过氧化物酶标记链霉亲和素说明书

Streptavidin-HRP说明书

Streptavidin-HRP
产品简介
链霉亲和素（Streptavidin）是一种分子量 60kDa 左右的四聚体蛋白，一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，链霉亲和素可用于检测和分离生物素化蛋白。辣根过氧化物酶（HRP）是一种含亚铁血红素的糖蛋白，与底物孵育，能产生一种着色、荧光或发光标记的分子衍生物。Streptavidin-HRP 是由链霉亲和素和辣根过氧化酶交联所得，与生物素化蛋白和特定化学发光底物结合产生光信号，因此可用于生物素化抗体、蛋白、组织、细胞、核酸等样品的检测。
储存缓冲液
1XPBS, 50%甘油。
储存温度
2-8℃保存一个月，-20℃保存一年，避免反复冻融。
产品应用
具体工作浓度按实际实验样品调整。稀释倍数受多种因素影响，包括一抗和二抗浓度、孵育时间等，我们推荐稀释比例如下：
Immunocytochemistry Western Blot ELISA
1:200-1：500 1:1000 - 1:10000 1:5000 - 1:20000
订购信息
产品名称
Streptavidin-HRP
货号 SLP001H SLP001HC
规格 100µl 1ml
1/1
常州天ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ人和生物科技有限公司

BeaverBeadsTM Streptavidin 链霉亲和素磁珠说明书

链霉亲和素磁珠（BeaverBeads TM Streptavidin ）产品简介链霉亲和素-生物素（SA-Biotin ）系统具有极高的结合亲和力（Kd=10^-15），在生物领域具有广泛的应用。

BeaverBeads TM Streptavidin 采用海狸专利的蛋白偶联技术将SA 共价连接于固相载体表面，可高效结合生物素化抗体、核酸、蛋白等配体分子。

本产品采用超顺磁性微球，粒径均一、形貌规整，有利于方便、快捷地捕获目标分子以及实现磁性分离。

本产品可配套自动化设备进行高通量操作。

产品信息产品信息 SA 磁珠（300 nm ）生物素化IgG 结合性能 20μg/mg 磁珠磁珠浓度 10 mg/mL 磁珠表面亲水基团保存溶液 1×PBS ，含0.1%（w/v ）BSA ，0.1%（v/v ）proclin-300 保存条件 2-8 ℃ 保质期2年产品应用范围适用于体外诊断体系磁微粒化学发光免疫诊断操作流程（本操作以两步双抗体夹心CLIA 法为例）1. 使用前准备1.1. 检测试剂：包括捕获抗体、待测物标准品、待测样品、酶标记抗体、底物液等，使用前平衡至室温1.2. Washing buffer ：用户根据需求配制洗液，使用时平衡至室温 1.3. 化学发光96孔平底微孔板1.4. 96孔平底微孔板磁性分离器：可选用海狸磁性分离器，Cat.No.60302 1.5. 漩涡振荡器 1.6. 真空吸液泵 1.7. 化学发光仪 1.8. 移液器2. 磁微粒化学发光免疫诊断操作流程2.1.调整磁珠至合适浓度（建议0.8mg/ml ），将磁珠置于漩涡振荡器上20 s ，振荡重悬磁珠。

用移液器移取50 μL 磁珠至96孔板中，磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下96孔板。

2.2. 每孔加入100 μL 生物素化捕获抗体，充分震荡重悬磁珠，37℃恒温箱中孵育15min 后，磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下96孔板。

过氧化物酶(POD)试剂盒说明书

过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理：利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。

二、实际的组成和配置试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解，4℃避光保存试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。

若A 值太高，则加双蒸水稀释，若A 值太低，则加入适量试剂三。

（一般在25倍左右稀释）试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。

三、操作步骤：1、前处理：植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min ，取上清液进行测定。

混匀后，3500r/min 离心10min ，取上清于波长420nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

四、计算及举例1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。

2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul 匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。

链霉亲和素Streptavidin 说明书

链霉亲和素Streptavidin说明书货号：S9170规格：1mg/5mg/10mg保存：-20℃干燥保存，有效期至少保持2年。

纯度：≥95%活性：≥15Units/mg，（Green改良法测定）。

产品来源：大肠杆菌发酵工程菌株。

分子大小：60kDa产品简介：链霉亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的一种同型四聚体蛋白。

