余各种组织都需经过体外培养才能使细胞大量增殖。其中的外周血体外培养法运用最广泛,细胞遗传学领域中90%以上的研究取材于它。[1]

由于各个实验室实验条件和个人操作手法的差异,细胞培养和染色体标本的制作方法也不尽相同。作者在本实验室现有的条件下,经过长期摸索,总结出了一套适合本实验室的实验方法,现将具体方法和几点肤浅的体会介绍如下: 1材料与方法

采血:常规消毒皮肤,用预先经012ml(200单位/ml)肝素湿润过的注射器抽取静脉血1~115ml,立即混匀。

接种和培养:在无菌条件下,将抗凝血013ml(7号针头26滴)接种于装有5ml含小牛血清、PHA及双抗(青、链霉素)的RP M I1640培养液的培养瓶中,摇匀,置于37e培养箱中恒温培养68~70h。

秋水仙素处理:在培养至68h加入秋水仙素,使终浓度为012~015L g/ml,轻摇后继续培养115h,以积累较多的中期分裂细胞。

收获细胞:将培养物移至离心管中,以1000r/min离心10min,弃去上清液,沉淀物约留015~1ml。

低渗:加入6ml已预温37e的01075M KCI低渗液至离心管中,用吸管轻轻吹打均匀制成细胞悬液,置37e温箱内,以使红细胞破坏,淋巴细胞膨胀,染色体分散。

预固定:加入1ml固定液(甲醇:冰醋酸为3:1)混匀预固定5min。以1000r/min离心10min,弃去上清液。

固定:加入固定液5ml,立即用吸管吹打细胞团块使之混匀,室温下固定20min,离心,去上清液。依上法重复固定2 ~3次。

滴片:将固定后的沉淀物加新鲜固定液013~015ml(视细胞多少而定),用吸管吹打混匀,制成细胞悬液。吸取细胞悬液2~3滴,以约20cm或更高的距离滴于清洁冰湿的载玻片上,并轻轻吹一口气,以助细胞、染色体分散。室温晾干。

染色:用Giemsa染液(1份G iemsa原液加9份pH为712的磷酸缓冲液)染色30分钟,自来水冲洗晾干备用。

2结果与讨论

用上法制得的染色体标本分裂相多,染色体分散良好、清晰。

以往资料通常是在终止培养前3~4h加入秋水仙素[2,3],由于秋水仙素作用时间较长,获得的染色体标本收缩过度,不便于显带。作者通过多次实践,将秋水仙素的作用时间控制在1h15min到115h范围内,使染色体标本较为伸展,便于显带和分析。

低渗时间可延长至35min,以便使染色体分散、消除细胞背景,使标本更加清晰。但需注意不要过猛吹打细胞,否则会造成染色体散落、丢失。

参考文献

11周焕庚.人类染色体.北京:科学出版社11987185~86

21蔡绍京.细胞生物学与医学遗传学实验指南.上海:第二军医大出版社,2002147~48

31柳家英.医学遗传学.北京:北京医科大学出版社,19981233~234

(收稿日期2003-11-08)

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