交叉配血知识

1 很小的凝集块,肉眼可见,背景不透明,游离细胞较多,需要 +W 微用小显凝微集镜块观,察肉眼很难看清,背景混浊,要用显微镜观察 +
O 无凝集,无溶血,全部是游离细胞,要用显微镜观察
P 部分溶血 H
H 完全溶血
W 混合外观
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4.盐水试验
多采用立即离心法
正确的操作是：RBC悬液加到血清后立即离心并观察结果
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5.正反定型结果不一致
原因：技术、受检红细胞或血清本身
（1）技术和管理错误
器材不洁
—— 假阳
试剂污染或不足 —— 假阳
标本和试剂搞错 —— 假阳 、假阴
离心过度或不足 —— 假阳 、假阴
结果记录或判断错误 —— 假阳 、假阴
漏加试剂
——
假阴
阳性反应产生溶血现象未能识别——假阴
要是经输血或妊娠等免疫刺激产生。
血型抗体是体内免疫系统所产生的针对血型抗原发生特
异性反应的一类免疫球蛋白类物质。人类血清中有5种类 型：G、M、A、D、E，其中IgM、G是最重要的2种抗体。
RBC血型抗体分为：
① 完全抗体：能在盐水中凝集相应RBC，又称盐水抗体。
主要是分子量较大的IgM
① 不完全抗体：能结合RBC上抗原致敏RBC ，
病人血清 病人血清 病人血清 病人血清
3. PolyGram 100ul
枸橼酸钠重悬液，为 负电荷，中和凝聚胺 正电荷，使正常RBC
凝集解散
4. Resuspending 100ul
2. LIM 600ul
低离子介质中 孵育，促进抗 体与RBC结合
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血清 +
筛选细胞I
血清
血清
血清
+
+
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不规则抗体筛选的操作步骤
被检血清 + 抗体筛选细胞 → 盐水介质或非盐水介质（凝聚胺、抗球蛋白、酶）
筛选细胞I 筛选II
1.
对Kell系统抗体不理想，阴性结果
需做抗球。中国人群几乎100%为
筛选III
病人红细胞
kk型，具有K抗原的几乎为0，至今 未发现Kell系统抗体
凝聚胺含多价阳 离子，中和RBC 表面负电荷，减 少RBC间距离
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2. 离心力的标准
不同规格离心机，力矩不同，统一离心转速，但
没有统一离心力。
离心转速换算公式：
RCF = 1.118 × 10-5 × (rpm) 2× R (cm)
3. 离心后结果观察注意事项
将试管成30-45℃角拿在手上，细胞扣朝上，手腕
轻轻用力，用液体去冲细胞扣。
果，可解决明显的问题.
对一些疑难问题需进一步检查。可初步采取以下措施：
1)重新抽样，纠正因污染或搞错标本造成的不符。 2)将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗A+B做实验， 可得到其他有用信息。有条件加做抗H试验 3)对受检者作直接抗人球蛋白试验，看RBC有没有被致敏 4)如疑为A抗原或B抗原减弱，可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收放散 试验。 5)如试验结果红细胞成缗钱状排列，加等渗盐水1滴混匀，往往可使缗钱现 象消失。 6)做反定型试验时需要加做O细胞。
盖在输血前实验中抗体反映引起的溶血
5.标本标识：唯一性标识无误、与输血申请单一致
6.使用血浆标本：应排除纤维蛋白原的干扰
7.输血后标本保存：2-8℃,至少一周。
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血型
1. 红细胞悬液的配制 2. 离心力的标准 3. 离心后结果观察 4. 盐水试验 5. 正反定型结果不一致原因及处理
二二
血型
三 不规则抗体的筛选
四四
交叉配血
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标本的采集与要求
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1.标本要新鲜:
标本要具有代表性， 能代表患者目前状况
前三个月内输血或妊娠:配血试验标本抽取<48h,
避免因回忆反应产生的抗体漏检。
新近的输血或妊娠：可引起意外抗体迅速出现,如
果对病人的输血史或人身史不明,使用的标本必须是 输血前48h内抽取的。
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1.红细胞悬液的配制
洗涤
洗涤目的: 去除RBC表面物质
①少量的血浆蛋白 ②已溶解红细胞的基质（有竞争抗体的作用） ③抗凝剂（有抗补体的作用）
至少要用大量生理盐水洗一次
浓度
2%：一般用于抗体效价的测定
5%：一般用于血型鉴定、配血试验、抗球蛋白试验 等大多数血型血清学试验 10%：一般用于测定抗体的亲和力试验
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疑难血型病例
1.白血病血型变异 2.血浆蛋白紊乱 3. 类B 4.多/全凝集 5.冷凝集 6.ABO亚型
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三、不规则抗体的筛选
