抗菌药物敏感性试验及2010CLSI
抗菌药物敏感性试验(药敏试验)
B组 C组
常规和首选药物，其结果应常规报告
首选试验选择性报告。包含一些临床 上重要的、特别针对医院感染的药物 替代性和补充性药物
U组
补充性试验，仅用于治疗泌尿道感染 的抗菌药物。
药物选择
表中小框内是一组类似药物，其结果解释
和临床效力相似，不必个个试验。
“或”字表示一群相关药物，其抗菌谱和
第一、二代头孢菌素和氨基糖甙类药物体外
可能有活性但临床无效故不应报告敏感
沙门菌属的肠道外分离株应测试并报告
氯霉素和一种三代头孢菌素的敏感性
肠球菌对头孢菌素类、氨基糖甙类、磺
胺甲恶唑/甲氧苄啶和克林霉素在体外可
能有活性但临床耐药，不能报告敏感。
MRS 应 报 告 耐 受 所 有 β- 内 酰 胺 类 药 物
稀释法
定量测定抗菌药物活性
抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌 浓度（MIC） 将MIC与机体血清或体液中可获得药物浓度 相比较来确定恰当的临床疗效
MIC的对数与抑菌环直径关系 ——近似线性负相关
CLSI药物选择原则
上用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮 于生理盐水或肉汤中震荡混匀
与标准比浊管比浊，以有黑字的白纸
为背景调整其浊度相当于0.5号麦氏管。
平板接种
用无菌棉拭子蘸取菌液
在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分
用拭子涂布整个M-H培养基表面，反复
几次，每次将平板旋转60°
最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀
过低、过高会使某些药物失去效力（如氨基
糖甙类和大环内酯类）或活性可能增强（如 青霉素类）。
湿度
若使用前琼脂表面过分潮湿，应放35℃
抗菌药物敏感性试验及2010CLSI
耐药机制 None mecA
相对流行率 OX报告
一般
S
一般
R
RS
mecA（低水平表达） 少见
R*
SR
PBP改变或β-内酰胺 罕见
R*
酶的高表达（模糊的
MRSA）
葡萄球菌属:诱导性β-内酰胺酶试验
青霉素 – MIC≤0.12mg/L – 抑菌圈直径≥29mm 诱导性β-内酰胺酶试验
对于严重感染，随后分离出的菌株，实验室应进行 青霉素的MIC检测和β-内酰胺酶诱导试验
霉素诱导耐药试验阳性 ,推测此菌株对克林霉 素耐药,但在少数患者 治疗中克林霉素可能仍 有效”。
修订的建议… Re：万古霉素MIC,什么时候葡萄球菌应该被
送到一个参考实验室做进一步检测？
§金黄色葡萄球菌 ---MIC 4μg/ml—Maybe ---MIC≥8μg/ml—Yes §凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS） --- MIC≥32μg/ml—Yes
2007版 ! M100-S17 Table 2G 青霉素
敏感 ≤2 ≤0.06 ≤0.06
中介 4
耐药 8
- 0.12
0.12-1 2
≤0.06 0.12-1 2
对于三个青霉素的判断标准我们都应该解 释和报告吗？
青霉素判断标准 脑膜炎
解释/报告？ • 是的，脑脊液标本
非脑膜炎 口服青霉素V
• 是的，其他的标本，因为我们通常不 能确定该感染是否涉及脑膜
40%
20%
0%
总体
MIC ≤1
MIC=2
*到达目标：万古霉素血浆谷浓度达到15-20µg/mL；†治疗反应：患者发热、白细胞增多症状部分或完全缓解
一项单中心、前瞻性研究，对95例罹患医院MRSA感染的住院或住护理院的老年患者静脉滴注万古霉素，对临床疗效、
抗菌药物敏感性试验最新动向_2010年CLSI M100-S20主要更新内容
万方数据万方数据万方数据万方数据抗菌药物敏感性试验最新动向:2010年CLSI M100-S20主要更新内容作者：杨启文， 王辉， YANG Qi-wen， WANG Hui作者单位：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,100730刊名：中华检验医学杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE年，卷(期)：2010,33(6)被引用次数：1次1.Wong-Beringer A;Hindler J;Loeloff M Molecular correlation for the treatment outcomes in bloodstream infections caused by Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae with reduced susceptibility to ceftazidime 20022.Craig WA Pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters:rationale for antibacterial dosing of mice and men 19983.Queenan AM;Foleno B;Gownley C Effects of inoculum and beta-lactamase activity in AmpC-and extended-spectrum betalactamaso(ESBL)-producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae clinical isolates tested by using NCCLS ESBL methodology 20044.Bonnet R Growing group of extended-spectrum beta-lactamases:the CTX-M enzymes 20045.Clinical and Laboratory Standards Institute Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:Nineteenth informational supplement 20096.Clinical and laboratory Standards Institute CLSI documents M100-S20.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing;Twentieth informational supplement 20101.王辉.史红引进CLSI微生物检验标准促进实验室标准化进程[期刊论文]-中华检验医学杂志 2010(6)本文链接：/Periodical_zhyxjy201006002.aspx。
clsi-m100-s20_2010抗菌药物敏感性试验解释标准(中文)
目 录 表
20 10 年 1 月
M1 0 0 - S 20
目录（续前）
