改良一步法微量淋巴细胞毒交叉试验
肾移植配型标准
肾移植配型标准
肾移植配型的标准主要包括以下几个方面：
1. 血型相匹配：换肾前应进行ABO血型相容性试验，要求器官移植时血型必须相配。
如果血型错配，此时受体血清中存在相应抗体，则可能会发生超急性的排斥反应。
2. 淋巴细胞毒性试验阴性：换肾前应进行淋巴细胞毒交叉配合试验，以检测受体的血型中是否存在针对供体的人类白细胞抗原抗体，淋巴细胞毒性试验呈阴性才满足换肾条件。
3. 基因位点接近：换肾前应通过血清学检测白细胞抗原，尽量根据对淋巴细胞有细胞毒作用的抗体种类，来选择位点相对接近的供者。
4. 其他条件：需要给患者进行心电图、心脏彩超、CT等检查，判断患者的身体情况。
对于身体状况差、无法耐受肾移植手术者，应谨慎手术。
请注意，以上仅为一般性的标准，具体的配型标准可能会根据患者的具体情况和医疗机构的政策有所差异。
如果您正在考虑肾移植，建议您咨询专业医生以获取更详细的信息。
2023年-2024年检验类之临床医学检验技术(中级)能力测试试卷B卷附答案
2023年-2024年检验类之临床医学检验技术（中级)能力测试试卷B卷附答案单选题（共45题）1、酶动力学检测ALT的基质是A.丙氨酸和α酮戌二酸B.丙酮酸和谷氨酸C.天门冬氨酸和α酮戌二酸D.草酰乙酸和谷氨酸E.谷胱甘肽和氨基酸【答案】 A2、单向免疫扩散试验与电泳结合的免疫技术称为（）。
A.对流免疫电泳B.火箭免疫电泳C.免疫电泳D.免疫固定电泳E.免疫印迹【答案】 B3、酸化血清溶血试验主要用于下列哪种疾病的诊断A.阵发性睡眠性血红蛋白尿B.不稳定血红蛋白病C.遗传性球形红细胞增多症D.阵发性寒冷性血红蛋白尿E.自身免疫性溶血性贫血【答案】 A4、患者，女性，40岁，因乏力、腹胀1个月。
常规检查后行骨髓穿刺符合慢性粒细胞白血病（慢性期）骨髓象。
A.慢粒合并骨髓纤维化B.慢粒进入加速期或者急变期C.急粒变D.原发性骨髓纤维化E.急淋变【答案】 B5、不属于自身免疫性溶血性贫血的是A.温反应性抗体型溶血性贫血B.冷反应性抗体型溶血性贫血C.冷凝集综合征D.阵发性睡眠性血红蛋白尿症E.阵发性冷性血红蛋白尿症【答案】 D6、患儿10个月，面色苍白，面肌震颤，红细胞2．8×10A.生理性贫血B.巨幼红细胞性贫血C.营养性缺铁性贫血D.再生障碍性贫血E.营养性混合性贫血【答案】 B7、反映骨髓红细胞增生功能的指标A.RDWB.PDWC.RetD.MPVE.MCV【答案】 C8、巨幼细胞性贫血A.红细胞中央淡染区扩大明显B.原始粒细胞＞50％C.α-NAE阳性反应，可被氟化钠抑制D.骨髓红系细胞增生伴巨幼变E.网织红细胞增高，＞15％F.以异常中性中幼粒细胞增多为主【答案】 D9、某慢性低氧血症患者出现代谢性酸中毒和高钾血症，但血压正常。
分析该患者血钾增高的原因是由于（）。
A.肾小管K离子-H离子交换增加B.肾小管Na离子重吸收减少C.肾小管K离子-Na离子交换减弱D.肾小球滤过率降低E.近球小管H离子重吸收增多【答案】 C10、尿液标本采集后，送检时间应在（）。
普通外科学(医学高级)：器官移植试卷(题库版)
普通外科学(医学高级)：器官移植试卷（题库版）1、多选器官保存损伤包括（）。
A.热缺血损伤B.冷缺血损伤C.缺血再灌注损伤D.机械灌注损伤E.深低温损伤正确答案：A, B, C2、单选急性排斥反应多出现在（江南博哥）移植后（）。
A.24小时内B.2～3天内C.1个月内D.1～2个月内E.1～2年内正确答案：C3、单选下列哪项指标是进行肺移植的适应证（）。
A.FEV1<20%B.FEV1<30%C.FEV1<40%D.FEV1<50%E.FEV1<60%正确答案：B4、单选下列哪一种情况禁忌作为器官移植的供者（）。
A.脓毒症血培养阴性B.年龄超过50岁C.乙肝病毒感染D.患骨肉瘤E.患脑原发性恶性肿瘤正确答案：D参考解析：下列情况禁忌作为器官移植的供者：①脓毒症血培养阳性或已知有全身性感染尚未彻底治愈；②人类免疫缺陷病毒感染；③患恶性肿瘤（脑原发性恶性肿瘤除外）。
因此，题中的A、B、C及E都不算是禁忌的供者。
当然采用乙肝病毒感染者应慎重。
5、单选下列哪种移植在移植过程中始终保持有效血供（）。
A.心脏移植B.肝移植C.皮瓣移植D.肾移植E.胰腺移植正确答案：C6、单选淋巴细胞转化率超过多少，说明供受者的淋巴细胞抗原不同，即应放弃做器官移植（）。
A.<10%B.10%～20%C.20%～30%D.30%～40%E.>40%正确答案：C7、单选肾移植术后感染最常见的细菌是（）。
A.溶血链球菌B.大肠埃希菌C.铜绿假单胞菌D.阴沟杆菌E.金黄色葡萄球菌正确答案：C8、单选组织配型方法是（）。
A.HLA配型B.血小板补体结合试验C.花环试验D.花结抑制试验E.以上都是正确答案：E9、单选女性，36岁，右手掌被菜刀砍伤，伤口长5cm，经检查无深处组织损伤，处理措施是（）。
A.清创包扎B.清创，游离植皮C.清创，皮瓣移植D.清创缝合E.三角度瓣转移缝合正确答案：D参考解析：菜刀砍伤后伤口属于污染伤口，创缘整齐，伤口较长，且手掌处张力较大，所以要清创缝合，不需要植皮。
