仔猪肠道健康及功能性饲料
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一般使用剂量：2000-3000mg/kg 一般使用不超过2周，最长不超过四周 长时间使用会造成中毒： – 发育停止、关节炎、腋下出血和胃肠炎。 同样，环境问题
难以承受的繁荣
• • • • • • 2100年--115亿人口，1988年资源量 铝：224年--------18年 铜：41年--------- 4年 锌：21年---------- 3年 油：41年---------- 7年 磷：100年---------- 17年 消耗殆尽 • 引自Paul Harrison:The Third Revolution
22 46 48 51 45 43 40
33
随着日龄的增长，哺乳仔猪血 清中葡萄糖、大部分酸类物质、 氨基酸中精氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、丙 氨酸浓度呈上升趋势。
10 23 10 13 20 53
11
9 6
39
41
28 31
25 27
19
18
7
15
8
A
8 7 ppm 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm
1-28d 肠道氨基酸ASCT1、CAT1、EAAC1或小肽PepT1转运载体基因 mRAN相对表达量(y)与日龄(x)之间曲线方程
y 空肠前段 ASCT1 mRNA相对表达量 CAT1 mRNA相对表达量 PepT1 mRNA相对表达量 空肠后段 ASCT1 mRNA相对表达量 日龄 y =1.83-0.13x+0.0005x2 日龄 日龄 日龄 y = -2.30+3.9x-0.57x2+0.03x3-0.0005x4 y = 0.45+0.90x-0.19x2+0.01x3-0.0003 x4 y = -0.41+1.31x-0.22x2+0.01x3-0.0003 x4 x 曲线方程
在空肠前段，ASCT1、CAT1和PepT1转运载体mRNA相对表达量均表现为四次方曲线 变化，在空肠后段ASCT1 为二次方曲线变化，在回肠末端，ASCT1、CAT1、EAAC1 和PepT1分别表现为线性、四次方曲线、三次方曲线和二次方曲线变化趋势。
高铜滥用导致的危害
引起动物中毒
–表现为血红蛋白降低、黄疸、神经症状、异 食、生长发育迟缓 –超过500mg/kg可引起死亡
引起动物某些营养素缺乏
–降低铁和锌的吸收，引起铁和锌的缺乏症； –加速饲料中维生素的氧化破坏； –加速饲料中油脂的氧化，出现哈味。
高铜滥用导致的危害
影响动物性食品的安全
1d
7d
14d
21d
28d
1-28日龄哺乳仔猪发育空肠前段形态学指标扫描电镜照片(HE，40x10)
揭示了哺乳仔猪肠道功能性基因发育变化规律
灰度单位
相对表达量 2.5 2 1.5 1 0.5
a b
150 100 50 0 空肠前段 空肠后段 回肠末端
b
0
空肠前段
空肠后段
回肠末端
A
B
哺乳仔猪发育肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度(A)及其mRAN相对表达量(B) 在不同肠道部位之间的比较 (n=30)
蛋白质组学分析对哺乳(左)和断奶(右)仔猪肠道粘膜上皮组 织2D凝胶蛋白质图谱比较
Wang et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 383-395
建立了哺乳仔猪发育血液产物变化代谢组图谱
随着日龄的增长，哺乳仔猪血 清中脂类、大部分碱类物质、 氨基酸中赖氨酸、组氨酸、苯 丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸浓度 呈下降趋势。
高度(mm)
250 200 150 100 50 0
b
ab
a
空肠前段 空肠后段 回肠末端
a
250 200 150 100 50
空肠前段 空肠后段 回肠末端
b b b b
上皮淋巴细胞数
a
绒毛长度
隐窝深度
0
杯状细胞数
哺乳仔猪发育肠道形态学指标在不同肠道部位之间的比较 (n=30) 哺乳仔猪发育肠道绒毛长度、 隐窝深度、上皮间淋巴细胞 数和杯状细胞数不受性别变 化的影响。 绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋 巴细胞数和杯状细胞数不受空肠 部位(空肠前段和空肠后段)的影响， 但与回肠之间有差异。
