实验一 细胞形态结构的显微镜观察

生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
大连理工大学
环境与生命学院
显微镜的成像的一般原理
显微镜的放大作用是由物 镜和目镜共同完成的。 镜和目镜共同完成的。标本经 物镜放大后， 物镜放大后，在目镜的焦平面 上形成一个倒立的实像， 上形成一个倒立的实像，再经 目镜的进一步放大形成一个虚 像，被人的眼睛所观察到。一 被人的眼睛所观察到。 般光学显微镜最大分辨率为 0.2µ m。 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
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实验一 细胞形态结构的 显微镜观察
指导教师： 指导教师：唐颖
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大连理工大学 1.实验目的 1.实验目的
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• 熟悉显微镜的工作原理及使用方法。 熟悉显微镜的工作原理及使用方法。 • 了解显微镜下细胞和细胞器形态结构。 了解显微镜下细胞和细胞器形态结构。 • 初步掌握临时制片的方法。 初步掌握临时制片的方法。
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可滴加碘液观察马铃薯块茎细胞。 可滴加碘液观察马铃薯块茎细胞。 观察与绘图。 观察与绘图。 绘制芹菜茎横切及自制的任一植物细胞标本的形态结构。 绘制芹菜茎横切及自制的任一植物细胞标本的形态结构。
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5.实验结果 5.实验结果
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• 除了观察细胞的一般结构，还应注意： 除了观察细胞的一般结构，还应注意： • 马铃薯块茎细胞：注意淀粉粒观察； 马铃薯块茎细胞：注意淀粉粒观察； • 番茄注意有色体的观察； 番茄注意有色体的观察； • 菠菜注意叶绿体、气孔的观察； 菠菜注意叶绿体、气孔的观察； • 芹菜横切可观察到维管束等结构。 芹菜横切可观察到维管束等结构。
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3.实验材料、 3.实验材料、用品 实验材料
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实验材料：马铃薯块茎、番茄、芹菜茎、 实验材料：马铃薯块茎、番茄、芹菜茎、菠菜及一些 生物标本的永久涂片、切片等。 生物标本的永久涂片、切片等。
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用品： 用品： ①仪器：光学显微镜。 仪器：光学显微镜。 ②试剂：碘液。 试剂：碘液。 ③其他 载玻片、盖玻片、吸管、镊子，吸水纸，培养皿， 载玻片、盖玻片、吸管、镊子，吸水纸，培养皿， 擦镜纸、双面刀片。 擦镜纸、双面刀片。 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
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2.2 显微镜的工作原理及使用方法
显微镜的构造
1. 镜座 2. 镜柱 3. 倾斜关节 4. 镜臂 5. 粗调节轮 6. 细调节轮 7 镜筒 8. 接目镜 9. 转换盘 10. 油接物镜 11. 低倍接物镜 12. 高倍接物镜 13. 载物台 14. 光圈盘 15. 压夹 16. 反光镜
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2.3 光学显微镜标本的制备
• 临时装片法： 临时装片法： 涂片法 铺片法 压片法 整装片法等 • 徒手切片法： 徒手切片法：
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加盖破片的正确方法 1.载破片 2. 盖玻片 3.镊子 4. 切片 5. 水滴 1.载破片 3.镊子
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7.思考题 7.思考题
制作切片标本及显微镜观察时的注意事项有哪些？ 制作切片标本及显微镜观察时的注意事项有哪些？
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显微镜的类型
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光学显微镜的使用方法
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1） 观察前的准备：调节光亮度调节钮、调节虹彩光圈的大小，使视野内的光线均 观察前的准备：调节光亮度调节钮、调节虹彩光圈的大小， 匀、亮度适宜。 亮度适宜。 2） 显微观察： 显微观察： ①低倍镜观察：调焦时只应降载物台，以免一时的误操作而损坏镜头；双眼同 低倍镜观察：调焦时只应降载物台，以免一时的误操作而损坏镜头； 时睁开观察 。 ②高倍镜观察 ③油浸镜观察 3） 显微镜的维护：用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净 显微镜的维护：用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹， 的擦镜纸擦去残留的二甲苯 。 将各部分还原，将物镜转成“八”字形，同时把聚光镜降下，以免物镜和聚光 将各部分还原，将物镜转成“ 字形，同时把聚光镜降下， 镜发生碰撞危险。 镜发生碰撞危险。
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通常把在光镜下所见到的结构称为显微 结构(microscopic structure)， 结构(microscopic structure)，电镜下所见到的 微细结构则被称为亚显微结构(submicroscopic 微细结构则被称为亚显微结构(submicroscopic structure)或超微结构 structure)或超微结构(ultramicroscopic 或超微结构(ultramicroscopic structure) 。
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6.注意事项 6.注意事项
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• 注意教师强调的显微镜使用中的注意事项，保护 注意教师强调的显微镜使用中的注意事项， 仪器。 仪器。 • 观察中除了对细胞基本形态结构的观察外，还要 观察中除了对细胞基本形态结构的观察外， 注重这些新鲜材料的制作标本的各自不同特点。 注重这些新鲜材料的制作标本的各自不同特点。 • 样品制备时，应防止产生气泡。 样品制备时，应防止产生气泡。
切片制标本示意图
徒手切片时最重要的是切下一小片平而薄的组织，而并不要 徒手切片时最重要的是切下一小片平而薄的组织， 求切下一个完整的切片。 求切下一个完整的切片。 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
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2.4 光学显微镜标本染色
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• 苏木精(hematoxylin)是染细胞核的优秀染料。 苏木精(hematoxylin)是染细胞核的优秀染料。 (hematoxylin)是染细胞核的优秀染料 • 伊红(eosin)是细胞质染料。 伊红(eosin)是细胞质染料。 (eosin)是细胞质染料 • Giemsa是一种复合染料，含有天青、伊红等， Giemsa是一种复合染料，含有天青、伊红等， 是一种复合染料 适用于多种细胞的染色质（ 适用于多种细胞的染色质（体）染色。 染色。
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大连理工大学 2.实验原理 2.实验原理
• 细胞的一般结构
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• 显微镜的工作原理及使用方法 • 光学显微镜标本的制备 • 光学显微镜标本染色
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2.1 细胞的基本形态
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动物细胞
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4.实验步骤 4.实验步骤
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通过观察一些生物标本的永久涂片、切片等熟悉显微镜的使用。 通过观察一些生物标本的永久涂片、切片ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ熟悉显微镜的使用。 利用徒手切片、临时装片等方法制作马铃薯块茎、 利用徒手切片、临时装片等方法制作马铃薯块茎、番茄果肉及 表皮、菠菜叶片细胞及芹菜茎横切的标本。 表皮、菠菜叶片细胞及芹菜茎横切的标本。