血红蛋白的提取和分离
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取血红蛋白的分离和提取是一个复杂却又充满魅力的过程。
它不仅关乎科学，也与生命息息相关。
想象一下，血液中那闪烁的红色，仿佛在诉说着每一个细胞的故事。
血红蛋白，作为携氧的英雄，承担着生命的重任。
在这个过程中，首先要明确分离的目标。
你得知道，血红蛋白的结构并不是简单的。
它是由四个亚基构成的，每个亚基都有自己的个性。
比如，α亚基和β亚基之间的相互作用，就像朋友间的默契，缺一不可。
分离时，采用的方法多种多样，比如盐析、透析和色谱技术等。
盐析是个经典手法。
它就像是聚会时的筛子，把不必要的“嘉宾”排除在外。
加入盐后，蛋白质的溶解度变化，最终分离出你想要的血红蛋白。
接着透析，简单来说，就是用半透膜把小分子杂质过滤掉。
想象一下，你在海边捞水，想把沙子留在外面，只让清水流进桶里。
再来就是色谱技术，真的是个科学的魔法。
根据分子大小和亲和力，血红蛋白会在色谱柱中“走出”不同的轨迹。
你只需耐心等待，最终就能得到纯净的血红蛋白。
每一步都需要细致的观察和实验者的直觉，心态要稳。
接下来，提取的步骤也很重要。
提取后，血红蛋白会被溶解在缓冲液中。
这个缓冲液就像是血红蛋白的家，让它保持稳定。
记得在这一过程中，要控制好温度和pH值。
过高的温度会让血红蛋白变性，就像你把冰淇淋放在阳光下，瞬间化为一滩水。
从分离到提取，这一系列的操作需要技巧。
你得时刻保持警觉，观察每一个变化。
哪怕是微小的细节，都可能决定最终的结果。
每一个实验都是一次新发现，充满了期待和惊喜。
最后，谈谈收获。
提取到的血红蛋白可以用于多种研究，甚至是临床应用。
它帮助我们理解许多疾病，像贫血或氧合能力不足等。
科学的探索如同一场旅程，虽然艰辛，却能收获无数的知识和感动。
总之，血红蛋白的分离和提取是一个充满挑战的过程。
它需要耐心、技巧和对科学的热爱。
每一步都透着生命的力量。
通过这一过程，我们不仅了解了血红蛋白的奥秘，也感受到了科学的美妙与神奇。
探索的旅程从未止步，期待着下一次的发现与启迪。
《血红蛋白的提取和分离》 讲义
《血红蛋白的提取和分离》讲义一、血红蛋白的简介血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，存在于红细胞中。
它使得血液呈现红色，并且在氧气的运输和二氧化碳的排放过程中发挥着至关重要的作用。
血红蛋白由珠蛋白和血红素组成。
珠蛋白部分有四条多肽链，每条多肽链与一个血红素分子相连，形成了具有四级结构的蛋白质。
其分子结构的特点决定了它能够与氧气可逆性结合，从而实现氧气在体内的运输。
了解血红蛋白的基本结构和功能，对于我们进行其提取和分离的实验具有重要的指导意义。
二、实验材料和设备1、实验材料新鲜的猪血（或其他富含血红蛋白的动物血液）、磷酸缓冲液、生理盐水、蒸馏水等。
2、实验设备离心机、透析袋、电泳仪、层析柱、移液器、磁力搅拌器、分光光度计等。
三、血红蛋白提取和分离的原理1、提取原理血红蛋白在不同的溶液中溶解度不同。
通过向血液中加入一定量的低浓度盐溶液，如磷酸缓冲液，可以使血红蛋白从红细胞中释放出来，进入溶液中。
2、分离原理（1）离心分离：利用离心机旋转产生的离心力，使不同密度的物质分层，从而将血红蛋白溶液与其他杂质分离。
（2）凝胶过滤层析：根据蛋白质分子大小的不同进行分离。
层析柱内填充有特定的凝胶颗粒，大分子蛋白质无法进入凝胶颗粒内部，因而先被洗脱出来；小分子蛋白质则能进入凝胶颗粒内部，后被洗脱出来。
（3）电泳分离：在电场的作用下，带电粒子会向与其所带电荷相反的电极移动。
由于不同蛋白质所带电荷的性质和数量不同，它们在电场中的移动速度也不同，从而实现分离。
四、血红蛋白提取的步骤1、红细胞的洗涤采集新鲜的血液，加入适量的生理盐水进行稀释。
然后将血液缓慢倒入离心管中，以一定的转速离心一段时间。
离心后，上层为血浆，下层为红细胞。
去除上层的血浆，再加入生理盐水，重复离心操作，直至上清液不再呈现黄色，以洗净红细胞中的血浆蛋白等杂质。
2、血红蛋白的释放向洗净的红细胞中加入一定量的低浓度磷酸缓冲液，在磁力搅拌器上充分搅拌，使红细胞破裂，释放出血红蛋白。
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取血红蛋白是一种存在于红细胞中的重要蛋白质，它负责运输氧气到身体的各个部位。
对于血红蛋白的分离和提取，无论是在医学研究、疾病诊断还是生物技术领域，都具有重要的意义。
要进行血红蛋白的分离和提取，首先需要了解它的基本性质。
血红蛋白由珠蛋白和血红素组成，相对分子质量约为 64500，等电点在 7 左右。
准备工作是必不可少的。
我们需要新鲜的血液样本，通常可以从健康的志愿者或者实验动物身上获取。
采集到血液后，要尽快进行处理，以防止血红蛋白的变性和降解。
第一步是红细胞的分离。
将采集到的血液加入抗凝剂，如肝素或柠檬酸钠，然后通过离心的方法，将红细胞从血浆中分离出来。
离心的速度和时间需要根据具体情况进行调整，一般来说，以较低的转速离心一段时间，就可以使红细胞沉淀在离心管的底部。
得到红细胞后，接下来就是裂解红细胞以释放出血红蛋白。
常用的方法是低渗裂解法，将红细胞置于低渗溶液中，如蒸馏水，红细胞会因为吸水而膨胀破裂，释放出其中的内容物，包括血红蛋白。
然后是去除杂质。
裂解后的溶液中含有大量的其他细胞成分和杂质，需要通过过滤、离心等方法进行去除。
例如，可以再次离心，使较大的细胞碎片沉淀下来，然后取上清液。
接下来就是血红蛋白的初步分离。
常用的方法有盐析法。
向溶液中逐渐加入适量的中性盐，如硫酸铵，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度会逐渐降低而沉淀出来。
不同的蛋白质在不同的盐浓度下沉淀，通过控制盐的浓度，可以初步分离出血红蛋白。
经过初步分离后，还需要进一步的纯化。
层析法是常用的手段之一。
比如凝胶过滤层析，根据蛋白质分子大小的不同进行分离；离子交换层析，依据蛋白质的带电性质差异来分离。
在分离和提取的过程中，要始终注意保持适当的温度、pH 值等条件。
温度过高或过低、pH 值不适宜都可能导致血红蛋白的变性和失活。
另外，实验过程中的操作要规范、细致，尽量减少人为因素造成的误差和损失。
例如，在转移溶液时要避免洒出，使用的仪器要经过严格的清洗和消毒。
实验报告_血红蛋白
一、实验目的1. 掌握血红蛋白的提取和分离方法。
2. 学习使用分光光度计测定血红蛋白的浓度。
3. 了解血红蛋白在生理和病理过程中的作用。
二、实验原理血红蛋白是一种含铁的蛋白质，是红细胞中携带氧气的主要成分。