与生物素具有很高的亲和力，本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12-15 U/mg。

SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6小时，而AV半衰期仅为1小时。

由于SA不含糖基且等电点接近于中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。

本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板，制备SA偶联酶制剂（如SA-HRP、SA-AP等），SA偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含StrepTagⅡ标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。

使用方法：一、微孔板包被1.用碳酸钠缓冲溶液（pH9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验）注意：由于SA等电点是7.4，包被不建议使用中性缓冲液。

2.用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；3.洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干4.后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。

包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。

二、SA偶联磁珠2.1NHS活化1.充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5ml离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；2.取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。

过氧化物酶（POD）活性检测试剂盒说明书

Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088过氧化物酶（POD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0095规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体0.04 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体3 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。

2、试剂二工作液：取0.01mL试剂二加入3.2 mL试剂一混合备用（约106T），现配现用，也可根据样本量按比例配制。

产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

POD在有过氧化氢存在的情况下，能使愈创木酚发生氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm有最大光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

碧云天Mouse TNF-α ELISA Kit (小鼠TNF-α酶联免疫吸附检测试剂盒)说明书

Mouse TNF-α ELISA Kit产品编号产品名称包装 PT512Mouse TNF-α ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠肿瘤坏死因子-α酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的TNF-α的试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。

多次重复检测结果表明，最小检出量为30.8pg/ml ，与人TNF-α、sTNF RIs 、TNF RII 等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

TNF-α，即TNF 、TNF α或TNFalpha ，也称cachectin 、cachexin 或TNFSF1A 。

TNF-α由巨噬细胞、上皮细胞等多种细胞在细菌感染、内毒素刺激、病毒或寄生虫感染时产生。

肿瘤坏死因子超家族(Tumor necrosis factor superfamily)共约19个成员，包含由巨噬细胞等产生的TNF-α和T 淋巴细胞产生的TNF-β(也称Lymphotoxin-alpha)，以及FASL 、TRAIL 、CD40L 、CD27L 、CD30L 等。

TNF-α与TNF-β在结构上有一定的相似性，并且在氨基酸水平有28%的同源性，它们拥有共同的受体TNFR1和TNFR2。

由于TNF-α的生物学活性占TNF 总活性的70%~95%，因此目前常说的TNF 多指TNF-α。

TNF (Tumor Necrosis Factor)因为能诱导细胞死亡而得名，实际上其很多时候诱导的细胞死亡为细胞凋亡。

人TNF-α有两种形式，一种是由233个氨基酸组成的跨膜蛋白同源三聚体(homotrimers)，另外一种是该跨膜蛋白在TNF-α转化酶TACE(TNF-α converting enzyme)的作用下切除信号肽，形成成熟的157个氨基酸的可溶性TNF-α单体(分子量为17KDa)的同源三聚体。

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒说明书

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）试剂盒说明书谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。

测定意义：GSHPx是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的重要酶之一、GSHPx不但能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的损害和加添机体抗辐射等本领。

测定原理：GSHPx催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，而NADP+没有；通过测定340nm光汲取减少速率来计算GSHPx活性。

自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调整移液器、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保管。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管。