外科护理(医学高级)：器官移植病人的护理试题
外科护理(医学高级)：器官移植病人的护理试题1、单选我国目前主要供体来源是（）A.有心跳的脑死亡供体B.无心跳的尸体供体C.无心跳的脑死亡供体D.活体亲属供体E.活体非亲属供体正确答案：B参考解析：尸（江南博哥）体供体分为有心跳的脑死亡供体，心脏停搏的脑死亡供体和无心跳的尸体供体，后者是我国目前主要供体来源。
2、多选排斥反应的表现有（）A.皮肤苍白，温度下降B.发热、血压增高、情绪异常C.局部肿胀、疼痛D.尿少E.神经功能障碍正确答案：B, C, D3、单选下列关于游离皮片移植不正确的是（）A.刃厚皮片用于肉芽创面较好B.中厚皮片是整形修复中最常使用的皮片C.全厚皮片多用于颜面、颈、手、足等部位D.刃厚皮片多用于手掌、足底和面部等部位E.点状植皮用肉芽创面上移植成功率高正确答案：D4、多选游离植皮术后护理，正确的是（）A.供皮及植皮部位应制动和抬高B.术后3日换药C.注意局部保暖D.观察有无感染征象E.供皮区无特殊情况不必换药正确答案：A, C, D, E5、单选男性，33岁，同种异体肾移植术后第6天，诉全身乏力，情绪低落，移植肾区胀痛。
体检：体温38.6℃，脉搏98次／分，血压165/96mmHg，尿量减少至25ml/h，血肌酐572mmol/L。
目前该病人最关键的处理措施为（）A.监测体温变化B.应用利尿药C.应用抗凝药物D.MP冲击治疗E.大量补液正确答案：D6、单选不属于同基因移植的是（）A.异体皮肤移植B.同卵双生异体移植C.自体皮肤移植D.自体输血E.自体骨移植正确答案：A7、单选男性，37岁，肾衰竭多年，现找到一个可移植的肾源，经组织配型检查可以移植，当日手术。
当移植手术完成后，约10分钟肾脏由红变暗，出现斑块、青紫、坏死并寒战、发热，病人出现的问题是（）A.超急排斥反应B.急性排斥反应C.加速性排斥反应D.慢性排斥反应E.以上都不对正确答案：A8、单选除低温外，保持离体器官功能的另一重要因素为（）A.保存液的浓度B.保存液的成分C.保存液的酸碱度D.保存液的压力E.保存容器的材料正确答案：B参考解析：低温可减缓细胞新陈代谢和能量储备的消耗，保存液中的成分如乳糖盐、棉糖、羟乙基淀粉可维持渗透压，减轻冷藏状态下细胞的肿胀；谷胱甘肽和腺苷通过减少氧自由基的产生发挥细胞保护作用，可弥补低温的缺陷，成为保存器官功能的又一重要因素。
输注淋巴细胞毒交叉配合试验阴性血液解决严重输血反应2例
后 经 骨 穿后 诊 断 为 骨 髓 异 常 综 合 征 （ ＭＤＳＲ 。 — Ａ） 住 院治疗期 间 ， 予 间断输新 鲜全 血 ７次 （ ２ｏｏ 给 共 ｏ ｍ１， ）无不 良反应 。 ８次输血时 ， 第 输血 后２ ｎ 患 ５ｍｉ， 者 出现高热 （ ９ ， 虑 为输血 反 应 ， Ｔ ３ ℃）考 停止 输 血 给 予对 症处理 ， 大约 １ｈ后 缓解 。第 ９次输 血 时， 输
１６ ０ｍ１ ， ０ ） 无不 良反应 。 患者一般 状况 良好 。 化验 ：
ｗＢｃ ４ ８Ｘ１ ’Ｌ， Ｃ ２ ０Ｘ１ ＰＬ ２ ０Ｘ１ ， ． ０ ／ ＲＢ ． ０２ Ｔ １ ， ０止
输 血后发 热反 应是 输血 反应 中常 见 的一 种 ， 大
多 由于 输入致 热 原 质或 患 者 对 供血 者 的 白细 胞 或
作 者 单 位 ０ ４ 沈阳 ， 宁 省血 ｛ １ ０４ １ 辽 葭中心
血 后５ｒｉ ， 者出现寒 战 ， ｎ患 ａ 高热 ，Ｔ ４ ￣ ， （ ０ Ｃ） 面色 潮
红 ， 身不 适 ， 即停 止输 血 ， 周 立 为查 明原 因 ， 血 袋 将 及 患者 的血样 急诊检查 。白细胞凝集 试验 阳性 ， 微 量淋 巴细 胞毒 试验 阳性 。 后进行 的 ４次输血 ， 均 为淋 巴细 胞毒 交叉配 合试验 阴性的 献血者 血液 （ 共
血 小 板不 相容 引起 ， ２例患 者 根据 试验 结果 排 除 了 细菌污 染血 液和输 注红 细胞 血型 不 合的 早期 反应 。
患者 由于多 次输 血 ， 白细 胞凝 集 试 验 阳 性 ， 微量 淋
巴细胞 毒试验 阳性 ， ２例患 者均 由 自身血 液 中 存在 白细胞 抗体 ， 与输入 的血 液 白细胞 不相 容 而 引起抗
微量淋巴细胞毒试验简介
微量淋巴细胞毒试验简介
目录
•1拼音
•2英文参考
•3注解
•4参考资料
1拼音
wēi liàng lín bā xì bāo dú shì yàn
2英文参考
microlymphocytotoxicity test[WS/T 203—2001 输血医学常用术语]
LCT[WS/T 203—2001 输血医学常用术语]
3注解
微量淋巴细胞毒试验（microlymphocytotoxicity test，LCT）是指淋巴细胞膜上的HLA抗原，若暴露于相应抗体并在补体参与下，淋巴细胞膜则被损伤，该损伤可被某些染料着色而检出，根据该原理，用已知的HLA抗原（或抗体）检查未知HLA抗体（或抗原）的血清学试验方法[1]。
4参考资料
1.^ [1] 中华人民共和国卫生部.WS/T 203—2001 输血医学常用术语[Z].2001720.