2F. 淋病奈瑟菌….........................................................................................................................….............78 2G. 肺炎链球菌………………….........……………….........................................................................…...82 2H-1.β-溶血群链球菌…………………………...................................................................……………..…86 2H-2. 草绿色群链球菌……………………….............................................................……....................….90 2I. 霍乱孤菌.........................................................….………………......................…...…............................93 2J. 脑膜炎奈瑟菌..................................................................……...........……………...…...........................94 2K 炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、鼻疽伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌/、土拉弗朗西斯菌和 布鲁氏菌.........................................................................................................................................................98 表3. 非苛养菌质控标准菌株纸片扩散法抗微生物药物敏感试验抑菌环直径的质控允许范围 （使用不加血或其他补充物的Mueller-Hinton 培养基） ....................................................................101 表3A. 纸片扩散法——苛养菌质控菌株抑菌圈直径（mm）质控允许范围..........................................103 表 3B. 纸片扩散法—质控频率参考指南...................................................................................................105 表 3C. 纸片扩散法质控缺陷解决指南......................................................................................................107 表 4. 非苛养菌 MIC 药敏试验质控——非苛养菌质控标准菌株的质控允许范围（ μg/mL），使用不 加血或其他补充物的 Mueller-Hinton 培养基（如果如果使用 Mueller-Hinton 肉汤，需要调整钙离子浓 度）...............................................................................................................................................................109 表 4E. MIC 试验——质控频率参考指南...................................................................................................111 表 4F. MIC 药敏试验质控缺陷解决指南...................................................................................................112 表 5. 制备抗微生物药物储存液的溶剂和稀释液.....................................................................................116 表 5A. 制备以活性单位表达的抗微生物药物的贮存液..........................................................................119 附录A. 关于药敏试验结果查证及细菌鉴定结果确认的建议.................................................................121 附录B.药敏试验所用质控标准菌株...........................................................................................................123
2010CLSI对肠杆菌科细菌药敏折点的修订(Final)
2010 CLSI对肠杆菌科细菌药敏折点的修订内部沟通文件沟通主信息：“更合理的折点，更加准确地提示头孢菌素的临床疗效”1. 改变三代头孢的肠杆菌科细菌药敏折点2. 取消常规ESBL确诊试验以及ESBL(+)必须报所有头孢菌素耐药的规定一、背景CLSI：Clinical and Laboratory Standards Institute, （美国）临床与实验室标准化研究所，是一个国际性、跨学科、非营利的、致力于发展操作标准的教育组织。
其前身于1967年由来自15个机构的31名临床医生和实验室学家共同组成，目标是“让我们为病人做得更好”。
时过境迁，CLSI的目标仍然是“让我们为病人做得更好”。
CLSI的主要致力于在临床和实验室检验的实践中不断提高，并在全世界进行推广新技术的运用。
临床医生在治疗重症的患者过程中，高度依赖于临床微生物的检验报告。
抗生素药敏结果的临床重要性要求这些药敏试验必须在最佳的状况下，并能够用最新的标准去检验。
CLSI中的抗菌药物敏感性试验小组委员会（Subcommittee on Antimicrobial Susceptibility testing）每年组织该领域专家和医药公司的代表等对药敏相关文件M100进行一次修订。
2010年1月，CLSI发布了《抗微生物药物敏感测试：第20版修订版》（Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility: Twentieth Informational Supplement, CLSI document M100-S20）。
国内的现状: 临床微生物室的首要任务是准确快速地检测病原微生物，同时报告正确的药敏试验，加强与临床医师的沟通与合作，提高临床疗效。
近年来，由于各种抗菌药物的大量应用，尤其是广谱及超广谱抗菌药物的应用，造成了耐药性突变菌株的大量出现（如临床大量应用碳青霉烯类抗生素导致耐碳青霉烯类的产KPC酶的铜绿假单胞菌不断增加），临床上表现为经验用药失败率增高，盲目大剂量治疗也易造成药物中毒。
药敏试验中的抗菌药物的选择和CLSI的重要改变
MIC (µg/ml) 抑菌环直径 (mm)
利耐唑胺不敏感的金黄色葡萄球菌比较罕见 0.05% (7 / 15,280)
CLSI agenda book June 2009.
