小鼠雌二醇(E2)Elisa试剂盒说明书
E2(雌二醇)检测作业指导书.doc
《文件已阅声明表》《Procedure Circulation Form》文件名称(File Name):雌二醇(E2)检测作业指导书编号(Serial Number) : ________________________ 表号(Table Number) :CSKM・MP03・02.02《文件本次修改记录表》《Procedure Amendment Form》编号(Serial Number) : ________________________ 表号(Table Number) :CSKM・MP()3.02.03《文件信息表》《Procedure Information Form》编号(Serial Number) : _________________________ 表号(Table Number) :CSKM-MP03.02.04雌二醇检测作业指导书1.目的检测人血清或血浆样本中雌二醇（E2）的浓度，作临床辅助诊断用。
2.检测原理采用Chemiflex®的化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术，对人血清，血浆屮雌二醇进行定量测定。
第一步, 将样本、样本稀释液和雌二醇抗体（兔，单克降）包被的顺磁微粒子混合。
样本中的雌二醇与雌二醇抗体包被的微粒子结合，孵育后，将口丫噪酯标记的雌二醇结合物添加至反应混合物中。
进一步孵育和冲洗后，向反应混合物中添加预激发液和激发液。
对产生的化学发光反应物进行测量，以相对光单位（RLUs）表示。
样品中的雌二醇含量与ARCHITECT i光学系统检测到的RLUs值成反比。
3.样本的釆集和贮存3. 1 ARCHITECT雌二醇项目可以使用人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素锂（包括血浆分离管）或EDTA钾抗凝管中的血浆。
3.2标本溶血超过+卄以上的情况下退单。
3.3稳定性：2-8°C可稳定7天3.4样本贮存：2-8°C保存10天4.试剂和仪器4.1试剂成分：4. 1. 1检测试剂盒ARCHITECT孕酮测定试剂盒（7K72）微粒子：1瓶或4瓶（9.9ml）雌二醇抗体（兔，单克隆）包被的微粒子，储存于含有蛋白（兔）稳定剂的TRIS/BIS TRIS缓冲液中。
雌二醇定量检测试剂盒说明书
检验方法的局限性
干扰物质
不能使用溶血的，黄疸的或高血脂的样本，但血色素 (4 mg/ml), 胆红素 (0.5 mg/ml) 和甘油三酸酯
(30 mg/ml) 不影响实验结果。
药物干扰
目前没有物质(药物)影响雌二醇测量。
产品性能指标
1. 批内精密度 ≤10 %
2. 批间误差 ≤15 %
3. 回收率 85～120 %
3. 含叠氮纳化物不能用于酶反应。
检验方法
1. 实验前所有的试剂、样本和微孔板条达到室温（18～25°C）
2. 双蒸水 1:40 稀释浓缩的洗液(稀释的洗液储存在 2～8°C 可保存 2 周)
3. 每孔加 25 μl 标准品、质控品、样品（96 孔板要求在 3 分钟内加样完毕）。
4. 每孔加 200 μl 的酶结合物，充分混合 10 秒钟，室温孵育 120 分钟。
主要组成成分
1. 单克隆抗体包被的可拆卸的 96（12×8）孔微孔板 1 块 塑封袋
2. E2 标准品（0, 25; 100; 250; 500; 1000; 2000 pg/ml） 1ml×7 瓶 无色玻璃瓶
3. 多克隆抗体－酶结合物
25 ml×1 瓶 白色塑料瓶
4. 底物
14 ml×1 瓶 棕色塑料瓶
等等, pp. 331-85. Raven Press, New York (1988).
