癌胚抗原
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肿瘤标志物癌胚抗原
CEA检测技术的研究
01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
过渡页
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01 癌胚抗原简介 清晰的内容设定 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
01
简介
癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）是一种存
- 18 -
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望 快捷的操作技巧
04 展望
癌胚抗原
自发现以来逐渐为人们所认识和了解
CEA检测技术的发展
一 二
利用癌胚抗原的许多 生物学特性提高肿瘤 的诊断率, 并结合其 它标记物联合诊断, 在肿瘤治疗中发挥重 要的作用
在于结肠癌、正常胚胎肠道、胰腺和肝内的一种蛋白多糖复合物，分子量为 180~200kDa。可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎 的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。
癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤的存在，对 大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好 的肿瘤标志物，但其特异性不强，灵敏度不高，对肿瘤早期诊断作用不明显。
时间分辨荧光免疫测定
1
游离的用镧系元素标记 的抗体与抗原发生特异 性的结合
检测步骤
抗原与包被的抗体发生 特异性结合
2
3
用时间分辨技术测量 荧光
- 14 -
03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
检测步骤
在包被孔中加入游离的用镧系元素标记的抗体，此抗体与已经结 荧光的强弱与镧系元素的量成正比，因此与抗原的量也呈正比， 在包被孔中有抗体被包被在孔的内表面，加入血清后，震荡使抗 合在孔表面上的抗原相结合，这样镧系元素就通过一个“双抗夹 这样可以测出血清中癌胚抗原的含量 原抗体完全结合，洗涤并甩干 心”化合物被固定在包被孔的表面，被固定的镧系元素的量与抗 原的量成一定的比例关系，洗涤除去未反应的游离的标记抗体
免疫分析法 基于抗原-抗 体的专一性和 灵敏性
传统
经典
免疫荧光技术 放射免疫技术 免疫酶技术
-9-
03 检测技术
癌胚抗原
荧光免 疫测定 荧光偏振免 疫测定 时间分辨荧 光免疫测定 酶联荧光免 疫测定
目前临床上用来检测CEA浓度的主要方法
酶联免疫 吸附测定 间接法 双抗体 夹心法 竞争结 合法
放射免 疫测定 核素分析 的高灵敏 度结合抗 原-抗体反 应的高特 异性
- 15 -
03 检测技术
液流荧光技术
主要原理
① 编码微球：用不同配比的两种红色分类荧光染料将直径为5 .6 μ m 的
聚苯乙烯微球染成不同荧光色 ，从而获得多达100 种荧光编码的微球 。 方式结合到特定的编码微球上，每个编码微球都对应相应的检测项 目。 或待检的基因扩增片断 ，形成复合物再与标记的荧光素发生结合反应。
② 共价交联：将 针对不同待测物的抗体分子或基 因探针以共价交联的
③结合反应：将针对不同待测物的荧光编码微球混合 ，加入待测物 质 ④激光分析：微球在流动的鞘液带动下单列依次通过红绿两束激光 ，红
激光用以判定微球的荧光编码 ，绿激光用以测定微球上报告分子的荧光强度 。
- 16 -
03 检测技术
液流荧光技术
总之：CEA并非一种癌的特异性抗原，而是癌的一种相关 抗原，缺少特异性，不能作为肿瘤的筛选指标，而是用于 肿瘤患者的监测，疗效的判断
-7-
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 简单的展示思路 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
03 检测技术
癌胚抗原
测定CEA含量的方法
电化学发光 免疫测定 灵敏的化学 发光分析 特异的免疫 测定
安培免疫 测定 电化学 信号的 变化
免疫金 标技术 胶体金 为标记 物
- 10 -
03 检测技术
荧光免疫测定
fluoroimmunoassay, FIA
荧光偏振免疫测定
分析 速度快
时间分辨荧光免疫测定
FIA
酶联荧光免疫测定
应用范 围窄 灵敏度 不高
-4-
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 巧妙的母版设计 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
02 临床意义
是一种广谱的肿瘤标志物，与消化系肿瘤 有关，也见于非消化系肿瘤和非肿瘤性疾 病，为低器官特异性肿瘤标志物 与肿瘤分化程度有关，分化程度差者浓 度低，分化程度高则浓度高，化疗或放 疗肿瘤细胞坏死或损伤使CEA释放，可 提高阳性率。
三
从传统的荧光、放射 性同位素和酶三大标 记技术逐渐转向更高 效、灵敏的电化学发 光免疫测定和安培免 疫测定
四
从最初单纯单纯用于 结直肠癌的诊断到目 前与多个肿瘤标志物 联合检测
随着微加工技术的日 趋成熟, 现代检测技 术也将向微型化、集 成化方向发展
- 20 -
- 21 -
CEA 浓度
动态 检测
-6-
