最新生化实验讲义(10个)
生化实验讲义：附录
附录一、722型分光光度计操作规程1. 将灵敏度旋钮调置“1”档，（放大倍率最小）。
2. 开启电源，指标灯亮，选择开关置于“T”。
3. 打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0％T”旋钮，使数字显示为“000.0”。
4. 将装有溶液的比色皿放置比色架中。
5. 旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。
6. 盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“100”旋钮，使数字显示为100％T（如果显示不到100％T，则可适当增加灵敏度的挡数。
同时应重复“3”，调整仪器的“000.0”）。
7. 将被测溶液置于光路中，数字表上直接读出被测溶液的透过率（T）值。
8. 吸光度A的测量，参照“3”“6”调整仪器的“000.0”和“100.0”将选择开关置于A旋动吸光度调零旋钮，使得数字显示为0.000，然后移入被测溶液，显示值即为试样的吸光度A值。
9. 浓度C的测量，选择开关由A旋至C，将已标定浓度的溶液移入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测溶液移入光路，即可读出相应的浓度值。
二、753型（53W）紫外/可见分光光度计操作规程1. 向右推开试样室盖，开显示箱电源开关，波段选择开关置于“T”，调节“0％T”旋钮，使显示器为“0.000”。
(53WB型如显示P1，即“T”未调0 )。
2. 光源电气箱电源开关向上，指示灯亮，钨灯开关向上，指示灯亮，溴钨灯亮。
氘灯开关向上，指示灯亮，点燃开关向下2～3秒后迅速拨向上，指示灯亮，氘灯点燃。
3. 用波长手轮选择波长，到位时的手轮旋转方向要固定，使用波长在200～350nm 范围内，将光源转换手柄置于“氘灯”处，在350nm～800nm范围内，将手柄置于“钨灯”处。
4. 检查T－A转换的精度：将波段选择开关置于“T”，池架第一孔置于光路，调节“100→0”旋钮，使显示为“1.000”；53WB型如显示P2即参比未调至100％。
开关置于“A”应显示“0.000”，若有偏差用小改锥调节侧面“0A”。
生工生化实验讲义(11-12)
生物化学实验讲义实验一蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应及蛋白质的沉淀反应实验目的1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
4．加深对蛋白质溶液的胶体性质的认识，了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
，一、茚三酮反应1.实验原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。
尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.材料、仪器与试剂蛋白质溶液；新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9）；0.5%甘氨酸溶液；0.1%茚三酮水溶液；0.1%茚三酮-乙醇溶液3.实验操作①取2支试管分别加入鸡蛋清溶液和0.5%甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
二、黄色反应1.实验原理含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
生物化学实验讲义
生化实验讲义综合型实验生物科学与工程学院溶菌酶的提取和系列性质测定在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。
酶的提纯工作往往要求多种方法交替应用，才能得到较为满意的效果。
常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。
酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离提纯效果。
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶、球蛋白G，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。
主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