血红蛋白的浓度是衡量红细胞携氧能力的重要指标。
本实验采用分光光度法测定血红蛋白含量，其原理是基于血红蛋白在特定波长下具有特定的光吸收特性。
三、实验材料1. 人血清2. 氯化钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 乙酸缓冲液5. 酚酞指示剂6. 高铁氰化钾溶液7. 分光光度计8. 50ml容量瓶9. 1ml移液管10. 10ml量筒四、实验方法1. 血红蛋白提取：取一定量人血清，加入氢氧化钠溶液，充分振荡，使血红蛋白释放出来。
2. 血红蛋白分离：将提取的血红蛋白溶液加入乙酸缓冲液，调节pH至4.6，离心分离血红蛋白。
3. 血红蛋白测定：取一定量的血红蛋白溶液，加入高铁氰化钾溶液，充分振荡，使血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。
用分光光度计在540nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算血红蛋白浓度。
五、实验步骤1. 准备标准曲线：取一系列已知浓度的血红蛋白标准溶液，按照实验方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，血红蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 提取血红蛋白：取2ml人血清，加入10ml氢氧化钠溶液，充分振荡，使血红蛋白释放出来。
3. 分离血红蛋白：将提取的血红蛋白溶液加入10ml乙酸缓冲液，调节pH至4.6，离心分离血红蛋白。
4. 测定血红蛋白：取1ml血红蛋白溶液，加入1ml高铁氰化钾溶液，充分振荡，使血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。
用分光光度计在540nm波长下测定吸光度。
5. 计算血红蛋白浓度：根据标准曲线，计算血红蛋白浓度。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，得到线性方程为y=0.021x+0.004，其中y为吸光度，x为血红蛋白浓度。
2. 血红蛋白浓度测定：根据实验步骤，测定血红蛋白溶液的吸光度为0.60。
血红蛋白的提取和分离教案
血红蛋白的提取和分离教案教案一: 血红蛋白的提取和分离教学目标:- 理解血红蛋白的结构和功能。
- 学习血红蛋白的提取和分离方法。
- 掌握实验室中分离血红蛋白的步骤和操作技巧。
教学步骤:引入活动:在开始实验之前，首先向学生介绍血红蛋白的结构和功能，以及为什么需要提取和分离血红蛋白。
1. 血红蛋白的提取:a. 实验材料准备:- 鲜血样本- 磷酸缓冲溶液（pH 7.4）- 离心管- 离心机- 冷藏器b. 实验步骤:1) 将鲜血样本取出，用磷酸缓冲溶液稀释。
2) 将稀释后的样本置于离心管中，离心10分钟。
3) 将离心后的上清液转移至新的离心管中，置于冷藏器中。
2. 血红蛋白的分离:a. 实验材料准备:- 血红蛋白样本- 离心管- pH 4.7缓冲溶液- pH 5.2缓冲溶液- pH 6.0缓冲溶液- pH 7.0缓冲溶液b. 实验步骤:1) 将血红蛋白样本转移到离心管中。
2) 分别加入pH 4.7、pH 5.2、pH 6.0和pH 7.0缓冲溶液，使其达到不同的酸碱度。
3) 转动离心管，使其充分混合。
4) 将混合溶液置于冰箱中冷藏一段时间。
5) 通过离心，收集上层液体，然后分别加入酸、碱溶液，使其达到酸碱中和。
6) 重复以上步骤，直到获得纯净的血红蛋白。
实验注意事项:- 实验过程中要注意安全，佩戴实验室衣物和手套。
- 实验器材要严密封闭，避免反应物外泄。
- 实验后要彻底清理实验场地。
教学总结:通过本次实验，学生可以了解血红蛋白的结构和功能，并掌握了提取和分离血红蛋白的方法。
同时，学生也了解了实验室实验的注意事项和操作技巧。
血红蛋白的提取与分离
血红蛋白的提取与分离血红蛋白是一种蛋白质，在红细胞中起着重要的运输氧气的作用。
血红蛋白结构复杂，可通过一系列的步骤进行提取和分离。
这篇文章将介绍血红蛋白的提取和分离过程。
1. 血红蛋白的提取血红蛋白的提取过程包括以下步骤：1.1 血液采集首先需要从供血者身体中采集血液。
在采集血液时需要使用无菌器材严格遵守卫生规范。
血液可以采用多种方式进行采集，如静脉采血或分离血浆和细胞等。
1.2 红细胞的分离红细胞是血液中含有血红蛋白的细胞，因此需要将其与其他细胞分离。
在现代分离技术中，离心、红细胞沉降法和滤纸法等都常用来分离红细胞。
1.3 血红蛋白的裂解在裂解血红蛋白之前，需要将红细胞中的膜蛋白和其他组分去除。
这个步骤可以通过再次采用离心、收集上清液的方式实现。
在获得裂解所需的含血红蛋白物质后，可以按照裂解液的pH值或添加特殊的裂解试剂来进行裂解。
1.4 血红蛋白的提取经过裂解后的血红蛋白可用于纯化和分离。
可以通过离心分离、色谱分离、电泳分离等方法来提取和分离血红蛋白。
2. 血红蛋白的分离对血红蛋白的分离过程包括以下步骤：2.1 血红蛋白的纯化纯化是分离血红蛋白的关键步骤，其目的是去除其他干扰因素，纯化血红蛋白。
可采用离心、柱层析、凝胶过滤等技术来实现血红蛋白的纯化。
2.2 血红蛋白的检测将提取和纯化得到的血红蛋白进行检测，以确保获得的血红蛋白的纯度。
检测过程中可以采用紫外吸收光谱法、电泳法等方法进行检测。
3.血红蛋白的提取和分离是一项关键的技术，在医疗和科研领域得到了广泛的应用。
这些步骤通常需要复杂的实验流程和严谨的实验技术，因此需要实验人员在实验过程中严格遵守相关的操作规范和安全注意事项，以确保实验的准确性和安全性。
血红蛋白提取和分离的四步
血红蛋白提取和分离的四步血红蛋白是存在于人类血液中的一种重要蛋白质，它承担着将氧气从肺部输送到身体各个组织和器官的重要功能。
因此，对血红蛋白的提取和分离具有重要的生物学意义和医学应用前景。
接下来将介绍血红蛋白提取和分离的四个步骤。
第一步：血样采集首先需要采集含有血红蛋白的血样。
一般来说，静脉采血是最常用的方法。
在采集血样之前，需要确保采血器具干净无菌，以避免外部微生物的污染。
同时，还要确保采集到的血样足够新鲜，以保证血红蛋白的活性和稳定性。
第二步：红细胞裂解将采集到的血样进行红细胞裂解，将红细胞膜破坏，释放血红蛋白。
一般可以使用生理盐水等溶液进行红细胞裂解。
在裂解的过程中，需要注意温度和pH值的控制，以确保血红蛋白的完整性和稳定性。
第三步：血红蛋白提取在红细胞裂解后，血液中的血红蛋白被释放出来，需要进行进一步的提取。
常用的提取方法包括离心、凝胶过滤、离子交换层析等。
