空肠弯曲杆菌快速PCR检测试剂盒

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鸡(Chicken)空肠弯曲杆菌IgG抗体(CJ-IgG)-NEWA

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断鸡（Chicken Chicken）空肠弯曲杆菌）空肠弯曲杆菌IgG 抗体（抗体（CJ-IgG CJ-IgG CJ-IgG））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被鸡空肠弯曲杆菌IgG抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP 标记的检测抗原，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUT OFF值相比较，从而判定标本中鸡空肠弯曲杆菌IgG抗体（CJ-IgG）的存在与否。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无阴性对照0.5mL0.5mL无阳性对照0.5mL0.5mL无检测抗原-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释样本稀释液6mL3mL无底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

空肠弯曲杆菌快速检测方法研究进展

空肠弯曲杆菌快速检测方法研究进展作者：申秋平沈静怡刘晓明庄林林来源：《中国动物保健》2024年第06期摘要：空肠弯曲杆菌是一种常见的人畜共患病原菌，快速精准检测是有效控制其传播和感染的关键。

本文主要介绍了近年来发表的快速检测空肠弯曲杆菌的相关方法，包括免疫学方法（酶联免疫吸附试验、免疫层析技术）、核酸检测方法（聚合酶链式反应及其衍生技术、多种等温扩增技术等），以及其他新型检测方法（表面等离子共振技术、生物传感器、CRISPR-Cas12b检测系统）。

此外，本文还讨论了这些方法的优缺点以及在实际应用中的考虑因素，以期为行业研究者提供相对全面的空肠弯曲杆菌检测方法参考和科学依据。

关键词：空肠弯曲杆菌；快速检测；免疫学方法；核酸检测方法；生物传感器空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni，C. jejuni）是一种常见的肠道致病菌，属于弯曲杆菌属，革兰氏染色阴性[1]。

该菌多寄生于畜禽、宠物及野生动物，可通过污染的水、牛奶、禽制品等途径进行传播，其感染可引起家畜繁殖障碍、乳房炎、幼畜禽腹泻等。

人类感染则可急性胃肠炎或食物中毒，并伴发关节炎等免疫性疾病[2]。

快速、精准地检测空肠弯曲杆菌是有效控制和预防该类食源性病原菌传播的关键。

近年来，免疫学和核酸检测技术及交叉学科技术的发展为快速精准检测空肠弯曲杆菌提供了新的有力技术和工具支持。

本文就近年來国内外在空肠弯曲杆菌快速检测方法上的研究进展做一综述。

1 免疫学检测方法1.1 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种可用于检测抗原或抗体的免疫学技术。