可作为估计预后、复发、转移和考核治疗 效果的依据之一
02 临床意义
结肠癌患者70%～90%显示CEA高度阳性，血清CEA水平变化与结肠癌 Duke分期密切相关 其他消化道肿瘤也可检测到CEA阳性，如：大肠癌患者可达65%-75%的阳 性 肠道炎症、肾功不全、结肠息肉、肝硬化、慢性肝炎、闭锁性黄疸等也可导 致CEA水平增高 妊娠、大量吸烟也可引起CEA水平增高
- 11 -
03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
主要原理
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是一种新型的
免疫分析技术，与一般的免疫荧光法不同，它所采用的示踪剂是镧系稀 土元素铕(Eu) 将镧系元素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类荧光物质有长荧光 寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后 再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除 非特异性本底荧光的干扰，最大限度的提高了测定方法的特异性和灵敏 度。
4
5
- 17 -
03 检测技术
液流荧光技术
检测优点
多功能技术平台
测物进行定性和定量分析
▲ 通量大
▲ 主要通过可偶联的荧光编码微球与两束激光检测
来对被
，可对多种目的同时分析，大大提高工作效率
于反应进行
▲ 液相环境更有利于保持生物电分子的天然构象，也更有利
▲ 灵敏度特异度、准确度好
，只03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
检测仪器
光源（每秒闪烁1000次的氙灯），照射样品后即短暂熄灭 测定样品发出的长镧系荧光
▲ 时间分辨荧光计与一般的荧光分光光度计不同，采用脉冲 ▲ 以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再 ▲ 检测灵敏度可达0.2～1ng/ml
- 13 -
03 检测技术
1 2 3
检测方法
在检测孔中加入25 μ l样品稀释液，分别加入标准 品及检测标本 10μ I，充分混匀 依次加入针对不同待测物的抗体编码微球 10μ l， 充分混匀 ，37℃ 5 min 避光反应 依次加入 PE 标记的抗体 25 μ l，充分混匀 ，37 ℃ 60 min避光反应 每孔加入终止液 100 μ l， 混匀上机检测 检测结果由机器自动从标准曲线上查出
CEA检测技术的研究
01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
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01 癌胚抗原简介 清晰的内容设定 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
01
简介
癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）是一种存
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过渡页
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望 快捷的操作技巧
04 展望
癌胚抗原
自发现以来逐渐为人们所认识和了解
CEA检测技术的发展
一 二
利用癌胚抗原的许多 生物学特性提高肿瘤 的诊断率, 并结合其 它标记物联合诊断, 在肿瘤治疗中发挥重 要的作用
在于结肠癌、正常胚胎肠道、胰腺和肝内的一种蛋白多糖复合物，分子量为 180~200kDa。可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎 的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。
癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤的存在，对 大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好 的肿瘤标志物，但其特异性不强，灵敏度不高，对肿瘤早期诊断作用不明显。
时间分辨荧光免疫测定
1
游离的用镧系元素标记 的抗体与抗原发生特异 性的结合
检测步骤
抗原与包被的抗体发生 特异性结合
2
3
用时间分辨技术测量 荧光
- 14 -
03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
检测步骤
在包被孔中加入游离的用镧系元素标记的抗体，此抗体与已经结 荧光的强弱与镧系元素的量成正比，因此与抗原的量也呈正比， 在包被孔中有抗体被包被在孔的内表面，加入血清后，震荡使抗 合在孔表面上的抗原相结合，这样镧系元素就通过一个“双抗夹 这样可以测出血清中癌胚抗原的含量 原抗体完全结合，洗涤并甩干 心”化合物被固定在包被孔的表面，被固定的镧系元素的量与抗 原的量成一定的比例关系，洗涤除去未反应的游离的标记抗体
免疫分析法 基于抗原-抗 体的专一性和 灵敏性
传统
经典
免疫荧光技术 放射免疫技术 免疫酶技术
-9-
03 检测技术
癌胚抗原
荧光免 疫测定 荧光偏振免 疫测定 时间分辨荧 光免疫测定 酶联荧光免 疫测定
目前临床上用来检测CEA浓度的主要方法
酶联免疫 吸附测定 间接法 双抗体 夹心法 竞争结 合法
放射免 疫测定 核素分析 的高灵敏 度结合抗 原-抗体反 应的高特 异性