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改良一步法微量淋巴细胞毒交叉试验
淋巴细胞毒交叉试验也称补体依赖细胞毒试验（cdc）。
它是检查器官移植受者体内有无针对供者，或者供者针对受者的hla抗体，在器官移植前一定要进行cdc检测。
如果受者血清中检出针对供者的hla抗体，一般认为是配合禁忌，移植后受者会发生超急性排异反应，导致移植失败。
由于试验是在施行器官移植术前临时进行匹配的试验，要求在短时间内报告结果，因此我们对该技术作了改良并与传统方法进行比较，收到满意效果。
现报告如下：一、材料和方法1.被检对象：标本来源于我院近10个月住院和门诊280例拟做肾移植待诊病人和其他器官移植待诊病人，采静脉血2 ml不抗凝待测。
2.试剂：免疫磁珠、荧光染液由美国o l公司提供，抗全淋巴细胞抗体试剂购自武汉生物制品研究所。
3.方法：(1)改良一步法：采用免疫磁珠3～5 μl分离出淋巴细胞，在terasaki板上每孔加入无菌矿物油5 μl，每排第1孔加生理盐水1 μl做阴性对照，第2孔加抗全淋巴细胞抗体1 μl做阳性对照，第3～6孔各加受者血清1 μl(即重复4孔试验)，每孔各加供者淋巴细胞1 μl(细胞浓度为2 000个/μl)，每孔各加补体1 μl，置22～25℃室温下反应45 min左右，每孔加荧光染液5 μl，倒置荧光显微镜下观察细胞毒性反应，分析判断结果。
(2)传统常规法见参考文献［1］。
二、结果采用改良一步法进行了400次淋巴细胞毒交叉试验，有9次检出阳性(阳性率为2.25%)。
其中1例患者反复多次cdc阳性，后进行hla抗体检测，特定细胞群反应抗体 (panel reactive antibody， pra) 阳性率为53.5%，提示抗hla-a2抗体增多，故放弃移植。
一步法与传统法试验比较：样本用量一步法1 μl，传统法40 μl；试验全过程一步法1.5 h内完成，传统法需2.5～4 h；补体用量一步法1 μl，传统法40 μl；30例标本用双盲法同时试验，结果一致。
三、讨论改良一步法cdc缩短和简化了试验时间、操作步骤，整个试验过程在1.5 h内完成。
分子诊断的其它应用培训课件
HLA-DR和HLA-DQ间的连锁不平衡
分子诊断的其它应用
35
全国高等医药院校教材-分子诊断学
第二节 分子诊断 在法医学鉴定中的应用
❖ 提要： 一、PCR技术在法医鉴定中的应用 二、DNA指纹图谱技术 三、STR位点分析 四、DNA数据库的建立与 DNA数据交换 五、性别鉴定与Y基因检测
分子诊断的其它应用
需同位素等优点成为目前较常用的HLA基因
分型技术之一，但是无法分辨杂合子，且只
能区分有限的多态性。
分子诊断的其它应用
24
2.PCR-SSP分型法[等位基因特异性PCR （ASPCR）]
设计出一整套等位基因组特异性引物 （sequence specific primer, SSP），借 助PCR技术获得HLA型特异的扩增产物，可 通过电泳直接分析带型决定HLA型别，从而 大大简化了实验步骤。优点是简单易行, 分辨 率可从低到高, 成本低 。缺点是不易自动化; 不能检测新的等位基因，试剂盒需不断升级。
❖ 常见的HLA分型，在300－500人就可以找到
相同者，少见的HLA分型可能是万分之一的机
率，而罕见的就要到几万甚至几十万的人群中
寻找。
分子诊断的其它应用
31
HLA-A、B、DR抗原配型与移植肾十年存活率（%）存活率 （加州大学资料）
70 60
50 40 30
6抗原
4抗原
不匹配
抗原匹配数
分子诊断的其它应用
发出案例报告， 并给出随机匹配的概率
图15-1 生物物证分析中HLA基因分型鉴定流程图
分子诊断的其它应用
40
全国高等医药院校教材-分子诊断学
二、DNA指纹图谱技术
❖ 一个DNA指纹能同时检测十几个甚至几 十个位点的变异，反映的基因组信息非常 丰富
微量淋巴细胞毒试验操作规程
微量淋巴细胞毒试验操作规程 SXYJ-GZ-02141目的规范微量淋巴细胞毒试验操作，正确进行HLA抗体鉴定。
2适用范围适用于HLA抗体鉴定。
3职责检测者负责依据此程序进行微量淋巴细胞毒试验操作。
4材料与设备肝素抗凝剂、淋巴细胞分离液、凝血酶、补体、伊红染液、12%甲醛、甘油；空白72孔微量反应板、微量加样枪（1µl、2µl、5µl）、倒置相差显微镜、水平式离心机、血细胞计数池、KUBOTA KA5100型离心机等。
5操作方法5.1待检标本准备及要求移植前交叉淋巴细胞毒患者不抗凝标本3ml,供者肝素抗凝静脉血5ml；习惯性流产女方不不抗凝标本3ml，男方肝素抗凝静脉血5ml。
不抗凝标本充分退缩，分离出血清备用；肝素抗凝静脉血充分混匀，室温放置备用。