耐药机制已经被鉴定 – rRNA突变以及cfr-介导耐药(这些可被质粒介导)
Mendes et al. 2008. Antimicrob Agents Chemother. 52:2244.
葡萄球菌属
MRS菌种的结果报告原则 ：除了有抗 MRSA活性的新型头孢菌素外，其他β内 酰胺类药物的结果均需报告为耐药或不 报告 mecA阴性的MRSA该怎么办呢？
– 按上述MRS菌种的结果报告原则
葡萄球菌修订建议… 万古霉素MIC=µg/ml 时应被送往参考实验室进一步证实
S. aureus金黄色葡萄球菌
≤1
≤1 ≤1 ≤4 ≤4
2
2 2 8 8
≥4
≥4 ≥4 ≥16 ≥16
肠杆菌科修订…折点（ MIC µg/ml ）
抗生素 头孢唑啉 头孢噻肟 头孢唑肟 头孢曲松 头孢他啶 氨曲南
M100-S19
耐药 ≤14 ≤14 ≤14 ≤13 ≤14 ≤15 中介 15-17 15-22 15-19 14-20 15-17 16-21 敏感 ≥18 ≥23 ≥20 ≥21 ≥18 ≥22 耐药 没有 ≤22 ≤21 ≤19 ≤17 ≤17
CLSI 对ESBL检测的建议
目的
病人治疗 进行ESBL筛选和确证实验 把头孢菌素，青霉素，氨曲 南 “S”结果改成“R” 医院感染控制 进行ESBL筛选和确证实验 把头孢菌素，青霉素，氨曲 南 “S”结果改成“R”
如果使用 旧折点
是 是 是 是
新折点
抗菌药物敏感性实验及细节耐药检测
抗菌药物敏感性实验与细节耐药性监测来源：查验医学在线2009-4-15 南网编辑2010-7-6一、需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感实验(一)纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法又称Kirby-Bauer实验，是操作最简易、利用最普遍的抗菌药物敏感性实验。
1．实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系，即抑菌圈越大，MIC越小。
2．培育基和抗菌药物纸片(1)培育基：水解酪蛋白(Mueller-Hin-ton，MH)培育基是CLSI/NCCLS采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏实验标准培育基，pH值为～，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。
琼脂厚度为4mm。
配制琼脂平板当天利用或置塑料密封袋中4℃保留，利用前应将平板置35℃孵育箱孵育，使其表面干燥。
(2)抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，吸水量为20ul的专用药敏纸片用逐片加样或浸泡方式使每片含量达到规定所示。
含药纸片密封贮存2～8℃或-20℃无霜冷冻箱内保留，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过l周。
利用前将贮存容器移至室温平衡l～2h，避免开启贮存容器时产生冷凝水。
3．细菌接种细菌接种采用直接菌落或细菌液体生长方式。
用麦氏比浊标准的菌液浓度。
校正浓度后的菌液应在15min内接种完毕。
接种步骤如下：①用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周；②平板置室温下干燥3～5min，用纸片分离器或无菌镊将含药纸片紧贴于琼脂表面；③置35℃孵育箱孵育16～18h后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素药敏感实验结果应孵育24h。
clsi m07-a9 的标准方法
CLSI M07-A9是临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）发布的标准方法之一。
该标准方法主要用于抗菌药敏感性试验，是临床微生物学领域中非常重要的一项标准。
旨在提供一个统一的、可靠的方法，以便医院实验室和临床实验室可以准确地评估细菌对抗生素的敏感性，从而指导临床医生的抗菌治疗。
下面将对CLSI M07-A9标准方法进行详细介绍。
一、概述CLSI M07-A9标准方法是抗菌药物敏感性试验（Antimicrobial Susceptibility Testing，AST）的标准之一。
该方法适用于革兰氏阳性和阴性细菌及真菌的敏感性试验。