试剂三：液体10μL×1支，20℃保管。

试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保管。

粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

GSHPx测定操作：1.酶标仪预热30min，调整波长到340nm。

2.混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。

生物素-亲和素标记技术完整讲解

4 .4 在分离纯化中的应用（亲和层析）
1.平衡 2.上样 3.洗杂 4.洗脱
五反应特点
1. BAS具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。
1包被抗原2洗涤3待测抗体4洗涤5生物素标二抗6洗涤7加亲和素8洗涤9加酶标生物素10洗涤11加底物12显色后加终止液直接法步骤2亲和素生物素过氧化物酶法abc法即亲和素生物素过氧化物酶法avidinbiotincomplextechnologyabc其原理是预先按一定比例将亲和素或链霉亲和素与酶标生物素结合形成可溶性的亲和素或链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物当其与检测反应体系中的生物素化一抗直接法或生物素化二抗间接法相遇时复合物中未饱和的亲和素或链霉亲和素结合部位即可与抗体上的生物素结合
磁微粒和氨基末端磁性微粒为载体分别通过物理吸附和共价作用制备两种链亲和素-磁性微粒，其具有较高的游离生物素结合容量以及较高的生物素标记寡核苷酸的结合能力。
4.1.4 在免疫酶技术中的应用
BAS应用于免疫酶技术，通过生物素-亲和素将免疫复合物与辣根过氧化物酶连接起来，形成免疫酶-生物素-亲和素法。赵金富等用合成的雌三醇-生物素复合物(E3Biotin)结合辣根过氧化物酶标记的亲合素(HRP-Avidin)作
BAS与免疫放射分析(immunoradiometric analysis，IRMA)方法偶联，先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与抗原(标准抗原和待测抗体)同时反应，在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物，再用放射性同位素标记的亲和素(或链霉亲和素)与复合物中的生物素结合，最终使反应信号放大。李贵平等用153Sm标记BAS，再标记抗CEA 单抗，最后在结肠癌裸鼠模型中进行γ显像和体内分布测定，结果肿瘤显像时间大大缩短。郝君等采用生物素-磁珠富集微卫星，与传统放射性同

Anti-TPO中文说明书

细胞的表面。该酶与甲状腺球蛋白（Ｔｇ）协同作用将Ｌ－酪氨酸碘化，标本在２－８度可稳定３天，－２０度至少可稳定１个月。只能冻融一次。
并将一碘酪氨酸和二碘酪氨酸联接成为甲状腺激素Ｔ４、Ｔ３和ｒＴ３。含沉淀的标本使用前需离心。
ＴＰＯ是一潜在的自身抗原。自身免疫性疾病引起的数种甲状腺炎常伴有不要加热灭活标本。标本和质控液禁用叠氮钠防腐。血中ＴＰＯ抗体滴度升高。目前仍可经常见到的＂抗微粒体抗体＂这一名词，从临床角度看，可认为是抗ＴＰＯ抗体的同义词，因为ＴＰＯ抗原发现检测步骤：
Ｒ１：Ｒｕ（ｂｐｙ）３２＋标记的羊抗ＴＰＯ抗体（灰盖），１瓶，１０ｍｌ。浓度１．０ｍｇ／ｌ，ＴＲＩＳ缓冲液０．１ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ７．２。含防腐剂。
Ｒ２：生物素化的ＴＰＯ重组抗原（黑盖），１瓶，１０ｍｌ。浓度０．１５ｍｇ／ｌ，ＴＲＩＳ缓冲液０．０３ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ７．０。含防腐剂。
Ｃａｌ１：羊抗ＴＰＯ定标液１（白盖），１瓶，１．３ｍｌ。浓度约３５ＩＵ／ｍｌ，人血清基质。含防腐剂。
¦ Roche Diagnostics GmbH, D-68298 Mannheim
l
2001-08
2178508001 02 04
1562
101
Ｃａｌ２：羊抗ＴＰＯ定标液２（白盖），１瓶，１．３ｍｌ。浓度约３５０ＩＵ／ｍｌ，人血清基质。含防腐剂。
ＰＣＡＴＰＯ１ＰｒｅｃｉＣｏｎｔｒｏｌ人抗ＴＰＯ质控品１，（黑盖），１瓶，１．０ｍｌ。浓度约２０ＩＵ／ｍｌ，人血清基质。含防腐剂。
ＰＣＡＴＰＯ２ＰｒｅｃｉＣｏｎｔｒｏｌ人抗ＴＰＯ质控品２，（黑盖），１瓶，１．０ｍｌ。浓度约１００ＩＵ／ｍｌ，人血清基质。含防腐剂。
干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素＜６６ｍｇ／ｄｌ）、溶血（血红蛋白＜１．５ｇ／ｄｌ）、脂血（脂质＜２１００ｍｇ／ｄｌ）和生物素＜６０ｎｇ／ｍｌ等干扰。接受高剂量生物素（＞５ｍｇ／天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素８小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（１５００Ｕ／ｍｌ）。２３种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体以及其它免疫反应的干扰。Ｅｌｅｃｓｙｓ抗－ＴＰＯ测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。检测范围：５─６００ＩＵ／ｍｌ。稀释：高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议１：５稀释。稀释后的标本抗－ＴＰＯ含量必须高于２００ＩＵ／ｍｌ。如用手工稀释，结果应乘上稀释