5.2淋巴细胞制备5.2.1肝素抗凝静脉血，室温放置20分钟，2000转/分离心10分钟，吸取白膜层于装有2ml盐水的试管中，混匀；5.2.2缓慢加在装有3ml Ficoll液面上，2000转/分离心30分钟，取淋巴细胞层，于另一小试管中，加盐水至3ml,3400转/分离心1分钟（SERO 3键）；5.2.3弃掉上清，加1ml盐水，将细胞轻轻吹起，3400转/分离心15秒钟（SERO 2键），去除血小板的干扰；5.2.4弃掉上清，加入3ml的生理盐水，并将细胞轻轻吹起，3400转/分离心1分钟（SERO 3键），弃掉上清，用1640保养淋巴细胞；5.2.5淋巴细胞浓度调节混匀淋巴细胞后冲入血细胞计数池，倒置相差显微镜下观察细胞浓度为2500-3000个/µl（中方格内的每个小格约20-30个细胞）。
5.3加样5.3.1在空白72孔微量反应板中加液体石蜡，8ul/孔；5.3.2每孔加相应血清1ul(阴性对照孔加血小板配型试剂中阴性对照血清)；5.3.3每孔加淋巴细胞1µl 置室温35分钟；5.3.4每孔加补体5µl，室温65分钟；5.3.5每孔加伊红2µl，室温2分钟；5.3.6每孔加甲醛8µl，盖板；5.3.7将反应板置湿盒内至少4小时或过夜再读板，若是急诊可以600转/分离心5分钟后读板。
临床输血检验：HLA抗原检测
台离淋巴细胞
HLA血清学分型试验
微量淋巴细胞毒试验
待检淋 巴细胞 悬液
静置30-40分钟
兔补体
静置60-70分钟
5%伊红
死细胞体积大，着黑色，无折光性；活细胞 大小正常，未着色，折光性强，较透亮；
HLA血清学分型试验
质量控制
HLA抗原抗体
• 最好选用单克 隆抗血清
C．具有快速、耗时较短和结果判断简便的特点
D．引物5＇端第一个碱基与模板配对起关键作用
A．过敏性输血反应
B．溶血性输血反应
C．输血相关性循环超负荷 D．输血相关性急性肺损伤
2．有关微量淋巴毒试验的特性描述错误的是（ ）。
A．死细胞明亮折光性强
B．需要活的淋巴细胞
C．HLA抗原指定的标准方法 D．一般在相差显微镜下观察结果
3.有关HLA基因分型PCR－SSP方法描述错误的是（ ）。
A．是目前大多数实验室常用的方法之一 B．可能出现假阳性条带或漏孔现象
• 抗体效价适宜 • 存在剂量效应
淋巴细胞
• 要求活性和纯 度高
• 浓度为2～ 4×106/mL
• 病理状态下 HLA可能会表 达异常
孵育温度和时 间
• 严格掌握孵育 时间
• 最适温度为 20-25℃
其他
• 补体 • 染液应进行预
试验；用甲醛 固定 • 设置阳性和阴 性对照
想一想
1．由HLA抗原与HLA抗体引起的输血不良反应是（ ）。
HLA抗原检 测技术
不松劲 不大意
学习目标
1.熟悉HLA血清学分型试验的原理及质量控制。 2.淋巴细胞毒交叉配合试验的原理及质量控制。 3.HLA分子生物学分型方法
HLA血清学分型试验
器官移植患者的护理常规
器官移植患者的护理常规移植是指将一个个体的细胞、组织或器官(移植物，graft)用手术或介入等方法，导入到自体或另一个体的同一或其他部位，以替代或增强原有细胞、组织或器官功能的一门医学技术。
根据导人移植物不同，分为细胞移植、组织移植和器官移植。
提供移植物的个体被称为供者或供体(donor),而接受移植物的个体被称为受者或受体(recipient)o 【分类】(一)按遗传学关系1.自体移植供体和受体为同一个体，移植后不会发生排斥反应。
若将移植物移植到原来解剖位置，称为再植术，如断肢再植;若移植到另一部位，则称异位移植，如自体皮肤移植。
2.同质移植相同基因的不同个体间的移植，移植之后不会发生排斥反应，如同卵双生同胞之间的器官移植。
3.同种异体移植供体和受体属于同一种族，如人与人之间的器官移植,是目前临床应用最广泛的移植方法。
按供体情况可分为活体移植和尸体移植。
因供体和受体的抗原结构不同，移植后会发生排斥反应。
4.异种移植不同种族之间的移植，移植后可发生强烈的排斥反应。
目前处于动物实验研究阶段，尚未在临床应用。
（二）按移植物植入的部位1.原位移植将移植物移植到受体该器官原来的解剖位置。
2.异位移植也称辅助移植，将移植物移植到受体非该器官原来的解剖位置。
3.原位旁移植将移植物移植到该器官原来的解剖位置旁边。
（S）按移植物的活力1.活体移植移植物保持活力，移植后恢复其功能。
临床上大部分移植均为活体移植。
2.支架移植也称结构移植，移植物不要求保持活力，术后不会发生排斥反应。
（四）按移植物的数量1.单一移植也叫单独移植，每次仅移植单个器官。
2.联合移植指两个器官同时移植到一个个体的体内。
3.多器官移植同时移植三个或更多的器官到一个个体的体内。
在联合移植或多器官移植中，若两个或多个器官只有一个总的血管蒂，整块切除后，在植入时只需吻合其主要动静脉主干，称为器官簇移植，常见的有肝、肠联合移植及肝、胰、胃、肠联合移植。
