实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化
实验三霉菌放线菌形态观察及微生物菌落观察
观察青霉菌 丝和分生孢 子着生情况：
1.单轮生青霉群；2.对称二轮 生青霉群；3.多轮生青霉群；4. 不对称生青霉群
担子菌担孢子的观察
切片标本的制作：现场演示
下次实验准备
每组两个平板，分别是马铃薯培养基（培养 真菌），另一个高氏培养基（培养放线菌）
实验室环境中微生物的检查 用棉签取实验室环境条件下的微生物进 行涂板。
一、实验目的
了解放线菌、霉菌、酵母菌和大型真菌的特点 并观察其形态特征
学习掌握霉菌染色的基本方法
二、实验原理
原核微生物
放线菌：
由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细 胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入 培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝） 和生长在培养基表面的气生菌丝。有些 气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波 浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆 形或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜 色常作为分类的重要依据。
真核微生物
酵母菌：酵母菌细胞一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或
柠檬形。酵母细胞核与细胞质有明显的分化，个体直 径比细菌大几倍到十几倍。繁殖方式也较复杂，无性 繁殖主要是出芽生殖，有些酵母能形成假菌丝。有性 繁殖是通过接合形成子囊及子囊孢子。
霉菌：凡在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网
形丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上 许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子 囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。
常见大型真菌：在分类上属于子囊菌纲和担子菌纲，
均为丝状真菌。
三、实验材料
放线菌和真菌培养物
1. 放线菌培养物：青色链霉菌四天插片培养物。 2. 啤酒酵母24至28h液体培养物。 3. 黑曲霉和根霉4d搭片培养物。 4. 各种真菌示范片。 5. 市售平菇
实验三霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化
． 黑 曲 霉 培 养 物 ．
一
插 片 培 养 物 ．
放 线 菌 培 养 物 ： 链 霉 菌
． 放 线 菌 和 真 菌 培 养 物
三 、 实 验 材 料
碘
灯环
四
液
、、
天
、
四、实验步骤
观察放线菌气生菌丝和基内 菌丝的区别 取插片一片，直接在显微镜 下进行观察，注意分界面两 侧菌丝形态的差异 插片法培养放线菌
分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基 （200ml／瓶）熔化后冷至50℃后加链霉素 2ml倒平板。
四．悬液涂布(演示): 无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用10 －2，10－3，10 －4稀释液涂布马丁－孟加拉红平板；采用 10－3，10－4，10－5稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板,每人用 剩下的1个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分 离（演示）
2、霉菌：
霉菌是一些“丝状真菌”的统称，不是分类学上的名词。凡是在基质上长成毛状、棉絮 状或蜘蛛网状的丝状真菌统称霉菌。
霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。因 此，在观察是要注意菌丝的直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖 或有性繁殖时形成的孢子是哪一种，孢子是怎样着生的。
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实验三 放线菌、霉 菌的形态观察 及微生物的分离纯 化
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一、实验 目的
实验（一）放线菌、霉菌的形态 观察
观察放线菌、霉菌的形态结构特征
学习掌握霉菌染色的基本方法 基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉 菌菌落形态特征
二、实验原理
放线菌：放线菌是介于细菌与丝状真菌之间而又接近于细菌的一类丝状原核生物，因菌落呈放射状 而得名。 放线菌的菌落在培养基上着生牢固，不易被接种针挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末状。 它和细菌单染色一样，可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后，在显微镜下观察它们的形态。放 线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞菌丝体，菌丝内无隔膜，菌丝体分为两部分，即潜 入培养基中的营养菌丝（基内菌丝）和有营养菌丝向上生长的气生菌丝，有些气生菌丝分化成各种 孢子丝，呈螺旋状、波浪形或分枝状等，着生形式有丛生、互生和轮生三种。孢子的表面光滑或粗 糙，圆或椭圆和干形。孢子有各种颜色。这些形态特点都是鉴别放线菌的重要依据。
实验3：细菌的分离与纯化
实验 3 微生物的纯种分离培养微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。
它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。
由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。
