食品中防腐剂苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定.
教案3 食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定
项目五用高效液相色谱法检测物质任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成教学内容苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。
但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。
表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准抑制物质腐败的药剂。
即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。
重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。
对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。
在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。
特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。
对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。
我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。
防腐剂应具备的几个条件：1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性2、低浓度下具有较强的抑菌作用3、本身不应具有刺激气味和异味4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用5、价格合理，使用较方便。
防腐剂的作用机理：1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。
2、防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。
由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，从而具有抗微生物的作用。
3、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。
4、作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。
食品中苯甲酸钠、山梨酸钾的测定数据处理
图-1标准物质色谱图表-1标准物质色谱图积分结果积分结果序号峰名称保留时间峰面积峰高相对峰面积相对峰高样品量min mAU*min mAU % %1 2.780 1.436 8.774 0.87 3.99 n.a.2 3.090 0.068 0.304 0.04 0.14 n.a.3 3.893 0.069 0.267 0.04 0.12 n.a.4 山梨酸钾11.583 59.573 94.722 36.17 43.02 0.15565 苯甲酸钠16.460 103.564 116.092 62.88 52.73 0.1553总和: 164.710 220.159 100.00 100.00表-2 标准溶液的测定峰面积（单位:mAU*min）0.02mg/ml 0.04mg/ml 0.08mg/ml 0.16mg/ml 0.32mg/ml 山梨酸钾 5.771 14.91 28.717 59.573 123.639 苯甲酸钠10.277 24.129 52.067 103.564 214.488山梨酸钾图-3 待测物质色谱图表-4 待测物质积分结果分析积分结果序号峰名称保留时间峰面积峰高相对峰面积相对峰高样品量min mAU*min mAU % %1 1.683 2.843 3.058 4.00 0.57 n.a.2 2.243 5.267 93.777 7.41 17.38 n.a.3 2.290 14.124 174.078 19.88 32.27 n.a.4 2.360 13.416 115.601 18.89 21.43 n.a.5 2.630 1.363 17.059 1.92 3.16 n.a.6 2.697 0.562 11.160 0.79 2.07 n.a.7 2.830 0.243 3.887 0.34 0.72 n.a.8 2.933 1.076 10.714 1.51 1.99 n.a.9 2.980 0.959 9.079 1.35 1.68 n.a. 10 3.467 2.141 5.633 3.01 1.04 n.a. 11 3.980 0.660 4.566 0.93 0.85 n.a. 12 4.0674.6204.666 6.50 0.86 n.a. 13 山梨酸钾 11.397 11.04838.135 15.55 7.07 0.0289 14 11.640 12.716 48.085 17.90 8.91 n.a. n.a.苯甲酸钠n.a. n.a.n.a.n.a.n.a.n.a. 总和:71.037 539.499 100.00 100.00待测物质的积分结果中，保留时间为11.397min 有检测信号，与标准物质的积分结果进行对比，此处为山梨酸钾的检测信号，说明待测物质中含有山梨酸钾。
气相色谱法测定食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾及注意事项
气相色谱法测定食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾及注意事项吴惠丽【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)021【总页数】1页(P79-79)【作者】吴惠丽【作者单位】焉耆回族自治县质量与计量检测所【正文语种】中文食品试样酸化后，利用苯甲酸、山梨酸易溶于乙醚的性质，用乙醚将食品中的苯甲酸、山梨酸提取出来，在气相色谱仪上进行分离测定，根据标准曲线求出食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸和山梨酸钾的含量。
乙醚：不含过氧化物；石油醚：沸程30～60 ℃；盐酸；无水硫酸钠；盐酸（1∶1）：量取100 mL水，一边摇动，一边缓缓加入100 mL盐酸，混匀，冷却至室温备用。
氯化钠酸性溶液（40 g/L）：称取4.0 g氯化钠，加水溶解，并定容至100 mL，然后加数滴盐酸（1∶1）酸化。
色谱柱：固定液AT添加剂玻璃毛细柱，柱长15 m，内径0.53 mm，液膜厚度：1.00 μm；柱温：150 ℃、汽化温度：250 ℃、检测温度260 ℃。
苯甲酸、山梨酸溶液标准物质食品防腐剂苯甲酸溶液标准物质，标准值1.00 mg/mL。
食品防腐剂山梨酸溶液标准物质，标准值1.00 mg/mL。
制备苯甲酸、山梨酸混合标准使用液分别准确吸取0.4 mL苯甲酸溶液标准物质和0.4 mL山梨酸溶液标准物质混合置于1个10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶剂稀释至刻度，此标准混合使用液含苯甲酸或山梨酸为40 μg/mL。
以此类推，再分别准确吸取0.8、1.2、1.6、2.0 mL和2.4 mL苯甲酸溶液标准物质和山梨酸溶液标准物质，混合后置于一组10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶剂稀释并定容至刻度，混匀备用。
盖好瓶塞，防止溶剂挥发造成浓度变化，同时控制实验室温度为20 ℃。
此标准混合使用液系列中，苯甲酸或山梨酸的浓度分别为40、80、 120、160、200μg/mL和240μg/mL。
高效液相色谱法测定食醋和酱油中 苯甲酸钠和山梨酸钾含量实验报告【专业版】
高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量实验报告【专业版】(文档可以直接使用，也可根据实际需要修订后使用,可编辑放心下载）高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量摘要：【目的】用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。
