透析液内毒素检测操作SOP
细菌内毒素检查SOP(动态浊度法)
细菌内毒素检查SOP（动态浊度法）1．目的为规范细菌内毒素含量测定的操作，特制定本SOP。
2．范围本SOP适用于细菌内毒素含量测定的操作。
3．定义3.1.动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
3.2.细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
3.3.细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.4.细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015 EU/ml（用于凝胶法）或0.005 EU/ml （用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。
4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量负责人/质量受权人负责本规程的批准。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6．材料6.1.仪器设备细菌内毒素测定仪、漩涡混合器、干烤箱6.2.试剂及溶液6.2.1.鲎试剂6.2.2.细菌内毒素工作标准品：国家标准品或经过国家标准品标定的工作标准品。
6.2.3.细菌内毒素检查用水：内毒素含量应小于0.005EU/ml。
6.3.使用的器具移液器、无热原稀释管和反应管、无热原枪头。
7．流程图无8．程序8.1.原理细菌内毒素能激活鲎试剂(TAL)中的酶系统，使凝固酶原变成凝固酶，进而凝固酶再激活其中的凝固蛋白原变成凝固蛋白，呈现凝胶反应，动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，计算内毒素浓度与反应时间关系的双对数标准曲线，利用标准曲线对供试品的内毒素含量进行定量测定。
8.2.试验前准备8.2.1.采样管用硅胶塞塞口，经180℃干烤2小时，除内毒素备用。
修改SOP细菌、内毒素的采样准则解读及临床实践0204
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透析液内毒素超标的主要原因
透析用水超标 透析浓缩A、B液超标 透析机水路系统（消毒不良）超标 以上因素叠加
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透析液内毒素超标的主要原因
微生物污染趋势
原水（自来水） 砂滤罐
树脂罐 活性炭
反渗机
输水管路
透析机（浓缩液）
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透析用水微生物、内毒素超标的可能原因
水源、预处理部分 反渗透机
维持合理的回收率，回收率与水质成反比关系，一般控制 在70%。 透析机工作结束后，水处理系统应两小时至少启动一次， 保证水的流动抑制微生物生长。
定期消毒，防止生物膜的形成（建议至少每三个月一次）
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透析用水内毒素超标的对策与预防
透析用水供水管路、储水容器部分
输送管路及储存容器选用卫生级器件，管路直径合理 输送管路采用单路串联结构。选用直接供给方式 管路内水的流速大于0.4m/s：15mm管路水处理产水量大于 用水量4.2L/min，20mm管路大于用水量8.4L/min
SOP细菌、内毒素的采样准则 解读及临床实践
大纲
• 采样准则 • 临床实践 • 小结
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大纲
• 采样准则
• 临床实践 • 小结
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内毒素检测取样
取样位置 水处理系统的末梢——验证水处理
透析机水入口处——验证管道污染情况
透析器入口透析液——验证透析液内毒素 每台透析机必须同步检测
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取样注意事项
放开阀门，放流半分内容、频率 明确相关的检测项目标准 指导了临床实践的方式和方法 有利于内容、管理和操作的标准化 完成质控检查和医院检查考核的要求 做到持续质量改进（CQI） 确保血液透析医疗安全
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细菌内毒素检查法SOP(陈魏制作)
细菌内毒素检查—凝胶法标准操作程序1.简述本操作程序主要参照BP 2003 Appendix XIV C. Test for bacterial endotoxins中MethodA.Gel-clot method: limit test和Method B. Gel-clot method: semi-quantitative test以及《中国药典2010版附录ⅹⅡE细菌内毒素检查法》中凝胶法，结合实验室自身条件编写而成。
2.安全注意事项由于细菌内毒素对人体有毒害作用，且鲎试剂对人的危害作用尚不明确。
因此实验过程中一定要做好防护措施。
3.检验目的检验供试品中的的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4.检验原理本操作程序通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量检测内毒素。
5.供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH 值在6.0～8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH 值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH 值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