不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。
肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。
一、实验目的：1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。
2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。
3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。
二、实验原理：在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。
三、实验材料和用具：1．材料（1）土壤样品（ 2 ）培养基：①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基（% ）牛肉膏0.3-0.5g 蛋白胨1.0g NaCl 0.5g 琼脂2.0g 蒸馏水100mL pH 7.2-7.4 ，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。
配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。
土壤中微生物的分离纯化(电子版实验报告)
微生物实验报告土壤中微生物的分离与纯化指导教师：李海花周四晚第四组实验成员: 杜玉琪180112010009董天涵180112010008蒋怡菲180112010018逄颖180112010035【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化1.实验目的（1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。
（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
2.实验原理（1）培养基的配制与灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。
不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性。
所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
（2）微生物的培养及鉴定接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
接种的关键是要严格的进行无菌操作。
鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。
细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。
（3）平板分离与活菌计数倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期等。
实验八、土壤微生物的分离和 纯化
实验八、土壤微生物的分离和纯化土壤微生物是指生长在土壤中的微弱的、微小的生物体，包括细菌、真菌、放线菌、原生动物等。
土壤微生物是土壤的重要组成部分，对维持土壤生态系统的平衡和功能发挥起着关键作用。
因此，对土壤微生物的分离和纯化具有重要意义。
本实验就是针对土壤微生物的分离和纯化进行研究。
一、实验原理由于土壤微生物数量繁多而多样，分离出单一的菌落对于此实验来说非常的困难。
但是采用适宜的富培养基后能够轻松的促进土壤微生物菌群的生长。
富培养基包括有机和无机元素、维生素、氨基酸、碳源和氮源。
地衣素琼脂（ISP）是一种富含多种碳源和氮源的优质菌落培养基，是常用的微生物培养基。
本实验的基本原理就是在能够生长的环境中分离出单一的菌落，通过多次分离和鉴定获得纯种菌株。
二、实验器材和试剂1.地衣素琼脂培养基2.试管、移液器、移菌环、烧灼器、电热蚊子香、灭菌器3.已经壳霉菌疫苗接种的贵州悬钩子种子和土壤三、实验步骤1.准备工作。
用移液器将壳霉菌疫苗接种在新的地衣素琼脂培养基板上，将其灭菌，以备之后的使用。
2.准备土壤基质。
将土壤样品剪碎成非常小的颗粒，并放入烧灼的试管中，加入恰当的地衣素酵母素琼脂，变形后形成一个接种板。
在较大的容器中放置电热器设备，以保持环境的湿度和温度适宜。
接下来，将接种板和采样站放在单独的区域以免混淆。
3.接种。
从土壤中取一小部分，倒入试管中，并加入适量的地衣素琼脂培养基，并将其摇动均匀，使菌群溢出。
等到土壤均匀地分散在地衣素琼脂培养基中之后，用移菌环扭曲并切出一个菌落，并将其置于新的地衣素琼脂培养基板中。
重复此步骤至少三次，每次都要将新的分离土壤菌落剪出来。
4.孵育。
将地衣素琼脂培养基板置于电热器设备中，以使温度保持在合适的范围内，并等待菌落的生长。
当新的菌落形成后，即可重复上述步骤以获得更多的菌株。
5.纯化。
检查菌落后，需要进行纯化。
鉴定每个菌落，把每个菌落分别悬浮在新的地衣素琼脂培养基板中，并等待菌落的生长。
土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法
土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法微生物因为体积小、质量轻、适应性强、繁殖能力强等特点，广泛分布于自然界中。
它们存在于食品、化妆品、饲料、环境等人们能触及的各个角落中。
某些微生物对产品的污染，不仅影响到产品本身的质量，更严重的是它危及消费者的健康和安全。
科标检测研究院凭借多年的微生物检测经验，可提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，赢得社会业内广泛认可。
主要针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析。
以下介绍几种菌的分离方法：一、从土壤中分离放线菌1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。
振荡10分钟，制成10-1菌悬液。
按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。
3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。