交叉配合试验简介
交叉配合试验简介传统的交叉配合（crossmatching）试验是检测受者体内是否存在抗供者的特异性抗体，现在可同时检测受者对供者LD抗原的相容程度。
传统的交叉配合（crossmatching）试验是检测受者体内是否存在抗供者的特异性抗体，现在可同时检测受者对供者LD抗原的相容程度。
不管是否已经进行过各种HLA分型试验，交叉配合试验对选择移植物都有一定的参考价值。
1.微量细胞毒试验：用供者的淋巴细胞作靶细胞，与受者的血清进行CDC；出现阳性反应说明受者体内含有抗供者的特异性抗体，移植后很有可能发生超急排斥反应。
若要明确受者的抗体是抗Ⅰ类抗原还是抗Ⅱ类抗原，可以将供者的淋巴细胞进一步分离出较纯的T细胞和B细胞分别进行检测；若要排除患者自身抗体的影响，可以用患者自己的细胞与自已的血清进行试验作为对照。
交叉配合是移值前必须做的一个检验项目；对一些曾经接触过移植抗原的受者，例如多次接受输血者、经产妇、有不成功移植史或接受过血清透析治疗者，尤其要进行审慎的检验。
2.流式细胞仪检测：将供者淋巴细胞与受者血清共育后，用荧光标记的抗人Ig对结合有抗体的细胞染色，在流式细胞仪上进行荧光标记测定。
该法比微量细胞毒法的灵敏度高100倍，有条件的单位可以优先考虑使用。
3.混合淋巴细胞培养：将供者与受者的淋巴细胞做双向混合培养，或者灭活供者的淋巴细胞做向混合培养，细胞反应的程度与供－受者相容的程度呈负相关。
4.细胞介导的淋巴细胞毒试验：检测受者对移植物可能发生的细胞介导的淋巴细胞毒作用（cell～mediatedlymphocytotoxicity，CML）。
将受者淋巴细胞与灭活的供者淋巴细胞做常规单向MLC，收获致敏的受者淋巴细胞后，再与51Cr标记的、PHA刺激的供者淋巴细胞做CML试验；51Cr释放的程度与供－受者相容程度呈负相关。
胃病的检查方法检查胃病的方法很多，常用的有以下几种：（1）胃液分析胃液分析是一种诊断胃病最古老而又最常用方法。
交叉反应组配型原则在肾移植中的应用研究
交叉反应组配型原则在肾移植中的应用研究发表时间：2017-03-06T16:27:53.883Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2017年1月第1期作者：董春来刘素英[导读] 由于移植肾供体和肾移植受体间存在着抗原的差别，是肾移植后排斥反应发生的基础。
第三军医大学附属第二医院重庆 400037【摘要】由于移植肾供体和肾移植受体间存在着抗原的差别，是肾移植后排斥反应发生的基础，排斥反应的发生直接影响着移植肾的存活。
在人类与移植有关的主要有红细胞ABO血型抗原系统和人类白细胞抗原系统（简称HLA）。
为了避免或减少肾移植后发生排斥反应的可能，取得肾移植的成功和使移植肾长期存活，肾移植前必须进行包括有血型、淋巴细胞毒试验、人类白细胞抗原（HLA）系统和选择性进行群体反应性抗体（PRA）检查等多种配型。
目前按交叉反应组配型选择供受者受到越来越多学者的重视，更多的临床研究提示，交叉反应组配型较传统配型能明显提高供受者相配率，同时减少排斥反应，提高移植肾长期存活率。
交叉配型就是交叉细胞毒试验，应用补体依赖性淋巴细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity，CDC），即用等待移植的受者血清与提供移植器官的供者外周血淋巴细胞共同孵育，在补体的作用下，如果受者血清中存在抗供者淋巴细胞的HLA特异性抗体，即可将供者淋巴细胞杀死，交叉配型试验结果呈阳性，根据死亡细胞百分率判断抗体强度；如果受者血清中没有抗供者HLA抗体，则供者淋巴细胞能够保持活力，交叉配型实验结果呈阴性。
交叉配型试验结果出现阳性时，说明受者体内存在抗供者淋巴细胞HLA特异性抗体，如果进行肾移植手术，将发生超急性排斥反应，术后几分钟即可出现移植物色泽由鲜红色逐渐变为暗红和青紫，质地渐渐变软，失去充实的饱胀感，同时移植肾功能完全丧失，必须立即切除移植肾，宣告手术失败，否则将危及受者生命。
所以，肾移植手术前必须进行交叉配型试验，只有当交叉配型实验结果阴性，也就是说，受者血清中没有抗供者HLA特异性抗体时，才能进行肾移植手术，避免超急性排斥反应的发生，确保移植手术成功。
[2018-2019年整理教学资料]医学三基考试（血型和临床输血学）名词解释题及答案
![[2018-2019年整理教学资料]医学三基考试（血型和临床输血学）名词解释题及答案](https://img.taocdn.com/s3/m/e79c4df2856a561252d36fd2.png)
医学三基考试（血型和临床输血学）名词解释题及答案1.RhD阴性：是一种Rh血型的表型,指个体红细胞上不表达RhD抗原。
