机械刺激对子宫内膜胞饮突的影响

机械刺激对子宫内膜胞饮突的影响

发表时间：2015-09-07T10:14:46.123Z 来源：《世界复合医学》2015年第7期供稿作者：罗国群1 马文敏1 陈孟循1 叶泉英2 杨美琼1 柳倩茹1

[导读] 佛山市妇幼保健院生殖医学中心胚胎着床是从胚泡植入子宫内膜开始的一系列细胞、分子信号传递过程。

罗国群1 马文敏1 陈孟循1 叶泉英2 杨美琼1 柳倩茹11.佛山市妇幼保健院生殖医学中心广东佛山 52800；2.佛山市科技学院药理教研室广东佛山 528000【摘要】目的：探讨机械刺激对子宫内膜容受性影响的机理。方法：将雌性小白鼠随机分成对照组和刺激组，每组48 只。对照组仅在动情期刮取子宫内膜1 次，刺激组在动情前期先接受特制小号刮匙刺激子宫内膜1 次，动情期再刮取子宫内膜1 次。采用扫描电镜技术，检测子宫内膜的胞饮突的表达。结果：刺激组的胞饮突较对照组的胞饮突表达丰富，差异有极显著意义（P＜0.01）。结论：机械刺激子宫内膜，增加胞饮突的表达，推测机械刺激提高子宫内膜的容受性与增加内膜容受性标志物的表达有关。

【关键词】机械刺激；子宫内膜；容受性；胞饮突【ABSTRACT】Objective: To study the effect of mechanical stimulation on endometrial receptivity. Methods: A total of 96 female mice were randomlydivided into two groups: control group and stimulation group. In stimulation group, emdometrium was scraped both in proestrus and estrus, compared thatonly in estrus in control group. Pinopod expression in the endometrial were determined by scanning electrom microscopy (SEM). Results: The expressionof pinopod in the stimulate group mices’ endometrial were significantly richer than in the control group mices’ endometrial, the difference between eachtwo groups was significant (P<0.01). Conclusions: Mechanical stimulating improve the endometrial receptivity perhaps by improving the expression ofpinopod.【Keywords】Mechanical stimulation; Endometrial; Receptivity; Pinopod【中图分类号】R8【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-07-026-02

胚胎着床是从胚泡植入子宫内膜开始的一系列细胞、分子信号传递过程，成功的着床不仅取决于胚胎的质量，而且取决于子宫内膜的容受性。子宫内膜容受性是指子宫内膜对胚胎的接受能力，即允许胚胎粘附其上直至植入完成的特定阶段，它受严格的时空限制。体外受精—胚胎移植( IVF-ET) 着床失败的病例中约有三分之二是由于子宫内膜容受性不良导致的，因此提高子宫内膜容受性对提高胚胎着床率及临床妊娠率非常重要。

对子宫内膜回声紊乱或子宫内膜异常增厚的患者，采用机械刺激子宫内膜可以提高患者胚胎着床率、临床妊娠率和活产率，但对其机理尚缺少理论研究。本研究将用动物模型进行研究，比较未接受机械刺激和机械刺激子宫内膜的胞饮突的表达，从形态特征探讨机械刺激对子宫内膜的影响，寻找调节子宫内膜胚胎着床的基础，为人工调控子宫内膜接受性提供可靠的理论依据和实践基础。

1 材料与方法1.1 动物分组雌性小白鼠动情周期为4d～5d，分为4期：动情前期、动情期、动情后期和动情间期。每日上午9:00时取清洁级、体重20g～25g的雌性8周龄昆明小白鼠阴道分泌物涂片行HE染色检查，确定其动情周期，连续2个动情周期均正常，将小白鼠编号，用Excel分析工具中随机数字发生器产生随机数字，对应随机数字将小白鼠分成对照组和刺激组，每组48只。

1.2 机械刺激子宫内膜方法及标本采集对照组在动情前期将刮匙放进子宫但不刺激内膜，在动情期刮取子宫内膜；刺激组在动情前期用特制小号刮匙刺激子宫内膜前、后壁各一次，动情期刮取子宫内膜。将对两组小鼠所刮取的新鲜子宫内膜用PBS 洗涤3 遍后，固定于