然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中，培养7-10天，培养基上会出现微生物菌落。
如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。
4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。
二、从土壤中分离霉菌1.制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。
将培养皿中，凝成平板，待用。
2.称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。
3.取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。
然后将培养皿倒置于2 5-30℃温箱内培养3-4天。
培养基上会出现微生物菌落。
霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。
4.挑取培养皿内的霉菌菌落接种于斜面培养基上三、从饮水中分离大肠杆菌1.制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2.用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。
土壤中微生物的分离
实验三土壤中微生物的稀释分离、纯化及无菌操作技术一、教学目标与基本要求：1、掌握倒平板的技术和分离纯化微生物的基本操作技术。
2、设计实验方案，分离目的菌，并通过后续实验做出初步鉴定。
二、实验内容：1．用稀释法从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。
2．用平板划线法分离纯化微生物。
3．学习斜宜接种、穿刺接种、平板接种、液体接种等接种方法。
三、实验步骤（一）微生物分离的方法有很多种，但常用的有两种：1.平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，二获得单个菌落，从而达到分离的目的，具体方法如下： 1)倒制平板：将固体培养基熔化，冷却至50-55℃，然后在酒精灯火焰旁，以右手持培养基，左手拿培养皿，以无菌操作将培养基注入培养皿内，约15ml，轻微转动培养基，使培养基均匀分布，然后静置于水平位置，凝固即成平板，并在皿该边贴上标签。
2.稀释平板分离法稀释手段，使样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平皿内，倒入培养基，摇匀静置凝固后培养，这样被分离的细菌被固定在原处而形成菌落，可作为一种记数方法。
1)制备土壤稀释液：（细菌的分离）以无菌操作，称取样品1g，加入装有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使土样与水充分混合，即成10-2土壤稀释液，然后用无菌移液管吸取9ml无菌水的试管内，制成10-3的稀释液将此移液管在试管内反复吸冲三次，然后取出移液管，并将其通过火焰，再插入原来包移液管的纸套内，以备再用，振荡10-3 的稀释液试管，再从纸套取出原来的移液管插入已混匀的试管内，再吹洗三次，然后吸出1ml10-3的稀释液至另一支装有9ml 无菌水的试管中，制成10-4稀释液。
用同样方法再制成10-5、10-6的稀释液，稀释完毕后，可用原来的移液管，从菌液浓度最小的 10-6的稀释液开始吸取1ml10-6稀释液，加到相应编号10-6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取1ml10-5、10-4的稀释液加到相应编号为10-5、10-4的无菌培养皿内，整个分离过程见下图。
土壤中放线菌的分离和纯化实验(精选5篇)精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。
2、掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。
4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。
7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。
二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。
2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
微生物实验三学校公共环境微生物的分离与纯化
（4）头发
在揭开皿盖的琼脂平板上方，用手将头发用力摇动数次， 使细菌降落倒琼脂平板表面，然后盖上皿盖。
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实验设计方案
（3）土壤样品
采集不同的土壤样品，称1g溶解于100mL的无菌生理盐水 中（0.85%NaCl），梯度稀释，取0.2mL稀释液涂布于含牛 肉膏蛋白胨培养基平板中，37℃培养24h，计数。
实验三 学校公共环境微生物 的分离与纯化
林标声
2021/4/9
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实验三 学校公共环境微生物的分离与纯化
一、实验目的 通过本实验的学习，使学生掌握微生物的
分离与纯化的原理与方法，熟练掌握微生 物的染色方法以及微生物的计数等基本技 能，为今后微生物的遗传、生理以及分子 生物学等学习打下基础。
2021/4/9
2021/4/9
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实验设计方案
（1）空气 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板放 在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂 表面暴露在空气中，5min后盖上皿盖
（2）超净工作台 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂 平板放在超净工作台上，移去皿盖，使琼脂 培养基表面暴露在超净工作台内的空气中， 15min后盖上皿盖
2021公式
空气的细菌数= W* 1000/ (Q * T) 式中：W---平皿细菌数，Q---流量:L/min，
