公共场所空气中细菌的测定(沉降法)
空气沉降菌检验方法
空气沉降菌检验方法
1. 样品采集在动态下进行。
室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、
外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1 m。
采样时，将含营养琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约
桌面高度)，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。
2 细菌培养
在采样前将准备好的营养琼脂培养基置36℃±1℃ 培养24 h，
取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
将已采集的培养基在6 h
内送实验室，于36℃±1℃ 培养48h观察结果，计数平板上细菌菌
落数。
3 菌落计算
肉眼直接观察计数，标记或在菌落计数器上点然后用5－10倍放大
镜检查，是否遗漏空气中细菌菌落总数（cfu/m3）＝平板面积（cm2）* 暴露时间（min）。
公共场所空气中细菌的测定(沉降法)
公共场所卫生标准
➢ 公共场所卫生标准 GB9663~9673—1996、 GB16153~1996 国家技术监督局和卫生部
➢ 公共场所卫生监测技术规范 GB/T 17220— 1998 卫生部
➢ 公共场所卫生标准检验方法 GB/T 18204.1~18204.30--2000
部分公共场所国家标准（细菌数）
❖ 图书馆阅览室：≤75个／皿 ❖ 医院候诊室：≤40个／皿 ❖ 公共交通工具： ≤40个／皿 ❖ 餐厅： ≤40个／皿
注意事项
❖ 培养皿要标记：学号或姓名（皿盖） ❖ 采样点的分布要均匀，不少于4个点，每个点
至少采集2-3样本。 ❖ 采样高度：1.2-1.5米 ❖ 采样结束是要倒置平皿 ❖ 实验结果要有图片（拍照） ❖ 实验报告要有讨论
公共场所卫生标准
➢ 旅店业卫生标准 ➢ 文化娱乐场所卫生标准 ➢ 公共浴室卫生标准 ➢ 理发店、美容店卫生标准 ➢ 游泳场所卫生标准 ➢ 体育馆卫生标准 ➢ 图书馆、博物馆、美术馆、展览馆卫生标准 ➢ 商场、书店卫生标准 ➢ 医院候诊室卫生标准 ➢ 公共交通等候室卫生标准 ➢ 公共交通工具卫生标准 ➢ 饭馆（餐厅）卫生标准
❖ 细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透 明、易挑取、质地均匀。
❖ 菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致。
实验安排
❖ 分组：按照学号平均分成8组 ❖ 采用地点：
1-2组 图书馆阅览室 3-4组 校医院大厅 5-6组 第一餐厅1楼 7-8组 公交车站501公交车 ❖ 实验记录方法：个人计数结果、小组平均结果 ❖ 实验结果：与国家相应标准比较
❖ 试剂与材料：营养琼脂培养基 ❖ 仪器与设备：恒温培养箱、培养皿等 ❖ 采样与测定方法：
平皿沉降法测定空气中细菌原理
平皿沉降法测定空气中细菌原理
3. 采样：在待测空气环境中使用采样器或空气采样器采集空气样品。可以使用灭菌的采样 器或空气采样器，通过吸气或冲击采样的方式，将空气中的微生物颗粒收集到培养基上。
4. 培养：将采样后的平皿放置在恰当的温度和湿度条件下，让培养基中的细菌进行生长。 一般会在适宜的温度下（如30-37摄氏度）培养24-48小时。
平皿沉降法测定空气中细菌原理
平皿沉降法是一种常用的方法，用于测定空气中细菌的数量和种类。其原理基于细菌在空 气中的沉降速度不同，通过将空气中的微生物沉降到培养基上，然后在适宜条件下培养和计 数。
以下是平皿沉降法测定空气中细菌的基本步骤和原理：
1. 准备培养基：选择适合细菌生长的培养基，如营养琼脂平板。确保培养基的质量和无菌 性。
Байду номын сангаас
5. 计数：在培养时间结束后，观察平皿上的菌落并进行计数。可以使用显微镜或计数器来 辅助计数。细菌形成的菌落会在平皿上形成可见的斑点。
平皿沉降法测定空气中细菌原理
通过计算菌落的数量和面积，可以估算空气中细菌的浓度。通常以CFU（菌落形成单位） /m³作为表示细菌浓度的单位。
需要注意的是，平皿沉降法只能测定空气中的沉降菌落，无法测定悬浮在空气中的微生物 。此外，平皿沉降法也无法区分不同种类的细菌，只能提供总体的细菌数量信息。因此，在 使用平皿沉降法时，需要结合其他方法和技术，综合评估空气中微生物的情况。
空气中微生物的检测
