空肠弯曲菌检验

2.微需氧条件的制备 最佳微需氧条件是氧气5%、二氧化碳为10%、氮气为 85%。微需氧条件的制备方法有很多种，例如常用的燃烛 法、化学法、生物法、气袋法、仪器法等。 带有双相压力计的厌氧罐：在装入平皿密封后，先抽 去罐内空气至负压为7.3×104 Pa（550mmHg)处，同样输 入上述气体至压力为零。即可放置恒温箱内培养。 3.分离培养 可直接在选择性培养基，如改良Camp-BAP布氏杆菌培 养基或Skirrow氏培养平板上划线接种。与42℃培养48h后， 观察可疑菌落。 4.初步鉴定 将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性， 则涂片做革兰氏染色。根据菌落生长特征、菌体染色、动 力（暗视野或相差显微镜下观察动力明显）、氧化酶和过 氧化氢酶阳性者，可初步确定为弯曲菌。
＋ ＋ ＋
－ －
＋ ＋ ＋
－ ＋
＋ ＋ ＋
＋ d
＋ ＋ ＋
d －
－ ＋
＋
＋ ＋
－
Biblioteka Baidu
＋ ＋
－
﹙－﹚ ＋
－
d ＋
？
？ d
d
马尿酸钠水解
－
－
＋
－
－
－
注: +为90%以上阳性； d为有的阴性，有的阳性； （-）为一般不生长； -为90%以上阴性； ？为未知。
（四）抵抗力
本属菌抵抗力不强，易被干燥、直 射阳光及弱消毒剂等杀灭，加热至 58℃经5min可杀死。对青霉素、头孢 霉素耐受，对红霉素、四环素、庆大 霉素敏感。
本节结束
6.生物分型 （1）快速马尿酸钠水解试验 （2）快速硫化氢试验 （3）DNA酶水解试验 空肠弯曲菌的生物分型
生物型 空肠弯曲菌 试验 Ⅰ 快速马尿酸钠水解试验 快速硫化氢试验 + Ⅱ + Ⅲ + + Ⅴ + + Ⅵ Ⅶ 弯曲菌 嗜热弯 曲菌 Ⅷ + Ⅸ +
DNA酶水解试验
-
+
-
+
-
+
-
+
7.血清分型 空肠弯曲菌O因子分型应采用间接血凝法，H或K因子分 型可用玻片凝集法。 8.菌种保存 空肠弯曲菌菌种应接种在改良Camp-BAP斜面培养基上 （棉塞不宜过紧），于42~43℃微需氧环境中培养48h后， 置4℃冰箱中微需氧环境保存10~14d，需要时仍可转种一 次，长期保存需用冻干法，即真空冷冻干燥法。 注：在进行空肠弯曲杆菌检验时，应严格执行无菌操作， 防止自身感染。
（三）生化特性
弯曲菌属各个种的生化特性
项目
过氧化氢酶 氧化酶 1%甘氨酸试验 H2S试验（纸 条法） 35g/LNaCl耐 受试验 25℃生长 42℃生长 硝酸盐还原试 验 奈啶酸试验
胎儿弯曲菌
胎儿亚种 结肠亚种 空肠亚种
痰弯曲菌
痰亚种 牛亚种
粪弯曲菌
＋
＋
＋
＋
－
－
＋ ＋ －
－ ＋
＋ ＋ ＋
－ －
（6）奈啶酸试验
将分离培养所得可疑菌落涂片于血平板上，然后贴上含有 39μm奈啶酸的滤纸于平板上，空肠弯曲菌敏感而肠道弯曲菌 不敏感。 （7）TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）试验
空肠弯曲菌在TTC培养基上呈阳性，而胎儿弯曲菌为阴性，阳性 者有紫色菌苔并有光泽。
（8）硝酸盐还原试验
取培养物的浓菌悬液，在37℃放置2h，加入试剂观察颜色 反应，以空肠弯曲菌呈红色的阳性反应。
㈡ 培养特性
