荧光定量PCR检测乙肝病毒-DNA的临床意义
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六 乙肝定量测定意义
• • • • • • • • • 1.定量方法使全程动态观察病毒含量成为可能 2.选择治疗时机 3.估计治疗反应 5.治疗后随访和检测复发 6.确定耐药株及选择合适的治疗方案 7.抗病毒药物疗效的评价和监测 8.抗病毒新药的研制 9.研究基因的表达情况,探讨某些疾病的致病机理 10.围产期保健
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九 具体治疗
• • • • • • • • 1. 抗病毒治疗 干扰素治疗 核苷（酸）类似物治疗 (拉米夫定等 ) 免疫调节治疗 其他抗病毒药物及中药治疗 2 其他对症治疗 抗炎保肝治疗 抗纤维化治疗
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谢谢大家！
12
定量PCR检测乙肝病毒-DNA 的临床意义
金域医学检验中心
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一、流行病学
• HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV 感染的流行强度差异很大。据世界卫生组 织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其 中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有 100 万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝 硬化和原发性肝细胞癌 (HCC)
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三 乙型肝炎的发病机制
• HBV是通过刺激宿主的免疫系统攻击受感 染肝细胞来间接地引起肝损伤。 • 受HBV感染的肝细胞在其表面表达病毒蛋 白质，成为CTL攻击的目标。 • 针对受染细胞的免疫反应引起炎症和坏死。 • 坏死-炎症活动持续存在导致肝纤维化。
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四 实验室检测方法
• • • • • • • • 一 传统实验室检测方法 1.血清学检测(两对半检测) ①HBsAg②抗-HBs ③HBeAg ④ 抗-HBe ⑤ 抗-HBc 2.肝功能检测(ALT,AST) 二新型实验室检测方法 1.乙肝病毒定量 2.赖药性基因检测 3.乙肝病毒基因分型
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五 为什么要做乙肝病毒DNA定量
• 1. 传统检测乙肝的方法为“乙肝两对半”和“肝功能”检测范围有 限.(不能测定乙肝病毒复制情况、传染程度) • 2. 乙肝病毒定量是直接检测乙肝病毒的核心成分—乙肝病毒DNA.(能 够直接了解病毒的载量,了解乙肝病毒复制情况、传染程度) • 例如: • 1． 小三阳的病情判断 • 2. HBsAg阳性或单一的抗 —HBc阳性病情判断 • 3. 二对半5项全部阴性病情判断 • 4. 抗一HBs阳性病情判断
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二、病原学
• 乙型肝炎病毒 (HBV) 属嗜肝DNA 病毒科 (hepadnaviridae)，基因组长约3.2k源自文库 ，为部分双 链环状DNA。 • HBV 含４个部分重叠的开放读码框 (ORF)，即前 S／S 区、前C／C 区、P 区和X 区。前S/S 区编 码大 (前S1、前S2 及S)、中 (前S2 及S)、小 (S) 3 种包膜蛋白；前C/C 区编码HBeAg 及HBcAg； P 区编码聚合酶；X 区编码X 蛋白。 • HBV由于基因序列的不同又可以分为A-H八种基 因型.