【方法】以Hyperclone BDS C18柱(150×4.60 mm，5μm，phenomenex)为色谱柱；检测波长215~230nm，进样量10μL，流动相：甲醇：0.02mol/L 乙酸铵(35：65)，流量0.8mL/min，柱温30℃【结果】：食醋中的苯甲酸钠含量为127.15899ug/mol，酱油中的苯甲酸钠含量为723.60033ug/mol，未见则出山梨酸钾。
？？？？【结论】：高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点，所以数据准确，用外标法计算结果操作简单，计算方便，得出样品中苯甲酸钠的含量。
关键词：高效液相色谱法外标法苯甲酸钠山梨酸钾一、前言苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。
山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。
本实验采用高效液相色谱法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
苯甲酸结构式：山梨酸钾结构式：二、实验目的和实验原理2.1.实验目的：（1）了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，以及初步掌握其操作技能；（2）学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线定量方法；（3）掌握RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的测定方法；2.2．实验原理：将样品加热去除其中的二氧化碳和乙醇，用（1+1）氨水调pH值近中性，过滤后进高效液相色谱仪，进行反相色谱C18柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性定量分析。
三、仪器与试剂及试剂处理3.1. 仪器：高效液相色谱仪【高压输液泵LC-6A，检测器SPD-10A，保温箱CPD-10AS，进样阀7725I】；电子天平；纯水仪；离心机；超声波清洗机。
食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的测定
食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的测定专业：食品科学与工程教育姓名：蒋翠莲学号：20105494 指导老师：白绮摘要:[目的]用高效液相色谱法测酱油和食醋中山梨酸钾和苯甲酸钠的含量。
【方法】采用RP-HPLC法以C-18不锈钢柱（150mm）为色谱柱；流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）=5:95；柱温30℃；流速1.0mol/min ；检测波长230nm；进样量(标准进样量：2.5 ，5 ，7.5 ，10 ，15 ,20ul；样品进样量:5 ul)。
【结果】酱油中的山梨酸钾含浓度为0.069mg/ml；苯甲酸钠为0.0146mg/ml；醋中的山梨酸钾为0.00141mg/ml苯甲酸钠为0.00155mg/ml。
结论：高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点 所以数据准确 用外标法计算结果操作简单 计算方便 得出样品中苯甲酸钠的含量。
关键词：高效液相色谱法苯甲酸钠山梨酸钾前言：苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。
山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。
本实验采用RP-HPLC法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便，快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
1 实验部分1.1实验目的了解高效液相色谱仪基本结构和使用原理，操作过程。
学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线测定方法。
学习RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量的测定方法。
1.2 仪器与试剂LC-6A/10A 高效液相色谱处理系统：由日本岛津公司提供；Milli-Q超纯水处理器；HS6150D型超声波处理器；2XZ-1型旋片真空泵，由浙江黄岩求精真空泵厂制造。
甲醇：HPLC，500ml，由Guangdong Ghuanghua Sol-Techco，Led提供；氨水：AR，500ml，由成都市科龙化工厂提供；碳酸氢钠（优级纯）纯度99.5%，500g 由成都市科龙化工厂提供；苯甲酸钠：AR 纯度99.5%，250g 由成都科龙化工厂提供；山梨酸钾：AR 纯度98.0%，由成都市科隆化工厂提供。
苯甲酸和山梨酸的测定
食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。
食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。
目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。
食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。
如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。
特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。
另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。
在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。
苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。
日本的进口食品中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。
但因价值低廉，在中国仍作为主要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。
但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。
因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M．Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测，实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法，但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。
超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸(钠)、山梨酸(钾)和糖
超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和糖精钠的含量发表时间：2018-07-09T17:23:54.363Z 来源：《基层建设》2018年第14期作者：钟锐文[导读] 摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。
广州市澳键丰泽生物科技有限公司广东广州 510760摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。