6.供试品细菌内毒素的限值(L)药典有明确规定的按照药典规定值，如无规定需经计算得出，具体计算方法见各药典。
7.供试品最大有效稀释倍数(MVD)和最小有效稀释浓度的确定(MVC)最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数( 1→MVD )，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。
用以下公式来确定MVD，MVD=cL /λ。
式中L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓度，当L 以EU / ml 表示时，则c为1ml / ml ，当L 以EU / mg 或EU / U 表示时，c的单位需为mg / ml 或U / ml。
血液透析sop操作规程2023
血液透析sop操作规程2023一、目的本规程的目的是明确血液透析操作流程，规范血液透析护理操作，保证患者安全，提高透析治疗效果。
二、适用范围本规程适用于我院血液透析室的所有护士，在开展血液透析治疗过程中必须遵循。
三、术前准备1. 术前核对患者基本信息，确保患者姓名、性别、年龄等信息无误。
2. 根据患者透析前的体征和生理指标，调整透析方案，包括透析时间、透析液成分等。
3. 准备好透析仪、透析管路、透析液和其他必需的设备和药品。
4. 预先进行护士间的透析治疗分工和沟通，确保透析操作流程的顺利进行。
四、透析操作步骤1. 提醒患者空腹，及时记录患者的透前体征。
2. 患者到达透析室后，核对患者身份，并辅助患者就座。
3. 患者进行手术穿刺前，仔细观察穿刺部位，如有异常及时进行处理，确保穿刺部位无感染迹象。
4. 根据医嘱，使用清洁消毒的穿刺器具对患者进行静脉穿刺。
5. 静脉穿刺后，连接透析管路，确保透析管路连接牢固，没有漏气、漏血等情况。
6. 启动透析机前，确认透析液浓度和流速是否符合医嘱要求。
7. 同时启动透析机和透析泵，开始透析治疗，确保透析机和透析泵正常运行。
8. 在透析治疗过程中，定期观察患者的生命体征和透析机器的运行状态，如有异常情况及时处理。
9. 在透析治疗结束后，进行透析管路的拔除，确保操作无误。
10. 透析治疗结束后，观察患者的生命体征，如有异常情况及时处理，并及时记录患者的透后体征。
11. 清洁消毒透析治疗用具和透析设备，确保透析设备和用具的清洁卫生。
12. 记录患者的透前透后生理指标和透析治疗过程中的操作情况，以便于医生进行透析疗效评估和进一步诊疗。
五、术后护理1. 透析治疗结束后，安抚患者情绪，协助患者安全离开透析室。
2. 观察患者透后的生命体征，如有异常情况及时处理并报告医生。
3. 完善患者透后记录，包括患者的透后生理指标、透析治疗操作情况、患者的主观感受等。
4. 将患者的透后情况及时报告给医生，协助医生对患者的病情进行评估和治疗。
透析液内毒素
鲎试剂灵敏度复核试验
内毒素浓度
鲎试剂 平行管
2λ
λ
0.5 λ
0.25
λ
阴性对照
灵敏度的测定 a) 将已充分溶解的待复核鲎试剂18支(管)放在试管架上， 排成5列，其中前4列每列4支(管),第5列2支(管),前4列分 别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素标准溶液,第5 列2支(管)分别加入 BET水。内毒素标准溶液和BET水 加样量均为0.1mL/支。 b) 加样结束后，用封口膜封口，轻轻混匀，避免产生气 泡，连同试管架放入37℃±1℃恒温水浴或其他适宜的 恒温箱中，试管架保持水平状态，保温60分钟±2分钟， 观察结果。 c) 将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°，管内凝 胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（＋）；凝 胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）
内毒素浓度 内毒素/检查用水
2.0λ λ
0.5λ
0.25λ
终点
λ λ
λ λ
阴性对照 内毒素/供试品溶液
λ λ 2.0λ 2.0λ
供试品阴性对照
Es=lg-1( ΣXs/4) = λ
Et=lg-1( ΣXt/4)=1.41λ
注意事项 供试品配方或生产工艺有变化时、须重新进行干扰试验
供试品细菌内毒素的检查
当Es在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且当Et 在0.5 ES ～2.0 ES （包括0.5 ES 和2.0 ES ）时，则认为 供试品在该浓度下不干扰试验，否则要使用更灵敏的鲎 试剂，供试品的最大有效稀释倍数（MVD）按下式计算： MVD=CL/λ 式中：L为供试品的细菌内毒素限值 C为供试品溶液的浓度，其中当L以EU/mL表示时，C为 1.0mL/mL当L以EU/mL或EU/u表示时，C的单位为mg/mL或 u/mL。
SOP02-961-00细菌内毒素检查法标准操作规程
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。
供试品溶液的制备：某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提
标准操作规程
题目：
细菌内毒素检查法操作规程
编号：
SOP02-961-00
颁发部门：
质量管理部
生效日期：
版本：
1
页数：
2/7
标题
正文
2.4
2.4.1
2.4.2
2.4.4
2.5
2.5.1
2.5.2
制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节PH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