它提供了一种标准化的操作程序，以便在不同的实验室和不同的细菌菌种之间进行可比较的敏感性分析。
二、试验流程1. 制备培养基：根据具体的试验要求，需制备适当的培养基，以供细菌的生长和试验使用。
培养基的质量和配方对试验结果有着至关重要的影响。
2. 细菌培养：接种适量的细菌菌液于培养基中，利用恒温培养箱进行培养，待细菌培养至适当浓度后方可进行下一步操作。
3. 药物敏感性试验：将不同浓度的抗生素药物加入含有细菌的培养基中，观察不同浓度的药物对细菌的抑菌效果，从而得出细菌对该药物的敏感性，通常采用克尔比法或肉汤稀释法进行测定。
4. 结果解读：根据试验结果，判断细菌对不同抗生素的敏感性，并报告相关的抗生素最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）。
三、质量控制CLSI M07-A9标准方法对试验的各个环节都有着严格的质量控制要求，以确保试验结果的准确性和可靠性。
常用的质控菌株包括金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等。
四、结果报告根据试验结果，编写标准化的报告，并按照CLSI的相关标准进行结果解读。
报告中需要包括细菌对各个抗生素的敏感性情况，以及MIC值等相关信息。
抗菌药物的敏感性试验及报告解读
明确提出在二级以上医院设立感染科与感染临床药师（第12、
13条），及临床微生物室（第14条）
6
Company name
概况和制定过程
第一章 总则
第六章 附则 第五章 法律责任
共六章 53条
第二章 组织机 构和职责
• 组织医院管理、临床、药学 、微生物检验、感染等方面 专家起草《抗菌药物临床应 用管理办法》
19
Company name
培养条件（一）
需氧菌： 35℃ ±2 ℃ ，16-18小时 嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌：20-24小时 葡萄球菌：33-35 ℃ ，OXA、MET、NAF、VAN24小时 肠球菌：VAN 24小时 溶血性链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属等：20-24小时
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Company name
操作：
无菌棉签蘸取菌液，在管壁内将多余菌液旋 转挤去后，在琼脂表面均匀涂布接种3次， 每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1 周。 室温干燥或35℃干燥5-15分钟 用纸片分配器或无菌镊子将药物纸片紧贴于 琼脂表面 纸片间距 20mm 纸片离平板内缘 15mm
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抗生素药敏试验质控
• 4月11日起征求全国意见
• 制定《抗菌药物临床应用分
第三章 抗菌药物 级管理目录》
临床应用管理
• 4月15日期征求全国意见
第四章 监督管理
7
Company name
第三章 抗菌药物临床应用管理
• 三级医院 不得超过50种，二级医院 不得超过35种 • 同一通用名称药品的品种，注射剂型和口服剂型各不得超过2种，处方组成
葡萄球菌属 Mueller-Hinton（MH）琼脂
美国CLSI抗菌药物敏感试验操作标准(2010年版)部分变更内容
ｅ ｈ ｎ ｏ ｍａ ｉ ｎ ｌ ｕ ｐ ｅ ｎｔ ｔ Ｉ ｆ ｒ ｔ ａ Ｓ ｐ ｌ ｍｅ ．ＣＬ ｄ ｃ ｍｅ ｔ ｏ ＳＩ ｏ ｕ ｎ Ｍ １ ０ Ｓ２ ０－ ０
ｂｌ ｙｏ ｆ ｕ ｕ ｎ ｉｉｏ ｓｉ ｈ ｌ ｉ —ａｖｓｏ ｏ ｐ ｉｔ ｆｅｆ ｘ ｐ ｍｐ ｉｈｂｔ ｒ ｎ ｔ ｅ ｃｉ ｃ— ｉｉｎ ｆｒａ — ｉ ｌ ｎ
［ ］ Ｖｉｅ ｏ ９ ｖｉ ｓＭ，Ｐ ｒｕ ａ Ｉ ｅｔｎ ｏ ｒ Ｒ，ｅ ａ．Ｉｏ ｉｚ — ｒ ｏｔｇｌ ，Ｂ ｔｅｃ ｕｔ ｌ １ ｓｎａｉ ｉ ｄｎ
２ ０ ０ ７，５ ６） ２ ７— １ ６ ． ９（ ：１ ４ ２ ０
ｂｒｕｏｉ ｂ ｅｌ ｉ ｅｅｓ ｒｎ ｃｉｔ ｎＰ Ｒ［ ］ ｅｃｌｓ ｙｒａ—ｍｅｒｖ ｒｅｔａ ｓｒ ｉ Ｃ Ｊ ．Ｍ ｉ ｏ ｓ ｔ ｐｏ ｃ ｂ ｒ
Ｄｒ ｇ Ｒｅ ｉｔ ２ ８ ４（ ）：７— １ ． ｕ ｓｓ ，００ ，１ １ １
２ ０ ０ ８，３１ ３） １ ８—２ ８ （ ９ ０ ．
