微生物学沈萍考试重点.docx

微生物学考试复习重点

第一章绪论

1、微生物学的定义

微生物学一般定义为研究肉眼难以看清的称之为微生物的生命活动的科学。

2、微生物的种类

①无细胞结构不能独立生活的病毒、亚病毒因子（卫星病毒、卫星RNA 和朊病毒）；

②原核细胞结构的细菌、古生菌；

③真核细胞结构的真菌（酵母菌、霉菌、覃菌等）、单细胞藻类、原生动物等。

3、微生物生命现象的特性和共性

①微生物具有其他生物不具备的生物学特性、代谢途径和功能；

②微生物具有其他生物共有的基本生物学特性；

③易操作性：微生物具有个体小、结构简单、生长周期短、易大量培养、易变异、重复性强等优势。

4、微生物的发现

荷兰商人安东 ?列文虎克利用自制的显微镜发现了微生物世界。

5、微生物学发展过程中的重大事件

①1867： Lister 创立了消毒外科；

② 1890： Von Behring 制备抗毒素治疗白喉和破伤风；

③1892： IV anowsky 提供烟草花叶病是由病毒引起的证据；

④ 1928： Griffith 发现细菌转化；

⑤ 1929： Fleming 发现青霉素；

⑥ 1977： Woese 提出古生菌是不同于细菌和真核生物的特殊类群；

⑦1995：第一个独立生活的细菌（流感嗜血杆菌）全基因组序列测定完成；

⑧ 1996：第一个独立生活的古生菌（詹氏甲烷球菌）基因组测序完成；

⑨ 1997：第一个真核生物（啤酒酵母）基因组测序完成。

6、微生物学发展的奠基者

①巴斯德和科赫是微生物学发展的奠基者。

②巴斯德的贡献

a彻底否定了“自生说”：巴斯德用著名的曲颈瓶实验彻底否定了“自生说”，并从此建立了病原学说，推动了微生物学的发展；

b免疫学—预防接种：巴斯德研究了鸡霍乱，发现将病原菌减毒可诱发免疫性，以预防鸡霍乱病，他为人类防病、治病作出了重大贡献；

c证明发酵是由微生物引起的

d其他贡献—巴斯德消毒法和家蚕软化病问题。

③科赫的贡献

a证明炭疽杆菌是炭疽病的病原菌；

b发现肺结核的病原菌；

c提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——科赫原则；

d用固体培养基分离纯化微生物的技术；

e配制培养基。

④科赫原则

a在每一相同的病例中都出现这种微生物；

b要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中培养出来；

c用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生；

d从实验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物。

第二章微生物的纯培养和显微技术

1、无菌技术的概念

在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物所污染，其自身也不污染操作环境的技术被称为无菌技术。

2、最常用的灭菌方法

高压蒸汽灭菌

3、接种操作

①接种环在火焰上灼烧灭菌；

②烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管；

③用接种环蘸取一环培养物转移到一装有无菌培养基的试管中，并将试管重新盖好；

④接种在火焰上灼，残留的微生物。

4、用固体培养基得培养

①涂布平板法

a先将已融化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板；

b冷却凝固后，将一定量的某一稀度的品液滴加在平板表面，再用无菌涂布棒将菌液分散至整个平板表面；

c培养后挑取个菌落。

②稀倒平板法

a 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀（如1:10、 1:100、 1:1000、 1:10000 ⋯⋯）；

b 分取不同稀液少，与已融化并冷却至50℃左右的脂培养基混合，匀后，入菌的培养皿中，

待脂凝固后，制成可能含菌的脂平板，保温培养一定即可出菌落。如果稀得当，在平板表面或脂培养基

中就可出分散的个菌落，个菌落可能就是由一个微生物胞繁殖而成的；

c挑取个菌落，或重复以上操作数次，便可得到培养。③平板

划法

a用接种以无菌操作蘸取少待分离的材料，在无菌平板表面行平板划、扇形划或其他形式的划；

b微生物胞的数量将随着划次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划适宜的，微生物能一一分散，培养后，可在平板表面得到菌落。

④稀管法(氧气敏感的氧型微生物)

a 先将一系列盛无菌培养基的管加，使脂融化后冷却并保持在50℃左右；

b将待分离的材料用些管行梯度稀，管迅速均匀；

c冷凝后，在脂柱表面倒一菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开；

d培养后，菌落形成在脂柱的中；

e行菌落的挑取和移植，需先用一只菌将液体石蜡—石蜡盖取出，再用一只毛管插入脂和管壁之，吹入无菌无氧气体，将脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将脂柱切成薄片，行察和聚落的移植。

5、培养

① 平板培养

根据待分离微生物的特点不同的培养条件。

②富集培养

利用不同的微生物生命活特点的不同，制定特定的境条件，使适于条件的微生物旺盛生，从而使其在菌落中的数量大大增加，使人能更容易地从自然界中分离到种所需的特定微生物。

6、微生物保藏技

① 代培养保藏

②冷保藏

③干燥保藏

a 沙土管保存

b 冷真空保藏

7、普通光学微

①利用目和物两透系来放大成像，故又常被称复式微；分辨率0.2um。

②分辨率：能辨两点之最小距离的能力。

③最小可分辨距离=0.5λ/n*sin θ， n*sin θ 数孔径；滴加香柏油（n=1.52）的目的是增加数孔径。

④光学微分辨率的限制：光学微在使用最短波的可光（λ=450nm）作光源在油下可达到其

最大分辨率0.18um。

8、菌染色法