2011.11.21
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一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果计算 五、结果评价
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一、实验目的和意义
掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
学习对室内空气进行初步的微生物学评价
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实验意义
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三、实验步骤
1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做） ↓
培养皿暴露空气中5min/10min ↓
37℃温箱培养24h ↓
计数和结果评价
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采样布点原则 a. 根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，
小于50m2的房间应设3个点，50～100m2设3～5个 ；100m2以上至少5个点 b. 采样高度 和人呼吸高度一致（1.2～1.5m） c. 采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,采样 时关闭门窗，减少人员走动
空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
用于医院、公共场所等空气质量的评价
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二、实验原理
1：自然沉降法（沉降平板法）
根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的 作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上， 经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。
特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm 的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集 率较低。
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各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义
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特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高
空气中微生物测定
1 实验 空气中微生物的检测
一、目的要求
1、通过实验了解一定环境空气中微生物的分布状况。
2、学习并掌握空气中微生物检验的基本方法。
二、实验原理
根据空气中微生物一般吸附在尘埃中，由于地心引力尘埃下沉到地面或物体表面原理制定的。
三、实验器材
培养皿、生化培养箱、营养琼脂。
四、操作方法（沉降法）
1、以无菌操作将已融化并冷却至50℃的营养琼脂倒入培养皿中，放置凝固。
2、在不同地点将培养皿分别打开，在空气中暴露15分钟，立即将培养皿盖好，作上记号，并作一空白对照。
3、将培养皿放置37℃恒温培养48小时，取出观察其结果并计算出菌落数。
4、计算
计算公式：每立方米空气中细菌数＝50000N/(A ×t)
N ：为培养皿经培养后的菌落数
A ：为所用平皿面积(cm 2
)，平皿直径(ø)9cm
t ：为平皿暴露于空气中的时间(t=15min)
（这个公式根据：根据15min 内在100 cm 2面积上降落的细菌数约等于10升空气中的含菌数而估计的。
）
五、实验报告
1、实验结果
记录所得空气中的微生物的量（个/L ）；
2、思考题
比较采用过滤法和落菌法求得的每升空气中细菌含量的差异，找出原因。
沉降法检测空气中微生物数量