仔猪肠道健康及功能性饲料 研究与应用
印遇龙
2009.07.03
肠道发育与调控
仔猪宫内发育迟缓 仔猪断奶应激
生长缓慢、腹泻
影响仔猪 生长发育
免疫抑制
肠道损伤
微生态平衡破坏
消化系统发育阻滞
内分泌紊乱
平均死亡率 12% 年死亡约 2400万头 年经济损失 120亿元
仔猪早期断奶已成为集约化、规模化养殖生产中所采取的一项重要手段，虽然早期断奶 技术可以提高母猪生产性能，也有利于提高仔猪的成活率，但伴随而来的腹泻、生长迟 缓、消化不良、免疫力低下等仔猪“早期断奶综合症”严重影响了养猪业的经济效益。
劣质饲料添加剂导致的镉污 染
镉（Cd）是一种有毒的重金属元素，属严重污染性 元素。FAO和WHO 将Cd列为仅次于黄曲霉素和 砷的食品污染物。 特点：在动物和人体内排泄很慢，有明显的蓄积 性。 危害： – 慢性毒性作用，主要是损害肾小管，并导致骨 质疏松症。 – 导致严重贫血、损害生殖系统，并干扰锌、铜、 铁在体内的吸收与代谢。
mRNA相对表达量
10 8 6
a
b c
CAT1 EAAC1
空肠前段 空肠后段 回肠末端
a
a
4
2 0
b
ASCT1
PepT1
肠道氨基酸(中性ASCT1、碱性CAT1、酸性EAAC1) 和小肽 PepT1转运载体mRNA相对表达量均不受性别变化的影响； 酸性氨基酸EACC1和小肽PepT1不受肠道部位的影响，中性 氨基酸ASCT1在空肠前段与空肠后段之间，空肠后段与回肠 末端之间，差异显著，而空肠前段和回肠末端之间则差异不 显著；碱性氨基酸CAT1在肠道不同部位之间存在差异。
技术路线
仔猪
宫内发育迟缓
断奶应激
肠道发育
组学技术
作用机制
调控技术
基因组学
蛋白质组学
肠道健康
功能性饲料产品 推广应用
代谢组学
仔猪健康养殖
主要进展-1
建立了仔猪肠道基因表达基因芯片变化图谱
与正常空肠基因比较：宫内发育迟缓 仔猪（IUGR)有306个基因上调， 271个 基因下调；添加精氨酸，有258个基因上 调， 171个基因下调；精氨酸生素有60个 基因上调, 169个基因下调。 断奶引发了 与氧化应激和免疫激活相关的21个基因表 IUGR(左)CK 达上调及与营养代谢和细胞增殖相关的 18 个基因表达下降。
肠道碱性磷酸酶是肠黏膜上的标志酶，可反映肠道的发育 情况及肠上皮细胞的吸收能力，其不受性别变化的影响， 免疫组化灰度不受肠道部位的影响，但mRNA相对表达量 在空肠前段较空肠后段和回肠末端要高。
1-28d 肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度或肠道碱性磷酸酶mRAN 相对表达量(y)与日龄(x)之间曲线方程
49
47 44
32
17
29 37
36
26 52 30
16 24 14 12
3
5
2 1
50 38
B
8.0 7.5 7.0 6.5 ppm 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm
4
35 42
34 21 3
16 3 3
C
8.0
7.5
7.0
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
–长期饲喂，肝肾铜残留显著提高 –铜中毒时，肝中铜含量高达750-6000mg/kg。
环境污染
–以万头猪场计，一年随猪粪排出铜量为540kg。 –土壤中铜污染可以破坏土壤的物理、化学和生 物学功能，引起土壤的肥力下降，影响作物产 量和养分含量。
添加高锌导致的问题
高锌的作用：促进仔猪生长和降低仔猪断奶后腹泻的效果。
有机砷制剂导致的环境砷污染
允许作为饲料药物添加剂的砷制剂有：
–对氨基苯砷酸（50-100mg/kg）、 硝基羟基苯砷酸 （30-50mg/kg）
部分饲料生产厂家片面强调： 超剂量添加－－皮肤红 环境污染
–以万头猪场计：仅在商品猪日粮中添加阿散酸，每 年要用360kg，向环境排放约124.4kg的砷。
y 空肠前段 灰度 mRNA相对表达量 空肠后段 mRNA相对表达量 回肠末端 mRNA相对表达量 日龄 y =1.55-0.16x+0.005x2 日龄 y =1.69-0.04x 日龄 日龄 y =149.79+0.93x y =0.82+0.63x-0.14x2+0.01x3-0.0002x4 x 曲线方程
背景
• 肠道最基本的功能是消化吸收，也是体内最大的免 疫器官，各种营养物质主要在此吸收转运，处于沟 通机体内外环境的重要位置。 • 肠道的发育越来越成为限制仔猪后期健康生长的重 要因素，认识仔猪消化道的发育过程对做好仔猪早 期断奶及断奶仔猪的生产管理非常重要。因此，仔 猪肠道健康及其调控对规模化养猪具有现实意义。