通过这些方法，可以将血红蛋白从其他蛋白质和杂质中分离出来，得到比较纯净的血红蛋白样品。
第四步：血红蛋白分离最后一步是对提取到的血红蛋白进行分离。
根据血红蛋白的性质和不同的应用需求，可以选择不同的分离方法。
例如，可以利用凝胶电泳、高效液相色谱等技术对血红蛋白进行分离和纯化。
通过这些方法，可以得到高纯度的血红蛋白样品，为后续的研究和应用提供基础。
通过以上四个步骤，我们可以完成血红蛋白的提取和分离工作。
这些工作不仅有助于深入了解血红蛋白的生物学功能和结构特性，还为相关疾病的诊断和治疗提供了重要的基础。
希望在未来的研究中，可以进一步完善血红蛋白提取和分离的技术，为人类健康事业做出更大的贡献。
《血红蛋白的提取和分离》 讲义
《血红蛋白的提取和分离》讲义一、血红蛋白的简介血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质。
它存在于红细胞中，使血液呈现红色。
血红蛋白由珠蛋白和血红素组成，其功能主要是将氧气从肺部输送到身体的各个组织，并将二氧化碳从组织带回肺部排出。
了解血红蛋白的结构和功能对于我们进行其提取和分离的研究具有重要意义。
二、血红蛋白提取和分离的原理1、凝胶色谱法凝胶色谱法也称分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
凝胶是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，当不同相对分子质量的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。
这样，相对分子质量不同的蛋白质就得以分离。
2、电泳法电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
在一定的 pH 下，蛋白质分子会带上电荷，由于不同蛋白质分子所带电荷的性质和数量不同，以及分子大小不同，在电场中的迁移速度也就不同，从而实现蛋白质的分离。
三、血红蛋白提取和分离的实验材料和用具1、实验材料新鲜的血液（通常选用哺乳动物的血液，如猪、牛等）2、实验用具（1）色谱柱：用于凝胶色谱法分离血红蛋白。
（2）电泳装置：包括电泳槽、电源等，用于电泳分离。
（3）离心机：用于离心分离血细胞和血浆。
（4）透析袋：用于去除小分子杂质。
四、血红蛋白提取和分离的实验步骤1、样品处理（1）采集新鲜血液，加入柠檬酸钠防止血液凝固。
（2）低速短时间离心，将血液分为血浆和血细胞两部分。
（3）向血细胞中加入蒸馏水，使红细胞吸水涨破，释放出血红蛋白。
2、粗分离（1）将混合液高速长时间离心，除去细胞膜等杂质，得到血红蛋白溶液。
（2）将血红蛋白溶液装入透析袋中，放入磷酸缓冲液中透析，以除去小分子杂质。
3、纯化（1）凝胶色谱操作装填凝胶色谱柱：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，避免出现气泡。
血红蛋白的提取和分离自制
端时，用试管搜集流出液，每（ 5ml ） 搜集一试管连续搜集
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开始进行层析
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搜集得到纯化后蛋白
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试验录像
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原理: 当不一样蛋白质经过凝胶时
相对分子质量较小 轻易进入
凝胶内部通道
相对分子质量较大
无法进入凝胶 内部通道
只能在凝胶外部移动
旅程较长 移动速度较慢
旅程较短 移动速度较快
相对分子质量不一样蛋白质所以得以分离。
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血红蛋白的提取和分离自制
SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物,
SDS所带负电荷量大大超出了蛋白质分子原有
电荷量。因而掩盖了不一样种蛋白质间电荷
差异, 使电泳迁移率完全取决于
(
分子大小
)。
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电泳检测PCR结果
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琼脂糖凝胶电泳
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课堂小结:
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4.透析：装入透析袋并置 于磷酸缓冲液中（PH为7.0） 透析。
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利用透析袋透析
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二、凝胶色谱纯化
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血红蛋白的提取及分离
“血红蛋白的提取和分离”的实验分析及教学组织人民教育出版社课程教材研究所吴成军东北师范大学附属中学赵伟涛“血红蛋白的提取和分离”是人教版选修模块《生物技术实践》中的实验内容，其目的是使学生体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法，该实验虽然操作难度较大，但原理清晰，动手机会较多，因此，学生的学习兴趣很高。
下面结合人教版教材对该实验进行分析并提出相应的教学建议。
1.习得实验原理和方法1．1 初步获取血红蛋白的原理和方法（样品的处理和粗分离）实验步骤实验目的实验原理操作方法结果判断①洗涤红细胞获取较纯净的红细胞通过离心将密度不同的物质分离低速离心，去除上清液，反复加生理盐水并离心直到上清液未呈现黄色为止②释放血红蛋白破裂红细胞，释放血红蛋白低渗溶液中红细胞破裂；甲苯溶解膜脂，加速细胞破裂（相似相溶原理）加蒸馏水，再加甲苯，磁力搅拌器充分搅拌无明显现象③分离血红蛋白溶液初步得到血红蛋白溶液通过离心将密度不同的物质分离离心（较高速）试管溶液分为4层④透析去掉液体中的小分子物质小分子物质容易透出透析袋透析（12小时）透析袋中物质的颜色更红1．2 分离纯化蛋白质的原理与方法──凝胶色谱法（分子筛效应）凝胶是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质直径小于凝胶网孔，由于静电吸附和扩散作用容易进入凝胶内部的通道，可以自由地进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动的过程中，它们从凝胶颗粒的网孔扩散到凝胶颗粒间的孔隙，再进入另一凝胶颗粒的网孔，如此不断地进出，使流程增长，而最后流出层析柱。
