秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别
制药分离工程实验指导定稿
四川理工学院制药分离工程实验指导第一版制药工程系编二○一二年制药分离工程实验目录目录实验一细胞SOD的提取和分离.............................................................................................. - 1 - 实验二大枣中多糖的提取分离 . (3)实验三有机溶剂沉淀法制备大豆脲酶 (6)实验四柱层析法对色素的提取与分离 (8)实验五质粒的提取及电泳分离 (10)实验六八角茴香油的提取与检识 (12)实验七秦皮中七叶苷和七叶内酯的提取、分离与鉴定 (15)实验八大孔吸附树脂分离纯化白头翁皂苷 (17)实验九重结晶及过滤 (19)实验十简单蒸馏及分馏 (3)实验一细胞SOD的提取和分离一、实验目的1．掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。
2．掌握SOD酶提取分离的一般步骤。
二、实验原理超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。
它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。
大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。
由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。
有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。
同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。
三、试剂与仪器1.试剂与材料新鲜蒜瓣、0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）、氯仿-乙醇混合液：氯仿:无水乙醇=3:5 、丙酮：用前需预冷至4-10℃、0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH10.2）、0.1mol/LEDTA溶液、2mmol/L肾上腺素溶液2. 仪器恒温水浴锅、冷冻高速离心机、可见分光光度计、研钵、玻棒、烧杯、量筒四、实验步骤1. 组织细胞破碎：称取5g大蒜蒜瓣，置于研钵中研磨。
秦皮香豆素类成分的提制和鉴定
秦皮香豆素类成分的提制和鉴定秦皮，系木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh或宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh的干燥枝皮或干皮。
又名梣皮。
尖叶梣分布于黄河、长江流域各省，习称陕西秦皮；大叶梣分布于东北、河北、江西、河南等地；白蜡树分布于南、北各省区，商品药材习称四川秦皮。
有清热燥湿、收涩、明目的功效，用于肠炎、痢疾、白带、慢性气管炎、急性结膜炎，外用治牛皮廯。
一、主要化学成分的结构和物理性质1.七叶树苷（Esculin，又名七叶灵、七叶苷、秦皮甲素）针状体（热水），mp.204-206℃，为倍半水合物。
难溶于冷水，溶于沸水、热乙醇、甲醇、吡啶、乙酸乙酯和醋酸。
2.七叶树内酯（Esculetin，又名七叶苷元、秦皮乙素）3.棱状结晶（冰醋酸），叶状结晶（真空升华得），mp.268-270℃。
溶于稀碱显蓝色荧光，尚溶于热乙醇及冰醋酸，几乎不溶于乙醚和沸水。
3.秦皮苷（Fraxin，又名白蜡树苷、梣皮苷）水合物为黄色针状结晶，无水物为白色粉末，mp.206℃，（165℃软化）微溶于水，易溶于热水及热乙醇，不溶于乙醚。
4.秦皮素（Fraxetin，又名秦皮亭、白蜡树内酯、Fraxetol）片状结晶（乙醇水溶液），mp.227-228℃（230-232℃）。
溶于乙醇，微溶于乙醚及沸水。
二、实验目的1.掌握回流提取秦皮香豆素类成分的方法。
2.学习脂溶性成分和水溶性成分的分离方法。
3.了解香豆素类成分的一般性质和鉴别反应。
4.学习各种实验技能:提取：回流提取分离纯化：萃取鉴识：色谱法、化学法三、实验原理因为七叶苷和七叶内酯均为香豆素类化合物，能在乙醇中溶解，故采用乙醇提取。
再利用七叶苷极性大于七叶内酯极性，用乙酸乙酯分离。
乙醇提出的脂溶性杂质，可用三氯甲烷萃取除去。
天然药物化学课程标准课程名称天然药物化学课程代码
《天然药物化学》课程标准课程名称：天然药物化学课程代码：课程类型：专业基础课程一、概述（一）课程性质地位天然药物化学是应用现代理论、方法与技术研究天然药物中化学成分的学科，是药学专业学生的必修专业课程。
本门课程着重围绕天然药物中有效成分的结构、性质、提取分离和鉴定以及结构测定的基本知识和基本操作技能进行教学。
目的在于培养学生具有较强地天然药物化学成分提取、分离和鉴定的岗位实践操作能力，具有较强地知识运用能力和开拓精神，为学生今后适应岗位变化，学习相关专业技能，具有个人可持续发展能力而奠定基础。
（二）课程基本理念通过该课程的学习使本专业学生熟悉天然药物中有效成分的结构特点与类型；掌握各类有效成分的理化性质、提取分离以及鉴别方法；了解典型有效成分的结构测定方法以及生物合成途径。