3. Hall, P.F., 睾类固醇合成: 结构和调节: 再生生理学, Ed.: Knobil, E., 和 Neill, J. 等等., pp 975-98. Raven Press, New York (1988). 4. Siiteri, P.K. Murai, J.T., Hammond, G.L., Nisker, J.A., Raymoure, W.J. 和 Kuhn, R.W., 类固醇激素清 液运输, Rec. Prog. Horm. Res. 38:457 - 510 (1982). 5. Martin, B., Rotten, D., Jolivet, A. 和 Gautray, J-P-.卵巢卵泡液蛋白限制类固醇，《临床内分泌学与新 陈代谢》. 35: 443-47 (1981). 6. Baird, D.T., 女性卵巢类固醇分泌物和新陈代谢：卵巢的内分泌功能：James, V.H:T., Serio, M. 和 Giusti, G. pp. 125-33, 纽约学术出版社 (1976). 7. McNastty, K.P., Baird, D.T., Bolton, a., Chambers, P., Corker, C.S. 和 McLean, H., 人卵巢静脉血浓度 和月经周期卵泡液，内分泌学 71:7785 (1976). 8. Abraham, G.E., Odell, W.D., Swerdloff, R.S., 和 Hopper, K., 月经周期血浆中的 FSH, LH,孕，17-羟 脯氨酸和雌二醇-17 同时进行放射性免疫测定，《临床内分泌学与新陈代谢》34:312-18 (1972). 9. March, C.M., Goebelsmann, U., Nakumara, R.M., 和 Mishell, D.R., 在激素黄体化中期，雌二醇和孕 酮的作用和卵泡刺激素增高，《临床内分泌学与新陈代谢》 49:507-12 (1979). 10. Simpson, E.R., 和 McDonald, P.C., 怀孕 内 分 泌 : 内分 泌 学 教 材 , Ed.: Williams, R.H. pp412-22, Saunders Company, Philadelphia (1981). 11. Jenner, M.R., Kelch, R.P.,等等, 青春期前儿童激素的变化, 青春期女性和早熟，性腺发育不全和儿 童女性化肿块，临床内分泌学 34: 521 (1982). 12. Goldstein, D. 等等, 黄体不足，雌二醇和孕酮的关联性. 37: 348-54 (1982). 13. Odell, W.D. 和 Swerdloff, R.D.,男性性腺功能异常,《临床内分泌学》8:149-80 (1978). 14. McDonald, P.c., Madden, J.C., Brenner, P.F., Wilson, J.D. 和 Siiteri, P.K. 正常男性和女性雌二醇的基 源，《临床内分泌学与新陈代谢》 49:905 (1979). 15. Taubert, H.d. 和 Dericks-Tan, J.s.E., 克罗米酚对排卵的诱导作用结合服用高剂量雌激素和 LH-RH 搐鼻法：排卵 Crosignandi, P.G. 和 Mishell, D.R., pp.265-73, 纽约学术出版社 (1976). 16. Fishel, S.B., Edwards, R.G., Purdy, J.M., Steptoe, P.C., Webster, J. Walters, E., cohen, J. Fehilly, C. Hewitt, J., 和 Rowland, G., 月经自然周期或克罗米酚卵泡刺激和尿促性素，胚胎移植, 堕胎，体外受 精生育， 体外受精胚胎移植 1:24-28 (1985). 17. Wramsby, H., Sundstorm, P- 和 Leidholm, P., 妊娠率跟体外受精代替卵分裂的关系，雌二醇和孕 酮水平成为唯一指数，人类生殖 2: 325-28 (1987). 18. Ratcliff, W.A.., Carter, G.D., 等等 , 雌二 醇实验：临床生化技术的应用和指导，临床生化， 25:466-483 (1988). 19. Tietz, N.W. 临床化学教材, 1986. 生产企业 企业名称：德国 DRG 诊断设备有限公司 地址：德国 玛堡市斐恩贝塔思路 18 号 邮政编码：35069 电话：49（6421）17000 传真：49（6421）170050 网址：www.drg-diagnostics.de 售后服务单位名称：北京协和洛克生物技术研究开发中心 地址：北京市海淀区恩济庄 18 号院 4－2－302 邮政编码：100036 电话：010-51295656 传真：010-88140690 网址： 医疗器械生产许可证编号 京药管械生产许 20040085 号 医疗器械注册证书编号
E2 II中文说明书
０３００００７９ １００ 人份用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中雌二醇ＩＩ的含量。
电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０、２０１０和Ｅ１７０（Ｅｌｅｃｓｙｓ模块）免疫测定分析仪。
概述：生物活性最强的雌激素是１７β－雌二醇。
主要由卵巢产生。
睾丸和肾上腺皮质也产生少量的雌激素。
妇女怀孕期，雌激素主要由胎盘产生。
检测雌二醇可用于解释下丘脑－脑垂体－性腺调节功能紊乱、男子女性型乳房、产生雌激素型的卵巢和睾丸肿瘤和肾上腺皮质增生等。
另外还可用于生育治疗中的疗效监测以及体外受孕中排卵时间的确定。
原理：采用竞争法原理，整个过程１８分钟完成。
・ 第１步：３５ｍｌ标本与生物素化的抗雌二醇抗体混匀，形成复合物，其数量取决于标本中待测物的浓度。
・ 第２步：加入链霉亲和素包被的微粒和钌（Ｒｕ）标记的雌二醇衍生物。
游离的、未结合生物素化抗体即与此衍生物结合，并且通过生物素、链酶亲和素之间的球上。
让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
・ 第３步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