而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒的网孔，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随着洗脱液流动，流程较短，因此首先流出层析柱。
分子量介于二者之间的物质，虽然能够进入凝胶网孔，但比小分子难，因此进入凝胶网孔的几率比小分子小，向下移动的速度比小分子快，而比大分子慢。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取血红蛋白是人体内一种极其重要的蛋白质，负责运输氧气到身体的各个部位。
对血红蛋白的分离和提取，不仅有助于我们深入了解其结构和功能，还在医学诊断、疾病研究以及生物制药等领域具有重要意义。
要进行血红蛋白的分离和提取，首先得准备好相应的材料和试剂。
新鲜的血液是必不可少的，通常可以从健康的志愿者或动物身上获取。
此外，还需要一系列的化学试剂，如磷酸盐缓冲液、生理盐水、抗凝剂等等，以及各种实验仪器，如离心机、分光光度计、电泳设备等。
在实际操作中，第一步是采集血液样本。
为了防止血液凝固，需要在采集过程中加入适当的抗凝剂。
采集后的血液要尽快进行处理，以保证血红蛋白的活性和完整性。
接下来就是红细胞的分离。
这通常通过离心的方法实现。
将采集到的血液放入离心机中，以适当的转速和时间进行离心。
由于红细胞的密度较大，会沉淀在离心管的底部，而上层则是血浆和白细胞等成分。
小心地吸取上层液体，留下沉淀的红细胞。
然后，对红细胞进行裂解，以释放出其中的血红蛋白。
这可以通过加入低渗溶液来实现。
低渗溶液会使红细胞的细胞膜破裂，从而释放出细胞内的物质，包括血红蛋白。
裂解后的混合物中含有大量的杂质，需要进一步的纯化处理。
纯化血红蛋白的方法有多种，常见的有盐析法、凝胶过滤法和离子交换层析法等。
盐析法是利用不同蛋白质在不同盐浓度下溶解度的差异，来分离和纯化蛋白质。
在血红蛋白的纯化中，可以逐渐增加盐的浓度，使其他杂质蛋白沉淀，而血红蛋白则留在溶液中。
凝胶过滤法是根据蛋白质分子大小的不同来进行分离的。
将裂解后的混合物通过装有特定凝胶的层析柱，大分子的蛋白质先被洗脱出来，小分子的则后洗脱，从而实现血红蛋白与其他小分子杂质的分离。
离子交换层析法则是基于蛋白质的带电性质进行分离。
选择合适的离子交换树脂，使血红蛋白能够与树脂结合，而其他杂质蛋白则不结合或结合较弱。
通过改变洗脱液的离子强度或 pH 值，将血红蛋白洗脱下来，达到纯化的目的。
在整个分离和提取过程中，每一步操作都需要严格控制条件，如温度、pH 值、离子强度等，以确保血红蛋白的活性和纯度。
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取在探索血红蛋白的分离和提取时，我们仿佛打开了一扇通往生命奥秘的大门。
血红蛋白，这个在我们体内默默工作的英雄，负责运送氧气，维持生命的火焰。
今天，我们就来深入探讨一下，如何从头到尾把它分离出来。
首先，了解血红蛋白的基本结构很重要。
它由四个亚基构成，每个亚基里都有一个铁离子，正是这个小小的铁离子让血红蛋白有了“吸氧”的能力。
嘿，想想看，这铁可是血液的灵魂。
我们提取它的第一步就是要把这些亚基给分开。
通常，我们使用盐析法。
这是一种古老却有效的方法。
简单来说，就是用不同浓度的盐水，使血液中的蛋白质沉淀下来。
盐的浓度高了，蛋白质就沉底了。
这个过程像是在筛选出珍珠，越是纯粹的成分，越容易浮出水面。
接下来，我们要进行离心。
听起来挺高大上的，其实就是把样品放进一个高速旋转的机器里。
你可以想象一下，像个旋转的过山车。
这样，重的成分会被甩到底部，而轻的成分则会悬浮在上面。
经过几轮离心，我们就能获得较为纯净的血红蛋白。
这一步确实需要耐心，毕竟急于求成可不行。
接着，我们还可以使用层析法。
这种方法就像在看一场精彩的魔术表演。
通过使用不同的色谱柱，血红蛋白会被分成不同的成分，层层剥离，最终呈现出它的真面目。
我们可以使用亲和层析或者离子交换层析，具体选择哪种方法，得看实际情况和目标而定。
无论怎样，成功提取的瞬间总是令人兴奋。
之后，我们必须验证提取的血红蛋白是否有效。
通常，我们会用紫外光谱法来测量它的吸收光谱，确保其波长符合标准。
这可不是马虎的事，稍有不慎，可能会错失重要的实验数据。
检查后，如果一切正常，那就可以进行后续的研究或应用了。
在这个过程中，温度和pH值的控制同样至关重要。
想想看，如果温度过高，蛋白质就会变性，失去活性。
这就像一朵美丽的花，失去了阳光和水分，最终枯萎。
保持适宜的环境条件，才能让我们的血红蛋白焕发活力。
总结来说，血红蛋白的分离和提取是一门复杂却充满乐趣的科学。
每一个环节都需要细致入微的操作，绝不能掉以轻心。
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取一、引言血红蛋白，这个听起来有点复杂的东西，实际上在我们的身体里扮演着超级重要的角色。
想象一下，血红蛋白就像是你体内的快递员，负责把氧气送到每一个细胞。
它的分离和提取其实并不简单，但却充满了乐趣和挑战。
1.1 血红蛋白的基础知识首先，血红蛋白是红细胞中的一种蛋白质。
它能和氧气结合，形成氧合血红蛋白。
这种结合不仅让我们的血液呈现出鲜艳的红色，也让我们的身体能够正常运转。
哦，还有，血红蛋白的结构非常独特，包含四个亚基，就像一把精致的钥匙，专门用来打开氧气的大门。
1.2 分离的意义那么，为什么我们要分离血红蛋白呢？其实，分离出来的血红蛋白在医学和生物研究中非常重要。
研究人员可以用它来开发新的治疗方法，帮助那些血液疾病患者。
分离血红蛋白，就像在大海捞针，但每一次成功的提取都能为科学进步添砖加瓦。
二、分离与提取的步骤血红蛋白的分离和提取有一系列步骤，听上去复杂，但其实挺简单。
2.1 准备材料首先，得准备好一些材料。
你需要新鲜的血液样本。
不要担心，这并不是你想象中的复杂实验室环境。
其实，家里的厨房也是一个不错的地方。
再加上一些离心机、缓冲液和过滤器，你就可以开始了。
2.2 离心分离接下来，利用离心机把血液分开。
把血液放进离心管，调整好转速，启动机器。