环境科学与工程学院生物工程10（1）班叶智源3110007848实验二沉降法检测空气中微生物数量（一）实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物2．了解空气中微生物的分布状况（二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材1．试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 5.0g, 蛋白胨10.0g，NaCl 5g, 水1000ml，pH 7.2~7.4马铃薯培养基配方：马铃薯200g, 蔗糖20g, 水1000ml，pH 7.2高氏一号培养基配方：淀粉20g, 硝酸钾1.0g, 磷酸氢二钾0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.42. 仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等（四）实验方法1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。
临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。
2．暴露取样在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3．培养观察：细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。
细菌培养48h，真菌和放线菌培养4-6天。
计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4.计算1m3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L空气中的细菌数。
II、III、IV类环境空气消毒效果监测(沉降法)标准操作规程
3.必要时准备空白对照培养皿，做好标记。
2.怀疑医院感染暴发与空气污染有关时∶ 随机监测。
采样方法（沉降法）
布点图示
结果判定
1.II类环境∶ 空气中的细菌菌落总数≤4CFU/（和IN类环境∶空气中的细菌菌落总数≤4CFU/（5分钟·直径9mm平皿）
3.必要时分离致病性微生物。
注意事项
1.采样前应关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟。
II、III、IV类环境空气消毒效果监测（沉降法）标准操作规程
持有部门： 文件编号：
制定者： 审核者： 版次：
制定日期： 审核日期： 执行日期：
适用范围∶
1.感染高风险部门日常监测。
2.当怀疑医院感染暴发与空气污染有关时，暴发调查时应进行目标微生物检测。
采样时间
1.日常监测∶在房间消毒或规定的通风换气后、从事医疗活动前采样。
空气中细菌含量的测定
空气中细菌含量的测定
采用沉降法测定空气中的细菌数
1．培养基的配制。
称取10克蛋白陈、3克牛肉浸膏、5克氯化钠、20克琼脂，充分混合后，加入到1000毫升蒸馏水中，用盐酸和氢氧化钠调节溶液的pH值为7.4～7.6，过滤除去沉淀后，分装在5个250毫升三角烧瓶中，放入高压蒸汽灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌15分钟。
取出后置于暗处备用。
2．制作平皿。
加热使测定所用的培养基融化，待冷至50～60摄氏度时，倾注入培养皿，每皿注入15～20毫升，一共制作5块。
盖上皿盖。
3．细菌含量的测定。
（l）利用微生物在空气中能随尘粒下沉的原理,将盛有培养基的平皿平放，移去平皿盖，在空气中暴露五分钟，培养皿距地面1米，距墙壁最近不可小于30厘米，室内中央及周角各放一平皿。
（2）培养：放入37摄氏度恒温箱中培养24小时。
（3）计算：每立方米细菌数=50000N/（At）
其中：A是所用平皿面积（cm2）；t是平皿暴露的时间（min）；N是培养后平皿的菌落数。
空气中细菌含量测定记录
4．判断标准
100,000级生产区≤10个/碟(平均值)
5．注意事项：
1．本实验结果易受环境影响，因此采样时不要使空气流动。
2．平皿和其他器材须作高压灭菌处理。
空气沉降菌检测标准
空气沉降菌检测标准空气沉降菌检测标准是用于评估室内环境卫生状况的一项重要指标。
通过对空气中沉降的微生物进行采样和分析，可以了解室内环境中的微生物污染水平，为制定相应的卫生管理措施提供依据。
本文将介绍空气沉降菌检测的标准及其意义。
一、空气沉降菌检测的目的和意义空气中的微生物主要通过悬浮颗粒物传播，其中一部分会沉降到地面或物体表面。