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
Байду номын сангаасppm
哺乳仔猪血清600 MHz 代谢组的图谱 其中：A中芳香区(δ 5.6-8.5)相对于脂肪区(δ 0.6-5.4)扩大了约16倍，而B中芳香区 (δ 5.6-8.5)相对于脂肪区(δ 0.6-5.4)扩大了约4倍
Li et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 1-11
主要进展-2 首次阐明了仔猪哺乳期肠道黏膜发育变化规律
哺乳仔猪发育(1-28d) 肠道组织形态学指标(y)与日龄(x)之间曲线方程 (n=30) y x 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 曲线方程
空肠前段
绒毛长度 隐窝深度 空肠后段 绒毛长度 隐窝深度 上皮间淋巴细胞数 回肠末端 绒毛长度 隐窝深度 上皮间淋巴细胞数 杯状细胞数 y = 195.87+3.45x y = 83.30+11.27x-0.29x2 y = 370.71+21.23x-3.15x2+0.08x3 y = 49.73-1.00x y = 241.50+47.42x-9.64x2+0.54x3-0.009x4 y = 184.50-2.58x y = 0.47+5.12x y = 247.92-11.15x+0.34x2 y = 170.94-8.27x+0.24x2
IUGR(左)和CK仔 猪肠道粘膜基因 表达变化
IUGR(左)和CK（右)肠道粘膜基因表达变化图谱比较
Chen et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 238-243
建立了早期断奶应激肠道黏膜蛋白质组图谱
建立了分辨率较高且重复性好的仔猪肠道粘膜上皮组 织的2-DE图谱，鉴定了一些可能与蛋白质合成、肠道氨基 酸转运吸收相关的差异表达蛋白质。 同一组织3块凝胶的平均蛋白质点数依次为875±28、 836±48和944±26，匹配率达83.81%，84.05%，82.39%. 且平行胶在蛋白质点位置上有较好的重复性。
肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度仅在空肠前段表现出线性变化 趋势，其mRNA相对表达量发育趋势分别表现为四次方曲线 变化(空肠前段)、线性变化(空肠前段)和二次方曲线变化(回 肠末端)。
率先克隆了猪肠道氨基酸转运载体ASCT2、B0、b0,+AT和y+LAT1，以及小 肽转运载体PepT1的cDNA编码区，并在Genbank上注册了6个基因序列。
有机砷制剂导致的环境砷污染
对农作物的影响 土壤中砷酸钠为40mg/kg，水稻减产50%； 土壤中砷酸钠为160mg/kg时，水稻不能 生长；当灌溉水中砷浓度为20mg/kg，水 稻颗粒无收。
Geogenic arsenic contamination and human health-Xinjiang, China
回肠末端
ASCT1 mRNA相对表达量 CAT1 mRNA相对表达量 EAAC1 mRNA相对表达量 PepT1 mRNA相对表达量 日龄 日龄 日龄 日龄 y = -0.10+0.29x y = -1.18+2.68x-0.44x2+0.03x3-0.0005 x4 y = 1.58-0.42x+0.04x2-0.0009x3 y = 2.09-0.28x+0.01x2
Skin lesion due Arsenic toxicity
Geogenic arsenic contamination and human health
Arsenic toxicity symptom Blue feet
This a tubewell with As Contamination still being used By the local people. As concentration: 606 ppb
难以承受的繁荣
• • • • • • 2100年--115亿人口，1988年资源量 铝：224年--------18年 铜：41年--------- 4年 锌：21年---------- 3年 油：41年---------- 7年 磷：100年---------- 17年 消耗殆尽 • 引自Paul Harrison:The Third Revolution