ｇｉ ｔ ｅ ｓｌ ｈ ｌ ｎ ｅ Ｊ ．Ｖ ｃ ｎ ，２ ０ ， ４ ３ ａ ｓ ａｒ ｏ ｃａ ｅｇ ￣ ］ ａｃ ｅ ０ ６ ２ （ ７—３ ） ｎ ｏ ｌ ｉ ９：
６３ ０ ～ ６ ５ ． ４ ３ ０
［６ Ｌ ｍｏ ｓａ ａＯ，Ｂ ｓｉ １］ ｏ ｖｋ ｙ ｏ ｔ ｎＫ Ａ．Ｐ ａｔａ ａｐｉ ｔ ｎ ｎ ａｉ ａ ｒｃｉ ｌ ｐ ｌ ａｉ ｓａｄｆ ｓ ｃ ｃ ｏ ｅ —
制方 面 。
改 了头 孢 唑林 、 头孢 噻肟 、 头孢 唑 肟 、 孢 曲松 、 头 头孢
clsi药敏试验标准
clsi药敏试验标准CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）是一个专门制定临床和实验室标准的非营利组织，其制定的药敏试验标准对于临床医学和药物研发具有重要意义。
药敏试验是评估微生物对抗生素或抗真菌药物的敏感性的一种常见实验方法，其结果对于医生选择合适的治疗方案至关重要。
CLSI药敏试验标准覆盖了许多方面，包括试验的操作流程、质控要求、结果解释等。
首先，试验的操作流程需要严格遵循标准操作程序，以确保实验结果的准确性和可靠性。
在进行药敏试验时，需要注意细菌或真菌的培养条件、药物浓度的选择、试验板的布置等细节，这些都在CLSI标准中有详细规定。
其次，质控要求是保证药敏试验结果准确性的重要保障。
CLSI 标准对于质控菌株的选取、质控试验的频率、质控结果的解释等都有明确规定，实验者需要严格按照标准进行质控，以确保实验结果的可靠性。
另外，CLSI标准还对药敏试验结果的解释进行了详细说明。
在得到试验结果后，实验者需要根据标准中提供的解释标准，判断微生物对药物的敏感性或耐药性，从而为临床治疗提供参考。
需要指出的是，CLSI标准是不断更新和完善的，最新版本的标准更能反映当前医学和药学领域的最新进展。
因此，实验者在进行药敏试验时，应当使用最新版本的CLSI标准，以确保实验结果的准确性和临床应用的有效性。
总的来说，CLSI药敏试验标准对于规范药敏试验操作、保证结果准确性、指导结果解释等方面起到了重要作用。
实验者在进行药敏试验时，应当严格遵循CLSI标准，以确保实验结果的可靠性，为临床治疗提供科学依据。
同时，我们也期待CLSI在未来能够继续完善药敏试验标准，以更好地服务于临床医学和药物研发。
抗菌药物的敏感性试验
目前，我国抗菌药物的应用现状是临床无指征治疗性、预防性用药严重及选择错误的品种、剂量及疗程。
而不合理用药可导致治疗失败、不良反应增多、细菌耐药性增长迅猛、医药资源大量消耗等不良后果。
而我们应该如何为临床正确选用抗生素呢？正确的答案是，我们应该根据感染菌株的药物敏感性试验合理选用抗生素。
抗菌药物的敏感性试验就是测定抗菌药物在体外抑制病原微生物生长的效力。
目前，我科遵循美国临床实验室标准化研究所（CLSI）2010版抗微生物药物敏感性试验执行标准进行操作。
由于CLSI标准的公认程度和准确性，许多国家都采用该标准。
该标准根据不同的细菌分类（如肠杆菌科、葡萄球菌属、铜绿假单胞菌等）制定可选用的抗生素及其药敏试验的判读标准，并将它们分成四组：A组：一级试验并常规首选报告的抗微生物药物；B组：一级试验，临床使用的主要抗生素（尤其在院内感染时）有选择报告的药物；C组：补充试验，有选择报告的药物；U组：补充试验，仅用于泌尿道感染细菌的抗微生物药物。
CLSI标准所制定的三级划分制及临床意义如下：高度敏感（S）：用该种药物常用剂量治疗有效；中介（I）：仅在应用高剂量抗菌药物时才有效，或者细菌处于体内抗菌药物的浓缩部位（如尿液、胆汁等）才被抑制；耐药（R）：药物对某一细菌的MIC高于药物在血或体液中可能达到的浓度，有时细菌能产生灭活抗菌药物的酶，则不论其MIC值大小如何，均应判定该菌为耐药。
在临床实践中，我们常可以听到一些关于细菌药敏试验与临床药效不符的抱怨。
这一现象的出现，国内外的一些文献认为主要与以下几方面有关。
①与临床是否正确地获得合格的标本至为相关；我们应规范标本的取材、送检及减少送检污染部位的标本（如：痰、咽拭子等）。
②可能出现真菌等二重感染。
③CLSI药敏标准制定中的局限性。
④细菌感染的诊断是否正确。
⑤药敏试验操作不当。
⑥用药剂量不足或出现耐药菌株。
⑦一般医院的微生物实验室做细菌培养仅限于需氧非苛养菌的检测。
最新CLSI临床微生物实验室标准解读资料