2.5%戊二醛液中储存于4℃冰箱待行扫描电子显微镜观察。

1.3 扫描电镜观察用PBS 缓冲液彻底冲洗后浸入系列丙酮液中脱水，样本置入2%的乙酸异戊酯中3h，临界点干燥，装台粘胶，涂银粉导电胶，用真空镀膜仪对样本进行金属镀膜，上镜观察。电镜下胞饮突分为发育中胞饮突、完全发育胞饮突、退化的胞饮突。发育中胞饮突，微绒毛细胞开始突出，微绒毛已变短；发育成熟的胞饮突表面裸露，无微绒毛；退化的胞饮突表面皱缩并且出现微绒毛。按Rebecca S, 等的方法，每个样品选取12 个视野观察胞饮突，根据胞饮突的范围进行评分，0分：无胞饮突；1 分：＜25%；2 分：25%～50%；3分：＞50%，然后对评分进行统计学分析。每例标本的结果为5 帧画面的平均值1.4 统计学处理用SPSS17.0 统计学软件，对实验所获得的计量资料，用x ±s 表示，两组间数据比较采用独立样本t 检验，p＜ 0.01 认为差异有显著统计学意义。

2 结果对照组小鼠子宫内膜表面胞饮突数量少（见图1），刺激组小鼠胞饮突表达丰富,大部分胞饮突处于发育完全成熟阶段（见图2），两组比较差异有极显著意义（P ＜0.01）（见表1）。

表1 机械刺激对子宫内膜胞饮突的表达的影响（ x±s, n=48）Table 1 The effect of mechanical stimulation to endometrium on the pinopod（ x±s, n=48）

对照组刺激组 t P

胞饮突 1.87±0.43 2.45 ± 0.57 4.31 0.000

3 讨论

3.1 提高子宫内膜容受性的意义胚胎着床是从胚泡植入子宫内膜开始的一系列细胞、分子信号传递过程，成功的着床不仅取决于胚胎的质量，而且取决于子宫内膜的容受性。子宫内膜容受性是指子宫内膜对胚胎的接受能力，即允许胚胎粘附其上直至植入完成的特定阶段，它受严格的时空限制。正常子宫内膜仅在一个极短的关键时期内允许胚胎着床，这一时期代表着子宫内膜对胚胎的接受性达到最高，称为“着床窗”（nidation window），或称“种植窗”（ implantation window,IW ），又称为“着床窗期”（peri-implantation period）。在人类，此期通常在正常月经周期排卵后的6d～8d，或受精后5d～7d，持续不超过48h；在大鼠、小鼠等啮齿类动物，种植窗在受精后4d，持续约24h。胚胎只有在这一时期才能植入，在种植窗开放前或后，胚胎都不能植入。

胚胎只有在子宫内膜“种植窗”(implantationwindow)开启时才能植入，在种植窗开放前或后，胚胎都不能植入。胚胎和子宫内膜按严格的时空顺序分泌相关蛋白和局部因子，达到相互识别，相互融合进而完成着床[1]。

Achache H 等认为IVF-ET 失败的原因，1/3 归因于胚胎质量欠佳，另外2/3 归因于子宫内膜容受性差。内膜不成熟或不处于着床窗口期，即使移植优质的胚胎，也会导致很低的着床率。胚胎着床的成功与否在很大程度上还取决于胚胎与可容受性子宫内膜间的相互作用，即双方建立“对话”机制，胚胎才可以在子宫内膜中正常着床[2]。

子宫内膜形态分为三型：A 型为三线型或多层子宫内膜，为外层和中部强回声以及内层低回声或暗区，宫腔中线回声明显；B 型为弱三线型，宫腔中线回声不明显；C 型为均质强回声，无宫腔中线回声。

研究显示，hCG 注射日子宫内膜回声类型和胚胎着床率相关，发现子宫内膜回声紊乱或子宫内膜异常增厚可能会影响子宫内膜接受