培养学生具有初步从事天然药物的生产和研究能力。
在有机化学、分析化学、药用植物及波谱学课程的基础上，着重围绕中药有效成分的结构类型与特点、理化性质、提取分离方法、结构鉴定的基本原理和基本技能教学。
总论部分介绍了天然药物中有效成分的生物代谢途径、提取分离以及结构研究的方法与步骤；各论部分介绍了糖苷、黄酮、醌类、萜类、皂苷、生物碱等有效成分的结构特点、理化性质、提取分离及结构测定方法。
在该课程的学习中，涉及的中药有效成分提取的方法有：煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、连续回流法、超临界萃取法等溶剂提取法，水蒸气蒸馏法；用到离子交换色谱、硅胶色谱、氧化铝色谱、大孔吸附树脂色谱、聚酰胺色谱等多种分离手段；在中药有效成分的结构测定中用到紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、质谱（MS）、氢核磁共振（1H-NMR）、碳核磁共振（13C-NMR）等光谱检测手段。
（三）课程设计思路本课程标准以天然药物化学课程的基本理念为指导，根据我校实际情况和本门课程多年的教学经验、研究总结，在进一步调查、研究及实践的基础上形成的。
天然药物化学课程在第三学期开设，总课时为72学时，其中理论42学时、实践30学时，理论实践比例4:3，课程框架及学时如下：二、课程目标总体目标：通过本门课程的学习，要使学生了解和掌握天然药物化学的基本理论、基本实验技能以及新观点、新理论、新技术和新方法，获得支撑后续课程如天然药物学等的重要天然药物化学知识；灵活运用所学基本理论解释一些药学科学问题并应用于实践，培养学生具备发现问题、解决问题的创新意识和实践认知能力。
天然药物化学习题
一、名词解释
1.一次代谢产物、二次代谢产物 一次代谢产物、 一次代谢产物 2.生物合成 生物合成 3.相似相溶原理 相似相溶原理 4.正相分配色谱、反相分配色谱 正相分配色谱、 正相分配色谱 5.凝胶滤过法 凝胶滤过法 6.Molish反应 反应 7.Smith降解 过碘酸裂解 降解(过碘酸裂解 降解 过碘酸裂解) 8.相对构型、绝对构型 相对构型、 相对构型 9.还原糖、非还原糖 还原糖、 还原糖 10.香豆素 香豆素 11.异羟肟酸铁反应 异羟肟酸铁反应 12.木脂素 木脂素
（A）95%乙乙回乙 乙乙乙乙乙 减减醇醇 总乙乙乙 加碱加乙，滤滤；（B）等等等CHCl3洗洗
氯氯氯
碱氯 （C）乙酸乙乙萃乙
乙酸乙乙萃乙乙 无碱Na2SO4脱碱 减减回回乙减减减
碱乙 醇醇，滤滤 甲乙、碱水水水水
残残醇 甲乙、碱水水水水 黄黄淡水（D）
淡黄淡水（E）
四、提取分离与工艺设计
2.一种含有香豆素的中药，还可能含有一些酸性成分及酚性成 一种含有香豆素的中药， 一种含有香豆素的中药 试利用酸碱法， 分，试利用酸碱法，设计一提取分离香豆素内酯成分的工艺路 以流程图表示）。并提出可能的注意事项。 ）。并提出可能的注意事项 线（以流程图表示）。并提出可能的注意事项。
三、鉴别各组化合物
1.
OH HO O (A) O O (B) O
化学方法
2. 光谱方法
O O (A) O HO O (B) O
3.
O O O O O
O O
光谱方法
O O (A) O (B)
O
三、鉴别各组化合物
4.
O O O O O O O O O O O O
光谱方法
天然药物化学实验指导
实验须知 (1)第一章天然药物化学实验技术 (5)第一节经典的提取和分离方法 (5)第二节结晶和重结晶 (9)第三节层析分离方法 (11)第二章实验部分 (18)实验一中草药化学成分的鉴别法 (18)实验二薄层板的制备、活度测定及应用 (25)实验三秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别 (28)实验四虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别 (31)实验五芦丁的提取分离和鉴别 (36)实验六黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别 (40)实验七挥发油成分的提取和鉴别 (44)实验八穿心莲内酯的提取分离鉴别与亚硫酸氢钠加成物的制备 (48)实验九女贞子中齐墩果酸的提取分离和鉴别 (54)实验十薯蓣皂苷元的提取分离和鉴别 (57)实验十一粉防己生物碱的提取分离和鉴别 (60)实验十二绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别(设计性实验) (65)附录一中草药化学成分检出试剂配制法 (67)附录二常用有机溶媒的性质 (74)实验须知一、天然药物化学实验的特点1．实验周期长。
本实验指导中一般一个提取分离和鉴别实验需要用去8学时，时间长。
因此，在实验过程中，应该注意仪器、试剂尤其是提取物的妥善保管或者保存。
2．所用试剂和溶剂品种较多，用量较大，许多试剂易燃、有毒或有腐蚀性，在一定条件下可能会和空气会形成爆炸混合物。
许多实验需用电炉加热或进行减压操作，学生用到的热源和电器较多，因此应切实注意实验安全，严防产生触电、中毒、烫伤等意外发生，谨防发生火灾、爆炸等重大事故，并保证实验室通风良好。