22 46 48 51 45 43 40
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随着日龄的增长，哺乳仔猪血 清中葡萄糖、大部分酸类物质、 氨基酸中精氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、丙 氨酸浓度呈上升趋势。
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8 7 ppm 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm
1-28d 肠道氨基酸ASCT1、CAT1、EAAC1或小肽PepT1转运载体基因 mRAN相对表达量(y)与日龄(x)之间曲线方程
y 空肠前段 ASCT1 mRNA相对表达量 CAT1 mRNA相对表达量 PepT1 mRNA相对表达量 空肠后段 ASCT1 mRNA相对表达量 日龄 y =1.83-0.13x+0.0005x2 日龄 日龄 日龄 y = -2.30+3.9x-0.57x2+0.03x3-0.0005x4 y = 0.45+0.90x-0.19x2+0.01x3-0.0003 x4 y = -0.41+1.31x-0.22x2+0.01x3-0.0003 x4 x 曲线方程
在空肠前段，ASCT1、CAT1和PepT1转运载体mRNA相对表达量均表现为四次方曲线 变化，在空肠后段ASCT1 为二次方曲线变化，在回肠末端，ASCT1、CAT1、EAAC1 和PepT1分别表现为线性、四次方曲线、三次方曲线和二次方曲线变化趋势。
高铜滥用导致的危害
引起动物中毒
–表现为血红蛋白降低、黄疸、神经症状、异 食、生长发育迟缓 –超过500mg/kg可引起死亡
引起动物某些营养素缺乏
–降低铁和锌的吸收，引起铁和锌的缺乏症； –加速饲料中维生素的氧化破坏； –加速饲料中油脂的氧化，出现哈味。
高铜滥用导致的危害
影响动物性食品的安全
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7d
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21d
28d
1-28日龄哺乳仔猪发育空肠前段形态学指标扫描电镜照片(HE，40x10)
揭示了哺乳仔猪肠道功能性基因发育变化规律
灰度单位
相对表达量 2.5 2 1.5 1 0.5
a b
150 100 50 0 空肠前段 空肠后段 回肠末端
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空肠前段
空肠后段
回肠末端
A
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哺乳仔猪发育肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度(A)及其mRAN相对表达量(B) 在不同肠道部位之间的比较 (n=30)
蛋白质组学分析对哺乳(左)和断奶(右)仔猪肠道粘膜上皮组 织2D凝胶蛋白质图谱比较
Wang et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 383-395
建立了哺乳仔猪发育血液产物变化代谢组图谱
随着日龄的增长，哺乳仔猪血 清中脂类、大部分碱类物质、 氨基酸中赖氨酸、组氨酸、苯 丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸浓度 呈下降趋势。
高度(mm)
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上皮淋巴细胞数
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哺乳仔猪发育肠道形态学指标在不同肠道部位之间的比较 (n=30) 哺乳仔猪发育肠道绒毛长度、 隐窝深度、上皮间淋巴细胞 数和杯状细胞数不受性别变 化的影响。 绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋 巴细胞数和杯状细胞数不受空肠 部位(空肠前段和空肠后段)的影响， 但与回肠之间有差异。
仔猪肠道健康及功能性饲料 研究与应用
印遇龙
2009.07.03
肠道发育与调控
仔猪宫内发育迟缓 仔猪断奶应激
生长缓慢、腹泻
影响仔猪 生长发育
免疫抑制
肠道损伤
微生态平衡破坏
