实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值

实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值

明胶液化试验

(1)原理：某些可以产生一种胞外蛋白水解酶(明胶酶)，能使明胶分解为氨基酸，使明胶失去凝固能力而液化，因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。

(2)方法：将待检菌接种于明胶培养基中，22℃培养7d或更长时间，每天观察结果有无凝固。

(3)结果：如无凝固，则表示明胶已被水解，液化试验阳性。如凝固，则继续培养。

(4)应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶，肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外，许多假单胞菌也能产生明胶酶而使明胶液化

吲哚试验(靛基质试验)

(1)原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，当加入吲哚试剂(对二甲氨基苯甲醛)后则形成红色的玫瑰吲哚。

(2)培养基：蛋白胨水培养基。

(3)方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24~48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂，观察结果。

(4)结果：于两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。

(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。

硫化氢试验

(1)原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇亚铁离子或铅离子则结合形成黑色沉淀物(硫化铁或硫化铅沉淀)。

(2)培养基：醋酸铅培养基。

(3)方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基中，于35℃孵育24h -48h，观察有无黑色沉淀出现。

(4)结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。

(5)应用：主要用于鉴别肠杆菌科中属及种的鉴别，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其它菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。

尿素分解试验

(1)原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。

(2)培养基：尿素培养基。

(3)方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃孵育18~24h小时观察结果。

(4)结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。

(5)应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性，另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。

苯丙氨酸脱氨酶试验

(1)原理：测定细菌是否产生苯丙氨酸脱氨酶。细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨后生成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿色反应。

(2)培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。

(3)方法：将待检菌大量接种入苯丙氨酸琼脂培养基中，35℃孵育18~24h，滴加10%三氯化铁试剂3~4滴，自斜面上方流下。

(4)结果：有绿色出现为阳性。应立即观察结果，延长反应时间会引起退色。

(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其它细菌均为阴性。

氨基酸脱羧酶试验

(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶，能分解氨基酸使其脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。

(2)培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。

(3)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸)脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管(无氨基酸)，各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，每日观察结果。

(4)结果：对照管应为黄色，若为溴甲酚紫指示剂，则测定管呈紫色则为阳性，若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义，不能做出判断。

(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。

碳源和氮源利用试验

是细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。

在枸橼酸盐培养基中，细菌只有利用枸橼酸盐作为碳源，分解生成碳酸钠使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。

常用的试验方法有枸橼酸盐利用试验、丙二酸盐利用试验。

枸橼酸盐利用试验

(1)原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。

(2)培养基：枸橼酸盐培养基。

(3)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。

(4)结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基由淡蓝色变蓝色为阳性;不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长，培养基不变色，仍为绿色为阴性。

(5)应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常阳性。

丙二酸盐利用试验

(1)原理：某些细菌能利用丙二酸盐作为唯一碳源，丙二酸盐被分解生成碳酸钠，使培养基变碱

(2)培养基：丙二酸盐培养基。

(3)方法：将待检菌接种于丙二酸盐培养基中，置35℃孵育24~48h，观察结果。

(4)结果：培养基由淡绿色变为蓝色为阳性。颜色无变化为阴性。

(5)应用：肠杆菌科中属间及种的鉴定。克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性，其它各菌属均为阴性。

氧化酶试验

(1)原理：氧化酶(即细胞色素氧化酶)，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。

(2)方法：

1)菌落法：直接滴加试剂于被检菌落上。

2)滤纸法：取洁净滤纸一小块，蘸取菌少许，然后加试剂。

3)试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

(3)结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。无色为阴性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

(4)应用：主要用于肠杆菌科细菌和假单胞菌属的鉴别，前者阴性，而后者阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

过氧化氢酶试验(触酶试验)

(1)原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

(2)方法：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3%过氧化氢数滴，立即观察结果。