癌胚抗原

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03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
检测仪器
光源（每秒闪烁1000次的氙灯），照射样品后即短暂熄灭 测定样品发出的长镧系荧光
▲ 时间分辨荧光计与一般的荧光分光光度计不同，采用脉冲 ▲ 以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再 ▲ 检测灵敏度可达0.2～1ng/ml
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03 检测技术
1 2 3
检测方法
在检测孔中加入25 μ l样品稀释液，分别加入标准 品及检测标本 10μ I，充分混匀 依次加入针对不同待测物的抗体编码微球 10μ l， 充分混匀 ，37℃ 5 min 避光反应 依次加入 PE 标记的抗体 25 μ l，充分混匀 ，37 ℃ 60 min避光反应 每孔加入终止液 100 μ l， 混匀上机检测 检测结果由机器自动从标准曲线上查出
三
从传统的荧光、放射 性同位素和酶三大标 记技术逐渐转向更高 效、灵敏的电化学发 光免疫测定和安培免 疫测定
四
从最初单纯单纯用于 结直肠癌的诊断到目 前与多个肿瘤标志物 联合检测
随着微加工技术的日 趋成熟, 现代检测技 术也将向微型化、集 成化方向发展
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03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
主要原理
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是一种新型的
免疫分析技术，与一般的免疫荧光法不同，它所采用的示踪剂是镧系稀 土元素铕(Eu) 将镧系元素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类荧光物质有长荧光 寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后 再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除 非特异性本底荧光的干扰，最大限度的提高了测定方法的特异性和灵敏 度。
② 共价交联：将 针对不同待测物的抗体分子或基 因探针以共价交联的
③结合反应：将针对不同待测物的荧光编码微球混合 ，加入待测物 质 ④激光分析：微球在流动的鞘液带动下单列依次通过红绿两束激光 ，红
激光用以判定微球的荧光编码 ，绿激光用以测定微球上报告分子的荧光强度 。
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03 检测技术
液流荧光技术
CEA 浓度
动态 检测
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可作为估计预后、复发、转移和考核治疗 效果的依据之一
02 临床意义
结肠癌患者70%～90%显示CEA高度阳性，血清CEA水平变化与结肠癌 Duke分期密切相关 其他消化道肿瘤也可检测到CEA阳性，如：大肠癌患者可达65%-75%的阳 性 肠道炎症、肾功不全、结肠息肉、肝硬化、慢性肝炎、闭锁性黄疸等也可导 致CEA水平增高 妊娠、大量吸烟也可引起CEA水平增高
肿瘤标志物癌胚抗原
CEA检测技术的研究
01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
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01 癌胚抗原简介 清晰的内容设定 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
01
简介
癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）是一种存
时间分辨荧光免疫测定
1
游离的用镧系元素标记 的抗体与抗原发生特异 性的结合
检测步骤
抗原与包被的抗体发生 特异性结合
2
3
用时间分辨技术测量 荧光
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03 检测技术
时间分辨荧光免疫测定
检测步骤
在包被孔中加入游离的用镧系元素标记的抗体，此抗体与已经结 荧光的强弱与镧系元素的量成正比，因此与抗原的量也呈正比， 在包被孔中有抗体被包被在孔的内表面，加入血清后，震荡使抗 合在孔表面上的抗原相结合，这样镧系元素就通过一个“双抗夹 这样可以测出血清中癌胚抗原的含量 原抗体完全结合，洗涤并甩干 心”化合物被固定在包被孔的表面，被固定的镧系元素的量与抗 原的量成一定的比例关系，洗涤除去未反应的游离的标记抗体
在于结肠癌、正常胚胎肠道、胰腺和肝内的一种蛋白多糖复合物，分子量为 180~200kDa。可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎 的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。
癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤的存在，对 大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好 的肿瘤标志物，但其特异性不强，灵敏度不高，对肿瘤早期诊断作用不明显。
免疫分析法 基于抗原-抗 体的专一性和 灵敏性
传统
经典
ຫໍສະໝຸດ Baidu
免疫荧光技术 放射免疫技术 免疫酶技术
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03 检测技术
癌胚抗原
荧光免 疫测定 荧光偏振免 疫测定 时间分辨荧 光免疫测定 酶联荧光免 疫测定
目前临床上用来检测CEA浓度的主要方法
酶联免疫 吸附测定 间接法 双抗体 夹心法 竞争结 合法
放射免 疫测定 核素分析 的高灵敏 度结合抗 原-抗体反 应的高特 异性
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 巧妙的母版设计 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
02 临床意义
是一种广谱的肿瘤标志物，与消化系肿瘤 有关，也见于非消化系肿瘤和非肿瘤性疾 病，为低器官特异性肿瘤标志物 与肿瘤分化程度有关，分化程度差者浓 度低，分化程度高则浓度高，化疗或放 疗肿瘤细胞坏死或损伤使CEA释放，可 提高阳性率。
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望 快捷的操作技巧
04 展望
癌胚抗原
自发现以来逐渐为人们所认识和了解
CEA检测技术的发展
一 二
利用癌胚抗原的许多 生物学特性提高肿瘤 的诊断率, 并结合其 它标记物联合诊断, 在肿瘤治疗中发挥重 要的作用
4
5
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03 检测技术
液流荧光技术
检测优点
多功能技术平台
测物进行定性和定量分析
▲ 通量大
▲ 主要通过可偶联的荧光编码微球与两束激光检测
来对被
，可对多种目的同时分析，大大提高工作效率
于反应进行
▲ 液相环境更有利于保持生物电分子的天然构象，也更有利
▲ 灵敏度特异度、准确度好
，只需要微量样本即可进行检测
总之：CEA并非一种癌的特异性抗原，而是癌的一种相关 抗原，缺少特异性，不能作为肿瘤的筛选指标，而是用于 肿瘤患者的监测，疗效的判断
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01 癌胚抗原简介 02 癌胚抗原的临床意义 简单的展示思路 03 癌胚抗原的检测技术
04 展望
03 检测技术
癌胚抗原
测定CEA含量的方法
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03 检测技术
液流荧光技术
主要原理
① 编码微球：用不同配比的两种红色分类荧光染料将直径为5 .6 μ m 的
聚苯乙烯微球染成不同荧光色 ，从而获得多达100 种荧光编码的微球 。 方式结合到特定的编码微球上，每个编码微球都对应相应的检测项 目。 或待检的基因扩增片断 ，形成复合物再与标记的荧光素发生结合反应。
电化学发光 免疫测定 灵敏的化学 发光分析 特异的免疫 测定
安培免疫 测定 电化学 信号的 变化
免疫金 标技术 胶体金 为标记 物
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03 检测技术
荧光免疫测定
fluoroimmunoassay, FIA
荧光偏振免疫测定
分析 速度快
时间分辨荧光免疫测定
FIA
酶联荧光免疫测定
应用范 围窄 灵敏度 不高