JC-126 植物提取物中总黄酮(Total Flavones)含量测定方法
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法
总黄酮是一类化合物的总和，常用的测定方法有色谱法、光谱法和比色法等。
1. 色谱法：色谱法是一种常用的分离和测定化合物的方法。
常用的色谱方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
其中，HPLC是最常用的测定总黄酮含量的方法。
它可以将样品中的黄酮分离开，并通过检测器测量它们的浓度。
2. 光谱法：光谱法是利用物质对光的吸收、发射、散射等特性进行测定的方法。
常用的光谱法包括紫外-可见光谱法（UV-Vis）和荧光光谱法等。
这些方法通过测量样品在特定波长下的吸光度或荧光强度来确定总黄酮含量。
3. 比色法：比色法是通过比较样品与标准溶液的颜色差异来测定样品中的化合物含量的方法。
通常使用染色剂与样品中的黄酮发生反应，形成有色产物，并通过比色仪或分光光度计测量吸光度，进而计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同的测定方法可能对不同类型的总黄酮有不同的适用性和灵敏度。
因此，在选择测定方法时，需要考虑样品的特性和实验室的仪器条件，确保能够准确测定总黄酮的含量。
总黄酮的含量测定的操作流程图-分光光度法与比色法-简易图解-李熙灿-Xican-Li
总黄酮的含量测定方法：操作流程图2017.11【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。
为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。
其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。
根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。
常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。
采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。
【检测方法与实验流程图】图1实验流程图【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research.2012;26:1050-1053.【溶液配制】1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。
2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。
3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。
4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。
5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。
浓度尽量高，但要有精确的数值。
【标准曲线绘制】（芦丁）精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 芦丁标准液，代替上图中的 “样品液0.5mL ”，依“实验流程图”，测A 508nm 值：绘制标准曲线如下：A 508n m Concentration (mg/ml)总黄酮测定的标准曲线（芦丁）y = -0.00339 + 11.92871 x r=0.99926。
扬子毛茛中总黄酮含量的测定
扬子毛茛中总黄酮含量的测定李咏梅;龚元【摘要】为了解扬子毛茛全草中的总黄酮含量,以槲皮素为对照品,采用盐酸-镁粉反应比色法测定其总黄酮含量.结果表明,样品中总黄酮在浓度0.006 25～0.037 5 mg/mL时与吸光度呈良好线性关系,样品中总黄酮平均含量为12.31 mg/g.回归方程为y＝1.175 0x+0.007 9(r=0.999 7),回收率为100.03%,RSD＝0.89%(n=5).说明,该方法准确,简便,可用于扬子毛茛中总黄酮的含量测定.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2010(038)008【总页数】2页(P205-206)【关键词】扬子毛茛;总黄酮;盐酸-镁粉反应比色法【作者】李咏梅;龚元【作者单位】黔南民族医学高等专科学校,贵州,都匀,558000;黔南民族医学高等专科学校,贵州,都匀,558000【正文语种】中文【中图分类】S567.9扬子毛茛(Ranunculus sieboldii Miq.)，又名辣子草，水辣草，为毛茛科毛茛属植物。
全草入药，性辛、微苦、温、有小毒，多作为外用药，用于肿毒、疱毒、发泡截疟等。
扬子毛茛作为民族药已收入《贵州省中药材、民族药材质量标准(2003版)》中。
有文献报导毛茛属植物中含有黄酮类化合物[1]，但对扬子毛茛中总黄酮含量的研究未见报导。
植物中总黄酮含量的测定方法主要有紫外分光光度法、铝盐显色可见分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等[2]。
在比较、综合前人研究的基础上[3-4]，采用70%的乙醇提取扬子毛茛中的总黄酮，以槲皮素为对照品，采用盐酸-镁粉体系显色，用紫外可见分光光度法分析测定贵州都匀产扬子毛茛中的总黄酮含量，旨在建立一种快速、经济、简便的测定扬子毛茛中总黄酮含量的分光光度分析方法，并为这一资源的进一步开发利用提供理论依据。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂WFZ800型紫外分光光度计(北京)；索氏提取器；GB303型电子天平；扬子毛茛于2008年6月份采自都匀市郊，由贵阳医学院药学院龙庆德老师鉴定为毛茛科毛茛属植物扬子毛茛。
总黄酮含量的测定
植物中总黄酮的提取与测定原理黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。
用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。