几分钟后，红细胞就会沉底，血浆则漂浮在上面。
嘿，这个过程有点像制作沙拉，轻轻一拌，食材就分开了。
2.3 提取血红蛋白然后，你需要小心地取出沉淀的红细胞。
用缓冲液洗涤几遍，把杂质去掉。
最后，把红细胞用超声波处理，释放出血红蛋白。
这时候，你能看到一团美丽的红色液体，简直像是液体的宝石。
三、血红蛋白的分析提取出来的血红蛋白并不是终点，而是一个新的起点。
3.1 纯度检测在分析之前，得先检查纯度。
使用电泳技术，可以准确地判断血红蛋白的质量。
电泳就像是在赛道上跑步，跑得快的就是纯度高的，慢的就要重新来过。
3.2 功能测试然后，进行功能测试。
通过与氧气的结合能力，来评估血红蛋白的实际效果。
血红蛋白的分离和提取
血红蛋白的分离和提取血红蛋白是一种在红细胞中负责运输氧气的重要蛋白质。
对于血红蛋白的分离和提取，这不仅在生物化学和医学研究中具有重要意义，也在临床诊断和治疗中发挥着关键作用。
要进行血红蛋白的分离和提取，首先需要准备合适的材料。
通常，我们会选择新鲜的血液作为起始原料。
为了避免血液凝固，会在采集血液的过程中加入适当的抗凝剂，比如肝素或柠檬酸钠。
接下来就是红细胞的分离。
这一步可以通过离心的方法来实现。
将采集到的血液放入离心机中，以一定的转速和时间进行离心。
由于红细胞的比重较大，经过离心后，它们会沉淀在离心管的底部，而血浆和白细胞等则位于上层。
然后，小心地吸取上层的血浆和白细胞，留下底部的红细胞。
得到红细胞后，下一步就是破坏红细胞以释放出其中的血红蛋白。
常用的方法是低渗裂解法。
将红细胞置于低渗溶液中，由于细胞内外的渗透压差异，红细胞会膨胀并破裂，从而释放出细胞内的血红蛋白。
然后是去除杂质。
这其中包括细胞膜碎片、其他细胞内的蛋白质和核酸等。
可以通过再次离心的方式，将杂质沉淀下来，而上清液中则含有较纯的血红蛋白。
在分离和提取血红蛋白的过程中，还需要用到一些特殊的试剂和设备。
例如，为了保持蛋白质的活性和稳定性，可能会使用缓冲溶液来控制反应体系的酸碱度和离子强度。
常见的缓冲溶液有磷酸盐缓冲液、TrisHCl 缓冲液等。
同时，还可能会用到层析技术来进一步纯化血红蛋白。
层析技术有多种类型，如凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析等。
凝胶过滤层析是根据蛋白质分子大小的不同进行分离；离子交换层析则是利用蛋白质所带电荷的差异；亲和层析则是基于蛋白质与特定配体之间的特异性结合。
在进行凝胶过滤层析时，将含有血红蛋白的样品加到填充有特定凝胶颗粒的层析柱上。
较小的分子能够进入凝胶颗粒内部的孔隙，而较大的分子则被排除在外，从而实现分离。
离子交换层析则是根据血红蛋白的带电性质进行分离。
层析柱中填充的离子交换剂带有特定的电荷，当带有相反电荷的血红蛋白通过层析柱时，会与离子交换剂结合。
血红蛋白的分离和提取
02
血红蛋白分离和提取的方 法
离心法
要点一
总结词
离心法是一种利用离心力分离不同密度物质的方法，常用 于血红蛋白的分离和提取。
要点二
详细描述
离心法的基本原理是利用不同物质在离心场中的沉降速度 不同而实现分离。在血红蛋白的分离中，通常将红细胞悬 浮液置于离心管中，在高速离心机中以一定速度旋转，红 细胞由于密度较大而沉降到底部，上清液即为去除了红细 胞的血浆，而红细胞中包含大量的血红蛋白，因此通过离 心法可以获得较为纯净的血红蛋白。
子交换剂表面的离子进行可逆交换，从而实现血红蛋白与其他杂质的分离。
亲和层析法
• 总结词：亲和层析法是一种利用生物分子间的特异性亲和力进行分离的
方法，常用于血红蛋白的分离和提取。
• 详细描述：亲和层析法的原理是利用生物分子间的特异性亲和力将目标分子吸附在固定相上，通过改变洗脱液的组成将 目标分子从固定相上洗脱下来而实现分离。在血红蛋白的分离中，常用的亲和层析方法为铁结合亲和层析和珠蛋白亲和 层析。铁结合亲和层析是利用血红蛋白与铁离子之间的特异性亲和力将血红蛋白吸附在固定相上，通过改变洗脱液的组 成将血红蛋白从固定相上洗脱下来。珠蛋白亲和层析是利用珠蛋白与血红蛋白之间的特异性亲和力将血红蛋白吸附在固 定相上，通过改变洗脱液的组成将血红蛋白从固定相上洗脱下来。
血红蛋白具有低免疫原性和良好的携氧能力，可以作为药物载体用于药物传递和靶向治疗，提高药物的疗效和降 低副作用。
血红蛋白在生物材料中的应用
血红蛋白作为一种生物材料，具有优良的生物相容性和可降解性，可以用于制备人工器官、组织工程和生物材料 等。
05
血红蛋白分离和提取的展 望
新技术的研发和应用
01
02
《血红蛋白的提取和分离》课件
粗分离
通过离心或过滤去除细胞碎片 和杂蛋白。
鉴定
通过电泳、质谱等技术鉴定纯 度。
PART 04
血红蛋白的应用
血红蛋白在医学上的应用
诊断疾病
血红蛋白可用于检测和诊断各种贫血、血红蛋白病以及与血液相 关的疾病。
输血治疗
血红蛋白可用于制备红细胞输血制剂，为贫血患者提供治疗。
药物研发
血红蛋白作为药物载体，可用于药物的定向输送和释放。
感谢观看
KEEP VIEW
REPORTING
食品工业
血红蛋白可作为天然色素和营养强化剂，用于 食品加工和生产。
农业领域
血红蛋白可作为植物生长调节剂，促进植物生长和提高抗逆性。
PART 05
总结与展望
血红蛋白提取和分离的研究成果总结
血红蛋白提取和分离技术不断完善
随着科技的发展，血红蛋白的提取和分离技术不断得到优化，提高了分离效率和纯度。
血红蛋白结构与功能关系研究取得进展
血红蛋白在生物工程中的应用
生物传感器
血红蛋白可用于生物传感器制造，检测环境中的有害 物质。
生物燃料
血红蛋白可应用于生物燃料的合成，提高燃料的能量 转化效率。
生物制药
血红蛋白可用于药物的分离和纯化，提高药物的纯度 和产量。
血红蛋白在其他领域的应用
水体和土壤。
血红蛋白的提取
血红蛋白提取的方法和原理
血红蛋白提取的方法
硫酸铵分级沉淀法、离子交换法、层 析法等。
血红蛋白提取的原理
基于不同条件下蛋白质的溶解度不同 ，通过改变溶液的pH值、离子强度等 条件，将血红蛋白从其他蛋白质中分 离出来。
血红蛋白提取的实验材料和试剂
实验材料
血红蛋白的提取与分离
解决方案：开发新 型分离纯化技术， 提高分离纯度和收 率，降低成本
发展趋势：利用基 因工程技术改造血 红蛋白，提高其稳 定性和功能性
未来展望：血红蛋白 提取与分离技术将更 加成熟和高效，为生 物医学领域的发展提 供有力支持
技术改进：不断优 化提取和分离技术， 提高血红蛋白的纯 度和产量。
新技术的应用：利用 新兴技术如基因工程、 蛋白质工程等，实现 血红蛋白的定向生产 和分离纯化。
高效液相色谱法：结合了经典液相色谱和气相色谱的原理，利用吸附、分配、离子交换等原理进行分离