溶菌酶相对分子质量约为1.44×104，是一种强碱性蛋白质，等电点在10.0以上，并对温度和酸不敏感。
在自然界中，普遍存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿液、淋巴液等细胞中，植物卷心菜、萝卜、木瓜等，以蛋清含量最丰富，约为0.3%。
本实验用鸡蛋为原理，通过阳离子交换层析，硫酸铵沉淀，分子筛层析等步骤提取溶菌酶。
实验安排第一天实验理论第二天配试剂、离子交换剂的再生、平衡第三天蛋清样品上样、洗脱、硫酸铵沉淀第四天分子筛层析第五天酶活和蛋白浓度的测定第六天酶促动力学第七天 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳生化技术重要理论蛋白质提取分离技术以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。
蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。
一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。
生化实训讲义
实验二还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2 （4）三角瓶：100 mL×1 （5）容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2；10 mL×1 （7）恒温水浴锅（8）煤气炉（9）漏斗（10）天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL。
四、操作步骤1. 制作葡萄糖标准曲线取7支20 mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1 mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
实验诊断生化讲课文档
第一页，共131页。
2
肝脏的主要功能
1. 蛋白质、糖、脂类新陈代谢的主要场所； 2. 合成多种酶； 3. 参与铁、铜和多种维生素的吸收、储存和转化； 4. 激素的灭活和排泄； 5. 摄取、转化、排泄胆红素； 6. 生成胆汁，胆汁中的胆盐参与脂类物质的消化和吸收； 7. 通过氧化、还原、水解和结合等过程，对有害物质进行解
6
球蛋白测定的临床意义
1. 肝肾疾病：慢肝，肝硬化，肾病综合征 2. 自身免疫病：风湿热，系统性红斑狼疮 3. 恶性肿瘤及某些血液病：多发性骨髓瘤，淋巴细胞 性白血病 4. 感染性疾病：疟疾，丝虫病，血吸虫病
第六页，共131页。
1. 球蛋白减少或缺乏症
2. 使用大量网状内皮系统抑制后，如6-巯基嘌呤等化 疗后
第十四页，共131页。
15
第三节 胆红素代谢检查
胆红素代谢功能的常规检查主要包括： 1. 血清总胆红素（STB）：正常情况下为非结合胆红素 （UCB）和结合胆红素（CB）的总和； 2. 血清结合胆红素（CB）； 3. 血清非结合胆红素（UCB）； 4. 血清CB/UCB比值等。 【参考范围】 成人STB（TBil）：3.4～17.1μmol/L； CB（DBil）：0～6.8μmol/L； UCB ： 1.7～10.2μmol/L；
5
白蛋白测定的临床意义
较少见：严重腹泻、呕吐引起的脱水，广泛性烧伤， 急性大出血
第五页，共131页。
1.蛋白质摄入不足：慢性胃肠道疾病，营养不良，妊 娠后期，哺乳期
2.白蛋白合成功能不全：肝硬化，肝功严重损伤，慢 性感染，恶性贫血
3.蛋白质消耗太多：甲亢，糖尿病，慢性消耗性疾病， 恶性肿瘤
4.蛋白质丢失增多:肾病综合征,严重烧伤
生化试验讲义(理论)
〔Ⅰ〕理论部分1. 绪论欢迎同学们到生物化学实验室来！对于大多数学生来说，这不是第一次做化学实验，但是我们相信，生物化学实验一定是大家最感兴趣、最激动人心的实验，当然也是花费最大、最辛苦的实验。
同学们在过去几年中所学到的各种实验技术和操作技能，在这些实验中将会经常用到，当然更重要的是要学会一些新的、在生物化学的科学研究中最常用的实验方法。
同学们在生物化学实验方面要取得好成绩，在很大程度上，取决于你们对这些专门化实验技术的熟练掌握和对生物化学原理的深入了解。
当同学们进行实验时，无疑将会与以前做的各种实验进行比较。
在生物化学实验中，大家会发现，极少有像无机化学和有机化学实验那样进行化学反应和分离出“克”数量级的产物。
同学们将进行的是“毫克”和“微克”数量级的研究，并且在多数情况下，生物分子是溶解在溶液中的，而且往往看不到所研究的物质，但是将会看到动态的生物化学过程和由生物分子引起的生物化学变化。