60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制称量13.2mg芦丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作准确吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。
用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。
过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。
根据标准曲线计算总黄酮的含量。
总黄酮含量=A/M·100×稀释倍数A为标准曲线中的含量。
茜草中提取总黄酮实验微型法与常规法的比较
茜草中提取总黄酮实验微型法与常规法的比较斯琴毕力格;曲长明;李增春【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(023)003【摘要】建立茜草提取液中总黄酮含量的微型实验测定方法.对比常规实验和微型实验两种提取方法,利用紫外分光光度法,以芦丁为对照品制定标准曲线,进行样品含量和回收率的测定.其结果为最大吸收波长506 nm,线性回归方程为A=-0.01587+1.0434C( mg/10 mL) (R=0.999782),常量法提取液中总黄酮的平均含量为1.93%,平均回收率为102.74%.微型法提取液中总黄酮的平均含量为1.81%,平均回收率为101.59%.结果表明微型实验方法简便,准确可靠,测定茜草中总黄酮的含量其方法误差与常规实验方法一样在允许范围之内.【总页数】3页(P269-271)【作者】斯琴毕力格;曲长明;李增春【作者单位】内蒙古民族大学,化学学院,内蒙古,通辽,028043;内蒙古民族大学,化学学院,内蒙古,通辽,028043;内蒙古民族大学,化学学院,内蒙古,通辽,028043【正文语种】中文【中图分类】O657.32【相关文献】1.正交实验法优化艾纳香提取废渣中总黄酮提取工艺 [J], 王秋萍;马海霞;吴竹;陈伟;何珺;康冀川2.超声波法和微波法提取马齿苋中总黄酮的比较研究 [J], 翟硕莉3.比较常规法和试剂盒法提取人基因组中AIDS相关基因的优越性 [J], 金磊;王福生4.正交实验法优选香加皮中总黄酮的提取工艺 [J], 唐春伟;梁宗义;田志龙;邹婧;王舒玉;王彦予;王俊香5.正交实验法优选小蓟中总黄酮的提取工艺 [J], 吴晨光;孙岩;黄胜阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
总黄酮总酚含量测定方法
太行菊的抗氧化活性试验计划1. 实验内容对太行菊的甲醇提取物的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水共六种萃取物进行总酚、总黄酮含量的测定，分析实验结果，选择总分和总黄酮含量比较高的两个层分进行抗氧化能力测定，分析其抗氧化能力强弱，判断其有无研究价值。
用Folin-Denis法测定太行菊甲醇提取物各萃取层组分的总酚含量，以没食子酸作为标准品进行对照。
用三氯化铝法测定太行菊各萃取层组分的总黄酮含量，以槲皮素作为标准品进行对照。
根据实验结果，选择总酚和总黄酮含量较高的萃取层组分进行抗氧化能力测定，包括DPPH自由基清除能力测定，羟基自由基清除能力测定，还原能力测定。
2.实验步骤将太行菊用甲醇溶液回流提取其有效成分，旋转浓缩后用水溶解，然后分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取、水层，得相应层的馏分。
2.1总酚含量测定：在试管中分别加入不同层样品（1mg/ml）0,25ml +Folin-Denis 试剂0.5ml ，5min后，再加入Na2CO3饱和溶液0.5ml,并做三组重复。
对照组中样品和Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。
空白组中Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。
在760nm紫外光下测定吸光度。
对实验结果处理后做标准曲线，以没食子酸为标准品。
以没食子酸的微克数表示总酚含量:吸光度=0.0069 μg没食子酸－0.042。
Folin-Denis试剂的配制：在2L烧瓶中加入750ml蒸馏水，再加入100g钨酸钠和20g磷钼酸，再加入50ml正磷酸回流2h, 冷却后装入1L容器内置于暗处实验组*3:体积Folin-Denis的体积Na2CO3MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5mlH层0.25ml 0.5ml 0.5mlCH层0.25ml 0.5ml 0.5mlEA层0.25ml 0.5ml 0.5mlBUOH层0.25ml 0.5ml 0.5mlW层 1 2 2对照组*3：DW DW Na2CO3体积0.25ml 0.5ml 0.5ml空白组*3：体积DW的体积Na2CO3MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlCH层0.25ml 0.5ml 0.5mlEA层0.25ml 0.5ml 0.5mlBUOH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlW层0.25ml 0.5ml 0.5ml2.2总黄酮含量测定：在试管中分别加入不同层样品(1mg/ml) 0.5ml + 1M CH3COOK溶液0.1ml + DW 2.8ml + 95%乙醇 1.5ml + 10% AlCl3·6H2O溶液0.1ml，并做三组重复。
三种不同方法对余甘子中总黄酮含量测定
三种不同方法对余甘子中总黄酮含量测定摘要：目的:分析冷浸提取法、超声波提取法、回流提取法对余甘子中的黄酮类活性成分含量的影响。
方法:选取余甘子干果进行粉碎和过筛，对其粉末采用冷浸提取法、超声波提取法、回流提取法三种方法进行提取，利用NaNO2-AI(NO3)3显色法测定总黄酮含量，分析3种提取方法对实验结果的影响。
结果:回流提取法为最佳提取条件，测得云南余甘子含量为404.4mg/g。