通过对空气沉降菌进行检测，可以了解室内空气中的微生物污染状况，判断室内环境的卫生状况，及时采取相应的卫生管理措施，保障人们的健康。
二、空气沉降菌检测的方法1.采样方法空气沉降菌的采样通常采用接触板法或落尘法。
接触板法是将培养基装在平板上，暴露在空气中一定时间后，将培养基进行培养和菌落计数。
落尘法是将培养基装在容器中，暴露在空气中一定时间后，将培养基进行培养和菌落计数。
2.采样点位空气沉降菌的采样点位应选择在室内空气流动较为充分的区域，如大厅、走廊等。
同时，应选择不同功能区域的采样点位，以全面了解室内环境的微生物污染状况。
3.采样时间空气沉降菌的采样时间一般为1小时，但具体时间可根据实际情况进行调整。
采样时间应选择在人员活动较频繁的时段，以获取更准确的结果。
4.样品保存和运输采集的空气沉降菌样品应立即送至实验室进行分析，如无法立即送检，可将样品保存在4℃冰箱中，尽快送检。
样品在运输过程中应避免受到振动和高温等因素的影响，以保证结果的准确性。
三、空气沉降菌检测的评价标准空气沉降菌检测的评价标准主要包括总菌落数和常见致病菌的检出率。
1.总菌落数总菌落数是指在一定面积上计数的空气沉降菌的总数。
根据不同场所和用途的要求，对总菌落数的限值也有所不同。
通常来说，室内空气中的总菌落数应控制在一定范围内，以保证室内环境的卫生状况。
2.常见致病菌的检出率常见致病菌的检出率是指在空气沉降菌中检测到的致病菌的比例。
常见的致病菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
根据不同场所和用途的要求，对常见致病菌的检出率也有所不同。
空气细菌测定
空气细菌测定将采得的空气样品，通过培养，进行细菌菌落计数，或折算成单位体积空气中所含细菌数，对照标准，作出空气清洁或污染程度的评价。
一、沉降平皿法将盛有培养基的平皿持平暴露在空气中一定时间，然后置温箱培养，计算所生长的菌落数。
1．制备培养基常用的营养琼脂培养基含以下成分：牛肉浸膏50g；蛋白陈10g；氯分钠5g；琼脂20g；加水至1000ml。
调节培养基pH7.2～7.4，经15磅30分钟高压灭菌。
2．空气采样（1）选择有代表性的采样点，一般在室内四角及室中央，放置含营养琼脂的平皿。
（2）打开皿盖（将皿盖置于平皿底下，不可仰放，以防污染），将有培养基的平皿，暴露于空气10～20分钟（视空气清洁程度而定），采样毕合上皿盖，记录采样时间。
（3）培养皿置于37℃温箱培养24小时。
（4）记录5个平皿的菌落总数。
3．结果计算：100cm2琼脂面积上，5分钟所降落的菌落数，相当于10L空气所含细菌数，计算结果如下：t——平皿暴露于空气中的时间（分钟）N——培养后，平皿上的菌落总数A——所用平皿的面积（cm2）二、离心式空气微生物采样法（一）原理：采用LWC-1型离心式空气微生物采样器。
当采样器通电后，借助采样器内叶轮的高速旋转，把距离40cm范围内的空气吸进采样器，由于离心力的作用，空气中的粒子冲击到含有琼脂培养基的塑料条上，而空气呈螺旋状离开采样器涡壳流出。
（二）操作步骤1．根据所采细菌种类，往琼脂培养基条上浇灌不同种类的培养基，每条琼脂培养基的注入量约为6ml。
2．把琼脂培养基条，从无菌塑料套中取出，插入采样器头部的涡壳内。
3．根据需要选定采样时间的采样地点。
4．将电源开关拨至“开”的位置，指示灯亮。
5．按动按钮，即起动开始采样。
6．采样完毕，关断电源开关。
将基条从涡壳内抽出，放入无菌塑料套中（将条的凹面对准套的凸面）送恒温箱中进行培养，然后计算菌落数。
7．菌落计算菌落形成单位CFU/m3=琼脂培养基条上的菌落数／40×采样时间（min）琼脂培养基的表面积为34×1cm2。
空气细菌总数测定中自然沉降法和撞击法的应用与比较
空气细菌总数测定中自然沉降法和撞击法的应用与比较摘要：目的：对自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用效果进行探究。
方法：选择酒店室内和室外以及万级实验室作为研究对象，分别使用自然沉降法与撞击法来获得三个环境中空气细菌总数情况，对测定结果进行对比分析。
结果：空气细菌总数的自然沉降发和撞击法测定结果存在正的线性相关关系，在测定灵敏度上，撞击法优于自然沉降法（P＜0.05），差异有统计学意义。
结论：撞击法具有较高的灵敏度，能够较为准确的反映空气中细菌含量情况，但当采样时间较长时，其准确度会下降。
关键词：自然沉降法；撞击法；空气细菌总数；应用效果比较随着人们保护意识的不断增强，对空气环境的质量提出了更高的要求，细菌等空气微生物的危害得到人们的充分重视，加强空气细菌的检测，对于提高控制质量水平十分重要[1]。