・检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过２点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
试剂：Ｍ：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），１瓶，６．５ｍｌ。
粒子浓度０．７２ｍｇ／ｍｌ，生物素结合能力： ４７０ｎｇ生物素／ｍｇ粒子。
含防腐剂。
Ｒ１：生物素化的兔抗雌二醇抗体（灰盖），１瓶，８ｍｌ。
浓度４５ｎｇ／ｌ、甲二氢睾酮１３０ｎｇ／ｍｌ；ＭＥＳ缓冲液０．０５ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ６．０。
含防腐剂。
Ｒ２：Ｒｕ（ｂｐｙ）３２＋标记的雌二醇－多肽（黑盖），１瓶，８ｍｌ。
浓度２．７５ｎｇ／ｍｌ；ＭＥＳ缓冲液０．０５ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ６．０。
含防腐剂。
储存和稳定性：存放在２－８ 度，切莫倒置。
未开封，可稳定至标明的保质期。
大鼠雌二醇(E2)说明书
大鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T3ng/L -80ng/L使用目的：本试剂盒用于大鼠血清，血浆及相关液体样本中雌二醇（E2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠雌二醇（E2）水平。
用纯化的大鼠雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇（E2）再与HRP标记的雌二醇（E2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠雌二醇（E2）浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
雌二醇(E2)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求beiaikang
雌二醇（E2）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中雌二醇（E2）的含量。
1.1产品规格试 100管份/盒。
1. 1.2主要组成成分校准品靶值批特异，详见标签。
质控品质控范围批特异，详见标签。
2.1 外观a）试剂盒中的组份应澄清，应无沉淀和絮状物，内外标签、标识清晰，易识别；b）分离试剂摇匀后，应为均匀悬浊液，无明显凝集；c）冻干组分呈白色或淡黄色疏松体，加水后应在30分钟内完全溶解,所得液体应无沉淀和不溶物质。
2.2 校准品溯源根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至企业工作标准品，并与贝克曼雌二醇试剂盒比对赋值。
2.3 净含量试剂盒各液体组份的体积不得少于标称体积。
2.4 最低检出限最低检出限不大于8pg/ml。
2.5 线性在（0，3000pg/ml）范围内剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对值应≥0.9900。
2.6 精密度2.6.1分析内精密度：用高低两个浓度水平的样本，各重复检测10次其变异系数（CV）应不大于10%。
2.6.2 批间精密度：用三个批号试剂盒检测同一样本，则三个批号试剂盒试剂盒之间的变异系数（CV）应不大于15%。
2.7 冻干粉瓶间差质控品按照规定复溶后，瓶间浓度变异系数CV≤15%。
2.8 准确度按照EP9-A2文件要求与贝克曼化学发光免疫法雌二醇试剂进行比对，本试剂和比对试剂测定样本的浓度相关系数大于0.95，回归系数在0.8-1.2之间。
2.9 质控品测定值质控品的测定结果应在质控范围内。
2.10 特异性试剂盒与表中有关潜在交叉反应物应无显著的交叉反应。
2.11 稳定性2.11.1效期稳定性：试剂盒在规定的贮存条件2℃～8℃下保存，有效期12个月，效期后两个月内应符合2.1、2.4、2.5、2.6.1、2.8的要求。
2.11.2冻干粉复溶后的稳定性：质控品在复溶后24小时测定，实测浓度在质控品质控范围内。
小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒使用说明书
小鼠前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中小鼠前列腺素E2（PGE2）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠前列腺素E2（PGE2）水平。
用纯化的小鼠前列腺素E2（PGE2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入前列腺素E2（PGE2），再与HRP标记的前列腺素E2（PGE2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的前列腺素E2（PGE2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠前列腺素E2（PGE2）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
E2
精密度是质量控制的基本参数，用批内变异系数和批间变异系数确定。要求批内变异
系数 < 10% ，批间变异系数 < 15% 。 批内变异系数:指不同浓度的三个样品 C1、C2、C3 同时分别进行多个复管一次测
定中的重复性，应小于 10%。
C1
批内变异系数
8.31%
批内变异系数均小于 10%。
C2 6.34%
【使用目的】
用于定量测定人血清（或血浆）中雌二醇(E2)的浓度。 【用途】
雌二醇是一种 18 碳类甾体激素，分子量为 272D。在女性，月经周期的卵泡期由卵泡 内膜细胞与颗粒细胞分泌；黄体期由内膜黄体细胞分泌；妊娠期由胎盘合成。在男性， 则由肾上腺皮质网状带分泌的雌烯二酮在外周转化而来；也可由睾丸 Sertoll 氏细胞转 化而成。
200 200 200 200 200 200
200 200 200 200 ….
