洁净室沉降菌检测标准操作规程
沉降菌检验标准操作规程
01.0 目的01.1 阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0 适用范围02.1 适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0 人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0 内容04.1 术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2 测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3 监测周期：A级洁每次室验做监控， B 级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4 测试方法：04.4.1 使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35 ℃恒温培养箱中培养72 小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2- 8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2 测试时间：（1）对单向流，如 A 级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10 分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
洁净区沉降菌监测标准操作规程
洁净区沉降菌监测标准操作规程1目的：制定洁净区（室）沉降菌监测操作规程。
2范围：洁净区（室）沉降菌的监测。
3职责：QC员、QA员、QC主任、品质保证部经理、车间主任及相关人员对本SOP的实施负责4 程序：4.1 QA室根据洁净区（室）的验证结果，制定洁净区（室）的日常监测计划，依计划和生产需要填写洁净区（室）环境监测通知（以下简称通知），经品质保证部经理批准后，下发QC室和生产车间。
4.2 QC主任接通知后，与检验员、车间讨论确定具体监测时间，安排好监测工作，确保监测工作如期完成，如不能按期完成监测，应由QC室主任将情况以书面形式汇报至品质保证部，经品质保证部经理批准后，予以重新安排。
4.3 将培养皿在121℃湿热灭菌30分钟或者180℃干热灭菌2小时。
4.4 将灭菌培养基加热熔化，冷至45-60℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml，待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
制备好的肉汤培养基平皿应保存在洁净的普通冰箱内，以2-8℃为宜，且应在2周内用完。
4.5 在监测前，应对被监测洁净区（室）消毒。
4.6 在空调净化系统正常运行30分钟后，在洁净区（室）内没有生产人员的情况下，监测人员穿戴好符合洁净级别要求的工作服，进入洁净区（不得多于二人）进行测试。
4.7 根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目，在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。
采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。
3.8将培养基表面暴露0.5小时后，收集培养皿，将培养皿倒置于恒温培养箱中，30-35℃培养48小时，每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿做对照培养，其中2只培养皿做阳性对照，1只培养皿做阴性对照。
4.9 达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在菌数计数器上点计，并用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
洁净区沉降菌培养检验操作规程管理⽂件⼀、⽬的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准⼆、适⽤范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC⼈员将复核的培养⽫转移⾄恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1⼩时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采⽤⼤⾖酪蛋⽩琼脂培养基配制的培养⽫时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采⽤沙⽒培养基配制的培养⽫时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度⼀次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1⽤⾁眼对培养⽫上所有菌落直接计数，专⼈复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时⼀般⽤透射光对培养⽫背⾯或正⾯仔细观察，不要漏记培养⽫边缘⽣长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，⽤显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进⾏记录，然后进⾏结果计算。
3.结果计算：3.1⽤计数⽅法得出各个培养⽫的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养⽫菌落数M——2号培养⽫菌落数2Mn——n号培养⽫菌落数N——培养⽫总数3.2结果评定：3.2.1⽤平均菌落数判断洁净室（区）空⽓中微⽣物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进⾏消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.⾮主要⼯作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试⼀次，动态测试频次为每⼀年测试⼀次。
洁净室沉降菌测试标准操作规程
5.1.3.2.动态测试洁净区已处于正常生产状态下进行的测试。
5.2.试准备5.2.1.仪器与设备5.2.1.1.培养皿：φ90mm×15mm，121℃20分钟湿执灭菌。
5.2.1.2.高压灭菌器、恒温培养箱处于完好状态。
5.2.1.3.制备采样皿：取已配制好的普通营养琼脂培养基，检查品名及使用期是否在规定期限内，外观性状是否有异常，确认无误后，将培养基放入水浴中熔化，冷却到约45℃时，在规定条件下高压蒸气灭菌，在超净工作台以无菌操作技术注入培养皿中，每皿约15ml，冷凝后倒置于30-35℃恒温培养箱培养48小时，无菌生长方可供采样用。
5.2.1.4.编号对培养皿按测定区域及个数进行编号。
编号前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现有质量问题的应以剔除。
5.2.1.5.根据洁净室房间多少及面积，计算所需的培养皿数。
5.3.测试5.4.采样将培养皿在各个测试洁净区域按附表1和附表2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖好。
5.5.培养全部采样结束后，取样员将培养皿和放置记录一并交化验室主任，化验室主任将培养皿交于检验员检测、检验员将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。