分离纯化的目的：去除杂质，获得高纯度的血红蛋白
分离纯化的原理：利用不同物质在介质中的溶解度、吸附性、渗透压等性质进行分离
分离纯化的方法：包括沉淀法、色谱法、电泳法等 分离纯化的流程：包括粗分离、纯化、精制等步骤
添加标题
血红蛋白的分离纯化：通过分 离纯化技术，可以从生物样本 中提取出高纯度的血红蛋白， 用于生物医学研究和治疗。
添加标题
血红蛋白在药物输送方面的应用： 血红蛋白可以作为药物输送载体， 将药物输送到病变部位，提高药 物的疗效并降低副作用。
添加标题
血红蛋白在血液替代品方面的应 用：血红蛋白可以作为血液替代 品，用于输血治疗，缓解血液短 缺问题，并避免异体输血可能引 发的免疫反应。
血红蛋白在医疗领域的应用：血红蛋白具有携氧能力，可用于治疗某些缺氧性疾病， 如贫血和心脑血管疾病。
血红蛋白在生物工程领域的应用：血红蛋白可作为生物催化剂，用于加速化学反应， 具有高效、环保的优点。
血红蛋白在食品工业领域的应用：血红蛋白可用于生产新型食品，如血红蛋白饮料、 血红蛋白面包等，具有营养价值和保健功能。
拓展应用领域：不 仅局限于医学领域 ，还将应用于生物 工程、制药等领域 。
课件-血红蛋白的提取和分离.ppt
阅读课本P64（一）凝胶色谱法，回答：
1、凝胶色谱法的概念。 2、什么是凝胶？ 3、凝胶色谱法的原理。 4.凝胶色谱法分离蛋白质的具体过程
（一） 凝胶色谱法（分配色谱法）
1.概念：
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
2.凝胶：
•是一些微小的多孔球体 •这些球体大多数是由多糖类化合物构成的 （如葡聚糖或琼脂糖）。 •小球体内部有许多贯穿的通道
3.类型: 琼脂糖凝胶电泳、 聚丙稀酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳示意图
在电场的作 用下，这些带电 分子会向着与其 所带电荷相反的 电极移动
聚丙烯酰胺凝胶电泳
1、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚 丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联 剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交 联成的具有三维网状结构的凝胶。
3.凝胶色谱法的原理
①当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子 量较小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移 动速度较慢;
②而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部 的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速 度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以 分离。
③依据的特性是：蛋白质分子量的大小。
（三） 电泳：
1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2.原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有
可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正 电或负电。②在电场的作用下，这些带电分子会向着 与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离 样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小， 形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而 实现样品中各种分子的分离。
血红蛋白的提取和分离
本课题学习要点和难点
体验从复杂体系中提取生物大分子旳基本过 程和措施，并了解色谱法、电泳法等分离生 物大分子旳基本原理。
3、课题要点：凝胶色谱法旳原理和措施 4、课题难点：
①样品旳预处理 ②色谱柱填料旳处理和色谱柱旳装填。
2023年4月14日宣告人类基因组序列图完毕，这标志着进入了后基因组和蛋 白质组时代
2、你装填旳凝胶色谱柱是否有气泡产生？你旳色谱 柱装填得成功吗？你是怎样判断旳？
因为凝胶是一种半透明旳介质，所以能够在凝胶柱旁放一支与 凝胶柱垂直旳日光灯，检验凝胶是否装填得均匀。另外，还能够 加入大分子旳有色物质，例如蓝色葡聚糖—2023或红色葡聚糖， 观察色带移动旳情况。假如色带均匀、狭窄、平整，阐明凝胶色 谱柱旳性能良好。假如色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体 以消除气泡，消除不了时要重新装柱。
血红蛋白的提取和分 离
本课题学习目的
体验从复杂体系中提取生物大分子旳基本过 程和措施，并了解色谱法、电泳法等分离生 物大分子旳基本原理。
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④ 它们在血红蛋白旳提取中分别起到什么作用。
2. 主要原理：
①凝胶色谱法分离蛋白质旳原理
②电泳法分离样品旳原理
③缓冲溶液旳构成和作用机理
④洗脱：小心加入pH=7.0 旳20mmol/l旳磷酸缓冲液到合 适高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。
⑤搜集：待红色旳蛋白质接近色谱柱底端时，用试管搜集流 出液，每5ml搜集一试管，连续搜集。（在分离过程中，假如 红色区带均匀一致旳移动，阐明色谱柱制作成功）
⑥注意：正确旳加样操作：1、不要触及并破坏凝胶面。2、 贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁围绕移动。
装配好旳凝胶柱
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2.粗分离----透析（去除分子量较小的杂质）
（1）用 透析
方法进行粗分离，透析袋由半透膜制 成， 玻璃纸、肠衣、膀胱膜 常用 。将透析袋放入 磷酸缓冲 溶液中进行透析。
（2）透析的原理是 透析袋能使小分子自由进出，而将 大分子保留在袋内 （3）透析的目的是
去除样品中分子量较小的杂质
。