二、实验规则天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和鉴定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严谨的科学态度和良好的工作作风是必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验注意事项：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生，若发生事故应立即报告指导教师，进行适当处理。
天然药物第八章-香豆素
目标 概述 结构类型 性质 提取 分离 鉴别 结构测定 实例 实训 同步测试 小结
香豆素
1．异羟肟酸铁反应
性状
OH -
+
O OH
HONH2 HCl
COO OH
OH．-
C OH O
Fe3+
NH
+
H
OH
溶解性 试剂：盐酸羟胺 、碳酸钠、盐酸、三氯化铁 结果： 紫红色
反应范围：酯类 与碱反应
C OH O
Ledeb.var.japonica Nakai）的根中， 具有松弛肠张力的作用，对肠的蠕动 也有抑制作用。
目标 概述 结构类型 性质 提取 分离 鉴别 结构测定 实例 实训 同步测试 小结
香豆素
简单香豆素 呋喃香豆素
5、其他类香豆素
H3CO HO
来源于豆科植物印度黄檀
O O （Dalbergia sissoo Roxb .）
目标 概述 结构类型 性质 提取 分离 鉴别 结构测定 实例 实训 同步测试 小结
香豆素
性状 溶解性 与碱反应 显色反应
4、Gibb′s试剂、Emerson试剂反应：
条件：香豆素结构中酚羟基对位无取代 或C6位上没有取代时，
试剂： Gibb’s试剂（2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺） Emerson试剂反应（4-氨基安替比林-铁氰化钾）
高等职业教育技能型人才培养培训工程系列教材
第八章 香豆素 和木脂素类
目标 概述 结构类型 性质 提取 分离 鉴别 结构测定 实例 实训 同步测试 小结
香豆素
知识目标
木脂素
• 掌握香豆素的基本结构、性质、颜色反应 • 理解香豆素的结构分类。
• 理解香豆素的提取、分离原理及在秦皮、补 骨脂中的应用。
中药综合实验讲义
3） 展开：氯仿-无水乙醇（20:1）20 mL，氨气饱和。 4） 显色：用改良碘化铋钾在展开剂挥尽后，在薄板的两边 1 cm 处显色（其 余部分以玻璃板遮盖），划出两条显色带。 5）洗脱：分别刮下两条硅胶色带，碾碎，装在折叠好滤纸漏斗中，用约 30 mL 95％乙醇缓慢洗脱，浓缩洗脱液，点样检查后用丙酮重结晶。 3．Bűchi 中压柱层析分离和硅胶薄层层析检识的方法分离粉防己甲素和粉 防己乙素。 取中压层析柱一根（1.5 cm x 20 cm），称取中性氧化铝 25 g（100-200 目， 事先用事先以Al2O3:H2O(20:1，W:V)活化），干法装柱，氮气加压填充；取生物 碱粗品适量（约 100mg），加少量氯仿溶解，蠕动泵进样；以氯仿-乙酸乙酯溶 剂线性梯度洗脱，流速：20 mL/min，洗脱程序为：0-3 min，氯仿:乙酸乙酯 （90:10），10 min，氯仿:乙酸乙酯（70:30），15 min，氯仿:乙酸乙酯（0:100）， 洗脱液以每 15 mL一份，自动收集，各样品以薄层层析检查，合并相同部分， 分别回收有机溶剂后用丙酮重结晶，得粉防己甲素和粉防己乙素。 将上述分离所得各样品，进行硅胶薄层层析，条件如下： 薄板：硅胶-CMC 粘合板（5 cm×15 cm，层析用；2.5 cm×7.5 cm，点滴 反应用）； 对照品：粉防己甲素和粉防己乙素的氯仿溶液； 展开剂：氯仿-无水乙醇（9.5:0.5），整个系统以氨气饱和； 显色剂：改良碘化铋钾试剂 【思考题】 1．柱层析，中压柱层析，薄层制备层析实验中为获得好的分离效果，应注
乙醇
238-140℃
注：粉防己乙素也有双熔点现象。
溶解度：与粉防己甲素相似，但在冷苯中粉防己乙素难溶。
3）轮环藤酚碱（cyclanoline）
H3CO HO
天然药物化学实验讲稿
第一章 黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定教学目的要求掌握黄柏中小檗碱(季胺型生物碱)的提取原理和方法。
掌握干法装柱和湿法装柱的操作方法1、 掌握鉴定小檗碱(已知化合物)的一般方法。
教学重点难点季铵型生物碱的理化性质及提取方法。
2、 渗漉法的操作过程及注意事项。
3、 结晶法的注意事项4、掌握薄层色谱鉴定的方法实验一 黄柏中盐酸小檗碱的提取（一）实验原理根据黄柏中含粘液质较多的特点，首先用石灰乳使粘液质生成难溶于水的钙盐，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。
小檗碱能缓缓溶解于水中，在冷乙醇中的溶解度不大，但易溶于热水或热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。
小檗碱与酸结合脱去一分子水而成盐。
小檗碱盐酸盐在冷水中溶解度小，较易溶于沸水，几不溶于乙醇，小檗碱的硫酸盐、磷酸盐在水中溶解度较小，与大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度很小。
黄柏中主要含有小檗碱，其结构如下OO NH O O OMe OMeCHO季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色）小檗碱的三种互变异构体川黄柏含小檗碱约1.37％～5.8％，关黄柏含小檗碱约0.60％～1.64％。