200
200 混匀，37℃水浴温育 1.5 小时(Vortex and Incubate 1.5 hour at 37℃)
1000 摇匀，室温放置 5~10 分钟 3000RPM 离心 20 分钟（温度低于 25℃）
Vortex，Centrifuge for 20 minutes at 3,000 RPM （Below 25℃） 吸去上清液 Aspirate the Supernate of the tubes 沉淀物计数 1 分钟 Count for 1 minute
女性：
绝经期
<25 pg/ml
排卵期滤、泡早期
20-100 pg/ml
卵泡晚期
80-400 pg/ml
黄体期
50-300 pg/ml
正常妊娠
雌二醇(E2)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求mairui
1 性能指标2.1 外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；中文包装标签应清晰，准确、牢固； Ra 试剂应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物；Rb 试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物；Rc 试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物；Rd 试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
2.2 净含量应符合表2的要求。
表 2 净含量误差要求对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差应在±10%范围内。
2.4 最低检测限应不大于25 pg/mL 。
2.5 线性试剂盒在40 pg/mL~1200 pg/mL 范围内，其相关系数（r ）应不低于0.9900。
2.6重复性变异系数CV应≤10%。
2.7批间差变异系数CV应≤10 %。
2.8分析特异性当样品中甘油三酯浓度≤ 1000 mg/dL，胆红素浓度≤ 10 mg/dL，血红蛋白浓度≤ 500 mg/dL时，测试结果的干扰偏差应在±10%范围内。
当样品中硫酸雌酮浓度为400 pg/mL，雌三醇硫酸盐浓度为1,020,000 pg/mL，炔雌醇浓度为400 pg/mL，戊酸雌二醇浓度为1000 pg/mL，Equilin浓度为600 pg/mL，Androstenedione浓度为1,000, 000 pg/mL，交叉反应率应≤5%；当样品中17α-雌二醇浓度为100,000 pg/mL，睾酮浓度为15,000 pg/mL，Progesterone浓度为500,000 pg/mL时，交叉反应率应≤3%；当样品中雌二醇3,17β双葡萄糖醛酸化合物浓度为83,000 pg/mL，Estradiol-3-sulfate浓度为281,000 pg/mL时，交叉反应率应≤10%。
雌二醇(E2)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求beifang
雌二醇（E2）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）
)的含量。
适用范围：用于体外定量测定人血清中雌二醇(E
2
1.1 规格
本试剂盒包装规格为96人份/盒，具体组成见表1：
表1 试剂盒主要组成成分
2.1物理性能
试剂盒液体组分应澄清透明、无沉淀或絮状物，包被抗体板的真空封袋应无破损漏气现象。
各组分装量不少于表1中要求。
2.2准确性
回收率应在90%~110%范围内。
2.3线性
用百分结合率对数（Log-Logit）数学模型拟合，在8~5000pg/ml范围内，剂量-反应曲线相关系数（r）应不低于0.9900。
2.4精密度
2.4.1分析内精密度（CV%）应不高于15.0%。
2.4.2批间精密度（CV%）应不高于20.0%。
2.5空白检测限
应不高于4.0pg/ml。
2.6特异性
2.7稳定性
将试剂盒在2～8℃放置12个月，测定结果应符合上述2.1~2.6项要求。
雌二醇测定标准操作规程
雌二醇测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：雌二醇测定（缩写E2）；组合项目申请：女性激素检查组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆标本，用肝或EDTA 抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml 的血清或血浆。
2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血浆,避免溶血。
离心必须达到4000rpm×15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定2d，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，早上或上午采血。
3 方法原理采用竞争性酶联免疫发光分析法。
标本与包被了羊抗兔IgG-兔抗雌二醇复合物的磁性微粒子反应，20分钟后，加入雌二醇-ALP结合物，标本中雌二醇与碱性磷酸酶标记的雌二醇竞争结合磁性微粒子上抗雌二醇抗体有限的结合位点，最后抗原抗体复合物与固相化的捕获抗体结合形成微粒子-羊抗兔IgG-兔抗体-（雌二醇或雌二醇-ALP）免疫复合物。
经磁性分离，洗涤洗去未结合的物质，加入化学发光底物Lumi-Phos 530，经碱性磷酸酶的作用产生光子，光子的量与标本中雌二醇的量成反比，由多点校准曲线求得标本中雌二醇的浓度。
雌二醇(E2)测定试剂盒(化学发光法)产品技术要求科美
雌二醇（E2）测定试剂盒（化学发光法）
适用范围：本试剂盒用于定量测定人血清中雌二醇（E2）的含量。
1.1 型号规格
2.1外观
试剂盒组分齐全、完整；溶液无混浊，无沉淀或絮状物；微孔板包装袋无破损、漏气现象。
2.2 准确性
平均回收率应在90～110%范围内。
2.3 剂量反应曲线的线性
在（30～5000pg/mL）浓度范围内，剂量反应曲线的相关系数r应不小于0.9900。
2.4 空白检测限
应不大于25pg/mL。
2.5精密度
2.5.1分析内精密度
测定QC血清，变异系数(CV)应小于15.0%。
2.5.2分析间精密度
测定QC血清，变异系数(CV)应小于20.0%。
2.6批间差
用三个批号的试剂盒，分别测量同一质控血清，变异系数(CV)应小于20.0%。
2.7 质控血清测定值
应在允许的质控范围内。
2.8 特异性
2.8.1与睾酮(T)的交叉反应
检测浓度为1.5μg/mL的T，测定值应不大于25pg/mL。
2.8.2与孕酮(P)的交叉反应
检测浓度为5μg/mL的P，测定值应不大于25pg/mL。
2.8.3与雌三醇（E3）的交叉反应
检测浓度为10μg/mL的E3，测定值应不大于25pg/mL。
2.9 稳定性
E2试剂盒在2～8℃避光保存，有效期6个月。
在E2试剂盒有效期满后2个月内，分别检测2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。
小鼠雌二醇受体(ER)酶联免疫分析试剂盒 说明书
