中药复方化学研究思路与实践

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• 首先，通过对血清中存在的复方化学成分的 研究，追踪其来源。 • 其次，设计最佳提取分离方案，对复方或相 应单味中药进行定向提取分离。 • 再次，将分离出的各化合物，参考它们在血 清中的含量、配比和复方中药剂量，从动物 的整体行为到细胞水平进行药理实验评价， 筛选研究复方有效成分。 • 最后，以有效成分为指标，研究复方作用机 理和配伍规律。
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• 中药复方研究 ——中药现代化研究的一项重要内容
中药复方药效药理研究（较多） 中药复方质量控制方法研究（较多） 中药复方药效物质基础研究（中药复方化学研究） （较少）
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复方中的化学成分是中药发挥药效作 用的物质基础。
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四、中药复方化学研究实践
• 近年来，我们课题组在中药复方化学研究方面进 行了大胆而有益的尝试。为建立以现代化学和药 理学为基础，能阐明中药复方有效部位（群）组 成，有效成分（群）结构、药效及机理的方法， 进行了大量的实验与探索。 • 通过实践，形成了方-证（病）对应，整方筛选中 药复方有效物质基础的总体思路，以及以中药复 方有效物质为基础研制创新药物的方法和模式。
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HPLC、GC、 CE、 MS、 MS/MS、免疫亲 和萃取-HPLCISI-MS-MS…
色谱及联用技术
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复 方 化 学 成 分
色谱数据库
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信息 提取 加工 综合
质谱数据库
光谱数据库
指 纹 和 智 能 统 一 信 息 库
生物技术
活性筛选与化学分离紧密结 合，以药效为指标，追踪分离 复方有效部位与有效成分。
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分析其质和量的变化与药 效的关系，在一定程度上 阐明复方组方的配伍规则 及疗效机制
根据临床疗 效建立与某 一病症相对 应的药理模 型
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研究目的
研究现状
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研究成果
中药复方化学
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研究思路
研究实践
结 束 语
一、中药复方化学研究目的
药理活性 作用机理
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化 学 和 药 理 学 药 效 物 质 基 础 （ 有 效 部 位 和 有 效 成 分 ）
构效关系
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开 发 研 制 创 新 药 物
中药复方化学研究思路与实践
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刘 斌 北京中医药大学中药学院
2007.07
• 中药复方
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中医治病的主要临床应用形式 中医辩证论治理论的具体体现 遵循“君臣佐使”的组方原则 体现“理法方药”的治疗特色 涵盖了药味配伍的精妙 囊括了剂量组合的玄机
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选择目标处方
核定标准处方并确认标准汤剂的药效
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基 本 程 序
建立多指标活性筛选体系对目标成分进行系统评估
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追踪分离目标活性成分并确定其化学结构
探讨复方药效物质基础及其作用机理
阐明复方配伍规律
研究思路（二）
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在煎煮过程 中发生了人 参皂苷的水 解转化，原 来在单味药 中属微量成 分的Rg3和 Rh1在复方中 成为主要成 分。
枳术丸
• 采用GC/MS法测定了制备过程中苍术酮、苍术内 酯、羟基苍术内酯和脱水羟基苍术内酯等4种有 效成分的含量动态变化。 • 结果发现在炮制时白术中的苍术酮可氧化生成苍 术内酯和羟基苍术内酯，而在与枳实组方时苍术 内酯和羟基苍术内酯又可还原成苍术酮。 • 说明组方和制剂工艺可以对复方中的有效成分产 生质和量的双重影响，使之成为不同于单味药的 新体系，产生特定的治疗作用。
四 物 汤
阿 魏 酸
合煎液含量最高
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甘草酸与 麻黄碱产 生沉淀
合煎液含量最低
泻心汤类方
复方中同时含有大黄或甘草时，煎 液中小百度文库碱的强烈苦味消失，不含 大黄或甘草的煎液仍有强烈的苦味