结论:三种方法中，回流提取法是提取余甘子中黄酮类化合物的中最佳提取方法。
关键词：余甘子总黄酮含量测定余甘子又名余甘果、油甘子，其主要药理活性成分为黄酮类、生物碱、有机酸等。
黄酮类化合物，指以2-苯基色原酮为骨架衍生的一类化合物的总称。
黄酮类化合物可在紫外光（359nm）及可见光（510nm)下呈不同颜色的荧光，可以用紫外可见分光光度计进行总黄酮含量检测。
本研究分析冷浸提取法、超声波提取法、回流提取法对余甘子中的黄酮类活性成分含量的影响。
1材料与仪器1.1材料与试剂试剂:无水乙醇、95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、芦丁标准品（纯度≥95%，CAS号153-18-4），化学试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
余甘子购自云南。
1.2仪器与设备F-040型超声波清洗机（深圳福洋科技集团有限公司），752N型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），HC-30118R型高速冷冻离心机（云南中科中佳科学仪器有限公司），RS-FS1406型多功能粉碎机（合肥荣事达小家电有限公司），JJ324BC型电子天平（精度0.001，上海精胜科学仪器有限公司）。
2方法2.1粉碎:取云南余甘子50g，置中草药粉碎机中粉碎，过80目筛得余甘子粉末，置干燥箱中保存备用。
2.2提取:2.2.1浸渍法称取余甘子粉末5g,加60%乙醇100mL，冷浸24h，使有效成分充分浸出。
2.2.2超声波提取法称取余甘子粉末各5g，各加60%乙醇100 mL，超声提取1次，在提取温度为60℃，功率为210W，提取时间为40min的条件下进行提取。
鹿衔草中总黄酮的提取及含量测定
鹿衔草中总黄酮的提取及含量测定蔡蕊;谢茵;金伟;郭红叶;毕小平【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2011(42)11【摘要】Objective To optimize the method of extracting and determining the content of total flavonoids in Pyrola calliantha. Methods The thermal circumfluence and the ultrasound were used to extract the total flavonoids in Pyrola calliantha, respectively. Spectrophotometer was applied to determine the content of total flavonoid with the rutin as the control. Results The standard curve was linear in the concentration ranges of 0.002 -0.070 mg/ml with correlation coefficient of r =0. 999 9. The best extraction condition of total flavonoid was extracting 3 times, 1. 5 h each time,50% alcohol as the solvent and solid to liquid of 1: 25. Conclusion The content of total flavonoids by thermal circumfluence extraction is higher than that by ultrasonic extraction. And the method is simple,feasible and environmental friendly.%目的优选鹿衔草中总黄酮的提取及含量测定方法.方法通过加热回流和超声两种方法提取鹿衔草中总黄酮.以芦丁做对照,采用紫外可见分光光度法测定总黄酮的含量,确定总黄酮提取工艺.结果芦丁对照品的浓度与吸光度在0.002-0.070 mg/ml范围内线性良好(r=0.999 9).鹿衔草中总黄酮的提取工艺最终确定使用50%的乙醇水溶液为溶剂,料液比1:25,热回流提取3次,每次1.5 h.结论采用热回流方法提取鹿衔草中总黄酮的工艺操作简单,成本较低,对环境友好.【总页数】4页(P899-902)【作者】蔡蕊;谢茵;金伟;郭红叶;毕小平【作者单位】山西医科大学药学基础综合实验室,太原,030001;山西医科大学药学基础综合实验室,太原,030001;山西医科大学药学基础综合实验室,太原,030001;山西医科大学药学基础综合实验室,太原,030001;山西医科大学药学基础综合实验室,太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.正交试验优选槐角总黄酮的提取工艺及不同来源槐角中总黄酮的含量测定 [J], 韦华梅;闫腾蛟;林宜沛;王剑波2.鹿衔草中总黄酮和总多酚提取工艺研究 [J], 李囡囡;曹芳;丁红3.白花九里明提取物中3种有机酸及总黄酮、总有机酸的含量测定 [J], 韩璐;黄薏霏;那袭雪;张文涛;宋丹;杨宏;宁小清4.潞党参中总黄酮的提取及含量测定 [J], 刘薇5.鹿衔草中总黄酮提取工艺的优选 [J], 朱玲;王昌利;孙静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
含植物提取物固体饮料中总黄酮的检测_高丽霄
含植物提取物固体饮料中总黄酮的检测高丽霄，林汉卿，刘梅森*，臧成国（深圳市味奇生物科技有限公司，广东深圳518109）摘要：建立一种简单、准确度高、适用性强的方法，用于检测含植物提取物固体饮料中总黄酮的含量。
对样品处理的提取溶剂浓度、超声时间、提取料液比进行优化，并对该测定方法低浓度范围内的标准曲线及测定方法的精密度和准确度进行分析。
样品最佳处理条件为：提取溶剂为70%乙醇，超声时间30min ，提取料液比1∶2.5（g/mL ），该方法的RSD 在1.03%~7.83%范围内，精确度较好，平均加样回收率为98.44%，标准曲线在低浓度0~20μg/mL 范围内的线性方程为Y =0.0127X -0.0024，R =0.9993，线性关系良好。
