免疫细胞的分离技术PPT幻灯片

2020/10/4
免疫细胞的分离
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三、免疫细胞亚群的分离 —免疫磁珠分离法
❖ 1. 直接法：
抗细胞表面分子抗体 +磁性微球 免疫磁珠+细胞悬液 与免疫磁珠结合的细 胞
❖ 2. 间接法：
第二抗体+磁性微粒 第一抗体+细胞
特定细胞 13
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免疫磁珠法分选装置
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三、免疫细胞亚群的分离 —流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）
FCM将免疫荧光技术应用于流式细胞仪，对单个细胞的表面标 志（抗原或受体）进行快速、精确的分析和自动检测，并将 不同类型的细胞分选收集。
原理：细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细
胞排成单行，逐个流经检测区。当细胞从流动室喷 嘴处流出时，超声震动液流，使液流段裂成一连串 的均匀小滴，每个小滴内最多含一个细胞，细胞经 激光束照射产生荧光和散射光，由光电倍增管接收， 转换成脉冲信号，数据经电脑处理，分辨细胞类型。
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免疫细胞的分离
❖ 人外周血单个核细胞的分离 ❖ 淋巴细胞的分离 ❖ 免疫细胞亚群的分离
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细胞分离原理
❖ 细胞的大小和比重 ❖ 细胞表面标志 ❖ 细胞黏附于各种物质表面的特性
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一、人外周血单个核细胞的分离 ——Ficoll分层离心法
人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC): Monocyte、Lymphocyte。
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三、免疫细胞亚群的分离
❖免疫磁珠分离法 ❖流式细胞术
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三、免疫细胞亚群的分离 —免疫磁珠分离法
原理：将抗体交联于磁珠表面形成免疫磁珠
（Immunomagnetic bead，IMB），免疫磁 珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞 相连， 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性 分离的目的。
Ficoll分层液：蔗糖聚合物+泛影葡胺，密度1.077+0.001g/L。
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二、淋巴细胞的分离
❖ 尼龙棉柱法 ❖ E花环分离法 ❖ 补体细胞毒法免疫荧光
法
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二、淋巴细胞的分离
——尼龙棉柱法
原理：B细胞和单核细胞具有易黏附的特性，
将淋巴细胞悬液加至尼龙纤维柱上，37 ℃作 用1~2h后，洗脱的为非黏附性的T细胞。
谢谢！
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流式细胞仪工作原理
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流式细胞仪
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免疫细胞的分离
❖ 人外周血单个核细胞的分离——Ficoll分层离 心法
❖ 淋巴细胞的分离——尼龙棉柱法、E花环 分离法、补体细胞毒法免疫荧光法
❖ 免疫细胞亚群的分离——免疫磁珠分离法、 流式细胞术
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原理：血液中各细胞成分的比重不同，经离心
沉淀，即可在分层液与血浆之间获得比较纯的 单个核细胞，其中淋巴细胞占90%以上。
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不同细胞密度不同 红细胞和多形核白细胞 1.092
单个核细胞 1.070 分层液 1.077
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一、人外周血单个核细胞的分离
——Ficoll分层离心法
PBMC
B细胞 单核细胞
尼龙纤 维棉柱
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T细胞
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二、淋巴细胞的分离
— E花环分离法（纯化T细胞） 原理
＊成熟T细胞表面有绵羊红细胞受体（E受体，CD2分 子），可和SRBC形成E花环，B细胞则无。
＊ E花环比重大，沉淀，经分离液分离来。 ＊ E花环周围的绵羊RBC可 用低渗法除去。
免疫细胞的分离
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免疫细胞
❖ 1、概念
直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞。
❖ 2、分类
＊单核吞噬细胞系统：单核细胞 / 巨噬细胞 树突状细胞（DCs)
＊淋巴细胞系统：T 淋巴细胞 （Th / Tc) B 淋巴细胞 NK 细胞
＊粒细胞系统: 中性粒细胞 噬酸性粒细胞 噬碱性粒细胞