T---采样时间：min
2021/4/9
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实验设计方案
（3）手指（洗手前与洗手后）
A 分别在两个琼脂平板上标明洗手前、后，并用记号笔在 皿底划分三个区域
B 移去皿盖，同组的三个人将未洗过的手指分别在三个区 域的琼脂平板表面轻轻的来回画线。
实验(二)土壤中微生物的分离纯化及观察
2.稀释:
0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml
原样
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
0.2ml
0.2ml
0.2ml
3.取样
10-4
10-5
10-6
4.倒平板：倒入融化后冷却至45℃的培养基15～２５ml， 置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀。
么？
当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在
一起时，你认为问题出在哪里？
用倾注法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有何不
同？为什么要培养较长时间（48h）后观察结果？
倾注法
涂布法
倒平板
a 皿加法
b手持法
细 菌Leabharlann 霉菌放线菌实验内容
一、稀释涂布平板法（全组完成）
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 ：涂布10-3、10-4、10-5三个剃度，每个剃度两 块平板 高氏Ⅰ号培养基：涂布10-2、10-3、10-4三个剃度，每个剃度两块平板 马丁氏（孟加拉红）培养基：涂布10-2、10-3、10-4三个剃度，每个剃度 两块平板
器材
分离源：自采集土壤样品
培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，高氏Ⅰ号 培养基、马丁氏（孟加拉红）培养基 溶液或试剂 盛4.5ml无菌水的试管，盛90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶。
仪器或其他用具 振荡器，无菌培养皿，无菌 吸管，接种环，电磁炉，培养箱，吸耳球等。
一、稀释涂布平板法（全组完成）
1、编号：取无菌平皿１８个。另取无菌水４支，依次 标明10-2、10－3、10-4、10-5。
0.5ml
各4.5ml 无菌水
土壤中微生物的分离
微生物学实验报告土壤微生物的分离、培养及鉴定学生学号：学生姓名：专业班级：指导教师：土壤微生物的分离、培养及鉴定摘要：本实验是微生物学综合性实验项目包含了微生物学实验使用的微生物分离和纯化、微生物的选择培养基、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物类群的主要培养特征和形态特征、制片染色技术等。
[1]土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。
根际微生物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。
土壤微生物不仅对土壤的肥力和土壤营养元素的转化起着重要作用，而且对于进入土壤中的农药及其他有机污染物的自净、有毒金属及其化合物在土壤环境中的迁移转化等都起着极为重要的作用。
关键词：土壤微生物，分离鉴定，生理生化，1前言土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。
一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm 的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。
不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。
一般在较干燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多。
本实验从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。
为了分离和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。
各类菌的稀释度因菌源、采集样品的季节、气温条件而异。
其次，应考虑各类微生物的不同特性，避免样品种各类微生物相互干扰。
细菌或放线菌在中性或微碱性环境较多，但细菌比放线菌生长快，分离放线菌时，一般在制备土壤稀释液时添加10％酚或在分离培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌。
培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。
【精品】实验八 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化95
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 3、为什么要把培养皿备。 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏一号培养基，马丁氏培养基，豆芽汁葡萄糖培养基 3、无菌生理盐水。 4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。
四、实验步骤
1、制备土壤稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
实验八 土壤中细菌、放线菌、 酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 3、为什么要把培养皿倒置培养？ 酵母菌及霉菌的分离与纯化 酵母菌及霉菌的分离与纯化 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 微生物四大类菌的分离和培养 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。
实验三 培养基的制备