小鼠雌二醇受体（ER）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠雌二醇受体（ER），且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中雌二醇受体（ER）含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗雌二醇受体（ER）抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗雌二醇受体（ER）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的雌二醇受体（ER）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
雌二醇(E2)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求北京北方生物技术
雌二醇（E2）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中的雌二醇（E2）的含量。
1.1包装规格100测试/盒，200测试/盒1.2主要组成成分注：1.不同批号试剂盒中各组分不可以互换使用。
2. 校准品和质控品具有批特异性，具体浓度见瓶签。
2.1外观试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；磁微粒试剂摇匀后为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集；其他液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；包装标签应清晰，易识别。
2.2装量各组分装量应不低于标示体积。
2.3溯源性根据GB/T21415-2008及有关规定，提供试剂盒内校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，溯源至企业一级校准品，一级校准品用纯品质量赋值，与已上市产品比对验证。
2.4线性在[20，4000]pg/mL范围内，相关系数r应不低于0.9900。
2.5检出限应不高于15pg/mL。
2.6准确度回收率应在85.0%~115.0%范围内。
2.7重复性取浓度（35±7）pg/mL、（200±40）pg/mL的样品，各重复检测10次，其变异系数（CV）应不大于10.0%。
2.8质控品的测定值均应在规定的质控范围内。
2.9特异性检测浓度不低于100ng/mL的孕酮（Prog）样本，在本试剂盒上的交叉反应率应不高于1.5%；检测浓度不低于100ng/mL的睾酮（Tes）样本，在本试剂盒上的交叉反应率应不高于1.0%。
2.10批间差取浓度（35±7）pg/mL、（200±40）pg/mL的样品，分别用3个批号的试剂盒检测，其批间变异系数（CV）应不大于15.0%。
2.11稳定性试剂盒在2~8℃保存，有效期为12个月，有效期满前后两个月内，检测试剂盒的外观、装量、线性、检出限、准确度、重复性、质控品的测定值，应符合2.1、2.2、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8的规定。
小鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒说明书
小鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：通用名：小鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或相关组织液中雌二醇（E2）的残留含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠的雌二醇（E2）水平。
用纯化的雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入雌二醇（E2），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠雌二醇（E2）的含量。
试剂盒组成1 20倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（72ng/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本处理及要求1．血清、血浆标本可直接测定；2．组织：取相关组织1g 于5ml PBS中匀浆，室温孵育5小时（期间不时旋涡混合）后，2000-3000转/分离心10分钟后，取上清液待测。
3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
4．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上按序设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；再各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
雌二醇化学发光免疫检测试剂盒使用说明书.总结
雌二醇化学发光免疫检测试剂盒使用说明书( 美国DRG 编号: CLA-4664 规格：96T)企业名称：德国DRG诊断设备有限公司地址：德国玛堡市斐恩贝塔思路18号1简介1.1预期用途此DRG 化学发光免疫检测试剂盒可用于血清和血浆中雌二醇的体外定量检测.1.2前言（略）2实验原理此CLIA检测试剂盒采用化学发光免疫检测法,基于竞争法原理.微孔内预先包被有兔抗雌二醇分子特性性结合位点的多克隆抗体.患者样本中内源性雌二醇与辣根过氧化物酶(HRP)标记的雌二醇（酶联物）竞相与预包被的抗体结合。
孵育后，洗板洗去未结合的酶联物.结合的过氧化酶复合物（酶联物）与患者样本中雌二醇的量成反比.加入底物液后,发射光的强度与样本中雌二醇的浓度成反比3注意事项1.试剂盒仅供体外诊断用2.试剂盒相关有害物质的信息请参阅物料安全数据单（MSMD）3.试剂盒中的所有试剂包括人血清/血浆对HIV/II，HbsAg和HCV已检测为阴性，但所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理4.勿用嘴移液,同时避免样品和试剂接触皮肤和试剂.5.实验区内禁止饮食,化妆6.处理试剂和样品时应戴一次性手套。
微生物污染可能会导致结果失败7.按照相应的国家生物安全管理条理进行操作8.不要使用过期的试剂,有效期见试剂标签9.所有试剂的量都应按说明来，使用校正的移液器和发光仪可得到最佳的结果10.发光底物液（试剂A和试剂B）对光感染,应避光瓶装保存.11.不要混合使用不同批次的试剂、板条，即使是同一批次不同板条的也不建议。
试剂盒的运输和贮存环境不同可能会导致结果有轻微的变化12.化学物质、即用试剂或稀释试剂，需根据相关国家生物危害安全条例或规范，视为潜在有害物质处理。
13.产品的物料安全数据单（MSMD）可直接向DRG索取。