免疫组织化学及相关技术：实验二链霉亲和素-过氧化物酶法(SP法)

二抗
三抗
化
清
氢
3m*3 8′ 3m*3
8′ 37℃ 50’ 3m*3 12′ 3m*3 12′
DAB PBS
自
苏
显色
来水冲洗
木精复染
返蓝
脱透封水明片
3m*3 1′
1’ 10‘
SP法具体实验步骤
苏木精复染后续
1. 苏木精复染1min,返蓝10min 2. 脱水，透明，封片
95％酒精Ⅰ、Ⅱ 100％酒精Ⅰ、Ⅱ 二甲苯Ⅰ、Ⅱ 中性树胶封片显微镜观察
《免疫组织化学相关技术》
实验二链霉亲和素-过氧化物酶法
（SP法）
Department of Histology and Embryology
一、实验目的
1 掌握免疫组化染色的原理及步骤 2 了解免疫组化实验的设计及问题解决方法
免疫组织化学原理
利用抗原（antigen, Ag），抗体（antibody）特异结合的原理，用已知抗体检测未知抗原的一种方法。
抗原
三、SP法优点
• 可检测酶、多肽、蛋白质、蛋白多糖、激素等多种物质。
• 三步法，同一试剂盒（含二抗、三抗、底物）可检测多种抗原
• 原位显示可对检测物质初步定位 • 可半定量。淡黄－棕黄－深棕色，阳性
细胞数。
四、SP染色注意事项
载玻片的处理（多聚赖氨酸等粘附剂）选择对照(阳性对照、阴性对照、空白对照、
二、SP法基本原理
（streptavidin-perosidase）
即链霉亲和素-过氧化物酶连结法：（链霉抗生物素、链霉卵白素）抗原
＋一抗＋生物素标记的二抗＋ HRP标记的链霉抗生物素蛋白（三抗）

过氧化物酶标记链霉亲和素使用说明

过氧化物酶标记链霉亲和素使用说明HRP-Streptavidin货号：SE068规格：0.1ml/1ml保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。

2-8℃可保存1个月。

产品说明：链霉亲和素(streptavidin)是与亲和素(avidin)有相似生物学特性的一种蛋白质，是streptomycesavidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点 6.0，非特异性结合远比亲和素低。

链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。

一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级，这一性质常用于分子生物学用途。

其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。

HRP标记链霉亲和素是采用进口链霉亲和素和高活性过氧化物酶HRP制成复合物，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、蛋白或其它生物素标记分子的检测。

具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学等。

保存体系：0.01M PBS(pH7.4)﹑1%BSA﹑0.03%Proclin300﹑50%甘油。

浓度：链霉亲和素浓度为1mg/ml。

工作效价：ELISA法：1：500～5000组织化学：1：50～500免疫印迹：1：500～5000。

具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据实际情况而定。

相关试剂：SP034兔IgG免疫球蛋白抗原SPA131羊抗小鼠IgG(纯化) SA134羊抗兔IgG(免疫血清) SF134羊抗兔IgG-FITCSE237兔抗猪IgG-HRPA1800抗体稀释液。

ELISA说明书翻译

实验步骤1.开始ELISA前一天，稀释包被抗体，取酶标板每孔加入100ul包被抗体溶液，4度过夜2.使用前将所有试剂放置室温，强烈建议所有标准品和样品做复孔或三孔，各次检测均要求做标准曲线3.洗涤液不少于300ul洗板4次，并在吸水纸上拍干板子，后续洗涤液同此4.为了阻断非特异性结合和减少背景，每孔加200ul样品稀释液5.封板并在摇床上室温孵育1h6.在上述期间，准备标准品稀释液和适当的样品稀释液（如必需）7.标准品稀释：500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml,62.5 pg/ml, 31.25 pg/ml, 15.6 pg/ml,7.8pg/ml 和0 pg/ml8.如步骤3洗板4次9.每孔加入100ul标准品稀释液和样品到对应孔，如有需要可对样品进行稀释10.封板并在摇床上室温孵育2h11.如步骤3洗板4次12.每孔加入100ul已稀释的二抗，封板并在摇床上室温孵育1h13.如步骤3洗板4次14.每孔加入100ul 稀释的HRP，封板并在摇床上室温孵育30min15.如步骤3洗板5次，每次洗涤洗涤液浸泡30s至1min，有利于减少背景16.每孔加入100ulTMB显色液，并在摇床孵育15-30min，阳性孔将变为淡蓝色，此步无需封板17.每孔加入100ul终止液终止反应，阳性孔将由蓝色变为黄色18.终止反应半小时内测定OD值（450nm）ELISA实验基本原理基本原理1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