关键词：超高效液相；糕点；苯甲酸（钠）；山梨酸（钾）；糖精钠Simultaneous Determination of Benzoic Acid（Sodium），Sorbic Acid（Potassium），and Saccharin Sodium in Cakes by Ultra Performance Liquid ChromatographyRuiwen Zhong（Guangzhou Alchemy Biotechnology Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong 510760，China） Abstract：The benzoic acid（sodium），sorbic acid（potassium），dehydroacetic acid（sodium），acesulfame potassium，and sodium saccharin in the cake are extracted with water，delipidated，precipitated protein，centrifuged，and filtered，followed by ultra-high performance liquid chromatography.The average recoveries of the standard samples were 99.01%~99.36%，99.51%~101.58%，and 98.90%~99.73%，respectively.Key words：Ultra high performance liquid phase；Pastry；Benzoic acid（sodium）；Sorbic acid（potassium）；Sodium saccharin食品安全是当今关系民生的重大问题，直接关系到广大人民群众的身体健康，而食品的色香味取决于在食品加工过程中使用的适量的食品添加剂。
食品中苯甲酸、山梨酸及其钠盐的液相色谱法测定
食品中苯甲酸、山梨酸及其盐的测定
2020/11/12
6
我国食品苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）使用量标准
名称 苯甲酸、 苯甲酸钠
山梨酸、 山梨酸钾
2020/11/12
使用范围
最 大 使 用 量 备注 （g/kg)
酱油、醋、果汁（味）型饮料、果酱（不包含 1.0 罐头）
葡萄酒、果子酒、琼脂软糖
0.8
碳酸饮料
0.2
低盐酱菜、酱类、蜜饯
0.5
苯甲酸和苯甲酸钠同时 使用时，以苯甲酸计， 不得超过最大允许使用 量；以苯甲酸计，塑料 桶装浓缩果蔬汁不得超 过2g/kg
食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁
2.0
酱油、食醋、果酱、氢化植物油、软糖、鱼干 1.0 制品、即食豆制食品、糕点、馅、面包、蛋糕、 月饼、即食海蜇、乳酸菌饮料 低盐酱菜、酱类、蜜饯、果汁（味）型饮料、 0.5 果冻、胶原蛋白肠衣
提取、纯化后，也可利用其化学结构特性采用紫外吸收光谱法进行测定。
2020/11/12
8
食品中苯甲酸、山梨酸及其盐的测定
❖ GB/T5009·29—2003 ❖ 第一法 气相色谱法 ❖ 第二法 高效液相色谱法 ❖ 第三法 薄层色谱法
❖ 本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中苯甲酸、山梨酸 含量的测定方法。
葡萄酒、果酒
0.6
以山梨酸计，食品工业 用塑料桶装浓缩果蔬汁 不得超过2g/kg；山梨酸 和山梨酸钾同时使用时， 以山梨酸计，不得超过 最大允许使用量
果、蔬保鲜、碳酸饮料
பைடு நூலகம்
0.2
肉、鱼、蛋、禽制品
0.075
食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁
2.0
7
食品中苯甲酸、山梨酸及其盐的测定
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/，糖精钠的检测参照GB/T，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2样品前处理的注意事项GB/和GB/在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L) ml，加入%亚铁氰化钾溶液，20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL 测定。
用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。
3检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。
原因如下：液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。
下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。
一、方法原理：该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。
主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。
二、仪器设备：液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。
三、操作步骤：1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。
然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。
2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。
可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。
3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。
常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。
4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。
四、常见问题及解决方法：1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。
2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。
这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。
3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。
4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。
酸牛乳中山梨酸、苯甲酸的测定
6、山梨酸酸、苯甲酸混合标准贮备液 （2.000mg/ml）：准确秤取山梨酸、苯甲 酸各0.2000g，置于100ml容量瓶中，用石 油醚+乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释 至刻度。 7、山梨酸、苯甲酸混合标准使用液：分别吸 取0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml、 1.25ml山梨酸、苯甲酸混合标准贮备液， 用石油醚+乙醚（3+1）混合溶剂稀释定容 至10ml，此溶液每毫升含有50ug，100ug， 200ug，250ug山梨酸或苯甲酸。
酸牛乳中山梨酸、苯甲酸的测 定（气相色谱法）
物质介绍
• 山梨酸和山梨酸钾是限量添加的食品添加 剂，苯甲酸和苯甲酸钠是目前国家已不允 许添加的食品防腐剂。苯甲酸和苯甲酸钠 对细菌、霉菌等有较强的抑制作用，特别 是在酸性食品中效果更好，当ph>4时效果 明显下降；山梨酸和山梨酸钾适用于ph<5 的食品防腐，对于霉菌、酵母菌、需氧菌 的抑制均有效，但对厌氧菌与噬酸乳杆菌 几乎无效。山梨酸是不饱和脂肪酸，进入 人体后，直接参与脂肪代谢，被氧化成二 氧化碳和水，比苯甲酸更为安全。
计算
• 山梨酸（或苯甲酸的含量，g/kg） =(A*1000*1000)/ （m*0.2*V2\V1*1000*1000)
由测得苯甲酸的量乘以1.18，即为样品中苯 甲酸钠的含量。 结果的表达：报告算术平均值的2位有效数字。 允①该方法山梨酸回收率81%~98%，相对标准 偏差2.4%~8.5%；苯甲酸回收率为 92%~102%，相对标准偏差0.7%~9.9%。 ②该方法也适用于酱油中山梨酸、苯甲酸含 量的测定。
原理
样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸， 用带氢火焰离子化检测器的气相测谱仪进 行分离测定，与标准系列比较定量。
苏秀琴--紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠.