- 15 -
03 检测技术
液流荧光技术
主要原理
① 编码微球：用不同配比的两种红色分类荧光染料将直径为5 .6 μ m 的
聚苯乙烯微球染成不同荧光色 ，从而获得多达100 种荧光编码的微球 。 方式结合到特定的编码微球上，每个编码微球都对应相应的检测项 目。 或待检的基因扩增片断 ，形成复合物再与标记的荧光素发生结合反应。
② 共价交联：将 针对不同待测物的抗体分子或基 因探针以共价交联的
③结合反应：将针对不同待测物的荧光编码微球混合 ，加入待测物 质 ④激光分析：微球在流动的鞘液带动下单列依次通过红绿两束激光 ，红
激光用以判定微球的荧光编码 ，绿激光用以测定微球上报告分子的荧光强度 。
- 16 -
03 检测技术
液流荧光技术
总之：CEA并非一种癌的特异性抗原，而是癌的一种相关 抗原，缺少特异性，不能作为肿瘤的筛选指标，而是用于 肿瘤患者的监测，疗效的判断
-7-
过渡页
Transition Page
01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 简单的展示思路 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
03 检测技术
癌胚抗原
测定CEA含量的方法
电化学发光 免疫测定 灵敏的化学 发光分析 特异的免疫 测定
安培免疫 测定 电化学 信号的 变化
免疫金 标技术 胶体金 为标记 物
- 10 -
03 检测技术
荧光免疫测定
fluoroimmunoassay, FIA
荧光偏振免疫测定
分析 速度快
时间分辨荧光免疫测定
FIA
酶联荧光免疫测定
应用范 围窄 灵敏度 不高
-4-
过渡页
Transition Page
01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 巧妙的母版设计 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
02 临床意义
是一种广谱的肿瘤标志物，与消化系肿瘤 有关，也见于非消化系肿瘤和非肿瘤性疾 病，为低器官特异性肿瘤标志物 与肿瘤分化程度有关，分化程度差者浓 度低，分化程度高则浓度高，化疗或放 疗肿瘤细胞坏死或损伤使CEA释放，可 提高阳性率。
三
从传统的荧光、放射 性同位素和酶三大标 记技术逐渐转向更高 效、灵敏的电化学发 光免疫测定和安培免 疫测定
四
从最初单纯单纯用于 结直肠癌的诊断到目 前与多个肿瘤标志物 联合检测
随着微加工技术的日 趋成熟, 现代检测技 术也将向微型化、集 成化方向发展
- 20 -
- 21 -
CEA 浓度
动态 检测
-6-
可作为估计预后、复发、转移和考核治疗 效果的依据之一
02 临床意义
结肠癌患者70%～90%显示CEA高度阳性，血清CEA水平变化与结肠癌 Duke分期密切相关 其他消化道肿瘤也可检测到CEA阳性，如：大肠癌患者可达65%-75%的阳 性 肠道炎症、肾功不全、结肠息肉、肝硬化、慢性肝炎、闭锁性黄疸等也可导 致CEA水平增高 妊娠、大量吸烟也可引起CEA水平增高
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03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
主要原理
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是一种新型的
免疫分析技术，与一般的免疫荧光法不同，它所采用的示踪剂是镧系稀 土元素铕(Eu) 将镧系元素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类荧光物质有长荧光 寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后 再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除 非特异性本底荧光的干扰，最大限度的提高了测定方法的特异性和灵敏 度。
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03 检测技术
液流荧光技术
检测优点
多功能技术平台
测物进行定性和定量分析
▲ 通量大
▲ 主要通过可偶联的荧光编码微球与两束激光检测
来对被
，可对多种目的同时分析，大大提高工作效率
于反应进行
▲ 液相环境更有利于保持生物电分子的天然构象，也更有利
▲ 灵敏度特异度、准确度好
，只03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
检测仪器
光源（每秒闪烁1000次的氙灯），照射样品后即短暂熄灭 测定样品发出的长镧系荧光
▲ 时间分辨荧光计与一般的荧光分光光度计不同，采用脉冲 ▲ 以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再 ▲ 检测灵敏度可达0.2～1ng/ml
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03 检测技术
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检测方法
在检测孔中加入25 μ l样品稀释液，分别加入标准 品及检测标本 10μ I，充分混匀 依次加入针对不同待测物的抗体编码微球 10μ l， 充分混匀 ，37℃ 5 min 避光反应 依次加入 PE 标记的抗体 25 μ l，充分混匀 ，37 ℃ 60 min避光反应 每孔加入终止液 100 μ l， 混匀上机检测 检测结果由机器自动从标准曲线上查出