ELISA方法具有良好的灵敏度和特异性，且操作相对简单，目前已广泛应用于医学诊断、生物学研究等领域。

楼宏强等[3]以OMP18的B细胞抗原表位多肽为包被抗原，建立了一种可快速检测空肠弯曲杆菌的ELISA方法。

实验表明，当表位多肽在稀释度1：1000时，免疫反应性增高最明显。

动物及其产品中空肠弯曲菌PCR检测方法的建立

ｕｅｓｔｍｐａｅｉＣＲｓａ．ｅａｌｉｄｐｏｕｔｗａｒｇｎｔ６ｂｓｉｅｇｈＳｍｕｔｎｏｓｙｔｓｉｇｐｃ－ｓｄａｅｌｔｎＰａｓｙＴｈｍｐｉｅｒｄｃｓａｆａｍｅｔｗｉ５ｐｌｎｔ．ｉｌａｅｕｌ，ｅｔｓｉｓｅｉｆｈ１ｎｎｎ
维普资讯
１８２
中国人兽共患病学报
ＣｈｉｓＯｒａｏｓｓｎｅｅＪｕｎｌｏｆＺｏｎｏｅ
文章编号：０２６４２０）２１８４１０ —２９（０８０ —０２ —０
ｉｎｍａｒａｎｄａｉｌｐｏｕｔｎａｉｌｏｇｎｓａｎｍａｒｄｃｓ
ＨＯＵｉｎｊｎ，ＨＵｉｎｇｏ，ｌａ－ｕ。ＺＪａ－ｕ。ＨＵＡｕｇｏ，Ｘｉ— ｕ。ＨＡＯｎ — ｉｇ，ＩＹｏｇｑｎ。ＪＡＮＧ— 。ＷＵｈｎ —ｉｎ。Ｙｉ，Ｚｏｇｌｇａ
ｏｓｒｔｄｂｈｓｍｅｈｄｏｓａａｄｎｍｐｉｅｒｄｃｏｌｅｄｍｏｓｒｔｄｔｔｅｃｏｒａｉｍｓｓｃｓＥ．ｏｉｎｔａｅｙｔｉｔｏｆａｓｙ，ｎｏａｌｉｄｐｏｕｔｃｕｄｂｅｎｔａｅＯｏｈｒｍｉｒｏｇｎｓ，ｕｈａｃｌ，ｆ
ＳｌｎｌＳｒｐｏｏｃｓａａａｔａＳａａｉ．￡＾Ｚｃｃ“ ｕｅｓＡＴＣＣａｄｓｐｏｈｔｃｓａｈｌｃｃｉ．ｅｄｔｃｉｎａｍｏｅｌｔｅｔｃｃｕｇｌｃｉｅ，．ｆｃｌｓＳ口００ｃｓｒｕａ，ａｎａｒｐｙｉｔｐｙｏｏｃＴｈｅｅｔｏ

TaqManPCR快速检测食品中空肠弯曲菌

ｌ７ｆ／。Ｏｃｍｌｕ
学检测技术，因重复性好，特异性强，敏感性高和易操作等优点＿，２已成为检测领域中一种重要的快速检测手段。我们针ｊ对空肠弯曲菌的重要特异性基因ｈｏ基因设计引物和探ｉｐ针。优化该菌的ＲａｔｅＰＲ反应条件建立了食品中空肠ｅｌｉＣ－ｍ弯曲菌实时荧光ＰＲ检测方法。Ｃ
诸多领域［ｊ３。为保证方法的特异性，－５我们选取在空肠弯曲
菌一个高度保守且特异，有别与其他弯曲菌马尿酸酶（ｉ０ｈｐ）
５菌落计数。以无菌操作将空肠弯曲菌菌株４ｈ．８培养
液Ｉｌ１倍递增稀释至１１１－度，ｍ按Ｏ－０．０８浓按平板计数法进
一
３灵敏性。空肠弯曲菌菌株纯培养，ａｔｅＰＲ法的．ｅ —ｍＲｌｉＣ最小检出量为１ｃ／ｌ５ｆｍ。ｕ
４特异性。除空肠弯曲菌出现很好的阳性结果外，他．其
１０种细菌检测结果均呈阴性。
、
材料与方法；游下针：５一Ａｔｃｔｃ，Ｍ－ｔｔｔＦｃｃｇ－探
１荧光定量ＰＲ扩增条件优化结果。在以相同浓度阳．Ｃ
空肠弯曲菌是近年来日益受到国内外学者重视的一种人兽共患病原菌。在中国空肠弯曲菌与沙门菌所引起的腹泻同样常见，上海、北京、福建等地曾多次报道因食物感染该
菌并引发疾病【。１Ｊ实时荧光ＰＲＲａｔＣ）Ｃ（ｅ１ｉＰＲ是近几年兴起的分子生物．ｍｅ

PCR介绍

【摘要】分子鉴别诊断由于其高效、快速的特点, 在公共卫生领域和个体化医疗中将发挥越来越重要的作用。

分子鉴别诊断需要敏感、特异、可靠的多重扩增技术作为支撑, 靶序列富集多重PCR（Tem PCR）正是这样一项技术, 能在一个反应体系中同时对多种靶基因高度敏感和特异的扩增, 为分子鉴别诊断在应对公共卫生危机、食品安全、病毒分型、细菌耐药性分析和个体独特型遗传背景检测等方面的应用带来革命性变化。