实验中所用到的各种技术和方法，将起到“眼睛”的作用，用以对各种生物化学过程进行监测。
同学们通过生物化学实验应该做到：⑴学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
⑵训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器，包括各种天平、各种分光光度计、各种离心机、自动部分收集器、恒流泵、核酸蛋白检测仪、冰冻干燥机、酸度计、电导率仪、高速分散器、各种电泳装置和摇床等等。
⑶学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验，培养严谨细致的科学作风。
⑷掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。
预祝同学们以优异的成绩跨进这一新的科学殿堂，成为攀登生物科学高峰的新的勇士！1.1生物化学实验技术发展简史生物科学在20世纪有惊人的发展，其中生物化学与分子生物学的进展尤为迅速，这样一门最具活力和生气的实验科学，在21世纪必将成为带头的学科，这主要有赖于生物化学与分子生物学实验技术的不断发展和完善。
生化实验讲义(10个)教学内容
生物化学实验讲义赵国芬2010年9月实验之前说明1.各班学习委员将成员分成10个大组,每个大组中2人一小组,大组采用循环实验的方法,同时开出不同的10个实验.2.共开出10个不同的实验实验一温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定实验三血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法实验四双缩脲测定蛋白质的含量实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定实验七应用纸层析法鉴定动物组织中转氨基作用实验八植物组织中维生素C的定量测定实验九琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验十植物组织中DNA的提取和鉴定3.穿着要利索,做好实验记录4.注意实验室卫生和安全.一. 实验室规则:按照实验室的规则给学生讲解.二. 生物化学所用的实验技术1.样品: :血液、血浆、血清、组织植物样品：果实、花蕾、茎等无论用什么做材料，为了提取物质，需匀浆2．移液管的使用：移液管吸管移液管奥氏吸管读数时视线与凹面相平，取液时要用吸管嘴吸，放出液体时注意嘴部液体的残留问题。
3．离心机的使用：平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停4．分光光度计机器原理和测定原理（比尔定律）5．水浴锅的使用三、实验报告的书写（用教务处统一印刷的报告纸写）目的、原理、仪器、药品、步骤、结果及结论、讨论实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。
凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。
此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。
酶的活性通常是用测定酶作用底物在酶作用前后的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶作用的底物—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。
生化培训资料课件
介绍生物化学物质的基本分类，包括糖类、脂类、蛋白质、核酸 等，以及各类物质的结构和性质。
生物化学反应类型
01
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04
生物氧化
介绍生物氧化反应的类型和特 点，包括呼吸链、氧化磷酸化 等。
糖代谢
介绍糖的分解和合成代谢，包 括糖酵解、糖异生等。
脂代谢
介绍脂的分解和合成代谢，包 括脂肪酸氧化、脂肪合成等。
THANK YOU
感谢聆听
基于质谱分析的蛋白质组学技术为研 究蛋白质结构和功能提供了有力手段 ，有助于深入了解生物分子机制。
研究热点问题
肿瘤生物学
肿瘤的发生发展机制、肿瘤免疫 、肿瘤耐药性等是当前研究的热 点问题，对于肿瘤的诊断和治疗
具有重要意义。
神经生物学
神经退行性疾病、神经信号传导 、神经再生等是神经生物学研究 的热点，有助于深入了解神经系
农业领域
转基因作物
通过改变作物基因，提高 抗虫、抗病、抗旱等能力 ，增加产量。
生物农药
利用微生物、植物等天然 生物资源开发农药，减少 环境污染。
动物育种
通过基因编辑等技术，改 良动物品种，提高生产性 能和品质。