• 透析过程中如何去除无机盐离子和小分子 有机物？ • 半透膜的选择透过性，大分子物质不能通 过半透膜，离子和小分子能够通过半透膜 。在透析过程中，血红蛋白溶液中的离子 和小分子不断通过半透膜扩散进入到pH＝7 的磷酸缓冲液中。 • 透析过程中为何使用pH＝7的磷酸缓冲液？ 为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量？ • 维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分 子充分地向外扩散。
蛋白质的知识
(1)一个通式：是指组成蛋白质的基本单位氨基酸；氨基酸的通式只有 1个， 即 (形象记忆：碳周围有四个邻居，三个固定邻居即-H、-COOH、-NH2， 一个变动邻居即-R基)。不同的氨基酸分子，具有不同的-R基。 (2)两个标准：是指判断组成蛋白质的氨基酸必须同时具备的标准有2个： 一是数量标准，即每种氨基酸分子至少都含有一个氨基(-NH2)和一个羧基(COOH)；二是位置标准，即都是一个氨基和一个羧基连接在同一个碳原子上。
1、样品的处理
（1）红细胞的洗涤 A、洗涤目的: 去除杂质血浆蛋白，以利于后续步骤的分离纯化 B、分离时采用 低速短时间 三次 洗 涤，重复洗涤
表明红细胞已洗涤干净
五倍体积的生理盐水 离心，用 ，直至 上清液不再呈现黄色，
为什么要低速短时离心？ 防止白细胞沉淀 C、能否用蒸馏水代替生理盐水？
不能，生理盐水能保持红细胞的渗透压而不至于破裂，若红细胞 提前破裂，使血红蛋白与杂质血浆蛋白混在一起，加大分离难度。
D、为什么要缓慢搅拌？ 防止红细胞破裂释放出血红蛋白。
初次离心后的结果
3次洗涤后的结果
2.血红蛋白的释放：
• 将洗好的红细胞倒入烧杯中，加入蒸馏水 到原血液的体积，再加入40%体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10mim。在 蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释 放出血红蛋白。
（2）释放血红蛋白
②凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定 量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成 凝胶悬浮液。 ③凝胶色谱柱的装填方法： A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。 B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱 内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。 注意：1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之 间的空隙。 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效 果。
• • • • •
•
(5)五大功能：是指蛋白质分子主要有5大功能(由分子结构的多样性 决定)： ①有些蛋白质是构成细胞和生物体的重要物质，如人和动物的肌 肉主要是蛋白质； ②有些蛋白质有催化作用，如参与生物体各种生命活动的绝大多 数酶； ③有些蛋白质有运输作用，如细胞膜上的载体、红细胞中的血红 蛋白；
思考：
1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了 哪些物质？（蒸馏水，40%体积的甲苯） 2. 为了加速释放过程，采取了什么措施？ （使用磁力搅拌器充分搅拌） 目的分析： 使红细胞大量吸水胀裂 1. 蒸馏水的作用是______________________________ 。 溶解红细胞的细胞膜 2. 加入甲苯的作用是____________________________ 。 加速红细胞的破裂 3. 充分搅拌的目的是____________________________ 。
琼脂糖凝胶电ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ示意图
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
（1）、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于
它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。 （2）、SDS能与各种蛋白质形成蛋白质-SDS复合物， SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷 量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 分子的大小 迁移率完全取决于（ ）。
•
•
•
•
④有些蛋白质有调节作用，如胰岛素和生长激素都是蛋白质，能 够调节人体的新陈代谢和生长发育；
⑤有些蛋白质有免疫(包括细胞识别)作用，如动物和人体的抗体 能清除外来蛋白质对身体生理功能的干扰，起着免疫作用。
•
血红蛋白
• 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要 组成成分，是高等生物体内负责运载氧的一种蛋 白质(缩写为HB或HGB)。血红蛋白因含有血红素 而呈现红色，是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白 由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有 一个包含一个铁原子的环状血红素，此基团可携 带一分子氧或一分子二氧化碳。 • 血红蛋白的特性是：在氧含量高的地方，容 易与氧结合；在氧含量低的地方，又容易与氧分 离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧 的功能。
1. 用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞 提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA 的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋 白含量丰富，便于提取血红蛋白。 2与其他真核细胞相比,红细胞有什 么特点? 这一特点对你进行蛋白质的分离有 什么意义?