如试验中供试品溶液的所有平行管均为阴性，应记为内毒素浓度小于λ（如果检验的是稀释过的供试品，则记为小于λ乘以供试品进行半定量试验的初始稀释倍数）。如果供试品溶液的所有平行管均为阳性，应记为内毒素的浓度大于或等于最大的稀释倍数乘以λ。
若内毒素浓度小于规定的限度，判定供试品符合规定。若内毒素大于或等于
标准操作规程
式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)时，方可用于细菌内毒素检查
透析用水、透析液细菌和内毒素的取样及检测方法
透析液的纯净度要求
• 标准透析液（ISO 11663：2014）
细菌含量
<100cfu/ml
內毒素含量
<0.5EU/ml
• 超纯透析液（ISO 11663：2014）
细菌含量
<0.1cfu/ml
內毒素含量
<0.03EU/ml
在线生成的置换液应该无菌并且没有致热源
指南推荐应用超纯透析用水和透析液
Ⅳ. 1 对流和高通量透析治疗模式 强烈推荐应用超纯透析用水
• 透析用水中的内毒素含量应不超过0.25EU/mL。必 须建立干预水平，通常，是最大允许水平的50
国内外透析用水微生物质量标准
菌落计数与内毒素水平无直接关系
透析用水的微生物试验（
YY 0572—2015 ）
• 应采用常规的微生物检测方法( 倾注平板法、涂布 平板法、薄膜过滤法) 获得细菌总数( 标准培养皿 计数) ， 薄膜过滤法是首选的检测方法，但不接受 接种环法。
• 培养基宜选用胰化蛋白胨葡萄糖培养基（TGEA）、 R2A营养琼脂培养基（R2A）或其他确认能提供相 同结果的培养基，不能使用血琼脂培养基和巧克 力琼脂培养基。
• 推荐使用17℃～23℃的培养温度和168h（7d）的 培养时间，确认能提供相同培养结果的其他培养 时间和培养温度也适用。
膜过滤法细菌培养
European Best Practice Guidelines for Hemodialysis Ref: NDT, 17 (2002), Suppl 7
JSDT 强烈推荐所有透析模式应用超纯透析液
Ref: Kawanishi et al, Ther Apher Dial, 2009
透析用水和透析液微生物污染曲线
透析用水细菌内毒素检测流程
透析用水细菌内毒素检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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透析液内毒素检测操作SOP
透析液及其回收率的测定革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（显色法）即碱处理法规范操作1.目的测定透析用水、透析液等样本内毒素含量，保证透析安全。
同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定，保证试验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理内毒素检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起酶的级联反应，根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。
样品回收率试验测定原理：仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct，软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。
R%=(Ct－Co)/λ×100%其中Co为样品溶液内毒素实际测定值；Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值；λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。
4．产品性能指标4.1灵敏度0.01EU/ml4.2精密度批间CV≤10%。
4.3准确性回收率75-125%。
4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。
4.5相关系数r绝对值≥0.980。
5.实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统，配套软件：一次性器具检测系统3.7X洁净工作台旋涡混合器加样器（5-50μl，20~200µl，100~1000µl）5.2实验耗材：无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)无热原平底试管(塑料)无热源转移管无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管（4ml或5ml）5.3实验试剂：内毒素标准品（冻干品），3EU/支内毒素检查用水试剂盒组成：反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。
其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
血液透析浓缩液配置管理标准操作规程
应有配置流程，并有专人定期核查。
2.每月采集透析液监测细菌总数，应少于200cfu/ml，超过50cfu/ml应提前干预。采样部位为透析液进入透析器的位置，每台透析机每年至少检测1次。
3.每季度采集透析液检测内毒素，应小于2Eu/ml，超过1Eu/ml应提前干预。采样部位为透析液进入透析机的位置，每台透析机每年至少检测1次。
血液透析浓缩液配置管理标准操作规程
制订者：院感办
审核者：
文件编号：DSY-YGB-SOP-22
修订日期：
审核日期：
执行日期：
一、配置室应相对独立，周围环境清洁，无污染源。
二、配置人员应为经过培训的血透室护士或技术员。
三、购买的浓缩液和干粉应具有国家相关部门颁发的注册证、生产许可证和经营许可证、卫生许可证，且在有效期内使用。
参考文献：
1.中华人民共和国卫生部.医疗机构消毒技术规范2012.