5.5.1.1.计数取出用肉眼计数，然后用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
5.6.记录按《沉降菌测试记录》填写。
5.7.结果计算计数各个培养皿的菌落数并求其平均值。
计算公式：M—平均菌落数M 1……Mi—分别为1号至I号培养皿菌落数6.2.3.可在关键设备或关键工作范围内增加采样点。
6.3.检测结束后，质量部发检测报告，将所有记录一并归档。
6.4.测定频次车间洁净（区）每3个月测一次；微生物限度检查室每周期测一次，其超净化工作台每次实验时同时测定；有净化要求的取样间或取样车每3个月测一次。
6.5.空气净化系统连续停运1周以上，经对房间进行消毒后测沉降菌。
附表3 ：平均菌落数标准洁净级别100级10000级100000级30000级平均标准1个/皿3个/皿10个/皿15个/皿。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。
3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。
洁净区沉降菌测定规程
1.目的:明确洁净区(室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区(室) 沉降菌的检验操作方法2.适用范围：洁净区(室) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。
3.责任者：质量控制部洁净区(室) 沉降菌检验操作人员车间QC检验操作人员。
4.操作内容和方法：4.1.定义：4.1.1菌落4.1.1.1细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用个数表示。
4.1.1.2 沉降菌⑴用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.2.应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。
4.2.1监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。
4.2.2动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。
成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。
4.2.3对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。
在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
4.2.4洁净区微生物监测的动态标准(1)如下：4.2.4.1表中各数值均为平均值。
4.2.4.2单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
4.3. 沉降菌测试操作方法：4.3.1洁净区沉降菌控制限度：4.3.2、测试操作方法：4.3.2.1本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3.2.2所用的仪器和设备⑴高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。
⑵恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
⑶培养皿：一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
⑷培养基：普通肉汤琼脂培养基（微生物限度检查法）或其他药典认可的培养基。
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程⽬的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试⽅法，指导沉降菌的测试⼯作。
范围适⽤于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任QC微⽣物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进⾏统计分析。
程序1.定义1.1.菌落：微⽣物培养后，由⼀个或⼏个微⽣物繁殖⽽形成的微⽣物集落，简称CFU。
1.2.沉降菌：通过⾃然沉降原理收集在空⽓中的活微⽣物粒⼦，通过专⽤的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常⽣产状态设备在指定的⽅式下进⾏，并且有指定的⼈员按照规范操作的状态。
2.测试⽅法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平⽫或者⾃制TSA平⽫。
2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其⽣产及⼯艺要求相适应（⽆特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.3.动态测试。
2.3.测试⽅法2.3.1.将准备好的培养⽫按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。
将采样台⾯取样位置或采样辅助设施表⾯消毒，打开培养⽫，将培养⽫盖置于已消毒位置，将培养⽫置于培养⽫盖上，使培养基表⾯充分暴露后，将培养⽫盖盖上后倒置。
2.3.2.在每⼀只培养⽫上标记好具体的取样位置及取样⽇期，将所有培养⽫在QC微⽣物室进⾏培养观察。
2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养⽫倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本⾝是否污染。
可每次选定2只培养⽫作对照培养。
2.5.计算2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养⽫菌落数M2＝2号培养⽫菌落数Mn＝n号培养⽫菌落数n＝培养⽫总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采⽤平均值。
洁净区沉降菌操作规程
洁净区沉降菌操作规程洁净区沉降菌操作规程1. 概述洁净区沉降菌操作规程是为了确保洁净区域内的空气质量符合规定标准而制定的。
洁净区是进行微生物检测和培养工作的重要区域，任何存在细菌或其他微生物的污染都可能对结果产生影响。
因此，严格遵守该操作规程对于保证数据的准确性和可靠性至关重要。
2. 操作人员要求2.1. 操作人员必须经过相关培训，了解并熟悉本操作规程的内容。
2.2. 操作人员应具备良好的个人卫生习惯，必须在进入洁净区前进行必要的清洁操作，如洗手、更换工作服等。
2.3. 操作人员在操作过程中应保持安静，避免尘埃、气流等对样品产生污染。
3. 设备要求3.1. 洁净区内的设备必须定期进行消毒和清洁，保证操作环境的洁净度。
3.2. 设备必须符合相关的规定标准，确保其在操作过程中不会对样品产生污染。
3.3. 洁净区内必须配备必要的检测设备，如微生物培养箱、无菌平板等。
4. 操作流程4.1. 操作人员必须穿戴好个人防护装备，包括面罩、手套和工作服等。
4.2. 操作人员应在工作台上摆放必要的试剂和培养基。
4.3. 操作人员在摆放试剂和培养基的过程中应避免尘埃和颗粒物的产生。
4.4. 操作人员在取样过程中应使用无菌工具，避免污染样品。
4.5. 操作人员在操作完成后应及时清理工作台和设备，保持洁净区的干净和整洁。
5. 质量控制5.1. 洁净区内的空气质量必须定期进行检测，确保其符合规定的标准。
5.2. 洁净区内进行的实验必须进行严格的质量控制，包括阳性对照和负性对照的设置等。