甘肃联合大学学生毕业论文题目：紫外分光光度法同时测定饮料中的苯甲酸钠和山梨酸钾作者：苏秀琴指导老师：展惠英化工学院学院系工业分析与检验专业 2010 级三年制工业分析与检验班2012年 6 月 20 日紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠内容摘要：介绍了饮料中山梨酸钾和苯甲酸钠的紫外分光光度法同时测定方法。
实验表明该方法可快速准确地测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠，样品中山梨酸钾最小检出限为0.00067g/L,回收率为92%-94%;苯甲酸钠最小检出限为0.0014g/L,回收率为94%-96%。
关键词：山梨酸钾；苯甲酸钠；同时测定；紫外分光光度法一﹑实验目的(一)通过实验了解食品防腐剂的紫外光谱吸收特性,并利用这些特性对食品中所含的防腐剂进行定型鉴定.(二)掌握工作曲线的制作方法，并对食品中防腐剂的含量进行定量测定.二﹑实验原理食品添加剂对于改善食品色﹑香﹑味，延长食品保质期具有重要作用.山梨酸和苯甲酸及它们的盐在饮料中使用较为广泛，但都具有一定的毒性，其中苯甲酸还是防腐剂中使用量最大者.监测它们在饮料中的使用量，对于保障人们身体健康具有重要的现实意义.为了防止食品在储存﹑运输过程中发生变质﹑腐败，常在食品中添加少量防腐剂.防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸和山梨酸以及他们的钠盐﹑钾盐是食品标准允许使用的两种主要防腐剂.苯甲酸具有芳烃结构，在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带，山梨酸具有α不饱和羟基结构，在波长250nm处有β跃迁的K吸收带，因此根据他们的紫外吸收光谱特征可以对他们进行定性鉴定和定量测定.由于食品中防腐剂的用量很少，一般在千分之一左右，同时食品中其他成分可能产生干扰.因此需要预先将防腐剂与其他成分分离，并经提纯浓缩后进行测定.常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等.本实验可以采用溶剂萃取的方法，用乙醚将防腐剂从样品中提取出来，在经碱性水溶液处理及乙醚萃取以达到分离﹑提纯的目的.三﹑试剂山梨酸钾标准溶液:0.0052㎎/ml﹑苯甲酸钠标准溶液：0.0052㎎/ml﹑盐酸（1:1）；乙醚（AR）﹑饱和NaCl溶液，以上试剂为分析纯，水为重蒸馏水，7%的葡萄糖饮料.四﹑仪器UV-1201紫外分光光度计五﹑实验部分(一)实验方法取一定量实验所用溶液于分液漏斗中，加入20ml饱和NaCl溶液，再加入10ml 盐酸（1：1）和25ml乙醚充分振摇5min后静置弃去无机相，以试剂空白为参比测吸光度。
食品添加剂的测定—防腐剂的测定
防腐剂的主要种类及特性
目前，我国食品加工中允许使用的防腐剂主要有苯甲酸及其盐类、山梨酸及其 盐类、对羟基苯甲酸酯类、脱氢乙酸等，最常用的是前两种，常用于酱油、食醋、 酱菜、面酱、蜜饯类等食品中。
因为苯甲酸和山梨酸难溶于水，因此常用的防腐剂是苯甲酸钠和山梨酸钾。
防腐剂的主要种类及特性
1.苯甲酸钠 苯甲酸钠为酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌和抑菌作用，其防腐最佳pH为2.54.0。苯甲酸钠亲油性较大，易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞膜通透性，抑制其 对氨基酸的吸收。进入细胞体内电离酸化细胞内的储碱，抑制细胞的呼吸酶系的活性， 从而起到防腐作用。
操作步骤
吸取试样处理液2.0mL于相应的 10mL比色管中，按照标准溶液测定 方法，于530nm处测定吸光度，以 标准曲线定量，计算样品中山梨酸 （钾）含量。
Part 04
结果计算
结果计算
式中：X1---样品中山梨酸钾的含量，g/kg； X2---样品中山梨酸的含量，g/kg； ρ---试液中含山梨酸钾的浓度，mg/ml； m---称取匀浆相当于试样质量，g；
2.山梨酸钾 山梨酸钾也是酸性防腐剂，具有较高的抗菌性能，主要是通过抑制微生物体内 的脱氢酶系统，从而达到抑制微生物的生长和起防腐作用，能抑制细菌、霉菌和酵 母菌的生长，效果显著。其效果随pH的升高而减弱，pH为3时抑菌作用最强，pH达 到6时仍有抑菌能力。
防腐剂的主要种类及特性
2.山梨酸钾 山梨酸钾易溶于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。山梨酸是一种不 饱和脂肪酸，在机体内可参加正常的新陈代谢，最后被氧化为二氧化碳和水。因此， 山梨酸钾的毒性远低于其他防腐剂，几乎没有毒性，安全性高于苯甲酸钠。