2.中华人民共和国卫生部.血液净化标准操作规程2010.
3.胡必杰等.医院感染与防与控制标准操作规程2010.
五、配置容器
1.材料应符合中华人民共和国药典、国家（行业）标准等相关规范要求。
2.须标明Байду номын сангаас量刻度，每日用透析用水清洗1次；每周用消毒剂至少消毒1次，并用测试纸确认无残留消毒液，游离氯浓度应低于1×10-6。
3.滤芯每周更换1次。
六、浓缩B液现配现用，使用时间不超过24h；浓缩A液配置后使用时间不超过7天。
透析用水细菌 内毒素超标原因查找标准操作规程
透析用水细菌/内毒素超标原因查找标准操作规程 持有部门: 文件编号:
制订者: 审核者: 版次:
制订日期: 审核日期: 执行日期:
注：a 应首先排除采样操作与检验技术的原因。
透析用水细菌和（或）内毒素超标a 增加反渗水采样点 收集各采集点的检测结果 综合分析各采样点的监测结果 确定反渗水细菌/内毒素超标的具体原因 反渗机出水端样本超标 仅某台血液透析机输水软管样品超标 全部血液透析机输水软管样品超标 仅配液桶注水口样本超标 反渗机故障或反渗机内形成生物膜 血液透析机输水软管形成生物膜 本渗水主管路形成生物膜 反渗水主管路远端形成生物膜 整改问题和缺陷 重复检测 反渗水细菌/内毒素符合要求 事件终点。
透析液细菌内毒素凝胶检测法流程
透析液细菌内毒素凝胶检测法流程
1. 实验前准备接通恒温水浴箱电源，温度36-37℃;实验所有器材均需去热源。
0 2. 配制细菌内毒素阳性对照液：
取内毒素标准品一支，酒精棉球消毒瓶颈，开启，加入1mlBET用水，混合15分钟备用。
将2EU/ml内毒素对照液稀释成0.25EU/ml(取0.2ml加入1.4mlBET用水)
3. 配制供试品溶液:有效稀释倍数：MVD=L/λ=1/0.125=8(倍)
(L为透析液内毒素限制1EU/ml，λ为鲎试剂灵敏度0.125 EU/ml)
透析用水(反渗水):取透析用水0.1ml加入BET用水0.7ml,混合均匀。
透析液：取透析液0.1ml加入BET用水0.49ml和酸性调节剂0.21ml，混合均匀。
4. 鲎试剂的准备：每份供试品准备8支鲎试剂(0.1ml/支)
5. 试验加样：
6. 检测
加样完毕后用封口膜密封试管，保温58-62分钟观察结果。
7. 结果判断：缓慢倒转180°，管内的内容物呈坚实凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性;不呈凝胶或虽生成凝胶，但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性。
1.。
透析液及透析用水监测SOP
透析液及透析用水监测SOP文件编号：持有部门：医院感染管理科医务部护理部血透室微生物室修订时间：年月执行日期：年月日具体内容：一、透析用水、透析液等进行细菌学监测和内毒素检测1．受检材料：透析用水:普通自来水经过滤、软化、活性碳吸附及反渗处理形成反渗水（透析用水）;透析液浓缩溶液:A 液含氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁及葡萄糖等成分;B 液主要是碳酸氢钠;透析用水和透析液浓缩液按一定的比例混合即成透析液。
透析用水是用自来水作水源，经过反渗透装置产生反渗水(透析用水)，透析液由(A液+B液)与透析用水按1：3 4比例混合制成，A液主要是含各种电解质的高渗液，B液主要是碳酸氢钠溶液。
2．检测方法1：用无菌吸管分别吸取上述样品各1 m1到90mm无菌平皿中，加入已熔化的察45℃一48℃营养琼脂1 5ml一1 8ml，边倾注边摇匀待琼脂凝固放于3 5℃培养箱内48小时后计数，并鉴定致病菌。
检测方法2：采样用无菌注射器抽取1 ml 样品，加入无菌试管,吸取0. 2 ml 标本加入血琼脂平皿中均匀涂布,置36 ℃孵育箱培养48 h ,鉴定细菌及计算每毫升标本中的细菌菌落数(CFU/ ml) 。
计算公式为CFU/ ml = 平皿上的细菌菌落数×5 。
3．评价标准：透析用水细菌数<2 0 0 c fu／m1，透析液细菌数<2 000 c fu／ml，不得检出致病菌，A液和B液应无菌生长。
4．内毒素检测：使用动态凝胶法内毒素快速检测试剂盒Pyrosate检测。
具体方法根据各个公司产品使用说明。
二、可复用血液透析器使用前检测1.外观检查：标签字迹清楚；血液透析器无结构损坏和堵塞；血液透析器端口封闭良好、充满消毒液（由血液透析器颜色、用试纸或化学试剂确认该血液透析器已经过有效浓度消毒液的消毒和处理）、无泄漏；存储时间在规定期限内；血液透析器外观正常。
2.核对患者资料：确保血液透析器上的姓名和患者记录中身份信息一致，血液透析器上的标签和患者的治疗记录也应确保无误。
腹膜透析液(乳酸盐)检验操作规程(新处方)
：腹膜透析液（乳酸盐）检验操作规程1．目的：建立腹膜透析液（乳酸盐）检验操作规程，便于检验人员的规范操作。