2.连锁不平衡：由于各基因座的等位基因随机组合构成单体型,则某一单体型型别的出现频率应等于该单体型各基因频率的乘积。
但HLA各基因并非完全随机地组成单体型,某些基因比其他基因能更多或更少地连锁在一起,这就是连锁不平衡。
3.微量淋巴细胞毒试验：微量淋巴细胞毒试验的基本原理是:淋巴细胞上的HLA抗原,与相应的抗体结合后,在补体存在的情况下,可以破坏细胞膜。
经过染色,染料进人细胞而着色;如果抗原抗体未结合,则细胞膜完整,染料无法进人。
在倒置相差显微镜下估计着色细胞的百分数,如死细胞(即着色细胞)比例高于⒛%,一般认为是阳性反应,即存在相应的抗原。
4.PCR,,,,,SSP,,,,,PCRss：即序列特异性引物聚合酶链反应技术,基本原理是3′错配原则(3′,,,,,mismatch,,,,,principle),因此只有模板链是特定的等位基因时,才会检测出特异性的扩增条带,通过琼脂糖电泳直接判断有无扩增产物来确定基因的多态性。
5.血小板特异性抗原：特异性抗原由血小板特有的抗原决定簇组成,表现出血小板独特的遗传多态性,在其他细胞和组织上不能发现。
6.血小板相关抗原：相关抗原主要与红细胞ABO血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)有关。
7.新生儿溶血病：一般是指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。
8.(新生儿溶血病)释放试验：是一种检测新生儿红细胞上致敏的血型抗体的方法。
该方法首先将血型抗体从红细胞上放散下来,然后对抗体进行检测。
9.不规则抗体：是指抗A和抗B以外的血型抗体:10.少白细胞悬浮红细胞：将采集到多联袋内的全血中大部分白细胞、血小板及血浆在全封闭的条件下去除后,向剩余的部分加人红细胞添加液制成的红细胞成分血定义为少白细胞悬浮红细11.单采血小板：采用血细胞分离机在全封闭条件下,自动将全血中血小板分离出并悬浮于一定量血浆内制成的单采成分血定义为单采血小板。
交叉淋巴细胞毒实验名词解释
交叉淋巴细胞毒实验名词解释
交叉淋巴细胞毒实验（Crossmatch Lymphocyte Cytotoxicity Assay）是一种用于配型和移植手术前的免疫学实验。
该实验用于检
测供体与受体之间是否存在HLA（人类白细胞抗原）的免疫不相容性，以评估移植物排斥的风险。
在交叉淋巴细胞毒实验中，将供体的淋巴细胞与受体的血清进
行反应。
淋巴细胞是一种免疫细胞，而血清中含有抗体。
如果供体
与受体之间存在HLA抗原的不相容性，受体的抗体会与供体的淋巴
细胞结合，并引发细胞毒性反应。
这种细胞毒性反应可以通过染色
或其他方法来观察和评估。
通过交叉淋巴细胞毒实验，可以及早发现供体与受体之间的
HLA不相容性，从而避免移植手术后的排斥反应。
这对于器官移植、骨髓移植等手术非常重要。
实验结果可以指导医生选择合适的供体，减少移植后的并发症风险，并提高移植手术的成功率。
总而言之，交叉淋巴细胞毒实验是一种用于评估供体与受体之
间HLA不相容性的免疫学实验，可以帮助医生确定最佳的移植配型，减少移植排斥反应的发生。
微量淋巴细胞毒法检测HLA—B27试验的质控体会
Ｋ ２完全抗凝血液 ２ ｍ 。离心前 。 ． ｌ ５ 两组抗凝血液均做血涂片 观察记录淋 巴细胞形态 。 便于 比较离心后两组淋 巴细胞形态 情况 ； 两组均 分离血浆 ， 观察有无溶血 ， 溶血 的血液 不选用 。 离心时 。 两组均 使用 同一天平配平 ， 使用 同一台离心机。 离心 后 。 组均 由同一人员规范操作 ， ２ 提取淋 巴细胞 。
Ｈ Ａ Ｂ７ Ｌ — ２ 试验时的质量保证意识。现将 ２ ０ － ０７年 ， ０３２０ 笔者 临床应用微量淋 巴细胞毒法检测 Ｈ Ａ Ｂ ７经验总结如下。 Ｌ —２ ｌ 实验 材 料 的 质 量 保 证 １ 淋 巴细胞分离液与 Ｈ Ａ Ｂ ７反应板 ． １ Ｌ —２
大量的红细胞沾染 。 很难 与小淋 巴细胞鉴另 ， Ｕ易致假 阳性 。 笔 者去除淋巴细胞 巾红细胞的经验是 ： 加一滴 洁净蒸馏水于 先
１１１ 淋巴细胞分离液保存 ．．
淋 巴细胞分离液必须避光、 无
菌 、￣冷藏 保存 。 ４Ｃ 保证分离液 的成分不受破坏 。笔者 的经验 是： 根据 平常工作所需 要的量 。 一次性 把 ２０ １ 离液无菌 ５ｍ 分 操作。 分装在多个大玻璃试 管中， 随用随取 ， 以避免批次问 可 交叉污染 。
淋 巴细胞中 。快速混匀以便破坏红细胞 ，随后立 即加入 ８ — １ｍ 的生理盐水颠倒混匀 。 ０ｌ 保持淋 巴细胞的等渗状态。然后 低速离心沉 淀、 反复几次可去除彻底 。 ２３ 淋 巴细胞洗涤 洗 涤淋 巴细胞时 要轻轻 颠倒 混匀 ， Ｉ 避 免淋巴细胞剧烈振荡死亡 。 造成结果假 阳性 。 ２ 检测细胞活力鉴定 此步骤是许 多实验室 容易忽略 的 ． ４