该法操作简单，对于含植物提取物固体饮料中总黄酮的测定适用性好，准确度高，可为固体饮料中总黄酮测定方法标准的制定提供参考。
关键词：总黄酮；测定；分光光度法；植物提取物固体饮料Study on the Determination of Total Flavonoids in Solid Drink with Plant ExtractGAO Li-xiao ，LIN Han-qing ，LIU Mei-sen *，ZANG Cheng-guo（Shenzhen Weicky Biotechnology Co.，Ltd.，Shenzhen 518109，Guangdong ，China ）Abstract ：A more applicable and accurate method was developed to determine the total flavonoids in solid drink with plant extract by spectrophotometric method in this study.The effects of the concentration of solvent ，ultrasonic time and ratio of solid to liquid on the determination of total flavonoids were studied.The standard curve in low rutin concentration and the precision and accuracy of that method were analyzed.The optimum conditions were as follow ：the concentration of solvent was 70%ethanol ，the ultrasonic time was 30min and the ratio of solid to liquid was 1∶2.5（g/mL ）.Under this condition ，this method showed good linearity （Y =0.0127X -0.0024，R =0.9993）in low rutin concentration （0-20μg/mL ）and average recovery （98.44%）as well as low RSD （1.03%-7.83%）.This simple method was regarded to be very useful and high accuracy for the determination of total flavanoids in solid drink with plant extract.Key words ：total flavonoids ；determination ；spectrophotometric method ；solid drink with plant extract食品研究与开发F ood Research And Development2015年9月第36卷第18期DOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.18.042作者简介：高丽霄（1985—），女（汉），工程师，硕士，研究方向：健康食品。
总黄酮的测定方法
总黄酮的测定方法黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。
黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。
近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。
因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
一、方法（一）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。
黄酮含量的测定方法[方案]
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黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。
③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。
各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。
在510nm的波长下测定吸光度。
2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。
从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。
②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。
③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。
分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。
④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。
沙芥全草总黄酮提取方法及含量测定的研究
沙芥全草总黄酮提取方法及含量测定的研究
贾彦峰
【期刊名称】《陕西林业科技》
【年(卷),期】2004(000)002
【摘要】本文采用碱提酸沉法、超声波提取法、甲醇直接提取法、乙醇提取法和热水浸提法对沙芥全草总黄酮进行了提取方法的选择,同时采用硝酸铝比色法进行了总黄酮含量的测定,结果表明:(1)各种方法的提取效率依次为:碱提酸沉法＞超声波提取法＞甲醇直接提取法＞乙醇提取法＞热水浸提法;(2)碱提酸沉法提取沙芥总黄酮的提取效率较高,其精密度好,回收率高,适合对沙芥总黄酮的提取,同时采用硝酸铝比色法对总黄酮含量进行测定,其精密度也较高,并测得沙芥全草总黄酮含量为
4.804 9 mg/g,证明其是一种值得开发的药用植物资源.