2．范围：适用于腹膜透析液（乳酸盐）检验。
3．责任：质检科检验员对实施本规程负责。
4．程序：4.0[处方]G1.5% G2.5% G4.25%葡萄糖（C6H12O6·H2O） 15 25 42.5氯化钠（NaCl） 5.38 5.38 5.38 .氯化钙（CaCl2·2H2O） 0.26 0.26 0.26氯化镁（MgCl2·6H2O） 0.051 0.051 0.051乳酸钠（C3H5NaO3） 4.48 4.48 4.48注射用水加至 1000ml 1000ml 1000ml4.2试验方法各种试验必须在洁净的环境中进行，以避免试样的玷污，均使用分析纯试剂。
4.2.1鉴别4.2.1.1仪器：一般实验室仪器4.2.1.2试剂和溶液4.2.1.2.1氢氧化钠液（1mol/L）：取氢氧化钠4g，加水稀释至100ml，摇匀，即得。
4.2.1.2.2对硝基苯偶氮间苯二酚的碱性溶液：取对硝基苯偶氮间苯二酚1mg，加氢氧化钠液（1mol/L）100ml使溶解，即得。
4.2.1.2.3铂丝、盐酸、甲基红、氨水、草酸铵、醋酸、硫酸铜、酒石酸钾钠、氢氧化钠、硝酸、硝酸银、溴试液、硫酸铵、亚硝基铁氰化钠试液、稀硫酸、浓氨试液4.2.1.2.4氨试液：取浓氨溶液400ml，加水使成1000ml，摇匀，即得。
4.2.1.2.5草酸铵试液：取草酸铵35g，加水适量使溶解成1000ml，摇匀，即得。
4.2.1.2.6碱性酒石酸铜试液（1）取硫酸铜结晶6.93g，加水使溶解成100ml。
（2）取酒石酸钾钠结晶34.6g与氢氧化钠10g，加水使溶解成100ml，同时将两液等量混合，即得。
4.2.1.2.6溴试液：取溴2～3ml，置用凡士林涂塞的玻璃瓶中，加水100ml，振摇使饱和的溶液，即得。
sop细菌内毒素检查操作规程
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6号、9号）、保鲜纸、试管（10×75 mm）、镊子（金属）、金属盒。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于2EU，不大于50EU。
4.2.3细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.2.4鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。
4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
透析内毒素标准
透析内毒素标准
透析内毒素标准在不同的规定和指南中可能存在差异。
•在2005年8月卫生部颁布的《血液透析器复用操作规范》中明确规定，复用用水内毒素含量不得超过2EU/mL，干预限度为1EU/mL。
水质细菌学、内毒素检测时间最初应每周检测1次，连续2次检测结果符合要求后，内毒素检测应每3个月至少1次。
•2020版血液净化sop要求透析用水内毒素不超过100CFU/ml，透析液内毒素不超过0.5EU/ml。
通常情况下，至少每三个月进行一次内毒素检测，超过最大允许水平的50%应进行干预。
请注意，这些标准可能因不同的地区、医疗机构和透析技术而有所差异。
在实际操作中，应遵循当地的规定和指南，并咨询专业医生或透析专家的意见，以确保透析过程的安全和有效性。
细菌内毒素检验SOP
干扰试验
表1凝胶法干扰实验溶液的制备
编号
配制内毒素的溶液浓度
稀释用液
当Ea在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5 Ea～2Ea（包括0.5 Ea和2Ea）时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。若供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对实验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺或环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
一般要求供试液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需要调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸，碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜缓冲液调节PH值。酸或碱溶液必须用细菌内毒素检查用水在已除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经验证不含内毒素和干扰因子。
检测
