pcr注意事项

PCR做了很多，根据论坛和自己的经验总结了一下几点，算是抛砖引玉吧，呵呵：

1）PCR实验一定要保管好试剂，防止交叉污染，尤其是ddH2O2的交叉使用，极易引起污染（惨痛的教训）！

2)NA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高压处理，常规消耗用品用后作一次性处理，避免反复使用造成污染。

3)PCR在超净台内进行，操作前后紫外灯消毒。（不一定需要）

4)超净台内设内供PCR用微量离心机、一次性手套、整套移液器和其它必须品；移液品用一次性吸头和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。

5)PCR操作应戴手套并勤于更换。

5)成套试剂，小量分装，专一保存，防止它用。配制试剂用新器具，用后作一次性处理。

6)试剂管用前先瞬时离心（10s），使液体沉于管底，减少污染手套与加样器机会。

7)最后加模板DNA（包括在石蜡油后），马上盖好，混匀，瞬时离心（10s），使水相与有机相分开。加入模板且忌喷雾污染，所有非即用管都应盖严。加模板DNA后应更换手套。

8)引物稀释时，要首先瞬时离心，以避免粉末状引物在开盖时弹出管外。

9)实验设阳性、阴性对照。