【总页数】4页(P1-4)
【作者】贾彦峰
【作者单位】西北植物化学研究中心,陕西杨凌,712100
【正文语种】中文
【中图分类】O655.1
【相关文献】
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总黄酮的检测方法
【含量测定】总黄酮对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取20ml，置50ml置瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0. 2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml．分别置25ml量瓶中，各加水至6ml．加5%亚硝酸钠溶液1ml．摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外·可见分光光度法(附录V A)，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线．
测定法取本品细粉约1g．精密称定，加稀乙醇（甲醇）溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度．摇匀，作为供试品贮备液．取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
精密量取2ml．置25ml置瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液巾芦丁的重量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁( C27 H30 O16)计，不得少于7.0%。
总黄酮含量测定方案
总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。
取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。
使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。
二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。
制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。
三显色方法的确定1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。
2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。
3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。
4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。
四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。
六精密度实验按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。
次数 1 2 3 4 5吸光度平均值相对标准偏差RSD（%）七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。
总黄酮、多酚含量的测定
总黄酮含量的测定一、仪器紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个二、药品芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤（一）、标准曲线绘制1. 芦丁标准品40mg置于称量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg芦丁标准品用水定容至100mL,得200µg/mL芦丁标准贮备液，精确量取上述浓度芦丁标准贮备溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL分别置于10 mL具塞试管中。
2. 向具塞试管中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0 mL。
3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。
4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。
5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。
6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
研究表明芦丁标准品含量在0～0.5mg 范围内与吸光度具有良好的线性关系。
（二）、样品处理及总黄酮的提取（以60%乙醇提取为例）1. 将样品在80℃烘干24 h，粉碎后过80目筛置于干燥器中备用。
2. 称取500±2 mg样品于25 mL具塞三角瓶中，使样品位于三角瓶底部（重复3次）。
3. 每瓶加4 mL 60％乙醇，放超声波提取器提取2 h。
提取液转至10 mL具塞离心管中。
4. 再向具塞三角瓶中加4 mL的60％乙醇，放超声波提取器提取1 h，提取液转至相应10 mL具塞离心管中，6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL具塞试管中。
60％乙醇定容至10 mL，待测。
（三）、样品提取液总黄酮含量的测定准确吸取总黄酮提取液（稀释适当倍数）2.0 mL于10 mL具塞试管中，加入60％乙醇3.0 mL,然后按步骤一中（3,4,5,6）的方法测定吸光度，试剂空白为参比（提取溶剂代替提取液），将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。