Human BDNF ELISA Kit（人脑源性神经营养因子浓度检测试剂盒）说明书

EK1127-01Human BDNF ELISA Kit检测试剂盒（酶联免疫吸附法）Catalog NumberEK1127-48EK1127-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的人脑源性神经营养因子(BDNF)浓度。

本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。

一、产品介绍1.背景介绍脑源性神经营养因子(BDNF)是生长因子神经营养素家族中的一员，与神经生长因子相关。

神经营养因子存在于脑及外周。

BDNF在内质网中加工合成，由致密核心囊泡分泌。

它在大脑中的海马、皮层和基底前脑区域活跃，同样也在视网膜、运动神经元、肾脏、唾液和前列腺中表达。

BDNF作用于中枢神经系统和外周神经系统的某些神经元，帮助现存神经元的存活、促进新生神经元和突触的生长和分化。

BDNF的改变可能在精神分裂症的发病中起作用，与抑郁、湿疹、癫痫、阿尔茨海默病、肥胖、衰老、先天性中枢性低通气综合征和化疗后认知功能障碍有关。

2.检测原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。

特异性抗人BDNF抗体预包被在高亲和力的酶标板上。

酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的BDNF与固相抗体和检测抗体结合。

洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。

洗涤后，加入显色底物TMB，避光显色。

颜色反应的深浅与样本中BDNF的浓度成正比。

加入终止液终止反应，在450nm波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。

3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。

2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。

3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。

4)本试剂盒在设计上去除或降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能的影响因素都已经去除。

400-6721-600二、基本信息1.试剂盒提供的材料组分编号EK1127-48EK1127-96预包被酶标板EK1127P48T96T标准品EK1127S1vial2vials检测抗体EK1127D1vial1vial辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素E02901vial1vial10×检测缓冲液E031010ml10ml显色底物TMB E02306ml11ml终止液E030011ml11ml20×洗液E028150ml50ml封板膜E0200662.未提供的材料设备1)能够检测450nm吸光度的酶标仪，参考波长570nm或630nm2)移液器及枪头、加样槽3)准备试剂用的试管、离心管、量筒等4)蒸馏水或去离子水5)涡旋振荡器、微孔板振荡器3.贮存试剂盒保存于2-8℃，有效期标注于标签上。

过氧化物酶染色液（DAB法）使用说明书

过氧化物酶染色液（DAB法）使用说明书过氧化物酶染色液(DAB法)使用说明书货号：G2370有效期：6个月有效。

产品内容：名称4×10ml4×20ml Storage 试剂(A):BFA固定液10ml20ml4℃避光试剂(B): POX孵育液B1:DAB染色液10ml20ml-20℃避光B2:DAB氧化剂2×100μl4×100μl RT临用前，按B1:B2=1000:1比例混合，即为POX孵育液，即配即用。

试剂(C):WG染色液10ml20ml RT避光试剂(D):WG buffer10ml20ml RT产品说明：过氧化物酶(Peroxidase，简称POX或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

过氧化物酶染色液(DAB法)是ICSH推荐采用的POX染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的DAB的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX所在部位。

该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX活性部位呈棕黄色。

自备材料：1、载玻片2、显微镜操作步骤(仅供参考)：1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA固定液，4℃固定30～60s，稍水洗。

