脆性X综合征的产前基因筛查与诊断

脆性X综合征的产前基因筛查与诊断

杨丹彤贾颐舫吴爱华张爱东

【摘要】目的对脆性X综合征进行产前基因筛查与诊断。方式采纳聚合酶链式反映(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对32例妊妇及其胎儿的脆性X基因(CGG)n重复序列进行检测，同时采纳PCR扩增牙幼基因对胎儿性别进行鉴定。结果在32例妊妇及其胎儿中，检出1例妊妇为前突变携带者，1例男性胎儿为脆性X综合征患者。结论采纳PCR扩增脆性X基因(CGG)n重复序列，结合扩增牙幼基因进行性别鉴定，可对脆性X综合征进行产前筛查与诊断。

【关键词】脆性X综合征; 聚合酶链反映; 牙幼基因; 产前诊断

Prenatal screening and diagnosis for fragile X syndrome YANG Dantong, JIA Yifang, WU Aihua, et al. Shandong Provincial Key Laboratory for Improving Birth Outcome Technique Shandong Provincial Family Planning Science and Technology Institute, Jinan, Shandong 250002, China

【Abstract】 Objective To screen and diagnose fragile

X syndrome prenatally by PCR. Methods The CGG repeat region in the FMR 1 gene was amplified by PCR and was detected by PAGE in 32 pregnant women and their fetuses and the fetal sex was identified by the amplification of amelogenin gene. Results One premutation carrier and one male fetus with fragile X syndrome were detected from 32 pregnant women and their fetuses. Conclusion Amplification of the CGG repeat region in the FMR

1 gene and the amelogenin gene by PCR can be applied for prenatal screening and diagnosis for fragile X syndrome.

【Key words】 Fragile X syndrome; Amelogenin gene; Prenatal screening; Prenatal diagnosis

脆性X 综合征(fragile X syndrome，FXS)是一种X连锁遗传病，是危害儿童智力发育致使儿童智力低下的要紧遗传病之一，该病的临床诊断与产前诊断一直备受关注。1991年Verkerk等[1]发觉了FXS相关致病基因FMR1，提出FMR1基因内(CGG)n重复序列的不稳固性扩展及其上游CpG岛的异样甲基化是致使该病的分子基础。尔后，检测FMR1基因(CGG)n重复序列及甲基化状况的分子生物学方式开始用于FXS的诊断与产前诊断。本研究成立了稳固的聚合酶链反映(polymerase chain reaction,PCR) 扩增FMR1基因的(CGG)n 重复序列作为FXS的筛查与诊断方式，结合PCR扩增牙幼基因

(amelogenin)作为性别的诊断方式，用于FXS的产前筛查与诊断，报告如下。

对象与方式

一、对象

2007年1月～2007年10月来本所优生遗传门诊进行羊水染色体检查的无FXS家族史妊妇30例，还有2例妊妇系FXS家系成员，其中1例已生有1个FXS男性患儿。32例妊妇均为单胎怀胎。妊妇于孕18～22周抽取羊水，留用5 ml，3 000 r/min离心10 min后弃上清，细胞沉淀-20 ℃保留备用。同时取妊妇外周血5 ml，0.1mol/L EDTA 抗凝，-20 ℃保留备用。

二、方式

1.基因组DNA提取：采纳基因组DNA提取试剂盒(Takara公司)，按说明提取。

1基因(CGG)n重复序列：参照文献[2]，在FMR1基因5’非翻译区(CGG)n重复序列双侧设计合成一对引物(由上海生工生物技术合成)，序列如下。

FMRF 5’GCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCCGGT3’

FMRR 5’AGCCCCGCACTTCCACCACCAGCTCCTCCA3’

PCR反映整体积为25 μl，含1×PCR buffer，2U Golden TaqDNA聚合酶(ABI公司)，12.5 %二甲亚砜(DMSO)，12.5 pmol/L引物，10 mmol/L dNTP，50 ng/L基因组DNA。反映条件为：98 ℃预变性10 min，97 ℃变性60 s，61 ℃退火60 s,72 ℃延伸120 s，共35个循环，最后72 ℃延伸5min。

3.PCR扩增牙幼基因：选择X Y同源牙幼基因(amelogenin)第一个内含子周围的特异序列进行扩增，引物序列如下。

Amel F 5’CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG3’

Amel R 5’ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG3’

反映体系为25 μl，含1×PCR buffer，1.5 U Taq酶，12.5 pmol/L引物，10 mmol/L dNTP，50 ng/L基因组DNA。扩增条件：95 ℃预变性3 min，94 ℃变性60 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共35个循环，最后72 ℃延伸5 min。