环境监测领域
污染治理
利用微生物降解污染物，净化水 体和土壤。
环境监测
利用生物传感器等手段监测空气、 水体等环境质量。
定期检查个人防护用品的完好性，如有损坏应及 时更换。
紧急处理措施
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03
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如发生火火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
如发生火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
如发生火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
华南理工大学生化实验讲义(补充)
生物化学实验化工、制药专业2011年5月第一章绪论一、实验须知【开设生化实验课的必要性及目的】生物化学实验是生物化学及一切生物学科的重要研究手段，它在对疾病的诊断、观察及发病机制的探讨方面起着越来越重要的作用。
因此，生化实验课是化学、生物学、医学、药学等学生必修的一门实用基础课程。
1．通过生化实验课使学生掌握基本的生化实验操作及技能。
2．通过生化实验课使学生加深对生化理论知识的认识和理解。
3．通过生化实验课使学生增长分析问题、解决问题的能力，并培养学生实事求是的工作作风。
【实验守则】1．实验前必须先预习，预习的内容包括：（1）实验目的及实验要求；（2）实验原理；（3）基本实验程序及注意事项；（4）与实验内容有关的理论。
2．严格遵守实验课纪律，不迟到、不早退，不在实验室内做与实验无关的事情，不妨碍他人的实验。
3．自觉加强基本技能训练，严格遵守操作规程，注意实验安全。
4．认真做好实验记录，不许弄虚作假---实验报告应如实反映自己的实验结果。
5．爱护公物，节约水、电、试剂。
遵守“损坏仪器的登记、报告、赔偿制度”。
6．保持实验室清洁，坚持值日生清洁实验室的制度。
7．赤脚、穿拖鞋者不得进入实验室。
实验时必须穿白大衣。
【实验室常识】1．挪动干净玻璃仪器时，切勿用手接触仪器的内部。
2．实验完毕必须将有关仪器洗净。
3．洗净的仪器要沥干水分后整齐放入仪器烘箱内，不应用抹布擦拭，更不能擦拭仪器内部。
4．取用试剂必须“盖随瓶走”，用后必须立即盖好放回原处，切记“张冠李戴”。
5．标准试剂尽量按需取用，未用完的标准试剂不应倒回瓶内。
6．量瓶及量筒是量器，不应做容器使用。
刻度吸管供移液使用，严禁用于搅拌。
7．凡是发生烟雾、有毒气体和有臭味气体的实验，应该在通风橱内进行。
8．对贵重的实验仪器（如分光光度计）应十分重视，倍加爱护。
必须先熟知使用方法才能使用。
仪器发生故障时，应立即关掉电源报告老师，不得擅自拆修。
9．实验用过的废液（如浓酸或碱等），应倒入指定的容器，不可直接倒入水槽内，以免腐蚀水管。
生化讲义（理论）
〔Ⅰ〕理论部分1. 绪论欢迎同学们到生物化学实验室来！对于大多数学生来说，这不是第一次做化学实验，但是我们相信，生物化学实验一定是大家最感兴趣、最激动人心的实验，当然也是花费最大、最辛苦的实验。
同学们在过去几年中所学到的各种实验技术和操作技能，在这些实验中将会经常用到，当然更重要的是要学会一些新的、在生物化学的科学研究中最常用的实验方法。
同学们在生物化学实验方面要取得好成绩，在很大程度上，取决于你们对这些专门化实验技术的熟练掌握和对生物化学原理的深入了解。
当同学们进行实验时，无疑将会与以前做的各种实验进行比较。
在生物化学实验中，大家会发现，极少有像无机化学和有机化学实验那样进行化学反应和分离出“克”数量级的产物。
同学们将进行的是“毫克”和“微克”数量级的研究，并且在多数情况下，生物分子是溶解在溶液中的，而且往往看不到所研究的物质，但是将会看到动态的生物化学过程和由生物分子引起的生物化学变化。
实验中所用到的各种技术和方法，将起到“眼睛”的作用，用以对各种生物化学过程进行监测。
同学们通过生物化学实验应该做到：⑴学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
⑵训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器，包括各种天平、各种分光光度计、各种离心机、自动部分收集器、恒流泵、核酸蛋白检测仪、冰冻干燥机、酸度计、电导率仪、高速分散器、各种电泳装置和摇床等等。
⑶学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验，培养严谨细致的科学作风。