【关键词】靶序列富集多重PCR; 分子鉴别诊断; 公共卫生2003年SARS爆发后, 公共卫生危机处理的重要性在中国上升到前所未有的高度, 各级政府都加大力度投入资金进行相关检测技术的研发, 只有准确鉴定出引起突发公共卫生事件的传染病病原, 才能为治疗疾病、控制疫情和政府决策提供可靠的依据。

而传染病所具有的症状相似、病原复杂的特点, 进行快速、准确的分子鉴别诊断（molecular differential diagnoses, MDD）无疑是最佳选择。

另一方面, 随着人类基因组计划的完成和数量巨大的遗传信息的获得, 人们的兴趣转向了解个体之间基因的差异性, 以及这种差异如何影响不同个体对疾病的敏感性及对药物的反应性, 从而向个体化医疗的最终目标迈进, 即在了解每位患者基因差异所导致的对疾病的易感性、对药物的反应性差异的基础上, “度身定做”针对不同个体的最佳治疗方案, 这也需要对代表每位每个患者特殊性的遗传信息如MHC进行快速的MDD。

PCR技术是MDD的基础, 但传统的PCR用于MDD的最大缺陷就是一次反应仅能对一个基因片段进行扩增和分析。

而引起感染症状的病原体可能多达几十种, 如果采用传统的方法, 则要进行几十个PCR反应, 工作量巨大, 耗时长, 很可能耽误控制疾病蔓延的时机。

为此, 研究人员开发了一次反应能同时扩增多个靶序列的多重PCR, 旅美华人科学家韩健博士发明的Tem PCR（target enriched multiplex PCR, 靶序列富集多重PCR）技术, 能在一次反应中对多种靶序列进行高度敏感和特异的扩增和检测, 为MDD带来革命性的变化［1］, 并因其在“非典”危机中的出色表现, 被咨询公司Frost and Sullivan授予2006年Frost and Sullivan技术创新及领导力年度奖分子诊断领域“行业先锋”的荣誉称号, 该技术还获得华尔街报技术创新奖。

食品中致病菌PCR检测方法-O157

ICSSN 备案号：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言SN/T XXXX－XXXX《食品中多种致病菌快速检测－PCR方法》分为十一个部分：─ 第 1 部分：食品中沙门氏菌检测方法；─ 第 2 部分：食品中志贺氏菌检测方法；─ 第 3 部分：食品中金黄色葡萄球菌检测方法；─ 第 4 部分：食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法；─ 第 5 部分：食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法；─ 第 6 部分：食品中空肠弯曲菌检测方法；─ 第 7 部分：食品中肠出血性大肠埃希氏菌 O157:H7检测方法；─ 第 8 部分：食品中副溶血性弧菌检测方法；─ 第 9 部分：食品中霍乱弧菌检测方法；─ 第 10 部分：食品中创伤弧菌检测方法；─ 第 11 部分：食品中阪崎肠杆菌BAX®全自动PCR检测方法。

本出血性大肠杆菌O157:H7检测方法PCR检测方法分为第一法（普通PCR方法）和第二法BAX®全自动致病菌PCR检测系统1）（简称：BAX® 系统）。

本标准的附录A是资料性附录。

本标准由国家认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。

本标准起草人：卢行安等。

本标准系首次发布的检验检疫行业标准。

1）为美国杜邦公司（DuPont Qualicon）的产品。

食品中多种致病菌快速检测－PCR方法第7部分：食品中出血性大肠杆菌O157:H7检测方法1 范围本部分规定了用普通PCR技术快速检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的方法。

本部分适用于食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的检验。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