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检验
审核
日期
批准
日期
序号
作业内容及作业要项
参考图
检验方法：凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验：在本检查规定的条件下，使鲎试剂生产凝集内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
记录原始数据，填写检验报告。
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检查标准操作规程
范围：注射用水、大输液、化学药品、生化药品、放射性药品、生物制品等以及药品生产过程的内毒素监控。
职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.操作前准备1.1检验人员操作前要穿戴好工作服、工作帽、戴上口罩，手要用75%的酒精消毒。
操作时要力求准确。
1.2设备与用具——试验所用器皿，需经处理，除去可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃干烤至少1小时（或180℃干烤至少2小时）。
1.3试剂与标准品1.3.1无热原水：内毒素含量不超过0.06Eu/ml的注射用水。
1.3.275%酒精棉1.3.3鲎试剂为冻干品，规格有0.1ml/支和0.5ml/支二种。
1.3.4细菌内毒素工作标准品，由中国药品生物制品检定所指定的鲎试剂厂标定及供应。
1.3.5供试品溶液可按药典正文规定进行。
2.操作步骤：2.1取试管5支，各加入0.1ml鲎试剂溶液，其中2支分别加入0.1ml供试品溶液作为供试品管。
2.2另一支加入2倍灵敏度内毒素标准品溶液0.1ml作为阳性对照管。
2.3第四支加入2倍灵敏度内毒素标准品溶液0.1ml，再加入供试品溶液0.1ml 作为样品阳性对照管。
2.4最后一支加入0. 灵敏度1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
2.5将上述5支管轻轻混匀后封闭管口，垂直放入37℃±1℃水浴中保温60min ±2min，小心取出，观察结果。
3.结果判断3.1阳性：缓慢倒转试管180℃，管内物质是坚实凝胶者，记录为（+）3.2阴性：缓慢倒转试管180℃，管内物质流动或呈凝胶状但不能保持完整者，记录为（－）3.3阳性对照管2管均为阳性（+）及阴性对照管为阴性供试品（－），则试验有效。
3.4供试品2管均为阳性结果（+），应判为不符合规定。
如供试品2管均为阴性结果（－）则符合本法规定。
3.5供试品2管中如有一管为（+），一管为（－）时，按“2.操作步骤”另取4支试管复试，4管中如有一管（+），即认为该批样品不符合本法规定。
透析水内毒素检测概述
六. 内毒素检测取样
取样位置
水处理系统的末梢，验证水处理 透析机水入口处，验证管道污染情况 透析器入口透析液，验证透析液内毒素 每台透析机必须同步检测
七. 取样注意事项
放开阀门，放流半分钟左右 取样人员带一次性无菌手套，将取样瓶塞用酒精棉球消毒后取下 迅速对准水流，接满瓶，盖瓶塞（若影响瓶管塞，可倒掉部分） 封口膜或胶布封口，送检验
1：应使用无热原取样瓶； 2：取样人员应清洗双手、酒精喷手、带一次性无菌手套； 3：取样过程应保持无菌，时间要短，动作要快，减少污染； 4：送检过程一定要密封。
八. 透析用水和透析液内毒素检测方法
定性检测： 定量检测：
简单，方便，12-20分钟出结果。
配套专用仪器和软件，
自动检测分析，一步即成。
九. 定性检测方法
10-20分钟出结果
十. 定量检测方法
高效，自动，微量，多功能
国际化96孔，自动化操作系统
谢谢，欢迎交流！
为了确保实验的安全，请详细查阅血液净化标准操作规程。
常见：患者于透析开始1h左右，出现恶寒、寒颤， 或伴恶心、呕吐，体温升至38℃左右。
三.内毒素超标可能直接或间接的临床反应
1.呼吸道感染 2.肝脏感染甲肝、急性乙肝、活动性丙肝 3.肝硬化 4.胆道疾病胆石症伴胆囊炎、化脓性胆管炎 5.急性胰腺炎 6.溃疡性结肠炎 7.原因不明的发热四. 国家相关标准 Nhomakorabea√
透析用水内毒素检测至少每3 个月1 次， 内毒素＜2 EU/ml。 置换液内毒素＜0.03EU/ml
质控标准：选用1EU/mL鲎试剂进行检测
浓缩物以细菌内毒素检查用水配成透析液后， 透析液细菌内毒素含量应小于0.5EU/ml。
透析用水采样
透析液及透析用水采样操作规程
检测内容：细菌和内毒素
检测频率：每月一次，若超标，查找原因，增加测定频次，直到达标
一．透析用水采样
1.检测员衣帽整齐，洗手戴口罩。
2.备齐用物：贴标签的内毒素试管和细菌培养试管、酒精灯、酒精、
消毒棉签、一次性注射器等
3.采样口冲洗1分钟，若消毒使用酒精，待干燥后采样，不应使用
