食品中防腐剂苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定.

实验 9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠和山梨酸(钾的测定

薄层色谱法

一、实验目的

掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。

学会制备聚酰胺薄层板。

二、仪器

吹风机层析缸玻璃板 10×18cm 玻璃板 50×80 cm 微量注射器10μL

喷雾器

三、试剂与试样

聚酰胺粉 200目乙醚可溶淀粉

无水硫酸钠盐酸溶液6mol • L-1

4%氯化钠酸性溶液于 4%氯化风俗溶液中加入少量mol • L-1盐酸溶液

展开剂:(1正丁醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2

(2异丙醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2

显色剂:0.04%溴甲酚紫的 50%乙醇溶液用0.1mol • L-1氢氧化钠调至 PH=8

苯甲酸标准溶液:精密称取苯甲酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于 2mg 苯甲酸。

山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于 2mg 山梨酸。

试样酱油、水果汁、果酱等

四、实验步骤

1、试样提取—试样溶液的制备

称取 2.5g 混合均匀的试样,置于 25mL 带塞量筒中,加0.5mL , 6 mol• L-1盐酸酸化,用乙醚提取两次 (15mL 、 10mL 每次振摇 1min , 将上层乙醚提取液吸入另一25mL 带塞量筒中, 合并乙醚提取液。用 3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静置

15min ,乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于 25mL 容量瓶中。加乙醚稀释至刻度,摇匀。

吸取 10.00mL 乙醚提取液分两次置于 10mL 离心管中, 在约 40℃水浴上除去乙醚, 加入 0.1mL 乙醇溶解残渣,制成试样测定液备用。

2、聚酰胺粉板的制备

称取 1.6g 聚酰胺粉,加 4g 可溶性淀粉,加 15mL 水,研磨 3~5min,使其均匀即可涂10×18cm 厚度 0.3mm 的薄层板两块。涂好的薄层板置于水平大玻璃板上, 于室温干燥后, 于 80℃干燥 1h 取出,置于干燥器中保存。

3、点样

在薄层板下端 2cm 的基线处,用 10ul 微量注射器,分别点1μL 、2μL 试样溶液和1μL 、2μL 苯甲酸、山梨酸标准溶液。

4、展开与显色

层析缸内倒入适量展开剂,在层析缸周围贴上滤纸,待滤纸湿润后,展开剂液层厚约 0.5~0.7cm,让展开剂在层析缸内饱和 10min ,将点样后的薄层板放入层析缸内,使薄层下端浸入展开剂中约 0.5cm , 迅速盖紧缸盖, 进行展开, 如图 8— 12。待展开剂前沿上展至 10cm 时 , 取出吹干,喷显色剂,斑点呈黄色,背景为蓝色。

5、定性和半定量测定

把试样斑点与标准斑点比较,以比移值(Rf 值定性,在此实验条件下苯甲酸和山梨酸的比移值分别为 0.73、 0.82。

比较试样斑点与标准斑点面积大小及颜色深浅进行含量计算。

根据测定结果按下式计算试样中苯甲酸、山梨酸含量。

计算:

式中:X ——试样中苯甲酸(山梨酸的含量, g • kg-1;

A ——测定用试样溶液中苯甲酸(山梨酸的质量, mg ;

m ——试样的质量, g ;

V1——溶解苯甲酸(山梨酸时,加乙醇体积, mL ;

V2——测定时点样的体积, mL ;

25——试样乙醚提取液的总体积, mL;

10——测定时吸取乙醚提取液的体积, mL 。

五、说明和注意事项

1、此方法用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸含量的测定。苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是食品常用防腐剂, 主要用于酸性食品的防腐。国家规定在不同食品中其最大使用量为0.2~1.0 g• kg-1。如碳酸饮料中苯甲酸或山梨酸的最大使用量为0.2 g• kg-1。酱油、食醋中苯甲酸钠或山梨酸钠最大使用量为1.0 g• kg-1。因此,测定食品防腐剂的含量以控制其用量,对保证食品质量,保障人民健康具有十分重要的意义。

2、本方法测定原理为:试样经酸化,使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸、山梨酸,再用乙醚提取, 乙醚提取液经氯化钠酸性溶液洗涤,并用无水硫酸钠脱水后,将乙醚蒸出, 残渣用乙醇溶解后,点样于聚酰胺薄层板上,经展开,显色后,根据比移值与标准比较定性,根据斑点面积和颜色深浅进行半定量测定。

3、试样中如含有二氧化碳、酒精时应加热除去,富含脂肪和蛋白质的试样应除去脂肪和蛋白质,以防用乙醚萃取时发生乳化。

4、本方法灵敏度高,但操作繁琐,重现性差,现今多用气相色谱法测定,试样经酸化后, 用乙醚提取苯甲酸、山梨酸后, 用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离和测定, 与标准系列比较定量。

也可采用高效液相色谱法测定, 利用被分离组分在固定相和移动相中分配系数的不同, 使被测组分分离,用紫外检测器在特定波长下测定被测组分的吸收度,与标准比较定性和定量。思考题:

1、本实验分离测定苯甲酸和山梨酸为何要选用聚酰胺薄层板?

2、在本实验条件下山梨酸 Rf 值较苯甲酸 Rf 值大的原因?