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原因
• 小檗碱与大黄鞣质、甘草酸结合， 生成了难溶性沉淀物。 • 甘草酸与小檗碱产生沉淀导致黄连 抑菌活性降低以至丧失。
四逆汤
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干姜 附 子 甘草
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含量升高
乌头碱 含量降低
生脉散
比较 人参总皂苷 合煎液 低 高 高
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人参皂苷Rg3 人参皂苷Rh1 血流动力学 对心肌作用 临床疗效 ＋＋ ＋＋ ＋＋
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分煎液 高 低 低 ＋ ＋ ＋
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白头翁汤
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上述成分与单味药化学成分基本一致。
生脉散
人参、麦冬、五味子
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水煎剂中发现并分离鉴定了 在煎煮过程中产生的新成分5羟甲基-2-糠醛，并探讨了复方 化学成分动态变化与药效之间 的关系。
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3. 复方有效部位和有效成分筛选
配伍规律 处方优化
促 进 和 实 现 中 药 现 代 化
制剂工艺 质量标准
二、中药复方化学研究现状
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1. 复方主要指标性成分定性定量 2. 复方化学成分提取、分离和鉴定 3. 复方有效部位和有效成分筛选
1. 复方主要指标性成分定性定量
拆 方 分 析 方 法
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• 第三，对有效部位、有效成分进行药理研究， 阐明其作用机制。 • 第四，建立完善的有效部位质量控制方法： “多特征有效指标定量”加“指纹图谱定性”。
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• 首先，按照传统用药方式，将中药复方视 为一个有机整体进行有效物质基础研究。 • 第二，结合主要药效考察，筛选确定复方 有效部位和有效成分。 中药复方虽有多方面的药效作用，但在探 讨其物质基础时，不能面面俱到，而应有 所侧重。故选择的活性筛选指标，不宜过 多和分散，而应该与复方疗效一致，目标 明确，重点突出。
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研究思路（一）
• 首先，视中药复方为一有机整体； • 第二，药理学或生物活性指标与临床主要治 疗作用吻合； • 第三，物质分离与活性筛选同步进行，采用 多种活性筛选指标进行评估，确定目标活性 成分。 • 第四，探讨活性成分在复方及其组成的单味 药中的分布和含量，阐明各单味中药对复方 的贡献大小。 • 第五，在等剂量条件下进行目标活性成分、 单味中药以及复方的药效学对比，探讨复方 配伍规律和优化配方。
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研究方法
在中药复方化学研究技术与方法 上，陈耀祖认为中药复方化学研 究应重视实验方法学研究。如果 在方法学上没有突破，则很难达 到预期目标。
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• 色谱及其联用技术 是攻克中药复杂体系中分离分析 问题的最有力手段。采用以液相 色谱为主的各种色谱手段，配合 质谱和各种光谱的综合分析，建 立中药复方识别指纹和智能统一 信息数据库十分重要。
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单 味 药 研 究 概 况 定 性 定 量 指 标 分 离 分 析 技 术
主 要 有 效 成 分 或 指 标 性 成 分
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主要有效成分 或指标性成分 质和量的变化
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配伍规律 制备工艺 质量标准
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小 青 龙 汤 单 煎 、 分 煎 、 合 煎 麻 黄 碱
中药复方化学研究应严格按照中药传统 用药方式，重点对其水煎剂进行全面系 统研究。
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运用能确切反映 该复方疗效的动 物模型，进行活 性跟踪和筛选。
由于复方有效成分的多靶性，用单一 动物模型不能完全反映复方疗效，应 采用多个动物模型进行跟踪筛选，以 保证最大限度地反映复方的全面疗 效，分离鉴定出复方应用过程中全部 的有效成分。
进行中药复方化学研究，在阐明中医 的方药理论，揭示中药的配伍规律和作用 机制，优化制剂工艺，制定质量控制标 准，实现中药现代化并走向国际市场等方 面均具有重要意义。