含氯消毒剂或其他消毒剂
4.抽吸1ml透析用水按无菌操作原则注入细菌培养试管
5.抽吸5ml透析用水按无菌操作原则注入内毒素试管
6.及时送检，避免放置过久影响检测结果。
二．透析液采样
1.检测员衣帽整齐，洗手戴口罩。
2.备齐用物：贴标签的内毒素试管和细菌培养试管、酒精灯、酒精、消毒棉签、一次性注射器等
3.透析液在线生成后，酒精消毒采样口，待干燥后采样。
4.无菌注射器抽吸1ml透析液按无菌操作原则注入细菌培养试管
5.无菌注射器抽吸5ml透析液按无菌操作原则注入内毒素试管
6.及时送检，避免放置过久影响检测结果。
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透析液及其回收率的测定
革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（显色法）即碱处理法
规范操作
1.目的
测定透析用水、透析液等样本内毒素含量，保证透析安全。
同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定，保证试验结果的准确性。
2.授权操作人
经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理
内毒素检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起酶的级联反应，根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。
样品回收率试验测定原理：仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct，软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。
R%=(Ct－Co)/λ×100%
其中Co为样品溶液内毒素实际测定值；
Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值；
λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。
4．产品性能指标
4.1灵敏度0.01EU/ml
4.2精密度批间CV≤10%。
4.3准确性回收率75-125%。
4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。
4.5相关系数r绝对值≥0.980。
5.实验组成
5.1实验仪器及器具：
MB-80微生物快速动态检测系统，配套软件：一次性器具检测系统3.7X
洁净工作台旋涡混合器
加样器（5-50μl，20~200µl，100~1000µl）
5.2实验耗材：
无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)
无热原平底试管(塑料)无热源转移管
无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管（4ml或5ml）
5.3实验试剂：
内毒素标准品（冻干品），3EU/支
内毒素检查用水
试剂盒组成：反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。
其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。
6．工作环境
相对湿度：20%~80%；
温度控制：10~30℃；
电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7.样本采集及处理
7.1检测样本:R/O水、透析液、A原液、B原液等
7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原转移管。
7.3样品采集标准
7.3.1供试液的制备[1]：
浓缩液，直接取样成供试液；
对干粉，称取样品5克，用细菌内毒素检查用水按使用说明配成浓缩液成供试
液。
取供试液按使用说明的比例混合，以细菌内毒素检查用水稀释后进行检测。
7.3.2用水标准[2]
应在透析装置和供水回路的连接处收集试样，取样点应在供水回路的末端或在混合室的入口处。
7.3.3《血液透析器复用操作规范》透析复用用水
采样位置：应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检
测。
检测时间：最初应每周检测一次，连续两次检测结果符合要求后，内毒素检
测应每3个月至少一次。
7.3.4《血液净化标准操作规程（2010版）》透析用水的水质监控
采样位置：反渗水输水管路的末端
检测时间：透析用水内毒素检测至少每3个月1次。
每台透析机每年至少检
测1次。
8.操作程序