5.3. 实验结果必须进行正确的解读和记录，确保数据的准确性和可靠性。
6. 废弃物处理6.1. 操作人员在操作过程中产生的废弃物必须进行正确的分类和处置。
6.2. 废弃物应按照相关规定进行正确的包装和封存，并交由专门的机构进行处理。
6.3. 废弃物的处理过程中必须避免对环境造成二次污染。
7. 紧急情况应对7.1. 在发生紧急情况时，操作人员必须立即停止操作，并按照相关规定采取应急措施。
沉降菌检测标准操作规程
沉降菌检测标准操作规程(总4页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除沉降菌检验标准操作规程1.目的本文件规定了洁净室（区）中沉降菌检验的操作方法，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。
2.范围标准规定了医药工业洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室（区），无菌室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌测定。
本公司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次的检验。
3．职责QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；相关使用人员做好洁净室清洁维护工作。
4.内容4.1. 定义4.1.1.洁净室（区）对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.1.2.洁净工作台一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.1.3.洁净度洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.1.4.菌落细菌培养后，由一个或几个细菌系列而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.1.5.沉降菌用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见菌落数。
4.1.6.静态测试洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.1.7.动态测试洁净室（区）已处于正常状态下进行的测试。
4.2. 测试方法4.2.1.方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
沉降菌环境监测规程
洁净区（室）沉降菌监测操作规程1、目的:建立洁净区（室）沉降菌监测操作规程，以便准确监测，为药品生产环境条件符合规定要求提供保证。
2、适用范围：公司所有生产车间、微生物实验室、仓库取样室。
3、职责：现场QA人员、QC生物岗位人员4、定义：4.1沉降菌：由本方法收集到的活微生物粒子，通过专用培养基，在适宜的生产条件下，繁殖到可见的菌落数。
4.2菌落：细菌培养后，有1个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用个数表示。
5、规程内容：5.1人员要求5.1.1洁净区 (室)的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净区(室)测试的职责，其中包括涉及的卫生知识和基本微生物知识。
5.1.2洁净区 (室)的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进D级以上的区域。
5.2仪器、辅助设备与培养基5.2.1培养皿一般采用90*15规格的玻璃培养皿5.2.2电热恒温培养箱5.2.3培养基：一次性胰酪大豆胨琼脂成品培养基5.3测试要求5.3.1测试条件5.3.1.1温度和相对湿度的测试：洁净区(室)的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃-26℃.相对湿度在45%-65%为宜），同时应满足测试仪器的适用范围。
5.3.1.2压差的测定：洁净区与非洁净区之间.不同级别洁净区之间应当不低于10Pa，相同洁净区之间不同功能的房间要保持一定的梯度，一般不低于5Pa。
5.3.2测试状态5.3.2.1测试状态分为静态和动态两种；5.3.2.2静态测试时所有生产设备均已安装就绪，但未运行，室内测试人员不得多于2人。
5.3.2.3动态测试时，被测洁净区（室）应已处于正常生产状态下进行。
5.3.2.4应在记录报告中注明测试环境状态。
5.3.3测试时间5.3.3.1静态测试时，对单向流洁净区(室)而言，测试宜在净化空调系统正常运行时间不少于10分钟后开始。
洁净区环境沉降菌监测标准操作规程
依据：依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求
目的：建立洁净环境沉降菌监测标准操作规程
范围：生产车间洁净区、生测室
1．仪器与试剂：ф90×150玻璃培养皿、普通肉汤琼脂培养基
2．操作方法：
2.1将培养皿布置在有代表性的地方和气流扰动最小的地方，其最少采样点数目见下表：
洁净级别100000级
面积（㎡）‹10 10 20 40 100
采样点数 2 2 2 2 3
2.2在每一采样点处，不论面积大小应至少放2个培养皿。
3．采样方法及培养：将培养皿按要求位置放置后，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖盖上，然后在30-35℃的条件（可用恒温培养箱）培养48小时后计数。
4．结果计算：
M =ΣM
i n
式中：M为平均菌落数（CFU）
5．结果判定
洁净粒度级别沉降菌落数（CFU/皿） 100000级平均≤10
300000级平均≤15。
车间洁净区、冷库沉降菌检测操作规程
1目的检测车间洁净区、冷库沉降菌，验证车间消毒的有效性。
2范围100级、1万级，10万级，30万级车间洁净区和冷库。
3检验依据GB/T16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范4内容4.1方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境中的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度已达到验证车间消毒的有效性。
4.2仪器和设备：高压蒸汽灭菌锅恒温培养箱培养皿，¢90mm×15mm玻璃培养皿培养基，平板计数琼脂4.3准备操作4.3.1将¢90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
4.3.2按比例配置平板计数琼脂培养基，将其装入三角烧瓶，置于121℃湿热灭菌20min。
将加热溶化并冷却至46℃的培养基，在无菌操作要求下倒入培养皿，一般15ml～20ml/皿。
4.4采样点的布置：4.4.1采样点的布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置，布置规则如下图：4.4.2采样点数目：沉降法的最少采样点数可按表1确定。
表1 最少采样点数目面积m2洁净度级别100 1万10万/30万＜10≤≥≥10～＜20 ≥20～＜40 ≥40～＜100 ≥100～＜200 ≥200～＜400 ≥400～＜1000 ≥1000～＜2000≥2000 2～3481640801604008002224102040100200222236133263注：表面的面积：对于单向流洁净室，是指送风面积；对于非单向流洁净室是指房间的面积。
在满足最少采样点的同时，还应满足最少培养皿数，见表2。