消化系统发育阻滞
内分泌紊乱
平均死亡率 12% 年死亡约 2400万头 年经济损失 120亿元
仔猪早期断奶已成为集约化、规模化养殖生产中所采取的一项重要手段，虽然早期断奶 技术可以提高母猪生产性能，也有利于提高仔猪的成活率，但伴随而来的腹泻、生长迟 缓、消化不良、免疫力低下等仔猪“早期断奶综合症”严重影响了养猪业的经济效益。
劣质饲料添加剂导致的镉污 染
镉（Cd）是一种有毒的重金属元素，属严重污染性 元素。FAO和WHO 将Cd列为仅次于黄曲霉素和 砷的食品污染物。 特点：在动物和人体内排泄很慢，有明显的蓄积 性。 危害： – 慢性毒性作用，主要是损害肾小管，并导致骨 质疏松症。 – 导致严重贫血、损害生殖系统，并干扰锌、铜、 铁在体内的吸收与代谢。
mRNA相对表达量
10 8 6
a
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CAT1 EAAC1
空肠前段 空肠后段 回肠末端
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ASCT1
PepT1
肠道氨基酸(中性ASCT1、碱性CAT1、酸性EAAC1) 和小肽 PepT1转运载体mRNA相对表达量均不受性别变化的影响； 酸性氨基酸EACC1和小肽PepT1不受肠道部位的影响，中性 氨基酸ASCT1在空肠前段与空肠后段之间，空肠后段与回肠 末端之间，差异显著，而空肠前段和回肠末端之间则差异不 显著；碱性氨基酸CAT1在肠道不同部位之间存在差异。
技术路线
仔猪
宫内发育迟缓
断奶应激
肠道发育
组学技术
作用机制
调控技术
基因组学
蛋白质组学
肠道健康
功能性饲料产品 推广应用
代谢组学
仔猪健康养殖
主要进展-1
建立了仔猪肠道基因表达基因芯片变化图谱
与正常空肠基因比较：宫内发育迟缓 仔猪（IUGR)有306个基因上调， 271个 基因下调；添加精氨酸，有258个基因上 调， 171个基因下调；精氨酸生素有60个 基因上调, 169个基因下调。 断奶引发了 与氧化应激和免疫激活相关的21个基因表 IUGR(左)CK 达上调及与营养代谢和细胞增殖相关的 18 个基因表达下降。
肠道碱性磷酸酶是肠黏膜上的标志酶，可反映肠道的发育 情况及肠上皮细胞的吸收能力，其不受性别变化的影响， 免疫组化灰度不受肠道部位的影响，但mRNA相对表达量 在空肠前段较空肠后段和回肠末端要高。
1-28d 肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度或肠道碱性磷酸酶mRAN 相对表达量(y)与日龄(x)之间曲线方程
49
47 44
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29 37
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26 52 30
16 24 14 12
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8.0 7.5 7.0 6.5 ppm 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm
4
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16 3 3
C
8.0
7.5
7.0
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
–长期饲喂，肝肾铜残留显著提高 –铜中毒时，肝中铜含量高达750-6000mg/kg。
环境污染
–以万头猪场计，一年随猪粪排出铜量为540kg。 –土壤中铜污染可以破坏土壤的物理、化学和生 物学功能，引起土壤的肥力下降，影响作物产 量和养分含量。
添加高锌导致的问题
高锌的作用：促进仔猪生长和降低仔猪断奶后腹泻的效果。
有机砷制剂导致的环境砷污染
允许作为饲料药物添加剂的砷制剂有：
–对氨基苯砷酸（50-100mg/kg）、 硝基羟基苯砷酸 （30-50mg/kg）
部分饲料生产厂家片面强调： 超剂量添加－－皮肤红 环境污染
–以万头猪场计：仅在商品猪日粮中添加阿散酸，每 年要用360kg，向环境排放约124.4kg的砷。
y 空肠前段 灰度 mRNA相对表达量 空肠后段 mRNA相对表达量 回肠末端 mRNA相对表达量 日龄 y =1.55-0.16x+0.005x2 日龄 y =1.69-0.04x 日龄 日龄 y =149.79+0.93x y =0.82+0.63x-0.14x2+0.01x3-0.0002x4 x 曲线方程
