细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术

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实 验 程 序2
（培养基的分装和斜面培养基的制作）
☆每支试管装的量为试管高度的1/4～1/3. ☆斜面长度为试管长度的1/3～1/2.
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实验程序2
（培养基的配制方法和步骤）
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目 的 要 求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
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实 验 材 料
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。
6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材等的灭菌）
湿热灭菌：高压蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法的操作步骤如下： 1. 灭菌锅内加入一定量的水。 2. 将待灭菌的物品放入锅内，并关严锅盖。 注意：器物不能装得太满。 3. 接通电源，进行加热。 4. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待温度 计指示温度为100℃时关闭排气阀；或当排出的蒸气相 当猛烈且微带蓝色时关闭排气阀。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法） 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
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第二部分 细菌纯种分离、培养和接 种技术
目的要求 实验材料 实验程序
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实 验 程 序2
（培养基的种类）ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
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实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤）
培养基配方 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 蒸馏水 pH
数量
0.75g
1.5g
0.75g
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2
实 验 程 序
玻璃器皿的洗涤和包装 培养基的制备 无菌稀释水的制备 培养基和玻璃器材等的灭菌
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实验程序1
（玻璃器皿的洗涤和包装）
清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材等的灭菌）
加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 干热灭菌的操作方法 a. 将待灭菌的物品放入恒温箱，将温度调节至160℃ 并维持2h； b. 把恒温箱的调节旋钮调回零处，待温度降到50℃ 左右，才能将物品取出。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法） 间歇灭菌法：即常压灭菌，用于一些受高温而破坏的培 养基的灭菌。 操作方法： a. 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次， 每次在100℃煮沸30～60min，连续3d重复进行。 b. 在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在37℃ 恒温条件下培养24h，这样可以使每次蒸煮后未杀死残 留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放在 37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材等的灭菌）
5. 当压力达1.05kg/cm2(灭菌器内的温度为121℃) 即开始灭菌，使其维持15～30min。对热不稳定的培 养基如含有葡萄糖、氨基酸等物质时，应适当降低压力 (0.56kg/cm2) ，延长时间。 6. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能 打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品，排出锅内 剩余水。 7. 待培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无 菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。
目 的 要 求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
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实 验 材 料
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
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实验程序3
（无菌稀释水的制备） 取一个250mL的锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水， 放30颗玻璃珠(用于打破活性污泥、菌块或土壤 颗粒)于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。 另取5支18mm×180mm的试管，分别装9mL 蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。
无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。
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实 验 程 序2
（培养基的种类）
据组成成分可分为:
1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制 而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
从培养基的物理状态可分为
1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入15～30g/L左右的琼脂。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右的琼脂。
3g
150mL
7.6
1. 取一个300mL烧杯，装150mL蒸馏水。 2. 按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。 注意： a. 前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分 b. 可加热促进各成分溶解 c. 加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当 补充因蒸发而损失的水量。
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