表2 最少培养皿数洁净度级别所需¢90mm培养皿数（以沉降0.5h计）1001万10万/30万14 2 24.4.3工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
洁净区沉降菌测定操作规程
文件制修订记录一、目的：建立洁净区沉降菌测定操作规程，使操作标准化，规范化。
二、范围：各生产车间、化验室。
三、责任人：质控部检验员。
四、管理内容：1 标准依据：ISO14644-1,新版《药品生产质量管理规范》。
2 微生物监测的标准：为评估无菌生产的微生物状况，应对微生物进行动态监测，监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如：棉签擦拭法和接触碟法）等。
动态取样应避免对洁净区造成不良影响，对表面和操作人员的监测，应在关键操作完成后进行。
在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
2.1 微生物监测的动态标准洁净区微生物监测的动态标准如下：（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
3 测试方法3.1 方法概述本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
3.2 所用的仪器和设备3.2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器标准操作维修保养规程。
3.2.2 恒温培养箱定期对培养箱进行检定。
3.2.3 培养皿一般采用 90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
3.2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。
其配制方法见附录A（标准的附录）。
3.3 测试步骤3.3.1 采样方法将已制备好的培养皿按4.4.1的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
3.3.2 培养3.3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.3.2.2 在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
3.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
3.3.3 菌落计数3.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不得遗漏。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
洁净室沉降菌检测标准操作规程⒈目的：建立沉降检测的标准操作程序，用以规范员工的检测操作。
⒉范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌检测工作⒊责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
⒋检测依据： YY/T0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分，药品生物测定法。
⒌内容：5.1 设备：高压消毒锅、恒温培养箱；5.2 培养基及平皿制备：5.2.1 培养皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
5.2.2 培养基一般采用普通肉汤琼脂培养基或其它药典认可的培养基。
5.2.3 将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或于180℃干热灭菌2小时。
5.2.4 将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
5.2.5 待琼脂凝固后，将培养基平面倒置于30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平面上确无菌落生长，即可供采样用。
5.2.6 制备好的培养基平面宜在2～8℃的环境中存放。
5.3 采样点：5.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。
最少采样点数目5.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
5.3.3 测试标准洁净区微生物监控的静态标准(a)如下：洁净区微生物监控的动态标准(a)如下：5.4 测试规则5.4.1 测试状态5.4.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
5.4.1.2 沉降菌测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
5.4.1.3 测试状态有静态和动态二种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
1. 目的建立洁净室沉降菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。
2. 范围适用于洁净区沉降菌的检测。
3. 职责3.1质量部专职检验员负责洁净室沉降菌的检测。
3.2 质量监督员负责监督本规程的执行情况。
4. 内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。
4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
4.1.3仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。
4.2 检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。
制备好的培养基平皿在2～8℃的环境中存放。
4.3采样4.3.1 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
图1 采样点位置参考图4.3.2 采样次数对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点不得少于2个，每个采样点一般采样一次。
表2 最少培养皿数注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于非单向流洁净室，是指房间面积。
4.4采样注意事项4.4.1 测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。
4.4.2 采取一切措施，防止人为对样本的污染。
4.4.3对培养基、培养条件及其它参数做相应的记录。
4.4.4 计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别。
4.4.5采样前应仔细检验每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.5 测试状态空态、静态和动态三种状态均可进行测试。
空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。
确保静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态，动态测试时洁净室已处于正常生产状态。
测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
沉降菌检测规程
1目的通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。
