食品微生物检验基础

6.接种环烧 红灭菌
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无菌操作 – 取菌技巧 2
(方法二：plate 反面拿起)
2. 自 Plate 上取单一菌 落 (方法一：盖子微开 遮住培养基，避免空 气中菌体掉入)
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无菌操作 – 取菌技巧 3
1.挤出吸球 内空气，插 上灭过菌的 玻璃吸管
2. 向上為吸， 向下為放
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无菌操作 – 取菌技巧 4 1. 调整微量加样器 刻度 (吸取范围 200 ~ 1000μl)
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（四）无菌操作 1、目的： （1）是保证待检物品不被环境中微生物的
污染； （2）是防止被检微生物在操作中污染环境
或感染操作人员。
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2、进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60分钟； （3）检查无菌器材是否完备； （4）洗手消毒； （5）手部消毒后，再穿戴无菌工作服。
2.常用的接种方法有以下几种：
１）划线接种 ２）三点接种 ３）穿刺接种 ４）浇混接种
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５）涂布接种 ６）液体接种 ７）注射接种 ８）活体接种
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(二) 分离纯化
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１.倾注平板法
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２.涂布平板法
倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解 1.菌悬液 2.熔化的培养基 3.培养物 4.无菌水
2. 插上灭过菌的 Tip (用力插紧)
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无菌操作 – 取菌技巧 4 3. 按钮压至第一段（ 不可压至最底）
4. 深入液面下 2 ~ 4 mm
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无菌操作 – 取菌技巧 4
5. 慢慢释放按钮，即可 吸取液体
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无菌操作 – 接菌技巧 1.试管前端过火
2. 打开试管盖
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无菌操作 – 接菌技巧
食品微生物检验基础
Contents 1 第一节 细菌学检验基础 2 第二节 免疫学检验基础 3 第三节 分子生物学基础
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第一节 细菌学检验基础
一、无菌技术 二、微生物的接种与分离技术 三、细菌的培养方法 四、细菌的生长现象 五、细菌的生化反应检查法
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一、无菌技术
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（一）什么是无菌技术 指在微生物实验工作中，控制或防止
尔溶液的消毒桶内消毒。
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无菌操作 – 取菌技巧 1
1.接种环前端铂 丝部分以酒精灯 烧红灭菌，后端
铁棒部分过火
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无菌操作 – 取菌技巧 1
2. 试管前端过火
3.打开试管盖（塞）
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无菌操作 – 取菌技巧 1
4.试管倾斜，放入接种环
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无菌操作 – 取菌技巧 1
5.试管前端 过火，盖上 试管盖
方法一：以接 种环沾菌，放
入新的培养基中 接菌
方法二：以安 全吸球吸取菌
液，放入新的培 养基中，向下排 出菌液
方法三：以
Pipetman 吸取
菌液，按钮压至 最底排出菌液
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无菌操作
斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
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2、超净工作台
超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10~15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台
内四周擦拭干净.
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（三）无菌器材 灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、 工作台、手等
生物性廢棄物
放至正确位置以 便灭菌
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二、微生物的接种与分离技术
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（一）接种
将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活 的生物体内的过程叫做接种。
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１、接种工具和方法
接种和分离工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7. 接种锄 8.小解剖刀
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各类微生物的污染及其干扰的一系列操作 方法和有关措施。
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（二）无菌环境
无菌Baidu Nhomakorabea 无菌柜 超净工作台
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1、无菌室
（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间 （2）无菌室的消毒和防污染
每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行 消毒。
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３.平板划线法
平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
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平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。 2、划线方法
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三、细菌培养方法 由于细菌的种类不同，对培养条件的要求也就 不同，细菌对培养条件的要求包括温度和气体。 由于大多数细菌所需的温度均是35～37℃，所 以细菌的培养方法仅以细菌对气体需求不同进 行分类。据此可将细菌培养分为三种，即需氧 培养法、CO2培养法、厌氧培养法。
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3、检验操作过程的无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在正火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏
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(一)需氧培养法 此法为一般培养法，适合于需氧菌及兼性厌氧菌
的培养。将已接种好的平板(一般需倒置)、斜面或液 体培养基置35℃孵箱中培养18～24h，一般的细菌均 能在培养基内生长。但对于难于生长或生长缓慢的 细菌(如结核杆菌)则需培养3～7d甚至一个月才能生 长。
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(二)CO2培养法 某些细菌(如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、布鲁杆菌、溶血 链球菌等)分离时，需在5％～10％CO2环境中才能生长良好。 根据造成CO2环境的方法不同，CO2培养法又可分为以下几 种： 1．CO2培养箱法 CO2的供应是靠与孵箱连接的CO2钢瓶，瓶中定期充有99.99 ％的CO2钢瓶上的真空表可指示CO2的输出量并指示补充气 体的时间。由于CO2孵箱较昂贵，此法仅供大型实验室应用。
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无菌操作 – 错误示范
试管直放，空气中菌体 容易掉入
操作时离酒精灯外 焰区太远
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无菌操作 – 错误示范
吸球倒放，菌液容易 流入吸球內
安全吸球随意放置桌面，菌 液容易流出至桌上
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无菌操作 – 错误示范
微量加样器 倒放，菌液 容易流入微量加样器 內
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注意事項 – 生物性废弃物