仪器与试剂
重铬酸钾-硫酸混合液：以0.02mol/L重铬酸钾和0.15mol/L硫酸以1：1 的比例混合均匀，备用。 山梨酸钾标准溶液：准确称取250mg山梨酸钾于250mL容量瓶中，用蒸 馏水溶解并稀释至刻度，该溶液为1mg/mL的山梨酸钾标准溶液。 山梨酸钾标准使用液：准确移取山梨酸钾标准溶液25mL于250mL容量 瓶中，稀释至刻度，充分摇匀，使之成为0.1mg/mL的山梨酸钾标准使 用液。
食品中防腐剂类检测标准及方法
流动相：甲醇：乙酸铵（0.02mol/L）5:95检测波长：230nm
3
对羟基苯甲酸酯类
GB/T 5009.29-2003食品中苯甲酸脂类的测
疋
气相/液相？
4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
蜂王浆中苯甲酸、山 梨酸、对羟基苯甲酸 酯类检验方法
SN/T 1303-2003蜂王浆中苯甲酸、山梨 酸、对羟基苯甲酸酯类检验方法
液相色谱
GB/T 5009.29-2003食
品中山梨酸、苯甲酸的 测定
气相色谱
液相色谱
薄层色谱法
3
对羟基苯甲酸 酯类
经表面处理的鲜水果、果酱、焙烤食品馅料及 表面用挂浆、醋、酱油、碳酸饮料等。
GB/T 5009.31-2003食 品中苯甲酸脂类的测定
气相色谱
4
双乙酸钠
豆干类、原粮、大米、糕点、熟肉制品、膨化 食品、调味品等。
流动相A:40%甲醇水溶液；B:甲醇 检测波长：苯甲酸、山梨酸（230nm）
对羟基苯甲酸酯类（248nm）
5
纳他霉素
GB/T 21915-2008食品中纳他霉素的测定
液相色谱
流动相：甲醇+水+乙酸（60+40+5） 检测波长：305nm
6
双乙酸钠
GB/T 23383-2009食品中双乙酸钠的测定
液相色谱
食品中防腐剂类检测标准及方法
序号
防腐剂名称
食品名称
检测标准
第一法
第二法
第三法
1
苯甲酸及其钠 盐
风味冰、冰棍、果酱、蜜饯凉果、腌渍的蔬菜、 醋、酱油、果蔬汁、饮料、果酒等。
GB/T 5009.29-2003食
品中山梨酸、苯甲酸的 测定
食品中防腐剂的测定
文献综述论文题目：食品中防腐剂的测定方法学院名称：化学工程学院专业：化学工程与工艺班级：姓名：学号指导教师：2012年3月14日摘要：食品防腐剂作为食品添加剂的一个类别，可以抑制微生物的生长，从而保证食品在保质期内不发生腐败变质，并延长食品的保存期，其在食品工业中已被广泛应用。
本文主要介绍了山梨酸和苯甲酸等食品防腐剂的测定方法。
关键词：食品防腐剂气相色谱法液相色谱法1 引言由于食品在生产、运输、销售及贮存的过程中，会因物理、化学、酶及生物等因素引起腐败变质，其中微生物作用最为严重。
食品中含有丰富的营养成分及大量的水分，使微生物易于生长，微生物的生长是最终导致食品腐败变质的根本原因[1]。
为了防止食品腐败变质，可通过腌渍、罐藏、冷藏等多种方法来保藏食品。
但在一定条件下，为了保证其在保质期内不发生腐败变质，延长食品的货架期，防腐剂作为食品添加剂之一，在食品工业中广泛应用。
我国目前普遍使用的防腐剂主要有三类：苯甲酸与苯甲酸钠、山梨酸与山梨酸钾和对经基苯甲酸醋类。
随着经济与社会的发展，食品安全问题越来越突出，尤其是对食品加工中使用防腐剂的安全性问题。
为保障食品防腐剂能得到正确的使用与发展，多方面力量应共同努力，发挥各自的积极作用。
本文主要介绍了山梨酸和苯甲酸等食品防腐剂的测定方法。
2防腐剂的测定方法2.1 气相色谱内标法山梨酸和苯甲酸是常甩的食品防腐剂，广泛使用在饮料、酱油等多种食品中，它们具有杀死微生物或抑制微生物增殖的作用，但过量对人体有一定毒性，国家标准详细规定了各类食品防腐剂最大使用限量及其检测方法，该检测方法采用标准曲线定量法，配制一系列不同浓度山梨酸和苯甲酸标准溶液，用气相色谱仪测定其标准曲线，与样品色谱比较定量[2]。
选用癸酸作内标物，气相色谱内标法同时测定食品中防腐剂山梨酸和苯甲酸，定量准确，标准回收率均在96%~103 %之间，样品测定的变异系数小，山梨酸为0.529 %，苯甲酸为0.311% [2]。
防腐剂检测
防腐剂检测目前常用的食品防腐剂检测可分为两大类，即有机防腐剂检测和无机防腐剂检测。
我国允许的有机防腐剂检测种类主要包括苯甲酸及其钠盐，山梨酸及其钾盐，脱氢乙酸和乙酸衍生物;无机防腐剂检测种类包括亚硫酸及其盐，过氧化氢，游离氯和次氯酸盐等。
食品防腐剂的检测方法有很多，主要针对于几种常见防腐剂的检测方法如下：1、防腐剂-过氧化氢检测方法目前，国内外检测过氧化氢的常用方法有两种，分别是化学溶剂滴定分析法和仪器分析法。
（1）化学滴定法我们国家常用的检测方法是化学溶剂滴定分析法，如高锰酸钾滴定法、间接碘量滴定法、硫酸铈滴定法。
高锰酸钾滴定法最为简单，成本较低，而且由于自带颜色，不需要使用其他指示剂，但有些食品中含有某些有机物，会被高锰酸钾氧化，从而导致检测结果出现较大的误差。