(二)实验方法实验二黄柏中盐酸小檗碱的纯化及鉴定一、纯化1.湿法装柱色谱法吸附剂：中性氧化铝(100～200目)35g置于烧杯中，加入50ml 95％乙醇，调成浆状，湿法装柱。
上样：取50～100mg自制盐酸小檗碱，溶于少量95％热乙醇中，加入色谱柱中。
洗脱：95％乙醇洗脱，收集开始流出的鲜黄色带，即为纯化的盐酸小檗碱。
2.结晶法抽率上次提取液，将得到的滤饼用少量水加热溶解，趁热抽率，滤液放冷等待析晶，再抽率得到晶体，即盐酸小檗碱纯品。
二、薄层色谱鉴定将提取分离出的盐酸小檗碱样品与盐酸小檗碱的对照品共薄层色谱，比较其Rf值是否一致。
吸附剂：硅胶G薄层板展开剂：①苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1.5：l.5：0.3)，氨蒸汽饱和。
②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1) 显色剂：改良碘化铋钾试剂1、渗漉前为什么要加入石灰乳搅拌？2. 提取时加氯化钠的作用是什么？3、在制备薄层色谱板时有哪些注意事项？第四章芦丁的提取、分离、精制和鉴定1、掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作。
天然产物化学实验
实验十一 秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定秦皮为本樨科白蜡树属植物白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb ）或苦沥白蜡树（F.rhynchophylla Hance ）或小叶白蜡树（F.bungeana DC ）的树皮,味苦，性微寒。
具有清热、燥湿、收涩作用。
主治温热痢疾、目赤肿瘤等症。
秦皮中含有多种内酯类成分及皂苷、鞣质等，其中主要有七叶苷、七叶内酯、秦皮苷及秦皮素等。
多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有退热作用，毒付作用小，几无苦味。
适于小儿服用。
一．秦皮中主要成分的结构及性质1．七叶苷（esculin ），又叫马粟树皮苷：白色粉末状结晶，mp205～206℃。
易溶于热水（1:15），可溶于乙醇（1:24），微溶于冷水（1:610），难溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。
在稀酸中可水解。
水溶液中有蓝色荧光。
O HO HOO O O HO O glu七叶苷（esculin ） 七叶内酯（esculetin ）2．七叶内酯（esculetin ）：黄色针状结晶，mp276℃。
易溶于沸乙醇及氢氧化钠溶液，可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，几不溶于乙醚、氯仿。
3．秦皮苷（fraxin ）：mp205℃。
O CH 3O HOO Oglu O CH 3O HO O OH秦皮苷（fraxin ） 秦皮素（fraxetin ）4．秦皮素（fraxetin ）：mp227～228℃。
二．实验目的1．掌握从秦皮中提取、分离七叶苷、七叶内酯的方法。
2．熟悉七叶苷、七叶内酯的性质及鉴定法。
三．实验原理根据七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。
四．实验材料材料秦皮粗粉、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、无水硫酸钠、甲醇、1%FeCl 3、浓氨水、甲苯、甲酸乙酯仪器索氏提取器、紫外灯、试管、梨形分液漏斗、布氏漏斗、精制棉、循环水泵、旋转蒸发器、电热套、水浴锅五．实验内容（一）提取：取秦皮粗粉150g 于索氏提取器中，加400ml 乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
中药化学试题及答案(四)
中药化学试题及答案一、名词解释412、香豆素类化合物：具有C6 – C3，且有内酯环的化合物。
413、木脂素类化合物：2个C6 – C3缩合而成的化合物。
414、木质素类化合物：大与2个C6 – C3缩合而成的化合物。
二、填空题415、香豆素因具有内酯结构，可溶于碱液中，因此可以用（碱溶酸沉法）法提取。
416、小分子香豆素因具有（挥发性），可用水蒸汽蒸馏法提取。
417、广义的苯丙素类化合物包含（简单苯丙素类）、（香豆素类）、（木脂素类）、（木质素）和（黄酮）。
418、天然香豆素类化合物一般在（C7 ）具有羟基，因此（7 –羟基香豆素）可以认为是天然香豆素化合物的母体。
419、天然香豆素可分为（简单香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素、异香豆素）类、（呋喃香豆素）类、（吡喃香豆素）和（异香豆素）。
420、香豆素具有（内酯）结构，可以发生异羟肟酸铁反应而显（红）色。
421、秦皮的主要化学成分是（七叶苷）和（七叶内酯），具有（具有抑菌）和（抗炎）作用。
422、木脂素是一类由两分子（苯丙素）衍生物聚合而成的天然化合物。
三、选择题423、可与异羟肟酸铁反应生成紫红色的是（C ）。