⑷掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。
生化实验讲义
实验一糖的颜色反应及还原性检验A. 莫氏试验①一、目的掌握莫氏（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚②生成紫红色缩合物。
利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材棉花或滤纸；吸管1.0ml（×5）、2ml（×1）；试管1.5cm×15cm（×5）；容量瓶50ml （×5）；烧杯50ml（×5）；棕色瓶50ml（×5）；玻璃棒多根、电炉（配石棉网）多个。
四、实验试剂莫氏试剂：称取α-萘酚2.5g，溶于95％乙醇并稀释至50ml。
此试剂需新鲜配制，并贮于棕色试剂瓶中。
1％蔗糖溶液：称取蔗糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％葡萄糖溶液：称取葡萄糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％果糖溶液：称取果糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混和成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至50ml。
五、操作于5支试管中，分别加入1％葡萄糖溶液、1％蔗糖溶液、1％果糖溶液与1％淀粉溶液1 mL和少许纤维素（棉花或滤纸少量浸在1ml水中），然后各加莫氏试剂2－3滴①，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸 1.5ml（切勿振摇！！！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫红色环出现。
注意：①一些非糖物质（如糠醛、糖醛酸等）亦呈阳性反应。
此外，样液中如含高浓度有机化合物，将因浓硫酸的焦化作用，而出现红色，故试样浓度不宜过高。
②亦可用麝香草酚或其他苯酚化合物代替α-萘酚，麝香草酚的优点是溶液比较稳定，且灵敏度与萘酚一样。
B. 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液②。
检验科讲课—生化课件
06
生化检验的新技术发展
自动化生化分析仪
自动化生化分析仪是生化检验领域的重要技术之一，它能够快速、准确 地完成大量生化样本的检测和分析。
自动化生化分析仪采用先进的机械臂和液体处理系统，实现了样本的自 动加样、混合、分离和检测等功能，大大提高了检测效率。
操作误差等。
03
误差纠正与预防
根据误差分析结果，采取相应的纠正措施，如维修仪器、更换试剂、培
训操作人员等。同时，还需要制定预防措施，防止类似误差再次发生。
05
生化检验的注意事项
患者准备
患者应提前了解生化检验的要 求，如饮食控制、禁食时间等 ，以便做好充分准备。
患者应避免剧烈运动、过度劳 累和情绪波动，以免影响检验 结果。
肾功能指标
评估肾脏功能，反映肾脏 健康状况。
尿素氮（BUN）：蛋白质 代谢产物，通过肾脏排泄
。
尿酸（UA）：嘌呤代谢产 物，反映肾功能和痛风。
肌酐（CREA）：肌肉代谢
尿蛋白（PRO）：检测肾
•·
产物，通过肾脏排泄。
脏病变和评估肾功能。
血糖血脂指标
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监测血糖和血脂水平，预防糖尿病和心血管疾病。
选择合适的质控品，将其与样本一同 检测，并根据质控品的结果评估实验 的准确性。
校准与校准验证
在开始实验前，必须对仪器进行校准 ，确保仪器处于正常工作状态。同时 ，还需要定期对校准结果进行验证， 以确保结果的准确性。
室间质量评价
参加评价计划
通过参加权威机构组织的室间质量评价计划，与其他实验室进行 比对，了解自身实验室的检测水平。
生化检测实验讲义
生化检测实验讲义实验一粮食、油料检验-脂肪酸值测定法一、实验目的粮食在储藏过程中受到温度、水分和酶的影响，其脂类物质易发生水解和氧化反应。
水解造成粮食游离脂肪酸含量增加，对粮食的种用品质和食用品质产生不良影响。
粮食游离脂肪酸含量以脂肪酸值表示,即中和100g粮食试样中的游离脂肪酸值所需氢氧化钾的毫克数。
通过脂肪酸值的测定，可以判断粮食品质的变化情况，推测储藏方法是否适当。
通过本实验要求掌握测定脂肪酸值的技术。
二、原理浸出法。
脂肪酸能溶于有机溶剂，利用苯来浸出脂肪酸，然后在酒精溶液中用标准KOH溶液中和脂肪酸，根据滴定时所消耗的碱液数量，就可求出脂肪酸值。