间接碘量法也较为经济，过氧化氢酶的使用量较少，但由于要保证酶的活性，试验的环境选择较为严格，比较难控制，测定的结果也极易出现误差。
硫酸铈法测定结果比较的准确，硫酸铈标准溶液稳定，试验过程中反应比较少，不生成中间产物，环境要求也不高，但是成本较高。
总而言之，化学滴定分析法存在众多不足，费时费料，试验终点颜色变化不明显，不能进行微量分析。
（2）仪器分析法食品中检测过氧化氢常用的仪器分析法有钛溶液分光光度法、原子吸收法、荧光分析法、色谱法等等。
钛溶液分光光度法简单易行，便于操作，准确度高，主要利用了酸性溶液中过氧化氢与钛离子发生化学反应，生成稳定的橙色的络合物，在一定浓度范围内，这种络合物的吸光度与样品中过氧化氢含量呈现线性关系，从而可以计算出过氧化氢的含量。
原子吸收法相对而言操作比较复杂，试验条件也比较苛刻，检测结果容易受到影响，形成误差。
荧光分析法是常见的灵敏度高、选择性强的分析方法，通过双氧水和二价铁离子在酸性条件下发生反应生成羟基自由基，然后与本身不产生荧光的苯甲酸反应生成荧光物质羟基苯甲酸，根据荧光反应间接测出过氧化氢含量。
2、防腐剂-山梨酸、苯甲酸检测方法山梨酸、苯甲酸在食品防腐处理中使用非常广泛，厨房调味品酱油、饮品水果汁等食品中山梨酸、苯甲酸的检测方法主要使用气相色谱法以及高效液相色谱法。
食品中防腐剂苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定.
实验 9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠和山梨酸(钾的测定薄层色谱法一、实验目的掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。
学会制备聚酰胺薄层板。
二、仪器吹风机层析缸玻璃板 10×18cm 玻璃板 50×80 cm 微量注射器10μL喷雾器三、试剂与试样聚酰胺粉 200目乙醚可溶淀粉无水硫酸钠盐酸溶液6mol • L-14%氯化钠酸性溶液于 4%氯化风俗溶液中加入少量mol • L-1盐酸溶液展开剂:(1正丁醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2(2异丙醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2显色剂:0.04%溴甲酚紫的 50%乙醇溶液用0.1mol • L-1氢氧化钠调至 PH=8苯甲酸标准溶液:精密称取苯甲酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于 2mg 苯甲酸。
山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于 2mg 山梨酸。
试样酱油、水果汁、果酱等四、实验步骤1、试样提取—试样溶液的制备称取 2.5g 混合均匀的试样,置于 25mL 带塞量筒中,加0.5mL , 6 mol• L-1盐酸酸化,用乙醚提取两次 (15mL 、 10mL 每次振摇 1min , 将上层乙醚提取液吸入另一25mL 带塞量筒中, 合并乙醚提取液。
用 3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静置15min ,乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于 25mL 容量瓶中。
加乙醚稀释至刻度,摇匀。
吸取 10.00mL 乙醚提取液分两次置于 10mL 离心管中, 在约 40℃水浴上除去乙醚, 加入 0.1mL 乙醇溶解残渣,制成试样测定液备用。
2、聚酰胺粉板的制备称取 1.6g 聚酰胺粉,加 4g 可溶性淀粉,加 15mL 水,研磨 3~5min,使其均匀即可涂10×18cm 厚度 0.3mm 的薄层板两块。
食品中山梨酸、苯甲酸的测定
3 分析步骤
• 结果计算： • 试样中山梨酸或苯甲酸(X)以毫克每千克表示，按式(3-1)计算：
• • • • • • • • •
式中： X——试样中山梨酸或苯甲酸的含量，mg/kg； A——测定用试样液中山梨酸或苯甲酸的质量，μg； V1——加入石油醚-乙醚（3+1)混合溶剂的体积，mL； V2——测定时进样的体积，μL； m——试样的质量，g； 5——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL； 25——试样乙醚提取液的总体积，mL。
1
2015-3-23
（1）苯甲酸