1. 筛选目的 2. 筛选步骤 3. 不规则抗体筛选与交叉配血结果分析
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定义：抗A、抗B以外的血型抗体，多为ＩｇＧ抗体。主
疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。
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2.筛选细胞：
通常是由2-3个单人份的O型红细胞组成一套筛 选细胞试剂，包括以下常见的抗原：Rh系统 、 MNSs系统、P系统、Lewis系统、Duffy系统等。
3.抗体筛选试验局限性：
不一定能检出所有有临床意义的不规则抗体。 一些抗低频率抗原的抗体则可能漏检。
反应时间过长而延误离心对ABO血型系统的抗体检出影响
室温2分钟后离心 室温5分钟后离心
有的标本延迟离心
可能使3+～4+的凝集减弱为0+ ～ 1+,并有溶血
原有凝集可能消失,并有溶血
原有凝集会变为既不凝也不溶血,难以发现ABO血型 的不配合。（多发生在O型人的血清抗体与A型、B 型或AB型红细胞反应的试验中,发生率为2%-3%.发 生机制是反应强的抗A、抗B和抗原强度强的A、B抗 原作用,补体C1在有Ca2+存在的条件下,固定到红细 胞膜上,妨碍了红细胞的凝集,进一步可能引起溶血）
解决的方法： A:血清与红细胞混合后立即离心。 B:用血浆或灭活的血清做试验 C:用EDTA盐水配制红细胞悬液, D:稀释血清
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加样时先加血清再加红细胞，以避免漏加； 抗体和抗原的比例一般为2：1。 必须要做正反定型实验才能确定血型。 正定型试验有条件可加做抗AB（检测弱A、弱B ） 反定型一定要加做O细胞,（发现不规则抗体）
直接：测体内致敏RBC
用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏,如新生儿溶血病、 溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血.
间接：测血清中不完全抗体
常用于血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验26等.
蛋白水解酶能消化破坏RBC表面唾液酸，减少RBC表面负电 菏，缩短RBC间距，IgG抗体能与有相应抗原的RBC产生凝集。
适合：酶法能显著增强Rh和Kidd系统的抗原抗体反应，
不适合：蛋白酶破坏M、N、S、s、Fya、Fyb抗原
又称Coombs试验,是检查IgG抗体的最有效方法。
除可测定RBC上IgG抗体外,还可测定IgM、IgA,、补体C3、 C4
④ 抗筛阳性，交叉配血相容 自身抗-H 抗-Lebh 抗筛阳性，但献血者红细胞可能正好不含与相应的抗原， 因此配血可以相合。
⑤ 抗筛阳性，交叉配血不相容
同种异体抗体存在，自身对照成阴性
同种异体抗体存在，自身对照成阳性
冷反应自身抗体能引起难以确定的阳性
温反应自身抗体能引起难以确定的阳性
“钱串状”红细胞形成引起非真实的阳性结果
（6）近期曾异型输血，病人血液标本成为不同型别的红细胞 混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。
（7）疾病因素导致抗原减弱 某些白血病病人ABO血型抗原 可受到抑制，检出困难。
（8）红细胞多凝集现象 RBC因遗传或获得性的表面异常，发
生多凝集现象。
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（9） 获得性类B 由于G-杆菌作用，RBC可获得“类B”活性
（10）异常血浆蛋白 病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例异 常和高浓度的FIB等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象
（11）近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反 定型困难。
（12）不规则抗体的产生 受检者血浆中，含有ABO血型抗体以 外的不规则抗体，如自身抗I，与试剂A、B细胞上的相应抗原起 反应。
交叉配血 知识讲座
检验科 马燕
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1Hale Waihona Puke Baidu
RBC表面有丰富唾液酸，在中性环境中带负电荷，互
相分离。可通过缩短细胞间距，以及在致敏细胞上的 抗体之间搭桥使RBC凝集。
凝集一般为二个步骤
Ϋ
Ϋ
Ϋ
ΫΫ
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抗体吸附于RBC抗原上成为致敏状态
致敏RBC凝集形成块状
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一一
标本的采集及要求
相应抗原的RBC,必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、poly等) 才能使致敏RBC出现凝集反应，这些方法的选择可按抗体的 血清学行为和试验的具体条件来确定。
临床上通常所称的“同型血”是指ABO血型系统和Rh血型