医学检验科住院医师：输血检验技术试题预测四
医学检验科住院医师：输血检验技术试题预测四1、单选血液保存液ACD的抗凝作用原理主要是试剂能结合（）A.纤维蛋白原B.Mg2+C.补体D.Fe2+E.Ca2+正确答案：E参考解析：ACD保养液中的枸橼酸（江南博哥）盐能与Ca2+结合从而起到抗凝的作用。
2、单选关于抗原，错误的说法是（）A.能显示抗原性和免疫原性的抗原称完全抗原B.抗原性是指抗原与抗体起反应的特性C.免疫原性是指抗原能诱发特异性免疫反应的特性D.具有抗原性的分子一定具有免疫原性E.半抗原只显示抗原性而无免疫原性正确答案：D3、问答题HLA抗原在体内是如何分布的？正确答案：HLA-Ⅰ类抗原在体内分布相当广泛，见于所有有核细胞，以淋巴细胞上密度最高，幼稚红细胞上亦有，血小板除自身带有HLA-Ⅰ类抗原外，还可从血浆中吸附一部分可溶性HLA。
HLA-Ⅱ类抗原分布较窄，以树突状细胞、单核细胞、一些吞噬细胞及B淋巴细胞的密度最高；T淋巴细胞上一般不表达Ⅱ类抗原。
4、单选血清中既没有抗A，也没有抗B的是（）A.A型B.B型C.AB型D.O型E.以上都可以正确答案：C5、单选Rh血型中抗原性最强的是（）A.C抗原性最强B.e抗原性最强C.E抗原性最强D.D抗原性最强E.c抗原性最强正确答案：D6、单选Rh阳性（）A.有D抗原B.无D抗原C.有抗原D.无抗原E.有E抗原正确答案：A7、判断题ABO血型不合新生儿溶血病常发生于第一胎，Rh血型不合则发生于第一胎以后。
正确答案：对8、单选新生儿溶血病当胆红素超过342μmol／L时，应首选（）A.光照疗法B.换血疗法C.宫内输血D.药物疗法E.液体疗法正确答案：B9、填空题HLA常用分型技术包括（）、（）、（）等。
正确答案：微量淋巴细胞毒试验；PCR一序列特异性引物；PCR一序列特异性寡核苷酸探针10、问答题抗体筛选试验对血标本有何要求？正确答案：一般采用血清标本，且一定是48小时内采集的；如果为冰冻保存者，融化后应充分混合；不能用反复冻融的血清标本。
淋巴细胞毒交叉配合试验标准操作程序
淋巴细胞毒交叉配合试验标准操作程序1 目的规范抗淋巴细胞抗体检测的操作程序，以保证临床检测结果的准确性。
2 检测方法和原理被检血清中的抗体与供体淋巴细胞膜表面相应抗原结合后激活补体，引起细胞膜破损，这种抗体称细胞毒抗体。
如将含有此抗体的血清与淋巴细胞和补体共同温育。
根据着色的死细胞数目，可以估计淋巴细胞毒的强度。
3 性能参数特异性为 100%，敏感性为 100%。
4 原始样品要求供体肝素抗凝血 2～3ml 及受体血清 2ml。
5 容器和添加剂类型受者用黄色胶头促凝试管，有促凝剂。
抽取静脉血 2~3ml 置黄头试管内送检。
供体用肝素抗凝血 2～3ml。
6 试剂和设备6.1 试剂：淋巴细胞分离液、抗淋巴细胞抗体、2%台盼蓝。
6.2 试剂保存与有效期6.2.1 新购试剂保存于 2-8℃，勿冷冻，在有效期内使用。
6.2.2 若有剩余试剂，应立即放回冰箱，保存于 2-8℃。
6.3 质控：试剂盒自身带有阴性、阳性质控。
7 操作程序7.1 常规分离淋巴细胞：取供者肝素化全血 3ml，用 PBS 或生盐水作等量稀释，沿管壁滴加于预先加有 2 ml 淋巴细胞分离液的 10ml 试管内，水平式离心机 1800 转/分，离心 20 分钟，吸取白膜表层之淋巴细胞于6ml 洗涤液中，2500 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，重复洗涤二次，调整细胞浓度至 2000个/ul。
7.2 微量淋巴细胞毒试验方法（两步法试验程序），见下表：7.3 结果观察：从各管取样，滴加于血细胞计数板内，用普通生物显微镜高倍镜计数 200 个淋巴细胞，计算出着色死细胞的百分率。
7.4 判读标准：被染色的死细胞呈蓝色，无折光，细胞肿胀，活细胞则具有很强的折光能力，呈明亮状，两者很容易区分。
8 质量控制程序每一次实验中有阴性、阳性对照。
9 干扰和交叉反应无。
10 生物参考区间10%为阴性。
11 临床意义一般而言，死淋巴细胞数10%可进行器官移植，11%～20%结合临床考虑，超过 20%一般不考虑器官移植。
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参考文献
1 Rautenberg P, Fi scher L, Tonnies R , et al .Evaluation of a novel immunoglobin a capture enzyme immunoassay for diagnosis of