三、材料、仪器和试剂1、材料大米2、仪器带塞锥形瓶，量筒，移液管，微量滴定管，表面皿，天平，振荡器，漏斗3、试剂（1）、0.01N KOH（或NaOH）乙醇(95%)溶液先配制约0.5N的KOH水溶液，再取20 ml,用95%乙醇稀释至500mL（2）、苯，95%乙醇（3）、0.04%酚酞乙醇溶液0.2g酚酞溶于500ml 95%乙醇溶液中。
四、操作方法1、浸出称取事先磨细的大米粉20±O.Olg于200ml或250ml锥形瓶中，加入50ml苯，加塞摇动几秒钟后，打开塞子放气，再盖紧瓶塞置振荡器振荡30min(或用手振荡45min)，取出，将瓶倾斜静置数分钟，使滤液澄清。
注：粉碎后样品如在20℃以上室温放置，脂肪酸值会很快增加，因此，必须及时进行测定。
2、过滤用快速滤纸过滤，弃去最初几滴滤液后用量筒收集滤液25ml。
3、滴定将25ml滤液移入锥形瓶中，再用原量筒取25m1 0.04%酚酞乙醇溶液加入锥形瓶中，立即用氢氧化钾乙醇溶液滴定至呈现微红色半分钟内不消失为止。
记下所耗用氢氧化钾乙醇溶液毫升数V1。
4、空白试验取25m1 0.04%酚酞乙醇溶液，用氢氧化钾乙醇溶液滴定，记下耗用氢氧化钾乙醇溶液毫升数V2。
五、结果计算脂肪酸值以中和100g大米样品中游离脂肪酸所需氢氧化钾毫克数表示。
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生物化学实验讲义赵国芬2010年9月实验之前说明1.各班学习委员将成员分成10个大组,每个大组中2人一小组,大组采用循环实验的方法,同时开出不同的10个实验.2.共开出10个不同的实验实验一温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定实验三血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法实验四双缩脲测定蛋白质的含量实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定实验七应用纸层析法鉴定动物组织中转氨基作用实验八植物组织中维生素C的定量测定实验九琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验十植物组织中DNA的提取和鉴定3.穿着要利索,做好实验记录4.注意实验室卫生和安全.一. 实验室规则:按照实验室的规则给学生讲解.二. 生物化学所用的实验技术1.样品: :血液、血浆、血清、组织植物样品：果实、花蕾、茎等无论用什么做材料，为了提取物质，需匀浆2．移液管的使用：移液管吸管移液管奥氏吸管读数时视线与凹面相平，取液时要用吸管嘴吸，放出液体时注意嘴部液体的残留问题。
3．离心机的使用：平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停4．分光光度计机器原理和测定原理（比尔定律）5．水浴锅的使用三、实验报告的书写（用教务处统一印刷的报告纸写）目的、原理、仪器、药品、步骤、结果及结论、讨论实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。
凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。
此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。
酶的活性通常是用测定酶作用底物在酶作用前后的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶作用的底物—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。
淀粉被酶水解的变化，可以用遇碘呈不同颜色来观察。
淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。
三、试剂1.0.5%淀粉溶液2.碘化钾－碘溶液3.1%尿素溶液。
4.1%CuSO4溶液5.磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液pH5.0-8.0:6.0.5%NaCl溶液。
7.唾液淀粉酶制备每人用自来水漱口3次，然后取20m1蒸馏水含于口中，半分钟后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液lOml，稀释至2Oml为稀释唾液，供实验用。
四、操作步骤一、温度对酶活性的影响（一）淀粉酶的观察1、取3支大试管，编号后按表操作2、在白色比色板上，置碘液2滴于各孔中，每隔1分钟，从第二管中取出反应液1滴与碘混合，观察颜色变化。
3、待第二管中反应液遇碘不发生颜色变化（即只呈碘的颜色）时，向各管中加入碘液1滴，摇匀，观察并记录各管颜色，说明温度对酶活性的影响。