• 近年来由于它的毒性，有用山梨酸代替的倾向。 我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB27602011）规定：最大使用量根据不同食品要求不 同，其范围是0.2～2.0g/kg。其中碳酸饮料和 配制酒为0.2g/kg；腌制的蔬菜、酱及酱制品、 蜜饯（凉果）类为0.5g/kg；复合调味料为 0.6g/kg；葡萄酒、果酒、乳脂糖果、凝胶糖果 为0.8g/kg；酱油、醋、果酱（不包括罐头）、 果汁（味）冰、果蔬汁（肉）饮料、风味饮料 为1.0g/kg；食品工业用浓缩果蔬汁为2.0g/kg。
（2）山梨酸
• 山梨酸结构式为 • 别名花楸酸，分子量为112.13，是具有特殊 气味的白色单斜结晶。熔点132～135℃， 室温时，在100g水中能溶解0.16g山梨酸 （20℃），在100g无水乙醇或100g冰乙酸 中能溶解13g山梨酸，在100g油中能溶解 0.5～1.0g山梨酸
（2）山梨酸
• 山梨酸的急性毒性，大鼠经口LD50为 10.5±1.96g/kg体重，山梨酸和其他防腐剂同时使 用时不改变其急性毒性。用含10％山梨酸的饲料喂 养大鼠42天，没有发现有害影响。用此剂量的山梨 酸喂养大鼠120天，引起体重增加及肝增重，但动 物的繁殖能力仍正常。用5%山梨酸的饲料喂养大鼠 和狗90天，未发现有害影响。重量增加可能是由于 山梨酸的热能的利用。其ADI为0～ 25mg/kg(bw)(FAO/WHO,1994)。 • FAO/WHO联合食品添加剂委员会将其列为A类，可 以安全使用的食品添加剂。FDA评定为GRAS，是 目前较为安全的防腐剂。
防腐剂的测定方法
（GB/T 5009. 苯甲酸钠易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂，与酸作用生成苯甲酸。
（GB/T 5009.29—2003） 高效液相色谱法——同时测这两种及糖精钠。
知识点：几种常用防腐剂的检测
苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定方法： 一、苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的检测 为白色有丝光的鳞片或针状结晶，微溶于水， 使用不便，实际生产多用其钠盐。
情景六：食品中添加剂的检测
一人体后，大部分与甘氨酸结合形成无害的马尿酸，其余部分与葡萄糖醛酸结合生成苯甲酸葡萄糖醛酸甙从尿中排出，不在人体积累。
苯甲酸进入人体后，大部分与甘氨酸结合形成无害的马尿酸，其余部分与葡萄糖醛酸结合生成苯甲酸葡萄糖醛酸甙从尿中排出，不在人体积累。
滴定法测苯甲酸 （适于样品中苯甲酸 含 0.1 %以上）
苯甲酸 微溶于水，用乙醚从样品中提取，蒸去乙醚， 以标准NaOH滴定。
若样品中是苯甲酸钠，先让其与酸作用成苯甲酸， 再按上法测定。
水。
山梨酸钾易溶于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。 比苯甲酸更安全，在体内最后成CO2和水。
苯甲酸及其钠盐主要用于酸性食品的防腐，在pH 2. 滴定法测苯甲酸 （适于样品中苯甲酸 含 0. 山梨酸又名花楸酸，(CH3CH=CHCH=CHCOOH） 山梨酸又名花楸酸，(CH3CH=CHCH=CHCOOH）
5时，抑茵效果明显减弱。
气相色谱法——氢焰检测器，两种同时测。 山梨酸钾易溶于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。
气相色谱法——氢焰检测器，两种同时测。
高5时效，液抑相茵色效谱果法明—显—减同高弱时。测效这两液种及相糖精色钠。谱法——同时测这两种及糖精钠。 薄层色谱法。 山梨酸钾易溶于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。
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实验 9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠和山梨酸(钾的测定
薄层色谱法
一、实验目的
掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。
学会制备聚酰胺薄层板。
二、仪器
吹风机层析缸玻璃板 10×18cm 玻璃板 50×80 cm 微量注射器10μL
喷雾器
三、试剂与试样
聚酰胺粉 200目乙醚可溶淀粉
无水硫酸钠盐酸溶液6mol • L-1
4%氯化钠酸性溶液于 4%氯化风俗溶液中加入少量mol • L-1盐酸溶液
展开剂:(1正丁醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2
(2异丙醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2