A 羟基蒽醌类B 查耳酮类C 香豆素类D 二氢黄酮类E 生物碱424、判断香豆素6 –位是否有取代基团可用的反应是（B ）。
A 异羟肟酸铁反应B Gibb’s反应C 三氯化铁反应D 盐酸- 镁粉反应E Labat反应425、在催化加氢过程中，香豆素类结构最先氢化的是（E ）。
A 3、4位双键B 苯环双键C 呋喃环双键D 吡喃双键E 支链双键426、组成木脂素的单体基本结构是（ C ）。
A C5– C3B C5– C4C C6 – C3D C6– C4E C6– C6427、Labat 反应的试剂组成是（C ）。
A 香草醛–浓硫酸B茴香醛–浓硫酸C 浓硫酸–没食子酸D浓硫酸–变色酸 E 浓硫酸–铬酸多选题428、检识香豆素苷类化合物可用（BE ）。
主管中药师 基础知识 中药化学第四单元 苯丙素类
中药化学——第四单元苯丙素类苯丙素的定义（了解）凡是由一个或几个C6-C3单位构成的天然成分均称为苯丙素类，包括香豆素、木脂素等。
一、香豆素类（一）结构与分类定义：一类具有苯骈α-吡喃酮母核的天然产物的总称，在结构上可以看成是顺式邻羟基桂皮酸脱水而形成的内酯化合物。
7-羟基香豆素（伞形花内酯）可认为是香豆素类化合物的基本母核。
1.简单香豆素类简单香豆素类是指只在母核的苯环一侧有取代。
如伞形花内酯、秦皮中的七叶内酯和七叶苷、茵陈中的滨蒿内酯、蛇床子中的蛇床子素、独活中的当归内酯、瑞香中的瑞香内酯。
2.呋喃香豆素类线型呋喃香豆素：6,7位缩合，如补骨脂素、佛手柑内酯等。
角型呋喃香豆素：8,7位缩合，如当归素、异佛手柑内酯等。
二氢呋喃香豆素：呋喃环外侧被氢化，如紫花前胡苷（线性）、旱前胡甲素、乙素（角型）等。
3.吡喃香豆素线型吡喃香豆素：6,7位缩合。
角型吡喃香豆素：8,7位缩合。
二氢吡喃香豆素：呋喃环被氢化，如紫花前胡素（线型）、白花前胡丙素（角型）等。
4.其他香豆素主要包括在α-吡喃酮环上有取代的香豆素类，香豆素二聚体、三聚体类，异香豆素类等。
如续随子中的双七叶内酯是香豆素二聚体，茵陈中的茵陈内酯是异香豆素类成分。
（二）理化性质1.性状游离香豆素类：多有完好的结晶。
小分子游离香豆素多具有芳香气味与挥发性，能随水蒸气蒸馏，并能升华。
香豆素苷类：多数无香味和挥发性，也不能升华。
紫外光（365nm）照射下，香豆素类成分多显蓝色或紫色荧光。
2.溶解性游离的香豆素：一般不溶或难溶于冷水，可溶于沸水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚；香豆素苷：能溶于水、甲醇、乙醇，难溶于乙醚、氯仿等极性小的有机溶剂。
3.内酯的碱水解分子中具内酯结构，碱性条件下可水解开环，生成顺式邻羟基桂皮酸的盐，经酸化至中性或酸性即闭环恢复为内酯结构。
（注意：如果与碱液长时间加热，开环产物顺式邻羟基桂皮酸衍生物则发生双键构型的异构化，转变为反式邻羟基桂皮酸衍生物，此时，再经酸化也不能环合为内酯。
秦皮实验
秦皮中香豆素类成分的提取与分离秦皮为木樨科苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla、白蜡树Fraxinus chinensis、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana、宿柱白蜡树Fraxinus stylosa的干燥枝皮或干皮。
功能清热燥湿善治湿热泄泻及痢疾对湿热痹症亦有清湿热、宣痹止痛之效。
现代研究证明秦皮具有抗炎镇痛和降低血尿酸的作用，用于治疗痛风疗效甚佳，其有效成分为秦皮甲素（Esculin）、秦皮乙素（Esculetin）等香豆素类成分。
一、已知成分物理性质1.秦皮甲素（Esculin，又名七叶苷）：白色针状结晶，熔点:204℃-206℃,溶于甲醇，乙醇和乙酸，可溶于沸水。
也易溶于稀碱液，并显蓝色荧光。
2.秦皮乙素（Esculetin，又名七叶内酯）：淡黄色针状晶体(稀醇)或黄色叶状结晶(真空升华)，熔点：271-273°C，易溶于甲醇,乙醇和冰醋酸，可溶于丙酮，不溶于乙醚和水。
也易溶于稀碱液，并显蓝色荧光。
二、实验目的1、掌握香豆素与木质素的结构特点与理化性质。
2、掌握蒸馏法、萃取法和结晶法的操作方法及注意事项。
3、熟悉荧光实验与异羟肟酸铁实验鉴别七叶苷与七叶内酯的原理。
4、熟悉薄层色谱的操作流程。
三、实验原理七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，用氯仿洗涤去除脂溶性杂质，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。
四、实验流程五、实验方法1.乙醇总提取物的制备方法一：取秦皮粗粉150g，用95%乙醇回流提取三次（500ml回流1h ,200ml回流两次，每次1h）。
合并乙醇液，抽滤，减压回收乙醇至浸膏状（乙醇回收至无醇味）。
方法二：取秦皮粗粉150g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
2、香豆素成分的分离（一）七叶内酯的分离与纯化在上述浸膏中加40ml水加热溶之。
移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干。
秦皮中七叶内酯七叶苷的提取实验报告
秦皮中七叶内酯七叶苷的提取实验报告一、实验目的1.学习利用溶剂提取的方法提取秦皮中的活性成分；2.了解并掌握活性成分的分离、纯化和鉴定方法；3.探究影响活性成分提取效果的因素。