CLSI 临床微生物实验室标准解读CLSI2010更新CLSI 临床微生物实验室标准解读 第三辑2010年CLSI 药敏试验的更新中国医学科学院北京协和医学院 杨启文 王辉美国临床与实验室标准化研究所(The Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)是一个国际性、跨学科、非营利的、致力于发展操作标准的教育组织。
其抗菌药物敏感性试验小组委员会(Subcommittee on Antimicrobial Susceptibility testing)每年组织该领域专家和药厂代表等对药敏相关文件M100进行一次修订。
目前我国的临床微生物实验室均以CLSI 文件作为药敏指导文件进行试验操作和报告，本文将CLSI M100-S20(2010年)的主要更新点总结如下：一、主要格式的更新：下表显示了一些在M100-S19(2009年)中位于最后的附录在M100-S20(2010年)文件中新的命名、编号和位置。
M100-S19中的名称 M100-S20名称/位置附录A(ESBLs 的筛选和确证试验) 补充性表格2A-S1/表2A 的最后附录G(碳氰酶烯酶的筛选和确证试验) 补充性表格2A-S2/表2A 的最后附录B(金黄色葡萄球菌的筛选试验) 补充性表格2C-S3/表2C 的最后附录C(凝固酶阴性葡萄球菌的筛选试验) 补充性表格2C-S4/表2C 的最后附录D(肠球菌的筛选试验) 补充性表格2D-S5/表2D 的最后附录E(药敏结果的确证建议)附录A/ M100-S20的最后，术语表前附录F(药敏试验的质控菌株) 附录B/ M100-S20的最后，术语表前(1) 修订了“非敏感”的定义：M100-S20中对“非敏感”的定义是由于耐药菌株缺失或稀少因而仅确立了敏感性解释标准。
当药物对菌株的MIC 高于或抑菌圈直径低于此折点时需报告为非敏感。
非敏感并不意味着菌株携带某种耐药机制。
CLSI临床微生物实验室标准解读
CLSI临床微生物实验室标准解读CLSI2010更新CLSI 临床微生物实验室标准解读第三辑2010年CLSI药敏试验的更新中国医学科学院北京协和医学院杨启文王辉美国临床与实验室标准化研究所（The Clinical and Laboratory Standards Institute， CLSI）是一个国际性、跨学科、非营利的、致力于发展操作标准的教育组织.其抗菌药物敏感性试验小组委员会(Subcommittee on Antimicrobial Susceptibility testing）每年组织该领域专家和药厂代表等对药敏相关文件M100进行一次修订。
目前我国的临床微生物实验室均以CLSI文件作为药敏指导文件进行试验操作和报告，本文将CLSI M100-S20(2010年）的主要更新点总结如下：一、主要格式的更新：下表显示了一些在M100-S19（2009年）中位于最后的附录在M100-S20（2010年）文件中新的命名、编号和位置。
（1）修订了“非敏感”的定义：M100—S20中对“非敏感”的定义是由于耐药菌株缺失或稀少因而仅确立了敏感性解释标准。
当药物对菌株的MIC高于或抑菌圈直径低于此折点时需报告为非敏感.非敏感并不意味着菌株携带某种耐药机制。
有可能MIC高于敏感折点的菌株缺乏耐药机制并且属于野生菌株，只不过其出现于敏感性折点确立后.对于“非敏感”的菌株，菌株鉴定和药敏结果需被再次确认.(2）对“使用头孢噻吩的折点仅用于预测对其他头孢菌素的敏感性”增加注释：在M100—S20中，头孢噻吩的折点仅可用于预测菌株对口服药物，包括孢羟氨苄，头孢泊肟，头孢氨苄和氯碳头孢的敏感性.旧的数据认为头孢噻吩的结果可以预测某些其他头孢菌素的敏感性可能仍然正确，但目前的数据尚不能支持此论点。
（3）在M100—S20的第26页增加第VII部分来描述筛选试验并总结他们的局限性以及对应的确证试验。
该部分总结了肠杆菌科菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌和肺炎链球菌的耐药表型初筛试验和对应的确证试验。
抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感试验
在体外测定药物抑制或杀死细菌能力Βιβλιοθήκη 的试验称为抗菌药物敏感性试验
（Antimicrobial Susceptibility Test），
简称药敏试验（AST）。
敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌 的MIC 5倍以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓 度