实验三培养基的制备、灭菌及微生物的分离与纯化实验三培养基的制备、灭菌及微生物的分离与纯化一、实验目的1. 了解配制培养基的一般方法和步骤；掌握牛肉膏蛋白胨培养基、高氏1号培养基和马丁培养基的制备方法。
2. 了解灭菌的原理，掌握高压蒸气灭菌的操作方法。
3. 掌握严格的无菌操作技术，掌握从土壤中分离微生物的方法。
二、实验内容1．学习牛肉膏蛋白胨培养基、高氏1号培养基和马丁氏培养基的配制。
2．学习高压蒸气灭菌的操作方法。
3．学习用稀释法分离细菌、放线菌和霉菌；用平板划线方法分离微生物。
4．学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
三、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HClKNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、4.5mL无菌水6管，10%酚液，49.5mL无菌水(带玻璃珠)1瓶。
土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯等。
电炉、立式高压蒸气灭菌锅、手提式高压蒸气灭菌锅、超净工作台等。
四、操作步骤（一）培养基的制备1．牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.6（1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物是土壤中最为丰富的生物群体之一，它们在土壤中扮演着重要的角色，如分解有机物质、固氮、矿物质转化等。
因此，对土壤微生物的研究具有重要的意义。
本文将介绍土壤微生物的分离和纯化实验。
一、实验目的
1.了解土壤微生物的分离和纯化方法；
2.掌握土壤微生物的培养技术；
3.观察土壤微生物的形态特征。
二、实验步骤
1.取一定量的土壤样品，加入适量的生理盐水中，摇匀后过滤；
2.将过滤液分别接种在不同的培养基上，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等；
3.将培养皿放置在恒温培养箱中，控制温度、湿度等条件；
4.观察培养皿中的微生物生长情况，挑选单一菌落进行分离和纯化；
5.将单一菌落接种在新的培养基上，重复以上步骤，直至获得纯种菌株。
三、实验结果
经过培养和观察，我们成功地分离出了多种土壤微生物，如放线菌、链霉菌、芽孢杆菌等。
其中，放线菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的线条；链霉菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的链条；芽孢杆菌的形态特征为菌落呈白色，表面有光滑的质地，形似细长的杆状物质。
四、实验结论
通过本次实验，我们了解了土壤微生物的分离和纯化方法，掌握了土壤微生物的培养技术，观察了土壤微生物的形态特征。
这些都为我们深入研究土壤微生物的生态学、生理学、遗传学等方面提供了基础。
同时，我们也认识到了土壤微生物在土壤生态系统中的重要作用，应该加强对其研究和保护。
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(二)悬液稀释:方法见下图: 悬液稀释:方法见下图:
(三)倒固体琼脂培养基平板: 倒固体琼脂培养基平板: 分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基(200ml/瓶) 分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基(200ml/ 熔化后加制霉菌素1ml后倒平板. 1ml后倒平板 熔化后加制霉菌素1ml后倒平板. 分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基( 分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基(200ml 熔化后冷至50 后加链霉素2ml倒平板 50℃ 链霉素2ml倒平板. /瓶)熔化后冷至50℃后加链霉素2ml倒平板.
2,霉菌: 霉菌: 霉菌是一些" 丝状真菌" 的统称, 霉菌是一些 " 丝状真菌 " 的统称 , 不是分类学上的 名词.凡是在基质上长成毛状, 名词.凡是在基质上长成毛状,棉絮状或蜘蛛网状的丝状 真菌统称霉菌. 真菌统称霉菌. 霉菌形态比细菌, 放线菌复杂, 个体比较大, 霉菌形态比细菌 , 放线菌复杂 , 个体比较大 , 具有 分枝的菌丝体和分化的繁殖器官.因此, 分枝的菌丝体和分化的繁殖器官.因此,在观察是要注意 菌丝的直径大小,菌丝体有无隔膜,营养菌丝有无假根, 菌丝的直径大小,菌丝体有无隔膜,营养菌丝有无假根, 无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子是哪一种, 无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子是哪一种,孢子是怎样 着生的. 着生的. 由于霉菌的菌丝较粗大,而且孢子容易飞散, 由于霉菌的菌丝较粗大,而且孢子容易飞散,如将 菌体置于水中容易变形,故观察时状不用水浸法制片, 菌体置于水中容易变形,故观察时状不用水浸法制片,而 将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中,使细胞不易干燥, 将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中,使细胞不易干燥,并 有杀菌作用. 有杀菌作用.
实验( 实验(二), 从土壤中稀释分离微生物
一,实验目的: 实验目的: 学习微生物稀释平板计数 微生物稀释平板计数及划线分离技术 学习微生物稀释平板计数及划线分离技术 实验原理: 二,实验原理: 采用适宜(选择)培养基和培养条件, 采用适宜(选择)培养基和培养条件,或加入某种 抑制剂有利于目标微生物的生长,从而分离获得目标 抑制剂有利于目标微生物的生长, 微生物的纯培养: 微生物的纯培养:常用稀释平板分离法和划线分离法 在固体培养基上形成单个菌落 依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一 菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净! 请确保油镜头擦拭干净! 所用器皿自己洗净! 所用器皿自己洗净! 请第三组同学留下值日 下周再见! 下周再见!