系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或只用盐水介质配血,则可能检查不出 ABO血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免
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输血前试验“三保险” 血型、抗筛、交叉配血
相合%
随机
64
ABO
99.4
Rh
99.8
抗筛
99.94
交叉配血
99.95
自身输血
100
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四、交叉配血
交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查 不配合性，使病人，献血者血液之间没有相对应 的抗原、抗体成分（如：患者体内有抗A抗体， 献血者RBC上就不能有A抗原）
但在盐水中不能使之凝集。主要是分子量小的IgG， 需用抗球蛋白
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1.筛选目的：
发现有临床意义的不规则抗体，以确保安全有效用血。
最好献血者血清也作不规则抗体的筛选，如有发现不规则
抗体，鉴定此抗体，找出能与其相配合的血液，不可随便用 于输血。
不规则抗体多为IgG抗体，盐水介质中不能凝集，只能致敏
+
筛选细胞II 筛选细胞III 病人红细胞
非特异性凝集 无凝集则重做
特异性凝集
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4. 抗 筛 和 交 叉 配 血 结 果 分 析
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② 抗筛阴性，盐水直接离心交叉配血不相容 献血者红细胞是ABO血型不相容 存在在室温反应的同种异体抗体 献血者的红细胞是多凝集红细胞
③ 抗筛阴性，酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相容 献血者红细胞DAT试验为阳性 受血者血清抗体活性很弱，则抗筛试验成阴性 抗体与低频率抗原反应
血量约为5ml 。
2.使用右旋糖酐、pvp等：
治疗前抽取标本备用,防止RBC缗钱状凝集的干扰
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3.24小时内输了12u血后：
可输注未经交叉配血的ABO、RH同型的血液,因为
原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情况。
4.防止血样的稀释和溶血的产生：
溶血标本一般不使用,因为血清中游离血红蛋白可掩
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（2）标准血清效价太低、亲和力不强。如抗A血清效价不高， 可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
（3）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应 不明显，误判为阴性反应。
（4）血清异常 华通胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响
反定性结果
（5）红细胞致敏 在含高蛋白介质试剂中可发生凝集，产生假 阳性
（13）低丙种球蛋白血症 可能会因免疫球蛋白水平全面下降使 血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。
（14）药物等因素 药物、右旋糖酐等静脉注射某些造影剂可引 起红细胞聚集而类似凝集。
（15）年龄因素 如新生儿、老年人等。
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正反定型不一致的处理方法
首先要重做试验一次。 严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结
试验应在37℃下进行。
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盐水法 聚凝胺
酶技术
AGT 抗人球
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用于IgM抗体的检出、盐水配血试验、用盐水抗体鉴定的血 型抗原，如ABO、MN、P等血型系统的抗原。
当IgG抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应 的红细胞发生凝集反应
Poly是带高价阳离子的多聚物，溶解后能产生正电荷，中和 RBC表面负电荷，缩短RBC间距，引起正常RBC可逆非特异性 凝集、抗体致敏的红细胞则凝集不可逆
- 细胞成细沙状沿试管壁流下 + 细胞成块状或成齿状沿试管壁流下
切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，
弱凝集则会误判为阴性。
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常用的记录符号及所示的凝集强度
4 一个大的凝集块,背景透明,无游离细胞 +
3 数个大凝集块,背景透明,无游离细胞 +
2 许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游离 + 细胞