敏感性分类（2）
中介
(Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗
反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 加大用药剂量可能有效
(尿-FQ)
缓冲区：防止操作的系统误差造成重
大结果的判定错误
药敏试验
MIC：在与微生物生长速率有关的特定 时间间隔内，通常是18～24小时，能 够抑制被测菌生长的最低药物浓度。
对倍稀释的优点：
操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助 临床医生选择合适的药物，避免产生或加 重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌 握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防 耐药菌感染的发生和流行。
抗菌药物敏感性试验
β溶血菌对万古霉素。
抗菌药物敏感性试验
第7页
5.自标本中分离出各种细菌，不能确定为致病菌各 种细菌，分离菌可能是来自环境或人体正常菌群污 染时，通常无须进行药敏试验。
6.分离自正常寄生部位条件致病菌和非致病菌，不 能说明其与污染关系，不需要进行药敏试验。
抗菌药物敏感性试验
第8页
体外药敏Байду номын сангаас验选药标准
药敏试验中抗菌药品选择要遵照合理科学标准， 含有以下几个方面标准：1.依据抗菌药品抗菌谱， 每种抗菌药品都有一定抗菌谱，药品类型不一样， 其抗菌范围也不一样。2.依据细菌种属：抗菌药 品对不一样种属细菌作用效果不一样，所以应有 针对性地选择抗菌药品进行敏感性试验，标准上 可依据CLSI推荐抗菌药品选择方法选择药品进 行试验，如肠杆菌科，葡萄球菌，假单胞菌。 （见表1）
2.从同一患者体中同部位连续分离到相同菌株， 为检测它们是否已经发展为耐药，应重新进行 药敏试验。尤其是在第四代头孢菌素治疗肠杆 菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷氏菌属，全部抗菌 药品治疗铜绿假单胞属，喹诺酮类治疗葡萄球 菌属3-4天后，起初对某种抗菌药品敏感菌株易 发展位耐药。
抗菌药物敏感性试验
第6页
3.进行细菌耐药性调查和抗菌药品疗效时 需要进行药敏试验。
在药品生理部位含有临床效力（如尿 液中喹诺酮类和β-内酰胺类）。另外 中介还能作为缓冲区，以预防微小， 未受控制技术原因造成较大错误结果 ，尤其是针对那些药品毒性范围靠近 疗效范围药品。
抗菌药物敏感性试验
第5页
药敏试验普通标准
1.药敏试验只在被认为是引发感染细菌纯培养物 上进行，当从合格临床标本中分离出任何感染 可疑病原菌，又不能从该菌种属特征可靠地推 测其反抗菌药品敏感性时，则需要进行药敏试 验。
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哪些需要做MIC
肺炎链球菌 苯唑西林纸片法直径≤19mm,需 要明确受试菌对青霉素的敏感性，必须做青 霉素的E-试验
革兰阳性球菌 万古霉素不敏感时（中介或 耐药），必须做万古霉素的E-试验确认受试 菌对万古霉素的敏感性（包括替考拉宁、利 奈唑胺等）
草绿色链球菌 对青霉素、氨苄西林 纸片法药敏结果不可靠，必须做上述 两药的E-test
镜下才能观察到的细小菌落应忽略
正确阅读抑菌圈内的“霾”现象
变形杆菌(迁移生长)以及磺胺类药物的纸片法药敏 注 意要读完全抑制的抑菌圈，对“霾”生长不予理会
克林霉素对葡萄球菌的抑菌圈内如有薄雾状菌苔应报告 细菌对克林霉素耐药,不管其是否显示 “D”抑菌圈
需在透射光（Transmitted light）下阅读万古霉素、 利奈唑胺和苯唑西林的抑菌圈，遇不敏感的结果需用稀 释法测定MIC法确证
E-Test
细菌报告应注意的问题
有无细菌：苛养菌、难培养细菌 正常菌群/病原菌:病史、病人体征、感染部位 药敏结果报告：耐药菌株的提示或修改
正确阅读纸片法结果
完全抑制的抑菌圈直径，包括纸片的直 径
不反光的黑色背景、反射光下阅读结果 抑菌圈的界限应该是以肉眼观察没有明
显的可见细菌生长区域 在抑菌圈边缘微弱生长的、仅能在放大
2010CLSI主要更新内容
主要格式的更新 关于药敏质控的更新（新增Doripenem等质控范围） 关于药敏试验操作的更新 脆弱拟杆菌的累积药敏报告 术语表的更新（新的抗生素亚组-抗MRSA活性的头孢菌素）