本文就对分别选择了酒店室内和室外以及公司无菌实验室空气环境为研究对象，探讨自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的效果，以提高空气细菌检测工作水平，现报道如下：1材料和方法1.1实验材料仪器准备，空气微生物采样器，型号TYK-6型；营养琼脂培养基，批号20131125-00；培养皿，直径9cm。
1.2空气环境采样对象：某酒店室内和室外以及公司万级实验室。
1.3空气细菌总数测定方法1.3.1自然沉降法测定1.3.1.1根据现场大小，选择3~5个采样点（室内面积不足50m2，设置3个采样点；50m2以上的设置5个采样点；采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
）采样高度为1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m，避开通风口、通风道等。
1.3.1.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，分别自然暴露在空气中，时间为5min和10min，盖上皿盖，采样完成。
1.3.1.3将平板倒置放入35℃~37℃恒温培养箱中，培养48h后取出，进行菌落计数[4]。
室内空气中细菌的测定
原理： 空气中附着于尘埃或飞沫小滴上的细菌，经过一段时间，可自然沉降于培养基的表面上，经培养后，计数其生长的菌落数，再按公式推算出每立方米空气中的细菌数。
实验准备：
仪器与设备： 高压蒸汽灭菌器 电热恒温干燥箱 恒温培养箱 电冰箱 玻璃平皿及制备培养基用的一般设备
1
2
营养琼脂培养基：
（二）试剂与材料：
操作步骤： 制作营养琼脂平板（无菌操作） 操作者面前点燃酒精灯 打开已灭菌处理的平皿 倾注适量营养琼脂培养基（15～20毫升） 冷凝（大约15分钟）
（二）选择采样点的要求：
（二）选择采样点的要求： 1．采样点的数量 根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于50㎡的房间应设（1～3）个点；50㎡～100㎡设（3～5）个点；100㎡以上至少设5个点。在对角线上或梅花式均匀分布。 2．采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。 3．采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。相对高度0.5m～1.5m之间。
演讲人姓名
——平皿暴露沉降法
202X
室内空气中细菌的测定
A
B
学习和掌握平皿暴露沉降法测定公共场所空气中细菌的总数。
A
评价居室的卫生状况
B
目的：
理论依据和实际应用： 室内空气中的微生物主要来源是人们在室内的生活和活动，使微生物随飞沫与悬浮颗粒物飞扬于空气中。所以室内空气中的微生物数量的多少取决于室内卫生状况、居住密度、居民健康情况、人们的活动情况、室内通风效果等。居住密度大、活动频繁、通风不良时，细菌总数就多。所以它可以代表居室一般卫生状况的意义；
（三）采样方法
选择好采样点后，将营养琼脂平板置于这些选测的部位，并将皿盖揭开，使平皿内营养琼脂培养基表面暴露于空气中5分钟。盖上皿盖，将平板倒转，置于37℃恒温培养箱中培养24小时后计数菌落数。
公卫空气细菌实验
A-平板面积（cm2）T-暴露时间（min）
N-平均菌落数（cfu/皿）
影响因素：
1.温度对细菌数量影响较大，温度越低，细菌数越少。
2.气流，不仅可以把室外的细菌带入室内，也会将地面、墙壁的含菌粒子扬起。
3.日光，波长为254纳米的紫外线光具有杀菌作用
4.湿度，湿度过低，繁殖体易趋向死亡。
室内空气质量标准（GB/T18883-2002）
2500cfu/m3
图书馆、阅览室的空气卫生标准：空气细菌总数≤2500cfu/m3（撞击式），或≤30个/皿（沉降式）
娱乐场所的卫生标准：空气≤4000cfu/m3
空气样品做细菌总数（普通营养琼脂平板）计数，同时记录当时温度，相对湿度及其人员活动情况
所需仪器设备和实验材料
试剂和仪器：
高压蒸汽灭菌器
干热灭菌器
恒温培养箱
冰箱
5平皿
结果计算
结果计算：
.自然沉降法
根据奥梅梁斯基建议，面积为100cm2的平板培养基，暴露于空气中5min，于37℃温箱培养24h后所生长的菌落数相当于10L空气中的细菌数
幼托机构室内卫生标准：空气细菌菌落数应≤2500cfu/cm3（沉降法）
老师审查意见
【实验记录格式参考】
实验名称.......