背景
• 肠道最基本的功能是消化吸收，也是体内最大的免 疫器官，各种营养物质主要在此吸收转运，处于沟 通机体内外环境的重要位置。 • 肠道的发育越来越成为限制仔猪后期健康生长的重 要因素，认识仔猪消化道的发育过程对做好仔猪早 期断奶及断奶仔猪的生产管理非常重要。因此，仔 猪肠道健康及其调控对规模化养猪具有现实意义。
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
Байду номын сангаасppm
哺乳仔猪血清600 MHz 代谢组的图谱 其中：A中芳香区(δ 5.6-8.5)相对于脂肪区(δ 0.6-5.4)扩大了约16倍，而B中芳香区 (δ 5.6-8.5)相对于脂肪区(δ 0.6-5.4)扩大了约4倍
Li et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 1-11
主要进展-2 首次阐明了仔猪哺乳期肠道黏膜发育变化规律
哺乳仔猪发育(1-28d) 肠道组织形态学指标(y)与日龄(x)之间曲线方程 (n=30) y x 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 日龄 曲线方程
空肠前段
绒毛长度 隐窝深度 空肠后段 绒毛长度 隐窝深度 上皮间淋巴细胞数 回肠末端 绒毛长度 隐窝深度 上皮间淋巴细胞数 杯状细胞数 y = 195.87+3.45x y = 83.30+11.27x-0.29x2 y = 370.71+21.23x-3.15x2+0.08x3 y = 49.73-1.00x y = 241.50+47.42x-9.64x2+0.54x3-0.009x4 y = 184.50-2.58x y = 0.47+5.12x y = 247.92-11.15x+0.34x2 y = 170.94-8.27x+0.24x2
IUGR(左)和CK仔 猪肠道粘膜基因 表达变化
IUGR(左)和CK（右)肠道粘膜基因表达变化图谱比较
Chen et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 238-243
建立了早期断奶应激肠道黏膜蛋白质组图谱
建立了分辨率较高且重复性好的仔猪肠道粘膜上皮组 织的2-DE图谱，鉴定了一些可能与蛋白质合成、肠道氨基 酸转运吸收相关的差异表达蛋白质。 同一组织3块凝胶的平均蛋白质点数依次为875±28、 836±48和944±26，匹配率达83.81%，84.05%，82.39%. 且平行胶在蛋白质点位置上有较好的重复性。
肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度仅在空肠前段表现出线性变化 趋势，其mRNA相对表达量发育趋势分别表现为四次方曲线 变化(空肠前段)、线性变化(空肠前段)和二次方曲线变化(回 肠末端)。
率先克隆了猪肠道氨基酸转运载体ASCT2、B0、b0,+AT和y+LAT1，以及小 肽转运载体PepT1的cDNA编码区，并在Genbank上注册了6个基因序列。
有机砷制剂导致的环境砷污染
对农作物的影响 土壤中砷酸钠为40mg/kg，水稻减产50%； 土壤中砷酸钠为160mg/kg时，水稻不能 生长；当灌溉水中砷浓度为20mg/kg，水 稻颗粒无收。
Geogenic arsenic contamination and human health-Xinjiang, China
回肠末端
ASCT1 mRNA相对表达量 CAT1 mRNA相对表达量 EAAC1 mRNA相对表达量 PepT1 mRNA相对表达量 日龄 日龄 日龄 日龄 y = -0.10+0.29x y = -1.18+2.68x-0.44x2+0.03x3-0.0005 x4 y = 1.58-0.42x+0.04x2-0.0009x3 y = 2.09-0.28x+0.01x2
Skin lesion due Arsenic toxicity
Geogenic arsenic contamination and human health
Arsenic toxicity symptom Blue feet
This a tubewell with As Contamination still being used By the local people. As concentration: 606 ppb