实验七 霉菌的培养和观察

实验七霉菌的培养和观察

摘要

通过在一定固定环境下培养根霉，毛霉，曲霉，青霉四种霉菌，先通过菌种的外形对其有一个“宏观”的认识，然后再在显微镜低倍或高倍镜下分别观察四种菌的形态，孢子囊及孢子形态，菌丝形态等方面。发现根霉，曲霉和青霉菌丝均有横隔；青霉的分生孢子小梗呈扫帚状等现象。

关键词

土豆培养基（PDA）分生孢子梗（Conidiophore）载片培养

一、实验目的

（1）学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。

（2）了解四类霉菌（根霉、毛霉、黑曲霉、青霉）的基本形态。

二、实验原理

霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石炭酸棉蓝染液进行染色，盖上盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体及孢子并可防腐，乳酸可保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制片不易干燥，能防止

孢子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长期保存。

三、实验器材

1、菌种

根霉（Rhizopus），毛霉（Mucor），黑曲霉（Aspergillus niger），青霉（Penicillium）

2、试剂

马铃薯20g，蔗糖2g，琼脂2g，水100mL，20%甘油等。

3、仪器

分析天平，玻璃棒，三角瓶，小烧杯，加热器，漏斗，纱布，培养皿，载玻片，盖玻片，U 型玻棒，解剖刀，镊子，接种环，移液管，酒精灯，显微镜等。

四、实验内容

（1）配制马铃薯培养基

配制200ml马铃薯培养基（PDA），其成分配比及配制方法见附录。灭菌后无菌操作，取培养基分别倒少量于灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。再将这一层培养基用解剖刀切割为若干1cm²左右的琼脂块。（2）制作小室及接种培养

①制作：在平皿底部铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上放一U

型玻棒。在玻棒上放上一块载玻片。取方形琼脂块，将其移至载玻片上，载玻片两端各放置一块。

小室培养法，图：

②接种：用接种环挑取很少量的菌落接种于琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。（同一块载玻片上的两块培养基上接种不同菌种）

③培养：无菌操作，在培养小室中滤纸片上滴加2～3ml灭菌甘油,

盖上皿盖,于27℃恒温箱中正置培养一个星期。

（3）镜检观察

从培养箱中取出载玻片在低倍镜下观察并记录四种霉菌菌丝体及孢子的形态特征，必要时可换高倍镜观察。

（3）注意事项

①菌时盖玻片最好分开包，载玻片、盖玻片不要和平皿接触，防止粘在一起。②倒薄片时培养基倒入占平皿底部一薄层即可，然后摇动平皿即可使培养基铺满底部。③接种时尽可能将菌种接在琼脂块边缘，避免培养后菌丝过于密集影响观察。④接种时确认有菌接上即可，接菌量不宜过多，会导致菌丝过密难以观察。

五、实验报告

1、实验结果

照片（资料）

图表 2-1根霉

图表 2-2根霉假根

曲霉

2、 思考题

12、黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？ ①菌丝：根霉无隔有假根，曲霉无隔有足细胞。 ②孢子梗：根霉位于假根上，曲霉由气生菌丝分化而来。 ③孢子囊形态：根霉孢子囊表面平滑，曲霉表面不平滑，呈絮状。 13、如果要求对某放线菌或霉菌不同发育时期（基内菌丝→气生菌丝→孢子丝或繁殖菌丝）进行连续观察，写出实验方案。

①选取对数期菌落进行同步培养，分化出处于同一生长阶段的菌。 ②接种，若放线菌则在平皿上插上至少7个载玻片，霉菌则至少接五个小室。

④ 养观察：在适宜条件下培养，每隔一天在相同时间内取出一个盖玻片进行观察记录。 六、实验小结

本次试验的成功需要注意几个方面的问题。首先，在接种的时候

图表 2-5青霉

不应该在固体培养基上接种太多太厚的孢子，并且接种需要接在固体培养基小块儿的边缘，以便于霉菌的生长。其次，无菌环境下进行各种操作也是非常重要的，这样可以保证菌种不被污染。再者，本次实验在观察霉菌的形态的时候，有特别的关注不同霉菌的细节及不同之处。比如菌丝是否有隔，孢子囊形态等特征。通过细心比较各种霉菌细节状态的不同，我们就可以用来分别鉴定一些霉菌，扩展了视野。

七、附录

马铃薯培养基配比及制作

制作：马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,溶化后补足水至200ml，自然pH，高压蒸汽灭菌30min。