血红蛋白
血红蛋白
本课题学习目标
体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了 解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。 2、主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②电泳法分离样品的原理 ③缓冲溶液的组成和作用机理 3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法 4、课题难点： ①样品的处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
磁力搅拌器
搅拌器转子
搅拌器正在工作
3.分离血红蛋白溶液：
• 将搅拌好的混合溶液转移到离心管中，以 2000r/mim的速度离心10mim后，可以看出 溶液分为4层，从上往下数，第一层是无色 透明的甲苯层，第二层为白色薄层固体， 是脂溶性物质沉淀层，第三层为红色透明 液体，这是血红蛋白的水溶液，第四层是 其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液 体用滤纸过滤，出去脂溶性沉淀物，于分 液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透 明液体
一、基本概念及原理
1、凝胶色谱法
凝胶色谱法也称为分配色谱法，它是根 据分子量的大小分离蛋白质的方法之一，又 称分子筛层析 。 凝胶实际上是一些微小的多孔球体，例 如：浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙 烯酰胺、葡聚糖凝胶等
原理： 当不同的蛋白质通过凝胶时
相对分子质量较小 容易进入 相对分子质量较大 无法进入凝胶 内部的通道 只能在凝胶外部移动 路程较短 移动速度较快
•
(3)三个数量关系：是指蛋白质分子合成过程中的3个数量关系( 氨基酸数、肽键数或脱水分子数、肽链数)，它们的关系为：当m个 氨基酸缩合成一条肽链时，脱水分子数为(m-1)，形成(m-1)个肽键， 即脱去的水分子数=肽键数=氨基酸数-1；当m个氨基酸形成n条肽链 时，肽键数=脱水分子数=m-n。 (4)四个原因：是指蛋白质分子结构多样性的原因有4个： ①组成蛋白质的氨基酸分子的种类不同； ②组成蛋白质的氨基酸分子的数量成百上千； ③组成蛋白质的氨基酸分子的排列次序变化多端； ④蛋白质分子的空间结构不同。
透析过程动画演示
3、纯化（凝胶色谱）---去除相对分子量 较大的杂质蛋白
（1）凝胶色谱柱的制作
①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两 端需用砂纸磨平。
②底塞的制作： 打孔 挖出凹穴 安装移液管头部 覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
凝胶色谱柱的制作
（2）凝胶色谱柱的装填
①凝胶的选择：A、材料：交联葡聚糖凝胶（G-75）。
液PH值的影响，维持PH 基本 不变。 调节缓冲剂 使用比例 的就可以制得在不同PH范围内使 用的缓冲液。 磷酸缓冲液 3.提问：在本课题中使用的缓冲液是:__________ , 其目的是: 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证 血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科 学研究(活性)
2.配制: 通常由 1~2 种缓冲剂 溶解于水中配制而成。
• 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，用离心 机进行分离。采用低速短时间离心，如 500r/mim离心2mim，用胶头滴管吸出上层 透明液体（黄色血浆），将下层暗红色的 红细胞液体倒入烧杯中，再加入五倍体积 的生理盐水（质量分数为0.9%的NaCl溶液 ），缓慢搅拌10mim，低速时间离心，如 此重复洗涤三遍，直至上层清液中没有黄 色，表明红细胞已洗涤干净。
血红蛋白的特点：
每个肽链环绕一个亚铁血红素基团， 此基团可携带一分子氧或一分子二 氧化碳，血红蛋白因含有血红素而 呈红色。
血红蛋白
两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁红素基团
蛋白质提取和分离的原理
•
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形 状和 根据蛋白质各种特性的差异， 各种特 性的差异 大小、所带电荷的性质和多少、 溶解度、 大小、所带电荷的性质和多少、 溶解度、吸附性质 和对其他分子的亲和力 等等 可以用来分离不同种 等等， 和对其他 分子的亲和力等等，可以用来分离不同种 类的蛋白质。
电泳检测PCR结果
琼脂糖凝胶电泳
①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先 处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 ②测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳， 这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所 带电荷的性质和分子的大小、形状。
二、实验步骤
答:血红蛋白是有色蛋白,因此在凝胶色谱分离时可 以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液 .这 使血红蛋白的分离过程非常直观,大大简化了实验操 作.
（二）操作过程
采集得到血液（加入抗凝血剂柠檬酸钠）