8.1打开仪器电源，预热30分钟，使仪器处于稳定状态（37℃）；
8.2填写表头信息：
“测定日期”默认为同电脑的系统时间相同
“数据文件名”与“测定日期”相同，可以改动（注意避免文件名重复）；
“检验员”填写操作者姓名；
“试剂批号”与试剂盒上的批号一致；（必填）
“试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml；（必填）
8.3填写样本基本信息
要求回收率信息与样品信息完全一致。
注意：填写标本名称、稀释倍数（如果标本名称一样，一定要区分开（如透析液
1、透析液2），否则软件会自动计算2个标本结果的平均值）。
8.4确认输入信息无误后，然后点击“采集”按钮。
8.5样品内毒素的测定
8.5.1取样品50μl加入无热原塑料平底试管中
（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，需要与血清试剂区分!）。
8.5.2溶解反应主剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。
EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
8.5.3在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻
轻震荡震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。
8.6样品回收率的测定
8.6.1将内毒素工作标准品溶解并稀释至0.5EU/ml。
取3EU内毒素工作标准品，加入1000ul待测定样品溶液，放在振荡仪上振荡5分钟，使之充分混合，即得3EU/ml内毒素标准品溶液。
取100ul上述3EU/ml内毒素标准品溶液与500ul待测定样品溶液，震荡混匀一分钟，得到0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液。
8.6.2样品回收率的检测，与主剂反应
取0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液50ul加入无热原塑料平底试管中
（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，，需要与血清试剂区分!）。
溶解反应主剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。
EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻轻震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。
每份样品回收率需做三个平行。
反应结束后仪器自动计算结果并保存。
9.透析液及回收率测定操作流程图
9.透析液及回收率测定操作流程图（以2M为例）
9.1样品内毒素测定
9.2样品回收率的测定
10.试验结果查看及判断。
10.1试验结果的查看
试验结束后，返回主界面，进入数据分析模块，调入试验数据：
打开数据后，点击“检验报告”，即可查看样品内毒素实测值及回收率值。
10.2结果判断标准
10.2.1透析用水
透析用水的定义为满足本标准的要求且适用于血液透析用途的水，包括透析液的制备用水、透析器的再处理用水、透析浓缩液的制备用水和在线置换液制备用水；
透析用水中的内毒素含量应不超过0.25EU/mL[3]。
10.2.2透析液
浓缩物以细菌内毒素检查用水配成透析液后，透析液的内毒素限量应不大于0.5EU/ml[1]；
10.2.3血液透析器透析复用用水内毒素含量≤2EU/ml[4]；
10.2.4置换液内毒素＜0.03EU/ml[5]。
10.3结果的判断
样品的检测结果若符合判断标准，且样品阳性对照的回收率在50~200%范围内，表示符合规定。
样品管检测结果若大于判断标准，则表示不符合规定。
11实验结果打印
点击功能键“打印”选择分组格式，即可打印。
打印结果如下：
12.注意事项：
1、样品的选择采取过程防止污染
2、操作过程防止污染
3、操作检测过程中用到的耗材须除热原
4、透析液操作过程中不需要处理液参与及加热冷却的步骤，需要与血清操作区分！
13.相关标准
①《中华人民共和国医药行业标准》YY0598-2015《血液透析和相关治疗用浓缩物》（ISO13958：2009,MOD）
②《中华人民共和国医药行业标准》YY0572-2015《血液透析和相关治疗用水》（ISO 13959：2009,MOD）
③《中华人民共和国医药行业标准》YY0572-2015《血液透析和相关治疗用水》（ISO 13959：2002,MOD）用水标准
④中国《血液透析器复用操作规范》透析复用用水标准
⑤血液净化标准操作规程（2010版）。