专业
医学检验技术
班级
14407
实验
分组
小组
成员
王雪妮
张雅川
陈苏强
刘欢颖
赵欣欣
实
验
准
备
时间
准备内容
培养基制备计或PH精密试纸
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
一、采样时间
选择消毒处理后与进行医疗活动之前采 样
。 二、采样高度
与地面垂直高度80-150厘米。
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
2/10
三、布点方法
1.面积≤30 m2, 设一条对角线取
三点, 即中间一点, 两端各距墙1米处各
取一点。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
5/10
9厘米直径普通琼脂平皿
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
6/10
放置方法
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
7/10
五、结果分析
I类区域: ≦4.0cfu/(30min)·90mm II类区域: ≦4.0cfu/(15min)·90mm III类区域: ≦4.0cfu/(5min)·90mm
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2. 室内面积>30m2，设两条对角线，东， 西，南，北，中取五点，其中东，西，南， 北距墙均1
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
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四、采样方法 用9厘米直径普通琼脂平皿, 打开
盖后面朝下斜扣到底盘, 在采样点准确 暴露5分钟后, 送检培养。
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
室、治疗室供给室清洁区、急诊室、化验 室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域: 传染病科及病房。
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
10/10
医院常规空气细菌培养自然沉降法采样方法
8/10
六、附录
Ⅰ类区域:
层流洁净手术室、层流洁净病房
（参考洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域:
普通手术室、产房、婴儿室、早
空气中微生物的检测沉降法
五、结果
• 用钢笔于平板底点数每块平板上的菌落数，再计 算出1落数=每块平板数÷πr2×100。再将5个部 位所得菌落数相加除以5求平均数，并换算出室内 每立方米空气的细菌总数。由于100cm2培养基暴 露于空气中10min相当于接受20L空气中的活菌， 又因1m3等于1000升。所以每立方米空气中的活 菌数＝100cm2培养基上菌落平均数÷20×1000。 计算菌落时，凡二个或几个菌落边缘有相互重叠 者，均分别计算为二个或几个。沉降法检查出的 活菌总数，客观地反映了空气污染的程度和卫生 通风状况，是判断空气污染的指标之一，亦常用 于评价空气消毒除菌的效果。
六、思考题
1.通过微生物的分布实验，说明什么？ 2.微生物在自然界与人体的分布，与医 药卫生工作有什么关系？尤其对药品 的生产和微生物学检查有何重要意义？
三、材料
• 1.培养基：普通琼脂平板。 • 2.仪器：培养皿.三角瓶.
四、实验步骤
• 1.取普通琼脂平板5个，分别在其底 部标记1、2、3、4与中。 • 2.将标有1、2、3、4的平板分别放置 于室内四角，标有“中”字的平板放 于室内中央，均离地面约1m高，打 开平皿盖，使培养基暴露于空气中， 10min后盖好平皿盖。同时放一普通 琼脂平板于桌面上不启盖，以作对照。 • 3.将上述6个平皿置37℃恒温箱中培 养24h后取出观察结果。
空气中微生物的检测沉降法
李能能
微生物沉降法检测仪器
一、目的要求
• 1.通过实验证明自然环境的空气 存在大量的微生物。 • 2.熟悉检测空气中细菌的方法
二、实验原理
• 检查空气中细菌中的方法很多， 沉降法是其中常用的一种，它是 利用含有细菌的尘粒或液滴因重 力自然下降至培养基表面来进行 检查。根据推算，每100cm2培 养基在空气中暴露5min，其表 面接受自然沉降的细菌相当于 10L空气中所含的细菌数
公共场所空气中细菌总数检验方法
公共场所空气中细菌总数检验方法1 定义撞击法（impacting method）是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使用空气通过狭颖或小孔而产生高整气流，使用悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°、48h培养后，计算出每m3空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