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加强中药复方化学研究，并以此为基 础，进行创新药物的开发研制，是摆在我 们面前的一项重要而紧迫的任务。
内容提要
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六味地黄汤
环磷酰胺 处理小鼠 免 疫 调 节 活 性 成 分
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六 味 地 黄 汤 动物模型 评价指标 抗体生成反应
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酸 性 多 糖
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相对分子量在 5000~40000 之间
示例
• 十全大补汤 追踪分离得到具有促进细胞增殖反应 的酸性多糖。
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复 方 水 煎 剂 有 效 部 位 HPLC 指纹图谱 定性分析
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有 效 成 分
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根据有效成分在复方 单味药中的含量进行 配比，在动物模型上 进行实验，并和复方 药理实验结果比较， 确定该有效成分是否 全面反映复方的药效。
定量分析
研究思路（三）
－－逆向思维方法
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• 用生物活性筛选手段（如有荧光标志化合物的 受体）直接从库中“钓”出有活性的化合物； • 采用多维色谱差异显示技术、基因芯片技术和 蛋白质组相关分析技术研究中药复方对细胞基 因表达谱和蛋白质表达谱的影响；将中药复方 多组分、多靶点、多途径作用特点与基因、蛋 白表达关联起来，通过比较各自不同的表达差 异谱、表达的器官特异性及表达水平，阐明复 方药效物质基础及配伍规律。
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多 少
将中药复方作为一个整体，以药 效为指标，对全方进行系统分 离，探讨复方产生某种药理活性 的物质基础的研究
三、中药复方化学研究思路
关于中药复方化学研究，无论在研究思 路上还是在研究技术与方法上，仍处于 探索阶段。
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确定一种 或多种药 效作用的 观测与评 价指标
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对复方及 其各种提 取分离部 位进行活 性追踪 确定复方 产生某种 药理作用 的有效部 位或有效 成分
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目 前 尚 处 于 起 步 和 探 索 阶 段 此 项 工 作 难 度 大 、 涉 及 面 广
示例
• 排脓散 提取分离和活性追踪结果显示排脓散对角叉菜 胶所致水肿形成的抑制作用，系枳实中的柑桔 苷、新橙皮苷和芍药中的芍药苷等协同作用的 结果。 • 二妙散 以2,4,6-三硝基氯苯所致小鼠迟发性变态反应 为指标，筛选确定其免疫抑制作用的有效部位 是总生物碱类。
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植物化学
化 学 方 法
色 谱 技 术
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提取分离 检识鉴定
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复 方 化 学 成 分
该方法有助于了解中药复方的化学物质基础，通 过与单味药成分的比较，也有可能发现复方配伍 后产生的新化合物等。
示例
四君子汤 芍药甘草汤 苍术醚、苍术内酯、 羟基苍术内酯、脱水羟基苍术内酯 苯甲酸、甘草苷、芍药苷、甘草酸 芒柄花素、异甘草苷元、甘草苷 元、4’，7－二羟基黄酮、芒柄花 苷、没食子酸、异甘草苷 巴马汀、小檗碱、药根碱、七叶内酯、 秦皮苷、七叶苷、白头翁皂苷A3、 白头翁皂苷B、白头翁皂苷B4、 黄柏内酯、liriodendrin
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• 小柴胡汤 分离获得具有增强NK细胞活性的酸性 多糖，分子量1.2×105，其组成单糖 摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：甘露糖： 半乳糖：葡萄糖：半乳糖醛酸=1：17： 3：21：100：87。
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中药复方化学研究现状
以复方中某个或某些药味的有 效成分或指标性成分为指标的 定性与定量分析研究
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白头翁汤
白头翁、黄连、黄柏、秦皮
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• 汤剂中小檗碱、七叶树碱、七叶树内 酯含量较单味药降低。 • 黄连与方中各味药配伍煎煮，均会产 生含小檗碱的沉淀。
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2. 复方化学成分提取、分离和鉴定
中 药 复 方 （ 整 体 ）