2范围沉降菌检测3职责检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。
4程序4.1洁净（区）clean room(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.2洁净工作台cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.3洁净度cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.4菌落colony forming units细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.5沉降菌settling microbe用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow)沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。
4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow)具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
4.8静态测试at-rest test洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.9动态测试operational test洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。
见表1表1洁净室环境要求、测试项目和频次4.11检测流程4.11.1检测条件4.11.2检测仪器、设备、培养基恒温培养箱、蒸汽高压消毒锅、电热恒温干燥箱、百级超净工作台、Φ90mm×15mm培养皿、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
目的
制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试方法，指导沉降菌的测试工作。
范围
适用于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任
QC微生物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进行统计分析。
程序
1.定义
1.1.菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，
简称CFU。
1.2.沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培
养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态设备在指定的方式下进行，
并且有指定的人员按照规范操作的状态。
2.测试方法
2.1.测试过程
2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平皿或者自制TSA平皿。
2.2.测试条件
2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊
要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.
3.动态测试。
2.3.测试方法
2.3.1.将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约）。
将采样台
面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。
2.3.2.在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在
QC微生物室进行培养观察。
2.4.培养观察计数
2.4.1.全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养
箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每次选定
2只培养皿作对照培养。
2.5.计算
2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MN
N
M1＝1号培养皿菌落数
M2＝2号培养皿菌落数
Mn＝n号培养皿菌落数
n＝培养皿总数
2.5.2.结果判定
2.5.2.1.最终结果采用平均值。
但每个碟的菌落数亦不得多于标准规定。
2.5.2.2.如有一个碟的菌落数超过标准规定，平均却符合规定，也以不合格论。
2.5.2.
3.静态测试时，若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须
对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
2.6.注意事项
2.6.1.若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以
上菌落计数。
2.6.2.采取一切措施防止人为因素对样本的污染。
2.6.
3.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正
面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培
养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
2.6.4.采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔
除。
2.6.5.对于沉降菌测试，符合最少采样点数时，还必须符合最小培养皿数。
最
少采样点数与最少培养皿见附表。
2.7.日常监控
2.7.1.对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限和警戒限，以保证洁净室（区）的微
生物浓度受到控制。
应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，
并做趋势分析。
静态动态监控都可以采用此方法。
2.7.2.对于沉降菌的取样频次。
如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情
况后，也应确定其他项目的检测频次：
2.7.2.1.连续超过纠偏限和警戒限
2.7.2.2.停工时间比预计长
2.7.2.
3.关键区域内发现污染存在
2.7.2.4.在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修
2.7.2.5.日常操作记录反映出倾向性的数据
2.7.2.6.消毒规程的改变
2.7.2.7.引起生物污染的事故等
2.7.2.8.当生产设备有重大维修或增加设备时
2.7.2.9.当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时
2.8.洁净车间采样点分布图详见《洁净区洁净度监控管理规程》。
2.9.微生物实验室采样点分布图详见《微生物实验室环境测试规程》。
附图：最少采样点数目
沉降菌测试记录
编号：SOP-QC-002a-00
测试人：测试日期：测试时间：
测试依据：测试级别：级生化培养箱型号：编号：________________有效期至：__________________霉菌培养箱型号：_____________编号：________________有效期至：__________________培养基批号：来源：有效期至：__________________培养条件：
测试标准：
复核人：复核日期：。