物料安全数据单（MSMD）符合EU-Guideline 91/155 EC4试剂盒组成4.1提供的试剂1.微孔板，12x8(可拆),96孔包被有抗雌二醇抗体（兔多抗）2.标准品，（标准品0-5）,6瓶，1ml，即用浓度为：0 – 25 – 100 – 250 – 500 - 1000 pg/mL单位换算: 1 pg/mL = 3.67 pmol/L含0.3% Proclin、0.005%硫酸庆大小诺霉素作防腐剂3.酶联物,1瓶, 12 mL,即用辣根过氧化物酶(HRP)标记雌二醇含0.3% Proclin、0.015% BND、0.010% MIT作为防腐剂4.化学发光底物液试剂A，1瓶，2ml，注意：光敏感试剂B，1瓶，2ml，注意：光敏感试剂C，1瓶，3ml见“试剂准备”5.洗涤液，1瓶，30ml，(40倍浓缩)见“试剂准备提示：额外的样品稀释液向DRG公司另购4.1.1实验所需器材(但本试剂盒没有提供)1.化学发光仪2.各种规格的标准精密移液管3.吸水纸4.蒸馏水或去离子水4.2存储条件及稳定性未开封的试剂在2-8℃下可保存至有效期，不要使用过期的试剂打开的试剂必须保存在2-8℃，微孔板也必须保存于2-8℃，一旦打开了微孔板的袋子，需小心地将其重新密封开封的试剂盒如按以上描述的贮存条件可保存2个月4.3试剂准备使用前，将所有试剂和所需微孔板平衡至室温洗涤液加30 mL浓缩洗涤液至1170 mL 去离子水中,制成总体积为1200 mL的稀释洗涤液。
人雌二醇(E2)ELISA 试剂盒使用说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人雌二醇(E2)ELISA试剂盒使用说明书【人雌二醇(E2)ELISA试剂盒试剂盒名称】人雌二醇(E2)ELISA试剂盒【人雌二醇(E2)ELISA试剂盒试剂盒用途】定量人血清、血浆及相关液体样本中雌二醇(E2)的含量【人雌二醇(E2)ELISA试剂盒检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被雌二醇(E2)透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中雌二醇(E2)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中雌二醇(E2)含量。
【人雌二醇(E2)ELISA试剂盒试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL2标准品：200ng/ml0.6mL8底物夜B6mL20mL9终止液6mL 320倍浓缩洗涤液4标准品稀释液6mL10说明书1份5样本稀释液6mL11封板膜1张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml【人雌二醇(E2)ELISA试剂盒需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【人雌二醇(E2)ELISA试剂盒操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
小鼠前列素E2(PGE2)ELISA试剂盒技术指导
小鼠前列素E2(PGE2）ELISA试剂盒技术指导小鼠前列素E2(PGE2）ELISA试剂盒技术指导小鼠前列素E2(PGE2）ELISA试剂盒实验原理小鼠前列素E2(PGE2）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被小鼠前列素E2(PGE2）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠前列素E2(PGE2）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
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小鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆,组织及相关液体样本中雌二醇（E2）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠的雌二醇（E2）水平。
用纯化的雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入雌二醇（E2），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠雌二醇（E2）的浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：72ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为48ng/L，32ng/L，16ng/L，8ng/L，4ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%检测范围：2ng/L-50ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月FOR RESEARCH USE ONLYMouse E2Drug NamesGeneric Name：Mouse E2ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of E2concentrations in Mouse serum, blood plasma,tissue and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Mouse E2level in the sample，use Purified Mouse E2to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody,then add E2to wells, Combined E2antibody which With HRP labeled,become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm.The concentration of E2in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitMaterials provided with the kit 48determinations96determinationsStorageUser manual11Closure platemembrane22Sealed bags11Microelisa stripplate112-8℃Standard：72ng/L0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1bottle 1.5ml×1bottle2-8℃HRP-Conjugatereagent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen SolutionA3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen SolutionB3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃wash solution （20ml×20fold）×1bottle（20ml×30fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serum-coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-minat