2、滴加配制好的POX孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min，水洗2min。

3、滴加WG染色液，孵育30～60s。

4、直接滴加等量WG buffer，染色10～15min。

5、水洗、晾干、镜检。

染色结果：POX活性部位棕黄色细胞核蓝色粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。

浆细胞及巨核细胞均为阴性。

AEC显色方法

注意事项
1．本产品总量为 10 次（10 毫升/次）或 1000 次（100 微升/次）操作 2．可用于 1000 cm2 免疫印迹膜片：建议 5 毫升用于 1 张 5 X 8 cm2 膜片 3．可用于 1000 片 1 cm X 1 cm 大小的组织切片 4．用户可以根据需求，调整试剂用量 5．操作时，须戴手套 6．染色时间根据情况调整，不能过长，以免造成过度显色 7．如果封闭欠佳，易造成背景颜色过深 8． GENMED 染色液（Reagent A）避免在－20℃冰箱里保存 9． GENMED 染色工作液不宜超过 4 至 6 小时；如果发现沉淀，不宜使用 10．固相膜染色后数小时将会褪色，不能永久存在 11．本产品只能用于辣根过氧化酶（HRP）标记的杂交和沉淀反应 12．染色后可用苏木素复染，增强对照；建议使用 GENMED 苏木素复染试剂盒－GMS80050 13．染色后不能使用乙醇等有机溶剂清理 14．本公司提供系列组化染色试剂
实验步骤
一、免疫印迹染色
实验开始前，分别移出
毫升 GENMED 染色液（Reagent A）和 GENMED 反应液（Reagent B）到
15 毫升锥形离心管，混匀后标记为 GENMED 染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。
1
1．准备好含有待测蛋白的固相膜（5 X 8 cm2）：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根
名称蛋白质西方杂交免疫印迹 ECL 化学发光检测试剂盒
蛋白质西方杂交免疫印迹 DAB 显色检测试剂盒蛋白质西方杂交免疫印迹消除试剂盒化学发光免疫印迹消除试剂盒
琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹 ECL 化学发光检测试剂盒
琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹 DAB 显色检测试剂盒

TUNEL实验步骤

TUNEL实验步骤DeadEnd TM Colormetric TUNEL System1.概述 (1)2.产物成分及贮存条件 (3)3.测定法规程 (4)A．规程⽂献 (4)B．组织⽚段中细胞凋亡的分析步骤 (5)C．细胞培养中细胞凋亡的检测步骤 (7)D．阳性对照（随机）进⾏ (9)E．采⽤茴⾹霉素诱导的HL-60细胞凋亡的步骤 (9)4.故障循迹 (10)5.缓冲液和溶液的成分组成 (10)6.相关产物 (10)7.参考⽂献 (12)1.概述DeadEnd TM Colormetric TUNEL System 是⼀种⾮放射性系统，⽤于单个细胞⽔平上的平上的原位地简单、准确、快速的检测凋亡细胞。

TUNEL通过测量DNA的断裂⽚段（DNA断裂⽚段可以作为许多细胞类型的细胞凋亡的重要的⽣物化学指⽰因⼦），以此测定组织⽚段和培养细胞的凋亡死亡细胞。

⾼等真核⽣物的绝⼤多数细胞都能够通过⼀种内在细胞间的⾃杀程序（例如程序性细胞死亡和细胞凋亡）来进⾏⾃我灭亡。

细胞凋亡对于⽣物发育、内稳态和⼀些疾病⼗分重要。

细胞凋亡具有⼀些特定的形态学特征，包括泡状膜、细胞核和细胞质皱缩、染⾊体凝集。

细胞凋亡产⽣的细胞碎⽚通过胞膜联合形成凋亡⼩体，凋亡⼩体易被巨噬细胞和周围细胞吞噬和消化，并且不产⽣炎症反应。

这与类似细胞坏死的细胞死亡恰恰相反，其特征为细胞膨胀、染⾊体絮凝、膜完整性的缺失、细胞溶解和局部的炎症反应。

凋亡细胞中，在内源性核酸内切酶的作⽤下产⽣了DNA断裂⽚段，因此其细胞核中发⽣了形态学变化。

最具代表性地是，凋亡细胞的DNA被分为以180~200bp为单位长度的多聚体⽚段，这些⽚段易在琼脂糖凝胶形成梯度。

在外侧膝体核（LGN）、Fas抗体处理后的Jurkat 细胞系(急性T细胞⽩⾎病细胞系)和茴⾹霉素处理后的HL-60细胞系中，采⽤轴突切断术诱导⼤⿏脑组织的神经死亡，并在振动切⽚机上切为组织⽚段，清晰地标记出凋亡细胞。