�
平板涂布
简单易行, 简单易行,但易 造成机械损伤
划线分离方式
结果分析: 结果分析: 我所涂平板种类: 1. 我所涂平板种类: (牛肉膏或马丁 氏) 计数:牛肉膏平板取单菌落数目在30 300个 30～ 2. 计数:牛肉膏平板取单菌落数目在30～300个 左右的稀释度来计数, 左右的稀释度来计数,马丁氏平板取单菌落数目 10～100个左右的稀释度来计数 在10～100个左右的稀释度来计数 3.我所计数的平板稀释度是 我所计数的平板稀释度是: 3.我所计数的平板稀释度是: 单菌落 数目: 数目: , , . 4.计算 活菌数目/每克土壤= 计算: 4.计算:活菌数目/每克土壤= 计算过程)= (计算过程)= 个/每克土壤 5. 对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析
根霉
三,实验材料
放线菌和真菌培养物
1. 2. 3. 放线菌培养物:链霉菌四天插片培养物. 放线菌培养物:链霉菌四天插片培养物. 黑曲霉培养物. 黑曲霉培养物. 各种真菌示范片. 各种真菌示范片.
显微镜,载玻片,接种环,解剖针,解剖刀, 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,解剖刀, 酒精灯,镊子等. 酒精灯,镊子等. 乳酸石炭酸棉兰染液,碘液,酒精, 乳酸石炭酸棉兰染液,碘液,酒精,蒸馏水等
观察黑曲霉菌丝分 隔情况和分生孢子 着生情况( 着生情况(着重辨 认分生孢子梗, 认分生孢子梗,足 细胞和分生孢子): 细胞和分生孢子):
观察根霉菌 丝情况和子 囊孢子情况 (着重辨认 孢子囊, 孢子囊,包 囊梗, 囊梗,假 根):
五,实验结果
记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别 绘制青霉(40x) 黑曲霉(40x) 的形态, 绘制青霉(40x) ,黑曲霉(40x) 的形态,注明各部 分名称. 分名称. 1.为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色 1.为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色? 为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色?
气生菌丝:又称二级菌丝体.营养菌丝体发育到一定时期, ⑵气生菌丝:又称二级菌丝体.营养菌丝体发育到一定时期,
长出培养基外并伸向空间的菌丝为气生菌丝. 长出培养基外并伸向空间的菌丝为气生菌丝. 气生菌丝
孢子丝:当气生菌丝体发育到一定程度, ⑶孢子丝:当气生菌丝体发育到一定程度,其上分化出可形成
孢子的菌丝即孢子丝,又名产孢丝或繁殖丝. 孢子的菌丝即孢子丝,又名产孢丝或繁殖丝. 放线菌最突出的特性之一是产生大量的, 放线菌最突出的特性之一是产生大量的,种类繁多的抗生素 根据估计,全世界共发现4000多种抗生素, 4000多种抗生素 ,根据估计,全世界共发现4000多种抗生素,其中绝大部分是由 放线菌产生的. 放线菌产生的.
近于细菌的一类丝状原核生物,因菌落呈放射状而得名. 近于细菌的一类丝状原核生物,因菌落呈放射状而得名. 放线菌的菌落在培养基上着生牢固,不易被接种针挑取, 放线菌的菌落在培养基上着生牢固,不易被接种针挑取, 由于孢子的存在,常使菌落表面呈粉末状.它和细菌单染色一样, 由于孢子的存在,常使菌落表面呈粉末状.它和细菌单染色一样, 可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后, 可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后,在显微镜下观察它们 的形态. 的形态.放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞菌丝 体,菌丝内无隔膜,菌丝体分为两部分,即潜入培养基中的营养 菌丝内无隔膜,菌丝体分为两部分,即潜入培养基中的营养 菌丝(基内菌丝)和有营养菌丝向上生长的气生菌丝 气生菌丝, 菌丝(基内菌丝)和有营养菌丝向上生长的气生菌丝,有些气生 菌丝分化成各种孢子丝 呈螺旋状,波浪形或分枝状等, 孢子丝, 菌丝分化成各种孢子丝,呈螺旋状,波浪形或分枝状等,着生形 式有丛生,互生和轮生三种.孢子的表面光滑或粗糙, 式有丛生,互生和轮生三种.孢子的表面光滑或粗糙,圆或椭圆 和干形.孢子有各种颜色. 和干形.孢子有各种颜色.这些形态特点都是鉴别放线菌的重要 依据. 依据.
三,实验步骤: 实验步骤: 从土壤中稀释分离微生物的方法如下: 从土壤中稀释分离微生物的方法如下: (一)土壤悬液制备 准备1瓶土壤悬液: 10克土壤放入带玻璃珠的 准备1瓶土壤悬液:称10克土壤放入带玻璃珠的 90ml瓶装无菌水中,手摇振荡(10 20min), ml瓶装无菌水中 (1090ml瓶装无菌水中,手摇振荡(10-20min),使 土样分散. 土样分散.