(收稿日期 :2000-04-04)
(本文编辑 :臧焰)
·简报·
改良一步法微量淋巴细胞毒交叉试验张泓 武大林Fra bibliotek 曹琼 陈卫芬
淋巴细胞毒交叉试验也称补 体依赖细胞 毒试验(CDC)。 它是检查器官移植受者体内有无针对供者 , 或者供者 针对受 者的 HLA 抗体 , 在器官移植 前一 定要进 行 CDC 检测 。 如果 受者血清中 检出针 对供 者的 HLA 抗 体 , 一般 认为 是配 合禁 忌 , 移植后受者会发 生超急性 排异 反应 , 导致 移植失 败 。 由 于试验是在施行器官移植术前临时进行匹配的试验 , 要求在 短时间内报告结果 , 因此我们对该技术作了改良并与 传统方 法进行比较 , 收到满意效果 。 现报告如下 :
参考文献
1 赵 桐茂 .HLA 原理 及其应用 .上 海科学技 术出版社 , 1984 .278279 . (收稿日期 :2000-01-06) (本文编辑 :臧焰)
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作者单位 :510515 广州 , 第一军医大学附属南方医院
采用改良一步法进行了 400 次淋巴 细胞毒交叉 试验 , 有 9 次检出阳性(阳 性率 为 2.25 %)。 其 中 1 例患 者反 复多 次 CDC 阳性 , 后 进 行 HLA 抗 体 检 测 , 特 定 细 胞 群 反 应 抗 体 (Panel Reactive Antibody , PRA) 阳 性 率 为 53 .5%, 提 示 抗 HLA-A2 抗体增多 , 故放弃移植 。
一 、材料和方法 1.被检对象 :标 本 来源 于我 院 近 10 个 月住 院 和门 诊 280 例拟做肾移植待诊病人 和其他 器官移 植待诊 病人 , 采静 脉血 2 ml 不抗凝待测 。 2.试剂 :免疫磁珠 、荧 光染液 由美 国 O L 公司 提供 , 抗 全淋巴细胞抗体试剂购自武汉生物制品研究所 。 3.方法 :(1)改良一 步法 :采 用免疫 磁珠 3 ～ 5 μl 分 离出 淋巴细胞 , 在 Terasaki 板上每孔加 入无菌矿物油 5 μl, 每排第 1 孔加生理盐水 1 μl 做 阴性对照 , 第 2 孔加抗 全淋巴细 胞抗 体 1 μl 做阳性对照 , 第 3 ～ 6 孔 各加受 者血清 1 μl(即重复 4 孔试验), 每 孔各加供者淋巴细胞 1 μl(细 胞浓度为 2 000 个/ μl), 每孔各加补体 1 μl, 置 22 ～ 25℃室温下反应 45 min 左右 , 每孔加 荧光 染液 5 μl , 倒置 荧光 显微 镜下 观察 细胞 毒 性反 应 , 分析判断结果 。(2)传统常规法见参考文献[ 1] 。 二 、结果
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中华检验医学杂志 2000 年 11 月第 23 卷第 6 期 Chin J Lab Med , November 2000 , Vol 23 , N o.6
法能更早期地诊断 HCMV 疾病 。 需要提出的是 , 由 于 PCR 检测技术的高敏感性 , 人们对应用 PCR 作为 诊断活动性 HCMV 疾病的指标 一直争论不休[ 4, 5] 。 而本实验中 , 当 nPCR 检测出现阳性后 , 病人也随即 出现 HCMV 临床症状 , nPCR 检测阳性和病人出现临 床症状高度相符 , 故我们认为 , nPCR 技术可作为活 动性 HCMV 感染的早期诊断方法 , 尤其适用于那些 因白细胞过少而难以行抗原血症检测的病人 。
一步法与传统 法试验 比较 :样 本用量 一步 法 1 μl, 传 统 法 40 μl;试验全过程一步 法 1.5 h 内完成 , 传统 法需 2 .5 ～ 4 h;补体用量一步法 1 μl, 传 统法 40 μl;30 例 标本用 双盲法 同 时试验 , 结果一致 。
三 、讨论 改良一步法 CDC 缩短 和简化了试 验时间 、操作 步骤 , 整 个试验过程在 1.5 h 内完成 。 大量标本还可同 时输入计算机 分析 。 免疫磁珠分离淋巴细胞纯度高且时间短 , 用荧光染 色 的结果容易观察 , 倒置荧光 显微镜 下死细 胞呈 红色 , 活细 胞 呈绿色 , 对比分明 , 易于识别 。 而传统常规法的伊 红染色 , 在 镜下观察判断细胞死活结果有很大的难 度 , 经 30 例样 本用 2 种方法进行双盲试验 , 其结 果一致 , 可 以证明 改良法 在样 本 用量上 、淋巴细 胞分离 、交叉反 应时间 及判断 结果上 均表 现 出优于传统法的特点 。 同时改 良法可 节省抗 全淋巴 细胞 抗 体 、补体等试剂用量 , 降低试验成本 。