二、实验仪器与试剂仪器：恒温振荡器、电子天平、离心机试剂：秦皮样品、氯o-磺酸苯甲酯、制备的草莓酶溶液、甲醇、氯仿、正己烷、PET醇三、实验步骤1.准备秦皮样品：将秦皮样品晾干研磨成粉末备用。
2.提取秦皮中的活性成分：（1）将秦皮粉末加入适量的甲醇中，与甲醇按比例1：30混合，然后放入恒温振荡器中振荡提取2小时；（2）用滤纸过滤提取液，获得甲醇提取液；（3）将甲醇提取液浓缩至干燥，得到粗提取物。
3.分离提取液中的活性成分：（1）取一部分粗提取物，加入适量的氯仿和PET醇混合液，与粗提取物按比例1：5混合，振荡提取20分钟；（2）用离心机离心分离，获得上层氯仿相和下层水相；（3）取上层氯仿相，用滤纸过滤，获得氯仿可提取物；（4）将氯仿溶液浓缩至干燥，得到分离提取液的氯仿可提取物。
4.提取纯化活性成分：（1）将氯仿可提取物溶解于适量的甲醇中，与氯o-磺酸苯甲酯按比例1：20混合，振荡提取20分钟；（2）用离心机离心分离，获得上层甲醇相和下层水相；（3）取上层甲醇相，用滤纸过滤，获得甲醇可提取物；（4）将甲醇溶液浓缩至干燥，得到纯化活性成分的甲醇可提取物。
四、实验结果对于秦皮样品进行甲醇提取后，得到的粗提取物为Mg。
将粗提取物Mg进行氯仿和PET醇提取后，得到的氯仿相为Mf。
将氯仿相Mf进行甲醇和氯o-磺酸苯甲酯提取后，得到的甲醇相为Mp。
五、实验讨论与分析从秦皮中提取出的活性成分可能含有七叶内酯和七叶苷等化合物，但本实验未对具体化合物进行鉴定。
进一步的研究可以通过质谱、核磁共振等手段对活性成分进行结构鉴定和分析。
在实验中，提取过程中的温度、溶剂种类和提取时间等因素都可能会对活性成分的提取效果产生影响，可以进行参数优化实验来寻找最佳的提取条件。
制药分离工程实验指导定
四川理工学院制药分离工程实验指导第一版制药工程系编二○一二年目录实验一细胞SOD的提取和分离.............................................................................................. - 1 - 实验二大枣中多糖的提取分离.. (3)实验三有机溶剂沉淀法制备大豆脲酶 (5)实验四柱层析法对色素的提取与分离 (7)实验五质粒的提取及电泳分离 (9)实验六八角茴香油的提取与检识 (11)实验七秦皮中七叶苷和七叶内酯的提取、分离与鉴定 (14)实验八大孔吸附树脂分离纯化白头翁皂苷 (16)实验九重结晶及过滤 (18)实验十简单蒸馏及分馏 (3)实验一细胞SOD的提取和分离一、实验目的1．掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。
2．掌握SOD酶提取分离的一般步骤。
二、实验原理超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。
它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。
大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。
由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。
有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。
同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。
三、试剂与仪器1.试剂与材料新鲜蒜瓣、0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）、氯仿-乙醇混合液：氯仿:无水乙醇=3:5 、丙酮：用前需预冷至4-10℃、0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH10.2）、0.1mol/LEDTA溶液、2mmol/L肾上腺素溶液2. 仪器恒温水浴锅、冷冻高速离心机、可见分光光度计、研钵、玻棒、烧杯、量筒四、实验步骤1. 组织细胞破碎：称取5g大蒜蒜瓣，置于研钵中研磨。
中药化学实验指导
中药化学实验指导甘肃农业大学农学院中药化学实验指导邱黛玉编农学院中草药栽培与鉴定教研室2007年8月前言中药化学是一门实践性非常强的学科，因此中药化学实验课是本门课程的重要组成部分。
根据中药化学教学大纲的要求，实验教学的主要目的是通过中药有效成分的提取、分离和鉴定等基本操作技能的训练，培养学生分析问题和解决问题的能力，从而训练严格的科学的工作态度。
同时通过实验可进一步巩固课堂所学的理论知识，使理论与实践密切结合。
在实验教学中，要求学生掌握浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流法、连续回流提取法、两相溶剂萃取法、沉淀法、结晶法、薄层色谱、纸色谱、柱色谱的基本操作技能。
熟悉它们在中药化学成分提取、分离、检识和鉴定中的应用。
由于中药中所含化学成分复杂，一些有效成分含量较低等特点，实验中着重训练常量、半微量成分的提取、分离及检识方法。
使学生具有初步设计提取中药中主要类型成分的能力。
《中药化学实验指导》分实验部分和附录部分两方面内容，实验部分收录有代表性的10个实验，每个实验包括六项内容：实验目的、实验原理、实验内容、实验工具、实验方法、注意事项、思考题。