结果与分析：结果：各管颜色分析：为什么比如：结果与分析：1号中为兰色，2号为无色，3号为兰色说明37℃为淀粉酶的活性最高的温度，淀粉水解的速度最快，其它2个温度淀粉酶的活性低，淀粉几乎没有水解。
二、pH对酶活性的影响1、取试管1支，加入pH6.8的磷酸缓冲溶液3m1、0.5%淀粉溶液2ml，混匀。
放置于37℃水浴中保温3分钟。
再加入稀释唾液2ml，混匀，继续保温，每隔l 分钟取出1滴于白瓷板上，加碘液1滴，观察淀粉水解的程度，直至碘不变色，记下保温时间。
2、另取试管5支，编号，按编号顺序分别加入pH5.0、 6.2、6.8、7.4、8.0的磷酸盐—柠檬酸缓冲溶液3m1，每管加入0.2%淀粉溶液2m1。
置37℃水浴中保温3分钟后，以1分钟的间隔，依次向1-5号试管中加入稀释唾液2m1，摇匀，37℃水浴中保温。
参照上述第一步实验的保温时间，到时迅速取出，并立即加入碘液2滴，充分摇匀，观察各管呈现的颜色，判断在不同pH条件下淀粉的水解的程度。
可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响，并确定最适pH。
结果与分析：结果：各管颜色分析：为什么三、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响1.取小试管3支，按表操作2.将3支试管放入37℃水浴中，并在白色比色板上用碘液检查第二管，待碘液不变色时，向各管中加碘液1滴，观察水解情况，记录并解释结果。
结果与分析：结果：各管颜色分析：为什么实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定一、实验目的学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验二、实验原理牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质，其中主要是酪蛋白。
酪蛋白在其等电点pH溶液中溶解度降低。
所以，将牛乳的pH调整至4.8，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来。
用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到纯的酪蛋白。
所得酪蛋白供定性鉴定。
除去酪蛋白的滤液中，尚含有球蛋白、清蛋白等多种蛋白质。
三、试剂1.醋酸钠缓冲液 (0.2mol/LpH4.6)2.米伦(Millon)试剂3.95%乙醇。
4.乙醚。
5.1O%NaCl6.0.5%Na2C03。
7.0.lmol/LNaOH。
8.0.2%HCl9. 饱和氢氧化钙 (Ca(OH)2)。
10. 5%醋酸铅。
四、实验操作(一)酪蛋白的制备取新鲜牛乳2Oml，放人100ml烧杯中加热至40℃。
加入2Oml 加热至同样温度的醋酸缓冲液，一边加一边摇动，并用pH计检测，调整混合液的pH为4.8（实际中准确加入牛奶与醋酸缓冲液体积相同时，可以不用调节pH）。
冷却至室温，继续放置5分钟，然后将溶液转入离心管中离心3000r/min，时间5分钟（注意离心时要对角配平），离心后清液保留做鉴定实验。
所得沉淀物悬浮在约30ml等量的醇醚混合液中，搅匀，离心3000r/min，时间5分钟，弃清液，所得沉淀摊在表面皿上，使醇醚混合液挥发。
（二）酪蛋白的性质鉴定1.溶解度取试管6支，分别加入水、10%氯化钠、0.5%碳酸钠、0.1mol/L 氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化钙溶液各2m1。
于每管中加入少量酪蛋白。
不断摇荡，观察记录各管中的酪蛋白溶解度。
2.米伦反应取酪蛋白少许，放置于试管中。
加入lml蒸馏水，再加入米伦试剂10滴，振摇，并徐徐加热。
观察其颜色变化。
3.含硫 (胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)测定:取少量酪蛋白溶于lmlO.1 mol/L 氢氧化钠溶液中，再加入1-3滴5%醋酸铅，加热煮沸，溶液变为黑色。
(三)乳清中可凝固性蛋白质的鉴定将制备酪蛋白时所得的清液移入烧杯中，徐徐加热。
即出现蛋白质沉淀。
此为乳清中的球蛋白和清蛋白。
实验三、血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法一、实验目的学习并掌握福林-吴宪氏法测定血液中葡萄糖的方法二、实验原理葡萄糖(C6H126)是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，而铜试剂中的二价铜(Cu2+')被还原成砖红色的氧化亚铜（Cu2O）而沉淀。