八 治疗方案
• 治疗的总体目标 • 慢性乙型肝炎治疗的总体目标是：最大限度 地长期抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及 肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝 脏失代偿、肝硬化、HCC 及其并发症的发生，从 而改善生活质量和延长存活时间。 • 慢性乙型肝炎治疗主要包括抗病毒、免疫调 节、抗炎保肝、抗纤维化和对症治疗，其中抗病 毒治疗是关键，只要有适应证，且条件允许，就 应进行规范的抗病毒治疗。
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七 HBV-DNA在什么水平需要治 疗
• (1) HBV DNA定量（乙肝病毒DNA定量） ≥105 拷贝/m l (HBeAg 阴性者为HBV DNA定量≥104 拷 贝/ml)； • (2) ALT（谷氨酸氨基转移酶）≥ 2×ULN（ULN 正常值上限）；如用干扰素治疗，ALT 应 ≤10×ULN，血总胆红素水平应<2×ULN； • (3) 如ALT <2 ×ULN， 但肝组织学显示Knodell HAI ≥4，或≥G2 炎症坏死。具有(1)并有(2) 或 (3) 的患者应进行抗病毒治疗；对达不到上述治疗标 准者，应监测病情变化，如持续HBV DNA定量阳 性，且ALT 异常，也应考虑抗病毒治疗。 9
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六 乙肝定量测定意义
• • • • • • • • • 1.定量方法使全程动态观察病毒含量成为可能 2.选择治疗时机 3.估计治疗反应 5.治疗后随访和检测复发 6.确定耐药株及选择合适的治疗方案 7.抗病毒药物疗效的评价和监测 8.抗病毒新药的研制 9.研究基因的表达情况,探讨某些疾病的致病机理 10.围产期保健
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九 具体治疗
• • • • • • • • 1. 抗病毒治疗 干扰素治疗 核苷（酸）类似物治疗 (拉米夫定等 ) 免疫调节治疗 其他抗病毒药物及中药治疗 2 其他对症治疗 抗炎保肝治疗 抗纤维化治疗
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定量PCR检测乙肝病毒-DNA 的临床意义
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一、流行病学
• HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV 感染的流行强度差异很大。据世界卫生组 织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其 中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有 100 万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝 硬化和原发性肝细胞癌 (HCC)
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三 乙型肝炎的发病机制
• HBV是通过刺激宿主的免疫系统攻击受感 染肝细胞来间接地引起肝损伤。 • 受HBV感染的肝细胞在其表面表达病毒蛋 白质，成为CTL攻击的目标。 • 针对受染细胞的免疫反应引起炎症和坏死。 • 坏死-炎症活动持续存在导致肝纤维化。
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四 实验室检测方法
• • • • • • • • 一 传统实验室检测方法 1.血清学检测(两对半检测) ①HBsAg②抗-HBs ③HBeAg ④ 抗-HBe ⑤ 抗-HBc 2.肝功能检测(ALT,AST) 二新型实验室检测方法 1.乙肝病毒定量 2.赖药性基因检测 3.乙肝病毒基因分型
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五 为什么要做乙肝病毒DNA定量
• 1. 传统检测乙肝的方法为“乙肝两对半”和“肝功能”检测范围有 限.(不能测定乙肝病毒复制情况、传染程度) • 2. 乙肝病毒定量是直接检测乙肝病毒的核心成分—乙肝病毒DNA.(能 够直接了解病毒的载量,了解乙肝病毒复制情况、传染程度) • 例如: • 1． 小三阳的病情判断 • 2. HBsAg阳性或单一的抗 —HBc阳性病情判断 • 3. 二对半5项全部阴性病情判断 • 4. 抗一HBs阳性病情判断
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二、病原学
• 乙型肝炎病毒 (HBV) 属嗜肝DNA 病毒科 (hepadnaviridae)，基因组长约3.2k源自文库 ，为部分双 链环状DNA。 • HBV 含４个部分重叠的开放读码框 (ORF)，即前 S／S 区、前C／C 区、P 区和X 区。前S/S 区编 码大 (前S1、前S2 及S)、中 (前S2 及S)、小 (S) 3 种包膜蛋白；前C/C 区编码HBeAg 及HBcAg； P 区编码聚合酶；X 区编码X 蛋白。 • HBV由于基因序列的不同又可以分为A-H八种基 因型.
八 治疗方案
• 治疗的总体目标 • 慢性乙型肝炎治疗的总体目标是：最大限度 地长期抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及 肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝 脏失代偿、肝硬化、HCC 及其并发症的发生，从 而改善生活质量和延长存活时间。 • 慢性乙型肝炎治疗主要包括抗病毒、免疫调 节、抗炎保肝、抗纤维化和对症治疗，其中抗病 毒治疗是关键，只要有适应证，且条件允许，就 应进行规范的抗病毒治疗。
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七 HBV-DNA在什么水平需要治 疗
• (1) HBV DNA定量（乙肝病毒DNA定量） ≥105 拷贝/m l (HBeAg 阴性者为HBV DNA定量≥104 拷 贝/ml)； • (2) ALT（谷氨酸氨基转移酶）≥ 2×ULN（ULN 正常值上限）；如用干扰素治疗，ALT 应 ≤10×ULN，血总胆红素水平应<2×ULN； • (3) 如ALT <2 ×ULN， 但肝组织学显示Knodell HAI ≥4，或≥G2 炎症坏死。具有(1)并有(2) 或 (3) 的患者应进行抗病毒治疗；对达不到上述治疗标 准者，应监测病情变化，如持续HBV DNA定量阳 性，且ALT 异常，也应考虑抗病毒治疗。 9