关于神香草部分成分的含量测定实验设计
神香草中已知成分的含量测定实验设计一、实验目的：1、在前人研究的基础上，对神香草中部分已知成分的含量进行测定；2、掌握高效液相色谱仪、紫外分光光度计、挥发油提取器等实验仪器的使用方法；二、实验内容：1、总黄酮的含量测定方法：（1）对照品试液的配置：精密称取芦丁对照品30mg置100ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，制成芦丁0.3mg/ml的对照品溶液备用。
（2）供试品溶液的配置：将神香草全草阴干，碾碎，取干燥的神香草粉末0.3 g，置于50ml的容量瓶中，用70%乙醇溶解每次20ml，每次超声10min共2次超声溶解，过滤，收接滤液定量转移到50ml 量瓶中，并用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作供试液。
（3）标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品（0.3mg/ml）0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置于25ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0ml，摇匀、静置6min，再加入10%硝酸铝溶液1.0ml摇匀、静置6min，再加入4%氢氧化钠溶液5ml，加70%乙醇定容至刻度、摇匀、放置15min，用1cm比色池于510nm波长处测定吸收度。
（4）精密度实验：精密量取对照品溶液 3 ml,置 10 ml 容量瓶中,测定吸光度, 重复测定 6 次,计算其 RSD值, RSD值不大于2.0%，则说明精密度良好。
1 2 3 4 56A（5) 稳定性实验：对同一样品每隔 10 m in 测定一次, 结果表明样品吸收度在 30 min 内稳定。
（6）重复性试验：精密吸取同一样品供试液5份，按照“标准曲线的测定”中的方法测定吸收度。
2、挥发油的含量测定方法：取干燥的神香草粉末200 g,以水蒸气蒸馏法，用挥发油提取器提取6 h,（流出液再经乙醚萃取,无水硫酸钠干燥后回收乙醚）,得有特殊气味的淡黄色透明油状液体,再将透明油状液体置于干燥器中干燥即得挥发油，然后密封保存,供分析用。
3、咖啡酸的含量测定方法：（1）实验仪器及色谱条件：高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10A vp紫外检测器；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠1.56g，加水使溶解成1000ml，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8～4.0，即得）（23：77）为流动相；检测波长为323nm。
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1. 仪器和试剂
1.1 UV-2450紫外-可见光分光光度计
1.2 分析天平：感量0.00001g
1.3 超声波清洗仪：功率250W，频率40KHz
1.4 芦丁对照品（99%）
1.5 槲皮素对照品（99%）
1.6 容量瓶（10mL、100 mL）
1.7 微量移液管（1 mL）
1.8 移液管（2 mL）
1.9 醋酸（分析级）
1.10 醋酸钠（分析级）
1.11 无水乙醇（分析级）
1.12 蒸馏水
1.13醋酸-醋酸钠缓冲液（PH4.5）：准确称取醋酸钠（分析纯）1.8g，加入醋酸（分析纯）0.98mL，加水溶解定容至100mL混匀即可。
1.14 0.1mol/L三氯化铝试液：准确称取三氯化铝（分析纯）
2.41g，加水溶解定容至100mL混匀即可。
2. 测定方法
2.1对照品溶液制备
精密称取102℃减压干燥的槲皮素（芦丁）对照品约20mg，于100mL容量瓶中，加70%乙醇溶液定容，即为对照样品溶液。
2.2 样品溶液制备
精密称取植物提取物适量，于100mL容量瓶中，加入80mL70%乙醇，超声
提取30min ，冷却至室温，加入70%乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤。
续滤液即为样品溶液。
2.3 标准曲线制作
精密称取槲皮素（芦丁）对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 于10mL 容量瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液2mL ，0.1mol/L 三氯化铝试液2mL ，摇匀，加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm 处以试剂为空白测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
3. 样品测定
取样品续滤液1mL 于10mL 容量瓶中，按工作曲线项下“加加醋酸-醋酸钠缓冲液起”，依法测定吸光度，从工作曲线上读出样品溶液中槲皮素（芦丁）的浓度。
4. 含量计算
100%11⨯⨯⨯=W
K V C ）总黄酮含量（﹪ 这是不是少了个百分号？ 式中：C 1---从标准曲线计算得的显色液总黄酮的浓度，mg/mL ；
V 1：显色液的体积，ml ；
K ：分取倍数；
W ：样品的重量，mg
样品含量结果取两个平行样品含量的平均值。
分取倍数：如100ML 盐酸溶液,稀释到1000ML 定容,然后再取25ML 进行测定.分取倍数就是1/40,相当于取原溶液2.5ML 进行测定.
按照你的方法，V1应该是10ML ，K 应该是100.
你这个应该叫稀释倍数吧。
从100ML 里取1ML 分析，推回去就应该乘以100.。