登革热病例的标本采集和实验室检测

标本的包装运输
《生物安全手册》 (WHO 3rd edition): 运送感染性 材料的基本三层包装：内层容器、第二层包装、 外层包装
内层包装：防水、 防漏、贴好标签、 标本独立包装 第二层包装：防 水、防漏（带吸 收性材料） 外层包装：为第 二层包装提供物 理性保护、保持 低温（冰袋，4℃）
登革热病例的实验室检测方法
根据基因型不同，设计通用型、I、II、III、IV型探针，标 上不同荧光基团，根据不同颜色的PCR扩增曲线进行结果判 断
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登革热病例的标本采集 和实验室检测
登革热病例的实验室诊断
• • • • 单份血清特异性IgG抗体或IgM抗体阳性 急性期、恢复期血清的登革IgG抗体滴度4倍增长 RT-PCR或荧光PCR检测到登革病毒基因 从急性期患者血清、脑脊液、血细胞、组织中分 离到登革病毒
登革热病例的标本采集
全血标本 采集流程：无菌采集发病后0-5d的患者静脉血 3ml，加入到无菌干wenku.baidu.com的采血管中，标明采样 日期和病人的姓名，立即送至实验室分离血清
脑脊液标本 分离流程： 标本采集应由临床医生完成。由腰椎穿刺无菌采 集脑脊液3～5ml，放于无菌螺口离心管内。标本 采集后应立即4℃送检。
蚊标本 采集、处理流程：
①采集吸过血的埃及伊蚊、白纹伊蚊或其它可疑蚊种，用 10%葡萄糖液喂养至胃血消化完，-20℃冷冻。 ②按蚊种及捕获地点分组，20-50只/组，用生理盐水冲洗后 加入1ml标本处理液，充分研磨，10000RPM，4 ℃，离 心10min，取上清液。 ③-上清液于4 ℃作用2h, 接种C6/36细胞分离病毒。 -上清液分离核酸，进行RT-PCR或荧光PCR检测登革病毒 核酸。
全血不能冷冻；运送过程尽量减少颠簸，避免溶 血，最好于24小时内分离到血清。
血清标本 分离流程：
①尽量采集病人的急性期和恢复期血清。采集时间：第一份 血应在发病3天内采集，最迟不晚于发病后7天。第二份血 应在发病2～4周采集。 ②无菌采集患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的试管中，标 明病人姓名、采集日期，并做好病人性别、年龄、发热日 期、出疹日期的资料登记。常温送到实验室分离血清。 ③ 2000rpm离心10分钟，分离血清；如果没有离心机，血标 本应静置，直到血清析出； ④小心吸取血清，避免吸到红细胞；在无菌条件下，移至无 菌的螺口离心管中；短期（7天内）保存置于4～8℃，长 期保存于－20 ℃。
C6/36细胞培养分离登革病毒
标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液 正常C6/36 病变C6/36（++）
CPE:细胞皱缩脱落、胀大成空泡、折光度增大、内容物增多
RT-PCR检测登革病毒基因
标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液
产物电泳，根据条带大小判断目的核酸存在与否
实时荧光PCR检测登革病毒基因
标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液
胶体金快速检测登革热特异性抗体IgM/IgG
标本类型：血清
阳性结果必须经病毒分离、双份血清抗体滴度检测或病毒 核酸检测，才能确诊为登革热病毒感染。
ELISA检测登革热特异性抗体IgM/IgG
标本类型：血清、脑脊液
ELISA原理：底物被 酶高效催化成为有色 产物，即间接放大了 抗原抗体之间的免疫 反应，检测样品的吸 光度值可确定样品中 是否存在登革热抗体 IgM/IgG。