自然沉降法（natural sinking method）是指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露15分钟，经37°、48h培养后计数生长的细菌菌落数的采样测定方法。
2 仪器和设备2.1高压蒸汽灭菌器。
2.2干热灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4冰箱。
2.5平皿（直径9cm）。
2.6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。
2.7撞击式空气微生物采样器。
3培养基3.1营养琼脂培养基3.1.1成分；蛋白胨牛肉浸膏10g氯化钠3g琼脂15～20g蒸馏水1000ml3.1.2制法将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌。
用自然沉降法测定时，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。
4操作步骤4.1撞击法4.1.1选择有代表性的位置设置采样点。
将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。
4.1.2样品采完后，将带核辐射营养琼脂平板置36±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每m3空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。
4.1.3选择撞击式空气微生物采样器的基本要求。
（a）对空气中细菌捕获率达95%。
（b）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。
4.2自然沉降法4.2.1设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
菌落沉降法
菌落沉降法
菌落沉降法是一种通过收集和培养空气中的微生物粒子，以测定洁净环境内活微生物数的方法。
该方法采用沉降法原理，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数。
具体步骤如下：
1.准备所需材料，包括培养皿、培养基、计时器、温度计、湿度计等。
2.选择一个待测的洁净环境，确保室内无人走动，关闭门窗，避免外界污染物进入室内。
3.将培养皿放置在室内中央的干净台面上，打开计时器，记录沉降时间。
4.在沉降过程中，注意保持培养皿的清洁，避免污染。
5.在沉降时间结束后，关闭计时器，取下培养皿，翻转培养皿，使菌落面朝上，放在恒温培养箱内进行培养。
6.观察并记录菌落的生长情况，记录菌落的数目和形态特征。
7.根据记录的数据计算出空气中的活微生物数，并以此评估洁净环境的洁净度。
需要注意的是，菌落沉降法只是一种测定空气中微生物数量的方法，不能代表全部环境中的微生物情况。
此外，在进行测试时，需要严格遵守操作规程，保证测试结果的准确性。
空气中细菌的测定
高压蒸气灭菌器
恒温培养箱
玻璃平皿或一次性灭菌平皿，9cm
六级筛孔撞击式空气微生物采样器
环境卫生学
（四）试剂 营养琼脂培养基 （五）操作方法 布点要求 采样点选择根据采样点面积及环境状况，选择有代表性的位置设置采样点。室内面积不
足50m2的设置1个采样点， 50~200m2的设置2个采样点，200m2以上的设置3~5个采样点。采 样点按均匀布点原则布置，室内1个采样点的设置在中央， 2个采样点的设置在室内对称点上，3 个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点，其他的按均匀布 点原则布置。采样点距离地面高度1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m。采样点应避开通风口、通风 道等。 采样器准备 ① 仪器的清洁消毒：根据采样点的洁净要求，对仪器表面进行不同程度的清洁或消毒处理。 ② 采样装置的清洁灭菌：取下采样装置上的盖子和端盖，用酒精棉球火焰灭菌约1min，然后将其
置于储存盒内。同一点应重复采样3次，按上述各步骤进，于恒温培养箱中，37 ℃培养24h后计数菌落数。 菌落计数 计数培养后每皿所生长的菌落数，并求出同一点重复采样的平均菌落数。 空气中细菌总数的计算 根据平皿菌落计数结果，用下列公式换算成每立方米空气中的菌落数，以
移回采样装置上，冷却。
环境卫生学
采样 ① 按仪器说明书操作，将采样时间的旋钮调到选定的采样时间档上。选择直流或交流电源，打开
电源开关，设定好采样时间。 ② 将采样的平皿盖略松开，打开已冷却的端盖，将无菌采样平皿置于采样装置座的平皿托架上，
旋紧端盖。 ③ 按下计时开关，仪器便开始采样和计时，调节流量（28.3L/min），采样5~15min。 ④ 设定的采样时间归零后，仪器自动关机，采样结束。旋开端盖，立即将平皿盖盖上，将平皿倒