肠杆菌科新旧折点(MIC
ug/l）
Agent
头孢唑 啉 头孢噻 肟 头孢唑 肟 头孢曲 松 头孢他 啶 氨曲南
100% 80%
到达目标*
未到目标
P=0.02
85%
62%
60%
治疗反应 †(%)
40%
20%
0%
总体
MIC ≤1
MIC=2
*到达目标：万古霉素血浆谷浓度达到15-20µg/mL；†治疗反应：患者发热、白细胞增多症状部分或完全缓解
一项单中心、前瞻性研究，对95例罹患医院MRSA感染的住院或住护理院的老年患者静脉滴注万古霉素，对临床疗效、死
CLSI M100-S19
S
I
≤8 16
≤ 8 16-32
≤8 16-32
≤ 8 16-32
≤ 8 16
≤ 8 16
R ≥32 ≥64 ≥64 ≥64 ≥32 ≥32
CLSI M100-S20
S
I
≤1
2
≤1
2
≤1
2
≤1
2
≤4
8
≤4
8
R ≥4 ≥4 ≥4 ≥4 ≥16 ≥16
肠杆菌科新旧折点(纸片扩
0.12- 2 1
对于三个青霉素的判断标准我们都应 该解释和报告吗？
青霉素判断标准
解释/报告？
脑膜炎
• 是的，脑脊液标本
非脑膜炎 口服青霉素V
• 是的，其他的标本，因为我们通 常不能确定该感染是否涉及脑膜
• 可能不需要，如果你们实验室不 用口服青霉素（阿莫西林经常被 用做口服青霉素的首选）
不可能出现的药敏结果
E-test试验结果阅读
忽略溶血，读取生长完全 被抑制处
MIC 0.032ug/ml
杀菌型药物如氨基糖苷类 产生“干脆利落”椭圆球
MIC 0.064ug/ml
试条两边产生不同的交界 点，读取较高数值侧的 MIC。如果两侧差＞1个稀 释度，则须重复试验。
MIC 0.5ug/ml
忽略变形杆菌的迁延现 象，MIC万古霉素 纸片法的分辨率低
Clinical Infectious Diseases 2007; 44:1536–42
万古霉素的MIC方法为常规药敏试验的 方法
2009
2008
2009年取消了万古霉素对葡萄球菌纸片法 药敏
增加万古霉素剂量不能改善临床
疗效
大剂量万古霉素治疗医院获得性MRSA感染， MIC=2µg/mL仍导致高 治疗失败率
药敏试验及2010年CLSI更新
华中科技大学同济医院
朱旭慧
细菌耐药性变迁—G+
金葡菌 MRSA VISA VRSA CA-MRSA 青霉素不敏感肺炎链球菌 PISP PRSP 耐万古肠球菌 VRE（vanA vanB vanC）
细菌耐药性变迁—G-
肠杆菌科细菌 大肠、肺克、奇异变形杆菌产ESBLs，AmpC酶等 大肠埃希菌－耐FQ 耐第三代头孢、碳青霉烯类革兰阴性杆菌 多重耐药及泛耐药菌－不动杆菌属、绿脓、肠杆菌科细菌中的某些种
细菌药敏试验的重要性
细菌耐药性仍呈增加趋势 加强对耐药菌的检测、耐药菌带菌者
的筛查和耐药机制研究 正确合理选用抗菌药和控制耐药菌感
染
正确的药敏试验及 报告非常重要！
如何进行药物敏感性试验？
纸片扩散法 Kirby-baure(K-B)法）
稀释法 试管稀释法（肉汤稀释法 平板稀释法（琼脂稀释法）
散法，mm)
Agent CLSI M100-S19
S
I
头孢唑林 ≥ 18 15-17 *
头孢噻肟 ≥ 23 15-22
头孢唑肟 ≥ 20 15-19
同一株细菌不可能出现的矛盾的药敏结果 金葡菌：青霉素S，苯唑西林R；万古霉素R 肠球菌：万古霉素S，替考拉宁R 肠杆菌科细菌：第三代头孢菌素R，第二、第一代S
CLSI附录E（Appendix E)指出的少见或罕见的结果 如遇到上述菌株必须重新鉴定细菌和药敏！
2010CLSI主要更新内容
肠杆菌科相关的更新 葡萄球菌属相关的更新 其他菌种相关的更新 表1和表2介绍内容中的更新
肺炎链球菌对青霉素药敏试验的判断 标准 (mcg/ml)
2008版！ M100-S18 Table 2G 青霉素（非脑膜炎） 青霉素（脑膜炎） 青霉素（口服青霉素 V）
2007版 ! M100-S17 Table 2G 青霉素
敏感 ≤2 ≤0.06 ≤0.06
≤0.06
中介 耐药
4 8 - 0.12 0.12- 2 1
亡率、肾毒性进行评价
Hidayat LK et al. Arch Int Med. 2006;166:2138-2144.
耐青霉素肺炎链球菌的检测
苯唑西林：1ug/片 抑菌圈直径≥20mm为青霉素敏感株
（ MIC≤0.06ug/ml ） 抑菌圈直径≤19mm可能为青霉素耐药、
中敏或敏感株，必须进行青霉素MIC测定。