the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix10-20mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared, Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue asterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspensionwith PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components, centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared,Centrifugal again.5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）,Rapidly frozen with liquid nitrogen,maintain samples at 2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to therelevant literature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t,specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRPactive.Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard:set10Standard wells on the ELISA plates coated,add Standard100μl to the first and the second well,then add Standard dilution50μl to the first and the second well,mix;take out100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately.then add Standard dilution50μl to the third and the forth well,mix;then take out50μl from the third and the forth well discard,add 50μl to the fifth and the sixth well,then add Standard dilution50μl to the fifth and the sixth well,mix;take out50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well,then add Standard dilution50μl to the seventh and the eighth well,mix;take out50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well,add Standard dilution50μl to the ninth and the tenth well,mix,take out50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample50μl to each well after Diluting,(density:48ng/L，32ng/L，16ng/L，8ng/L，4ng/L)2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same). testing sample well.add Sample dilution40μl to testing sample well,then add testing sample10μl(sample final dilution is5-fold),add sample to wells, don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30 min at37℃.4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing, add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50μl to each well,except blank well.7.incubate：Operation with3.8.washing：Operation with5.9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well,Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes in the room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the waterhelps dissolve when dilute.Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,avoids the experimental error.add sample within 5mins,if the number of sample is much ,recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation .7.Please according to use instruction strictly,The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range2ng/L -50ng/LTake the standard density as the horizontal,the OD value for the vertical ,draw the standardcurve on graph paper,Find out the correspondingdensity according to the sample OD value by theSample curve,multiplied by the dilution multiple,or calculate the straight line regression equationof the standard curve with the standard densityand the OD value ,with the sample OD value inthe equation,calculate the sample density,This chart for reference onlyStorage and validity 1．Storage：2-8℃. 2．validity：six months.。