显色剂:0.04%溴甲酚紫的 50%乙醇溶液用0.1mol • L-1氢氧化钠调至 PH=8
苯甲酸标准溶液:精密称取苯甲酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于 2mg 苯甲酸。
山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于 2mg 山梨酸。
试样酱油、水果汁、果酱等
四、实验步骤
1、试样提取—试样溶液的制备
称取 2.5g 混合均匀的试样,置于 25mL 带塞量筒中,加0.5mL , 6 mol• L-1盐酸酸化,用乙醚提取两次 (15mL 、 10mL 每次振摇 1min , 将上层乙醚提取液吸入另一25mL 带塞量筒中, 合并乙醚提取液。
用 3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静置
15min ,乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于 25mL 容量瓶中。
加乙醚稀释至刻度,摇匀。
吸取 10.00mL 乙醚提取液分两次置于 10mL 离心管中, 在约 40℃水浴上除去乙醚, 加入 0.1mL 乙醇溶解残渣,制成试样测定液备用。
2、聚酰胺粉板的制备
称取 1.6g 聚酰胺粉,加 4g 可溶性淀粉,加 15mL 水,研磨 3~5min,使其均匀即可涂10×18cm 厚度 0.3mm 的薄层板两块。
涂好的薄层板置于水平大玻璃板上, 于室温干燥后, 于 80℃干燥 1h 取出,置于干燥器中保存。
3、点样
在薄层板下端 2cm 的基线处,用 10ul 微量注射器,分别点1μL 、2μL 试样溶液和1μL 、2μL 苯甲酸、山梨酸标准溶液。
4、展开与显色
层析缸内倒入适量展开剂,在层析缸周围贴上滤纸,待滤纸湿润后,展开剂液层厚约 0.5~0.7cm,让展开剂在层析缸内饱和 10min ,将点样后的薄层板放入层析缸内,使薄层下端浸入展开剂中约 0.5cm , 迅速盖紧缸盖, 进行展开, 如图 8— 12。
待展开剂前沿上展至 10cm 时 , 取出吹干,喷显色剂,斑点呈黄色,背景为蓝色。
5、定性和半定量测定
把试样斑点与标准斑点比较,以比移值(Rf 值定性,在此实验条件下苯甲酸和山梨酸的比移值分别为 0.73、 0.82。
比较试样斑点与标准斑点面积大小及颜色深浅进行含量计算。
根据测定结果按下式计算试样中苯甲酸、山梨酸含量。
计算:
式中:X ——试样中苯甲酸(山梨酸的含量, g • kg-1;
A ——测定用试样溶液中苯甲酸(山梨酸的质量, mg ;
m ——试样的质量, g ;
V1——溶解苯甲酸(山梨酸时,加乙醇体积, mL ;
V2——测定时点样的体积, mL ;
25——试样乙醚提取液的总体积, mL;
10——测定时吸取乙醚提取液的体积, mL 。
五、说明和注意事项
1、此方法用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸含量的测定。
苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是食品常用防腐剂, 主要用于酸性食品的防腐。
国家规定在不同食品中其最大使用量为0.2~1.0 g• kg-1。
如碳酸饮料中苯甲酸或山梨酸的最大使用量为0.2 g• kg-1。
酱油、食醋中苯甲酸钠或山梨酸钠最大使用量为1.0 g• kg-1。
因此,测定食品防腐剂的含量以控制其用量,对保证食品质量,保障人民健康具有十分重要的意义。
2、本方法测定原理为:试样经酸化,使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸、山梨酸,再用乙醚提取, 乙醚提取液经氯化钠酸性溶液洗涤,并用无水硫酸钠脱水后,将乙醚蒸出, 残渣用乙醇溶解后,点样于聚酰胺薄层板上,经展开,显色后,根据比移值与标准比较定性,根据斑点面积和颜色深浅进行半定量测定。
3、试样中如含有二氧化碳、酒精时应加热除去,富含脂肪和蛋白质的试样应除去脂肪和蛋白质,以防用乙醚萃取时发生乳化。
4、本方法灵敏度高,但操作繁琐,重现性差,现今多用气相色谱法测定,试样经酸化后, 用乙醚提取苯甲酸、山梨酸后, 用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离和测定, 与标准系列比较定量。
也可采用高效液相色谱法测定, 利用被分离组分在固定相和移动相中分配系数的不同, 使被测组分分离,用紫外检测器在特定波长下测定被测组分的吸收度,与标准比较定性和定量。
思考题:
1、本实验分离测定苯甲酸和山梨酸为何要选用聚酰胺薄层板?
2、在本实验条件下山梨酸 Rf 值较苯甲酸 Rf 值大的原因?。