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(四)悬液涂布(演示): 无菌操作(从稀至浓将菌液涂 悬液涂布(演示): 无菌操作( 布均匀)采用10 稀释液涂布马丁- 布均匀)采用10-2,10-3,10 -4稀释液涂布马丁-孟 加拉红平板;采用10 加拉红平板;采用10-3,10-4,10-5稀释液涂布牛肉 膏蛋白胨平板,每人用剩下的1个平板做划线分离, 膏蛋白胨平板,每人用剩下的1个平板做划线分离,从 三角瓶中取土壤悬液作划线分离(演示) 三角瓶中取土壤悬液作划线分离(演示) (五)培养: 培养: 每个同学把平板用报纸包好(每个平板方向一致), 每个同学把平板用报纸包好(每个平板方向一致), 写上班级和姓名,皿底朝上,置于培养箱培养( 写上班级和姓名,皿底朝上,置于培养箱培养(温 度?!) . (六)检查结果
实验报告 从土壤中稀释分离微生物的原理,方法,步骤. 从土壤中稀释分离微生物的原理,方法,步骤. 2.思考题 (1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平 为什么融化后的培养基要冷却至45℃ (1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平 板? (2)要使平板菌落计数准确 需要掌握哪几个关键? 要使平板菌落计数准确, (2)要使平板菌落计数准确,需要掌握哪几个关键?为 什么? 什么? (3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优 (3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优 缺点及应用. 缺点及应用. (4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中 (4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中 在一起时,你认为问题出在哪里? 在一起时,你认为问题出在哪里? (5)用倒平板法和涂布法计数 用倒平板法和涂布法计数, (5)用倒平板法和涂布法计数,其平板上长出的菌落有 何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果? (48h)后观察结果 何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果?
四,实验步骤
插片法培养放线菌
观察放线菌气生菌丝和 基内菌丝的区别
取插片一片,直接在显微镜下 取插片一片, 进行观察,注意分界面两侧菌 进行观察, 丝形态的差异
2,霉菌:在载玻片上滴加一滴乳 ,霉菌: 酸石炭酸棉兰→用解剖针取少许霉 酸石炭酸棉兰 用解剖针取少许霉 菌 于染色液中→挑开菌丝 盖上盖玻 于染色液中 挑开菌丝→盖上盖玻 挑开菌丝 片
实验三 放线菌,霉菌的形态观察 放线菌, 及微生物的分离纯化
实验(一)放线菌,霉菌的形态观察 放线菌, 实验(
一,实验目的
观察放线菌,霉菌的形态结构特征 观察放线菌, 学习掌握霉菌染色的基本方法 基本掌握细菌,放线菌,酵母菌, 基本掌握细菌,放线菌,酵母菌,霉菌菌落形态 特征
二,实验原理
1,放线菌: 放线菌是介于细菌与丝状真菌之间而又接 , 放线菌:
营养菌丝:又叫初级菌丝体或一级菌丝体, ⑴ 营养菌丝 : 又叫初级菌丝体或一级菌丝体 , 匍匐生长于培
养基内,主要生理功能是吸收营养物,故亦称基内菌丝. 养基内,主要生理功能是吸收营养物,故亦称基内菌丝.营养菌丝 一般无隔膜,直径0.2—0.8,但长度相差很大,短的小于100 , 100, 一般无隔膜,直径 ,但长度相差很大,短的小于100 长的可达600 以上,有的无色素,有的产生黄, 600以上 长的可达 600 以上 ,有的无色素 , 有的产生黄 , 橙 , 红 , 紫 , 兰 , 黑等不同色素,若是水溶性的色素,还可透入培养基内, 绿,褐,黑等不同色素,若是水溶性的色素,还可透入培养基内, 将培养基染上相应的颜色,如果是非水溶性(脂溶性)色素, 将培养基染上相应的颜色,如果是非水溶性(脂溶性)色素,则使 菌落呈现相应的颜色,因此,色素是鉴定菌种的重要依据. 菌落呈现相应的颜色,因此,色素是鉴定菌种的重要依据.