关于血液筛查核酸检测

关于血液筛查中HBV、HCV、HIV核酸检测
答：
（1）HBV、HCV、HIV是输血传播疾病的主要病原体，为防止因输血引起的HIV、HBV及HCV传播，目前国内外已广泛将核酸检测技术应用于血液筛查，核酸检测可以缩短病毒的“窗口期”。

（2）目前血液筛查核酸检测运用的方法主要是实时荧光定量PCR法和TMA法。

●实时荧光定量PCR法是在普通PCR基础上在反应体系中加入荧光基团，利
用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。

●TMA法是指利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下从靶核酸产生
大量RNA扩增子的靶核酸扩增方法。

（3）下面主要介绍实时荧光定量PCR法检测HBV、HCV、HIV病毒核酸
●HBV基因组是部分双链的环状DNA，HCV基因组为单股正链RNA，HIV
基因组是双股正链RNA。

因为HCV和HIV基因组为RNA，所以扩增前需要将基因组RNA逆转录成cDNA再进行PCR。

●一般情况下根据三种病毒基因组的保守区域设计引物和探针，HBV可以选
择S、C、P、X编码区基因进行设计，HCV主要选择5′UTR进行设计，HIV 可以选择gag、env、pol、tat基因中某些核苷酸序列进行设计。

●将DNA或cDNA模板、DNA聚合酶、引物和探针、PCR反应底物和缓冲液
等加入PCR反应管中进行PCR，经过几十个变性—退火—延伸循环后，通过扩增曲线的Ct值了解病毒核酸检测情况，Ct值越小表明病毒载量越高，反之，Ct值越大表明病毒载量越低或没有。