禽源空肠弯曲杆菌的分离与双重PCR鉴定

（ ① 山东农业大学动物科技学院泰安２７１０００ ② 中国动物卫生与流行病学中心青岛）
‘
摘要
以空肠弯曲杆菌保守基Ｉ￣ｍａｐＡ和ｈｉｐＯ基因为靶基因，建立空肠弯曲茵的双重ＰＣＲ方法，该方法只对空肠弯
曲菌有特异性，对大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌等则不能扩增出特异性片段．利用该方法对从市场养殖鸡和屠宰场的禽源空肠弯曲菌进行了分离和鉴定，平均分离率为３５．８％，ＰＣＲ鉴定结果与生化鉴定结果相一致，说明建立的双重ＰＣＲ鉴定方法具有灵敏、特异的特点，可节省传统生化鉴定所耗费的时间，为空肠弯曲茵的检测提供新方法。
剂ＩｌＩ（Ｓｋｉｒｒｏｗ）事先用２ｍｌ蒸馏水溶解。无菌倒平皿，４ ℃保存备用。哥伦比亚血平板：３９ｇ培养基济于ＩＯ００ｍｌ水中，
随着分子生物学技术的发展。ＰＣＲ方法已经广泛应用
于各种病原微生物的检测，本研究利用空肠弯曲杆菌的
食源性致病菌作为一个公共卫生问题是影响食品卫
生安全的主要因素之一，而空肠弯曲杆菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ
１．２主要试剂及器材
新鲜绵羊（青岛海博生物科技公
ｊｃｊｕｎｉ）就是食品卫生中一种非常重要的食源性致病菌。它是引起人类细菌性腹泻的最重要原因之一，在很多动物特别是禽类体内属于正常携带细菌，如果屠宰过程中不注意卫生操作，或者加工不完全，便能够通过食物链传递给人类。可以引起人类发热、急性胃肠炎，儿童易发病，免疫低下者会进一步导致心内膜炎、关节炎、骨髓炎、脑炎、败血症等全身性疾病，最严重的并发症是某些血清型的Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ感染会引起周围神经自身免疫性疾病－

多重PCR与传统方法检测空肠弯曲菌的比较研究

多重PCR与传统方法检测空肠弯曲菌的比较研究袁宝君;吴高林;乔昕;戴建华【期刊名称】《卫生研究》【年(卷),期】2007(36)1【摘要】目的应用多重PCR法和传统检测方法对禽类样品进行空肠弯曲菌的检测,比较两种方法在检测结果准确性、效率、实用性上的差异与优缺点。

方法分别采用基于空肠弯曲菌hipO、mapA、23S基因多重PCR法和传统检测方法(GB/T4789.9-2003)对来自南京市5个大型农贸市场的290份禽类样品进行同步检测,并对两种方法的检出率、灵敏度、检测周期进行比较。

结果传统检测方法的检出率为16.6%,灵敏度为45CFU;多重聚合酶链反应(PCR)的检出率为37.9%,灵敏度为15cfu。

结论多重PCR方法在检出率、灵敏度与检测周期等指标上均优于传统空肠弯曲菌的监测方法。

【总页数】3页(P98-100)【关键词】空肠弯曲菌;多重PCR;检测方法【作者】袁宝君;吴高林;乔昕;戴建华【作者单位】江苏省疾病预防控制中心食品卫生科;南京医学大学公共卫生学院营养食品卫生系【正文语种】中文【中图分类】TS201.3;R155.5【相关文献】1.荧光定量分型PCR、多重PCR和测序检测HBV基因型的方法学比较 [J], 张秀瑜;赵耀;张文露;胡源;袁作为;黄爱龙2.空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157多重PCR分子检测研究 [J], 凌霞;沙丹;肖勇;张敬平;吴家林3.多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌 [J], 徐君怡;曹际娟;郑秋月;裴轶君;于珂4.含内标的多重实时PCR法同时检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌 [J], 申进玲;赵丽娜;蒋原;韩伟;袁辰刚5.空肠弯曲菌多重PCR快速检测方法建立的研究 [J], 吴高林;乔昕;袁宝君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。