植物病毒的人工摩擦接种实验

番木瓜环斑病毒（PRSV）人工摩擦接种西葫芦

一实验目的

通过人工摩擦接种方法，将番木瓜环斑病毒（papaya ring spot virus，PRSV）接种到健康的西葫芦幼苗。学习常规的汁液接种技术。

二实验方法

植物病毒不同于真菌和细菌，属于被动侵入寄主的类型。在自然界里大多依靠机械摩擦或生物介体完成传播。故在实验室中常用病株汁液作为人工接种的材料，将其有效地接种到试验材料上。

三实验材料

材料：侵染了PRSV的表现症状明显的番木瓜叶片；生长健康的3-4叶期的西葫芦幼苗。

研钵与研棒、纱布、洗瓶、金刚砂、0.05 mol/L pH7.2 的磷酸缓冲液（PBS）、标签、记号笔等。

四实验过程

（1）剪取小块含病毒的叶片（1 g）放在研钵中并加入适量磷酸缓冲液（10 mL），研磨成糊状。

（2）在植物幼嫩的叶面上洒少许金刚砂。

（3）用纱布蘸取少量病样汁液在洒了金刚砂的叶面上轻抹2-3次，之后用洗瓶内的水清洗叶面。另外在花盆中要插入标签，注明病毒样品代号、寄主、接种日期和接种人等

（4）管理和记载：有专人负责植物的日常管理，每2-3天记载一次发病情况，注意接种叶和新叶上的症状是否一致。

五实验要点

（1）供试植物材料的叶面和每个人的手指都要在实验前洗净以保证成功率。

（2）摩擦接种的动作要轻，不要弄破叶片，单方向进行；接种后用洗瓶将叶面冲洗干净以免影响以后的观察。