生化实验2 总糖的水解、提取和测量讲课教案

生化实验2总糖的水解、提取和测量

南京大学医学系实验报告

题目：酵母RNA的提取

姓名：彭睿学号：171230511 日期： 2019年3月29日

(一)实验目的：

掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。

(二)实验材料：

市售酵母粉、冰醋酸、无水乙醚、95%乙醇溶液、氢氧化钠溶液（0.2%）(三)实验原理：

电子天平、水浴锅、冷冻离心机、离心管、玻璃棒、抽滤瓶、砂芯漏斗、烧杯、量筒、广泛pH试纸

(四)实验原理：

各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖将3,5-二硝基水杨酸还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质深浅的程度呈一定的比例关系，在540nm 波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。

此外，多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测定所得的总糖量乘以0.9 即为实际的总糖量。

(五)实验步骤：

1.样品中总糖的水解、提取：

称取0.4913 g山芋粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入锥形瓶，并用约12ml蒸馏水冲洗，转入锥形瓶中。

加入盐酸溶液（6mol/L）约10ml，用沸水浴水解0.5h。取1-2滴用碘-碘化钾溶液检测是否已水解完全，如不显蓝色，则冷却到室温用氢氧化钠溶液中和至中性，全部转移至100ml容量瓶中。

用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液15ml，再定容至100ml。如果取出1ml总糖水解液，则含量稀释667倍。

2.葡萄糖标准曲线的制作与样品总糖的测定：

此时取9只干净的试管，如表所示进行操作。

表1：标准曲线的制作

其中，0号管为比色时的参照，1-5号管用于制作葡萄糖标准曲线，6-8号

管用于总糖水解液的测量。

(六) 实验数据：

012345678标准葡萄糖溶液/ml

00.20.40.60.81待测总糖水解液/ml 110.5蒸馏水/ml

10.80.60.40.20000.5DNS试剂/ml

222222222蒸馏水/ml

999999999葡萄糖含量/mg

00.20.40.60.81A540nm 00.0830.1940.3070.4650.5960.2840.2830.12沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却到室温。管号试剂

表2：540nm 处实验数据

图1：数据原表

图2：拟合曲线

根据计算，6、7号管的葡萄糖含量为0.516mg，8号管为0.245mg。

根据，计算得本次山芋粉的总糖含量为63.0%。

(七)实验结果与讨论：

1.在实际操作的时候，部分组获得的6-8号管显色太浅。本组调整了稀释倍数

进行测量，在初次定容后取了15ml水解液，并获得了良好的结果。

2.为什么显色时，要准确煮沸五分钟：因为反应程度不同可能影响显色深浅，

所以所有试管的加热时间要保持相同。

3.关于移液枪的使用，要注意容量在最大量程时是最准的，不同的移液枪，因

为损耗原因，可能精度不同，对于枪头液体的量和自己想要量取的量要有预估。

4.在线性预测的时候，本组一开始没有将起始点加入，加入后发现线性关系良

好，未对曲线的斜率、截距等造成影响。