实验部分所收录的内容超过本科教学大纲要求的实验学时数，供实验时选择。
附录部分选录了部分与实验相关的内容，供实验时参考。
本实验讲义适合中草药栽培与鉴定专业、制药工程及相关专业开设中药化学实验课时使用。
学生实验守则中药化学实验时间长，操作繁杂，所用溶剂和试剂品种多，而且用量较大。
许多有机溶剂及药品具有易燃、有毒、腐蚀性、刺激性和爆炸性等特点。
在实验操作过程中又经常需要加热或减压等操作，学生将接触各种热源和电器。
如果操作不慎，易引起中毒、触电、烧伤、烫伤、火灾、爆炸等事故。
所以要求每个实验操作者，必须加强爱护国家财产和保障人民生命安全的责任心，严格遵守操作规程，树立严密的科学实验态度，提高警惕，消除隐患，预防事故发生。
要求如下：1、严格遵守实验室的规章制度及管理措施，执行实验纪律。
七叶内酯和七叶苷的工艺流程
七叶内酯和七叶苷的工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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单元设计-秦皮中香豆素的提取与分离-20020517
1.掌握香豆素与木质素的 结构特点与理化性质 2.掌握蒸馏法、萃取法和 结晶法的操作方法及注意 事项 3.熟悉荧光实验与异羟肟 酸铁实验鉴别七叶苷与七 叶内酯的原理 4.熟悉薄层色谱的操作流 程
1. 培养学生严谨、认真 的工作态度和强烈的责 任心
2. 培养学生的合作能力
单元设计
课程导入 检查预习情况 （10分钟)
1.内酯的颜色反应（异羟 肟酸铁反应 ） 2.酚羟基的颜色反应 3.Gibb’s反应 4.Emerson反应
单元总结 技能提升
2 1
回流 减压蒸馏
萃取 重结晶
3
薄层色谱
20
单元总结——5分钟 考核与评价
？？
1.小组合作时 每个同学的考 核标准
2.每个小组的 考核标准
3.课堂提问的 考核？
21
40%
任务一
制定秦皮中七叶内 酯和七叶苷的提取 分离操作流程 （25分钟)
单元总结 知识梳理 （5分钟)
4
任务三
七叶苷与七叶内 酯的鉴定 （50分钟)
任务二
秦皮中香豆素类 成分的提取分离 （90分钟)
单元导入——10 分钟 回顾上单元内容
检查预习任务的完成情况
预习任务一：分组查阅并讨论秦皮的来 源，性质，有效成分；
主治：清热燥湿、 清肝明目、平喘 止咳。用于热毒 泻痢、目赤肿痛、 目生翳障
5
预习任务二：秦皮中主要有效成分香豆素的结构、性质、提取分离鉴定方法
香 豆 素
6
含义 结构类型
具有苯并α-吡喃酮基本母核的天然药物的总称
简单香豆素，呋喃香豆素、吡喃香豆素、异香豆素、双香豆素
性状
游离香豆素具有香味，无色或浅黄色结晶，有挥发 性，香豆素苷无香味，无挥发性和升华性。
秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别
秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别秦皮为木樨科白蜡树属植物白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦枥白蜡树（F.rhynchophylla Hance）或小叶白蜡树（F.bungeana DC）的树皮,味苦，性微寒。
具有清热、燥湿、收涩作用。
主治温热痢疾、目赤肿痛等症。
秦皮中含有多种香豆素类成分及皂苷、鞣质等，其中主要有七叶苷、七叶内酯、秦皮苷及秦皮素等。
多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有退热作用，毒副作用小，几无苦味，适于小儿服用。
一、实验目的1.掌握从秦皮中提取七叶苷和七叶内酯类成分的原理和操作；2.熟悉香豆素类成分的性质和鉴别方法。
二、仪器与试药（一）仪器索氏提取器 RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药秦皮粗粉乙醇氯仿乙酸乙酯无水硫酸钠甲醇 1%FeCl3溶液浓氨水硅胶G 甲酸乙酯甲苯七叶苷和七叶内酯对照品重氮化对硝基苯胺三、秦皮中主要成分的结构及性质R=glu 七叶苷 R=glu 秦皮苷R=H 七叶内酯 R=H 秦皮素四、实验原理七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离。
五、实验方法（一）提取：取秦皮粗粉150g 于索氏提取器中，加400mL 乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
（二）分离：在上述浸膏中加40mL 水加热溶解，移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等体积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲醇中，浓缩至适量，放置析晶，即有黄色针状结晶析出，滤出结晶。
用水、甲醇、水反复重结晶，即得七叶内酯。
秦皮中七叶苷
滤液2
药渣
合并滤液，减压回收乙醇，加80ml蒸馏水加热溶解，过滤 沉淀 滤液 放冷，等体积CHCl3洗涤2次
氯仿层 （非极性杂质）
水层 水溶液除去CHCl3[2]，冷却后， 醋酸乙酯萃取3次，每次50ml