氧化亚铜可使磷(砷)钼酸还原生成钼蓝，使溶液呈蓝色。
其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。
选用颜色深浅较接近于测定管一同在420nm比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。
三、试剂 "1.1/24mol/L硫酸溶液2.10%钨酸钠溶液3.碱性硫酸铜试剂4.磷钼酸试剂5.0.25%苯甲酸溶液6.葡萄糖贮存标准液 (lOmg/ml)7.葡萄糖应用标准液(0.lmg/ml)8. 1：4磷钼酸稀释液四、实验步骤：1. 用钨酸法制备1：10全血无蛋白滤液(相当于将原血稀释了10倍)。
2．4支血糖管按表操作用1：4磷钼酸溶液加至25刻度处后，用橡皮塞塞紧管口颠倒摇匀，用空白管调零，在420nm波长处进行比色，读取各管的密度值（光吸收值）。
3. 计算高标准管：低标准管：实验四双缩脲测定蛋白质的含量一、实验目的掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理二、实验原理双缩脲在碱性溶液中与Cu2+产生紫色的络合物,这一反应称“双缩脲反应”。
蛋白质分子中肽键，也能与Cu2+ 发生双缩脲反应，溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。
该紫色的络合物在580nm处有最大吸收值，通过测定580nm处的吸光值用于谷物蛋白质含量的测定。
三、器材分光光度计分析天平移液管具塞三角瓶漏斗三角瓶四、试剂10%KOH溶液、无水乙醇、碳酸铜、酪蛋白、豆粉五、实验步骤：(一)标准曲线的绘制按下表加入各试剂，振荡10min，静置片刻，将上清过滤后580nm测定吸光值。
以吸光值为横坐标,酪蛋白含量为纵坐标,绘制标准曲线。
六、结果计算标准曲线上查得蛋白质含量（g）样品蛋白质含量（%）= ×100豆粉（g）实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术，了解电泳技术的基本原理，测定人血清中各种蛋白质的相对含量。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术。
本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物，分离人血清蛋白。
血清蛋白中含有清蛋白、 α－球蛋白、β－球蛋白、γ－球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及行状不同（见下表），在电场中的迁移速度不同。
分子量小、等电点低的，在相同碱性PH 缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如人血清蛋白在PH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次是12,,,ααβγ----球蛋白（如图）。
三、材料、仪器与试剂 （一）、材料：人血清 （二）、仪器醋酸纤维薄膜(8×2mm)；点样器；染色皿，漂洗器，镊子；玻璃板；常压电泳仪；直流电源整流器；水平电泳槽；粗滤纸；直尺和铅笔（三）、药品巴比妥缓冲液(pH8.6)；氨基黑10B 染色液；漂洗液，洗脱液 四、实验步骤：1.浸泡:用镊子取醋酸纤维薄膜放在缓冲液中浸泡20分钟。
2、点样:把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后铺在玻璃板上(无光泽面朝上)，将点样器在血清中沾一下（量薄薄一层为好），再在膜条一端2-3厘米处轻轻水平地落下并随时提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
3、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。
膜条点样的一端放在负极上。
通电，电流强度每条膜2－2.5mA(注意强度),电泳时间约为90分钟。
4、染色:电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5分钟。
5、漂洗:将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止，可得到色带清晰的电泳图谱。
结果:实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定（3，5－二硝基水杨酸法）一、实验目的掌握还原糖总糖测定的基本原理，学习比色定糖的基本操作。