公共场所卫生检验方法 细菌总数 自然沉降法
公共场所卫生检验方法细菌总数自然沉降法1. 适用范围本方法规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与实验室培养方法。
本方法适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定，其他场所可参照执行。
注：本方法中同一个指标如果有2个或2个以上检验方法时，可根据技术条件选择使用。
2. 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1 细菌总数公共场所空气中采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃〜37℃、48h 培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
2.2 真菌总数公共场所空气中采集的样品，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃，5d培养所形成的菌落数。
2.3 β-溶血性链球菌公共场所空气中采集的样品，经35℃〜37℃、24h〜48h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。
2.4 嗜肺军团菌样品经培养在GVPC琼脂平板上生成典型菌落，并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板上不生长，进一步经生化试验和血清学鉴定确认的菌落。
2.5 撞击法采样撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经实验室培养后得到菌落数的测定方法。
2.6 自然沉降法将营养琼脂平板暴露在空气中，微生物根据重力作用自然沉降到平板上，经实验室微生物培养后得到菌落数的测定方法。
3. 细菌总数3.1 原理采用撞击式或自然沉降法采样，营养琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的细菌总数。
3.2 撞击法（省略）3.3自然沉降法3.3.1仪器和设备3.3.1.1高压蒸汽灭菌器3.3.1.2恒温培养箱3.3.1.3平皿：直径90 mm3.3.1.4采样支架3.3.2 培养基3.3.3采样3.3.3.1采样点：见附录A。
3.3.3.2采样环境条件；见3.2.3.2。
3.3.3.3采样方法；将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min。
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❖ 菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致。
实验安排
❖ 分组：按照学号平均分成8组 ❖ 采用地点：
1-2组 图书馆阅览室 3-4组 校医院大厅 5-6组 第一餐厅1楼 7-8组 公交车站501公交车 ❖ 实验记录方法：个人计数结果、小组平均结果 ❖ 实验结果：与国家相应标准比较
公共场所卫生标准
➢ 旅店业卫生标准 ➢ 文化娱乐场所卫生标准 ➢ 公共浴室卫生标准 ➢ 理发店、美容店卫生标准 ➢ 游泳场所卫生标准 ➢ 体育馆卫生标准 ➢ 图书馆、博物馆、美术馆、展览馆卫生标准 ➢ 商场、书店卫生标准 ➢ 医院候诊室卫生标准 ➢ 公共交通等候室卫生标准 ➢ 公共交通工具卫生标准 ➢ 饭馆（餐厅）卫生标准
❖ 试剂与材料：营养琼脂培养基 ❖ 仪器与设备：恒温培养箱、培养皿等 ❖ 采样与测定方法：
（1）将营养琼脂培养皿置于采样点距地面1.2-1.5米高度， 将培养皿揭开，暴露于空气中5分钟，盖上皿盖，将平皿倒 置，置于37摄氏度恒温培养箱中培养24小时。
（2）计数营养琼脂培养基表面上所生长的菌落数。
菌落的菌的测定（沉降法）
公共场所卫生标准
➢ 公共场所卫生标准 GB9663~9673—1996、 GB16153~1996 国家技术监督局和卫生部
➢ 公共场所卫生监测技术规范 GB/T 17220— 1998 卫生部
➢ 公共场所卫生标准检验方法 GB/T 18204.1~18204.30--2000
部分公共场所国家标准（细菌数）
❖ 图书馆阅览室：≤75个／皿 ❖ 医院候诊室：≤40个／皿 ❖ 公共交通工具： ≤40个／皿 ❖ 餐厅： ≤40个／皿
注意事项
❖ 培养皿要标记：学号或姓名（皿盖） ❖ 采样点的分布要均匀，不少于4个点，每个点
至少采集2-3样本。 ❖ 采样高度：1.2-1.5米 ❖ 采样结束是要倒置平皿 ❖ 实验结果要有图片（拍照） ❖ 实验报告要有讨论
公共场所环境质量调查常选用指标
❖ 温度 ❖ 相对湿度 ❖ 风速 ❖ CO2 ❖ CO
❖ 可吸入尘（IP） ❖ 空气细菌数 ❖ 噪声 ❖ 照度 ❖ 甲醛
空气中细菌的测定（沉降法）
❖ 原理：空气中附着在尘埃或飞沫小滴上的细菌，经过一段时 间，可自然沉降于培养基表面上，经培养后可计数其生长的 菌落数。