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实验流程
合并醋酸乙酯层（富含七叶内酯） 适量无水Na2SO4脱水， 减压回收EOAc至干 残留物 温甲醇溶解，适 结晶 当浓缩、放置过夜
样品：秦皮提取物，秦皮 甙标准品。 展开剂：正丁醇—醋酸— 水（4：1：5上层） 显色剂：三氯化铁试剂或 紫外灯254nm下观察荧光。
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实验原理
香豆素类成分性质
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
七叶苷
易溶于沸水、热乙醇、 甲醇、吡啶、醋酸，难 溶于氯仿、乙酸乙酯、 冷水。
七叶内酯
易溶于热乙醇、乙酸 乙酯、冰醋酸，几乎 不溶于乙醚及沸水。
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实验原理
提取与鉴别 香豆素类成分
提取原理
1.溶剂提取法（醇） 2.碱溶酸沉法 3.蒸馏法
鉴别原理
1.荧光 2.内酯 3.PC
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提取流程图
秦皮粗粉30g 4倍95%乙醇回流提取1.5hr，过滤
滤液I
药渣 3倍95%乙醇回流提取1hr，过滤
水层（富含七叶甙）
黄色结晶 含水甲醇重
黄白色结晶 白色固体
含水甲醇反复重结晶 （七叶内酯）
（七叶苷）
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鉴别
荧光试验
异羟肟酸 反应
PC鉴别 鉴别
取样品少许，加入乙 醇0.5ml，用毛细管滴 于滤纸上，在紫外灯 下观察。
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秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别
秦皮为木樨科白蜡树属植物白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦枥白蜡树（F.rhynchophylla Hance）或小叶白蜡树（F.bungeana DC）的树皮,味苦，性微寒。
具有清热、燥湿、收涩作用。
主治温热痢疾、目赤肿痛等症。
秦皮中含有多种香豆素类成分及皂苷、鞣质等，其中主要有七叶苷、七叶内酯、秦皮苷及秦皮素等。
多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有退热作用，毒副作用小，几无苦味，适于小儿服用。
一、实验目的
1.掌握从秦皮中提取七叶苷和七叶内酯类成分的原理和操作；
2.熟悉香豆素类成分的性质和鉴别方法。
二、仪器与试药
（一）仪器
索氏提取器 RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）
HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）
ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）
（二）试药
秦皮粗粉乙醇氯仿乙酸乙酯无水硫酸钠甲醇 1%FeCl3溶液
浓氨水硅胶G 甲酸乙酯甲苯七叶苷和七叶内酯对照品
重氮化对硝基苯胺
三、秦皮中主要成分的结构及性质
R=glu 七叶苷 R=glu 秦皮苷
R=H 七叶内酯 R=H 秦皮素
四、实验原理
七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离。
五、实验方法
（一）提取：
取秦皮粗粉150g 于索氏提取器中，加400mL 乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
（二）分离：
在上述浸膏中加40mL 水加热溶解，移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等体积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲醇中，浓缩至适量，放置析晶，即有黄色针状结晶析出，滤出结晶。
用水、甲醇、水反复重结晶，即得七叶内酯。
将乙酸乙酯萃取过的水层浓缩至适量，放置析晶，即有微黄色晶体析出，滤出结晶。
以甲醇、水反复重结晶，即得七叶苷。
（三）鉴别方法：
1．化学检识：取七叶苷、七叶内酯各少许分别置试管中，加乙醇1mL 溶解。
加1%FeCl 3溶液2—3滴，显暗绿色，再滴加浓氨水3滴，加水6mL ，日光下观察显深红色。
2．薄层鉴别：
吸附剂：硅胶G
样品：七叶苷、七叶内酯对照品及自制七叶苷﹑七叶内酯的醇溶液。
O O H RO O O
OR O H MeO
展开剂：甲醇-甲酸乙酯-甲苯（1：4：5）
显色：（1）UV254灯下观察，七叶苷为灰色荧光，七叶内酯为灰褐色。
（2）以重氮化对硝基苯胺喷雾显色，七叶苷和七叶内酯均呈玛瑙色。
结果：七叶苷R f=0.04，七叶内酯R f=0.28
六、实验结果
1．记录七叶苷和七叶内酯提取分离过程。
2．详细记录定性反应结果
3．绘制色谱图，并计算R f值。
4．总结实验过程中遇到的问题和解决方法。
七、思考题
1．索氏提取器提取药材的原理及其优缺点是什么？适用于哪些化学成分的提取？。