⒈初次分离时需要在含5%氧、85%氮和10%二氧化碳环 境中，传代后能在10%二氧化碳环境中生长，在多氧和绝 对无氧环境中均不生长。 ⒉培养适宜温度为25~43℃，最适温度为42℃，最适 pH7.2。 ⒊对糖类既不发酵也不氧化，呼吸代谢无酸性或中性 产物，生长不需要血清，从氨基酸或三羧酸循环获得能 量。 ⒋在布氏肉汤中生长呈均匀混浊。 ⒌在血琼脂上，初分离出现两种菌落特征： 第一型菌落不溶血、灰色、扁平、湿润、有光泽，看上 去像水 滴，边缘不规则，常沿划线蔓延生长；第二型 菌落也不 溶血，常呈分散凸起的单个菌落（直径 1~2mm）、边缘 整齐、半透明、有光泽，呈单个菌落生 长。当菌种传代后，如遇环境温度不适宜，易出现第二 型。
（4）35g/LNaCl耐受试验
将分离培养所得可疑菌落接种于含35g/L氯化钠肉汤培养 基中，经48h培养，空肠弯曲菌不成长。
（5）42℃和25℃生长试验
将分离培养所得可疑菌落接种于两管布氏杆菌肉汤中，一 管放在42℃下培养48h，一管放在25℃下培养48h，42℃生长 而25℃不生长，则为空肠弯曲菌。
5.确定试验 经初步鉴定后，仍需做下述试验，并且各项试验均应在 5%氧气的微需氧环境中培养。 （1）甘氨酸耐受性试验 将分离培养所得可疑菌落接种于甘氨酸培养基中，培养 48h，如为阳性，在培养基表面有云雾状生长，则为弯曲菌 空肠亚种。 （2）硫化氢生长试验 将分离培养所得可疑菌落接种于TSL斜面上，并吊一根 乙酸铅滤纸条于管口，经48~72h培养，空肠弯曲菌一般在 斜面上少量生长，其反应为碱性/碱性（K/K），滤纸条变 黑，但培养基底部不因硫化氢而变黑。 （3）马尿酸钠水解试验 将分离培养所得可疑菌落接种于马尿酸钠培养基，于 42℃培养48h，离心沉淀取出部分上清液，加入三氯化铁试 剂，如出现恒久沉淀物则为阳性，空肠弯曲菌呈阳性反应。
（五）致病性
弯曲菌在胆管中生长，小肠上端微需氧环 境中适宜本菌生存和繁殖，造成空肠、回肠和 大肠组织损伤，通过肠粘膜侵入血液。空肠弯 曲菌引起的病变主要在回肠和空肠见斑块样炎 症，伴有肠系膜淋巴结炎。
三、检验程序
四、操作步骤
1.样品的采集及处理 （1）肉类、乳类等可疑食品标本 先取10g检样于90mL生理盐水中，用电动搅拌器打碎，静 置15min,将上清液以3000r/min离心10min，取沉渣做检验用， 接种于Camp-BAP平板上，与42~43℃微需氧培养48h，取出平 板鉴定菌落。如1g样品菌量少于10² 个，此法不能检出。 （2）河水或污水标本 先取水样1000mL，经0.65μm微孔滤膜过滤，再用0.45μm 微孔滤膜过滤。取滤膜培养于布氏杆菌肉汤中（含Camp-BAP 抗菌剂），经微需氧42~43℃48h培养后，培养液做检验用， 用Camp-BAP平板分离。 （3）其他 不论哪种食物样品都应尽快交付检验。如果样品必须运送 和保存，应当使用Cary-Blair氏半固体培养基。弯曲菌的存 活时间取决于温度，在25℃情况下，其存活时间不到24h或更 少，因此样品在原始分离前需放冰箱或冷处保存。
动物→人 人→人
– 人群易感性
密切接触、粪口传播 粪口传播
人群普遍易感 1～5岁儿童发病率最高
所致疾病
1. 婴幼儿急性肠炎
腹痛、水样泻、粘液脓血便
2. 食物中毒
二、生物学特性
㈠ 形态与染色 本菌为革兰氏阴性多形态菌，螺旋 形，弯曲杆状。大小为（0.3~0.4） μm×（1.5~3）μm，呈S形或纺锤形， 菌体一端或两端有单根鞭毛，长度约 为菌体的2~3倍，在固体培养基上培 养时间过久，如超过48h以衰老的球 形菌居多。动力阳性。
空肠弯曲菌检验
一、概述
空肠弯曲菌是弯曲菌属中的一个亚 种，隶属于螺菌科。 已被认为是引起急性腹泻的重要原 因菌。目前已证明为人畜共患病菌， 人们食用受到该菌污染的食品和饮用 水可引起急性肠炎。
空肠弯曲菌(C.jejuni)
流行病学特征
– 家畜、家禽肠道正常菌群 – 传染源 病人，带菌者 ，带菌动物 – 传播途径