水 中 细 菌 总 数 的 检 测
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
实验5 水中细菌总数的检测
实验五水中细菌总数的检测一、实验目的1.采用标准平皿法对水样中细菌作计数。
2.掌握微生物实验中无菌操作技术方法。
二、实验原理水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。
由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h 培养后所生长的菌落数。
一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。
三、材料和器皿1.培养基：营养琼脂培养基牛肉膏：3-5 g ；NaCl ：5 g ；蛋白胨：10 g ；琼脂：15-20 g；H2O ：1000 ml ；pH ：7.0-7.2.2.无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。
四、方法和步骤1.采集水样。
2.吸取10ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等)，注入罐有90ml无菌水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。
3.按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、l0-4。
4.营养琼脂培养基(用于河水样)倒平皿(厚度约2-3毫米，12毫升）水平放置至固化。
5.根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、l0-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿0.2 ml，用玻璃刮刀涂匀。
稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30～300个之间。
6.将培养皿倒置于37ºC 培养24h，可观察出明显菌落。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
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医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
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培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法近年来，随着水污染问题的加剧，水资源的保护和管理变得越来越重要，其中水中细菌总数检测是水质监测的重要指标之一。
本文将介绍几种新的水中细菌总数检测方法，以期为水质监测提供更加可靠和高效的手段。
1.高通量细菌量检测技术高通量细菌量检测技术可以同时检测多种细菌，检测速度快，可靠性高、检测方法简便。
它基于基因分析技术，将PCR技术与微孔板自动化操作技术相结合，通过多重PCR检测技术，可以在很短的时间内迅速检测出水样中的多种细菌，可以检测多达100种以上的微生物群体；与传统的培养基技术比较，减少了很多操作时间，而且可以避免细菌在营养基中生长的误差，大大提高了检测的准确性和精度。
2.荧光定量PCR技术荧光定量PCR技术是一种基于PCR技术的定量检测方法，通过特异载体或FAM（荧光素丙酸酯）依赖基因和所需定量基因并列进行扩增，可以快速、准确地测定样品中细菌的数量。
它将实时检测平台与计量分析相结合，具有检测速度快、精确、灵敏度高、标准化程度高等优点，被广泛应用于水质监测领域，是一种更为先进的具有优势的技术手段。
3.自动化细胞计数法自动化细胞计数法是一种新型的自动计数方法，基于图像处理技术和机器学习算法，同时识别并统计生长在液体中的微生物的数量和大小，具有操作简便、检测速度快、精度高、可靠性好等优点。
此方法不受培养基、肌红蛋白等耗时耗费的因素的影响，而且能够快速而准确地检测出微生物数量，对于微生物的定量和质量检测具有很高的应用价值和推广前景，已成为最具有前景的水中细菌检测技术之一。
虽然上述三种水中细菌总数检测方法在水质监测中得到了广泛应用，但仍存在一些局限性。
因此，在推广过程中需要结合实际情况，选择合适的检测方法，并根据需要进行优化，以实现更加科学、现代、高效、准确的水质监测。
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-
V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法
测定生活饮用水中细菌总数的一种方法是平皿计数法，本文将对这种方法进行详细介绍。
一、实验原理
平皿计数法是利用细菌在液体培养基表面生长成菌落的原理，通过计算菌落个数来确定水中的细菌总数。
二、实验步骤
1. 准备培养基，将培养基倒入无菌平皿中；
2. 取样，将水样取自自来水管道或自然水源中；
3. 稀释，将取样液进行10倍、100倍、1000倍稀释，分别将每份稀释液分别均匀分散在培养基表面，避免液滴残留；
4. 写标签，标注菌落计数的相关信息，例如样品名称、稀释倍数、菌落计数的日期等；
5. 培养，将培养皿放置在恒温培养箱中，设定温度为37℃，并在3-5天内进行观察和计数。
三、实验注意事项
1. 取样应避免超过24小时，以免菌群失去代表性；
2. 取用的平皿应事先灭菌处理，以避免外来细菌的污染；
3. 实验室应有专门的抽风设备、消毒液等清洁工具，以维持实验室的高度卫生。
通过以上三个步骤，我们就可以精确地测定出生活饮用水中细菌总数。
同时，这种方法也可以应用在其他领域，例如食品安全、环境监测等
方面。
但需要注意的是，实验过程中必须遵守实验室操作规程，以保
证实验结果的可靠性。
简要叙述水中细菌总数的测定步骤
水中细菌总数的测定步骤在环境监测和饮用水管理中，测定水中细菌总数是非常重要的一项工作。
它可以帮助我们了解水质的卫生情况，评估水是否符合生活饮用水标准，从而保障人们的健康。
那么，究竟应该如何测定水中细菌的总数呢？下面我将结合常用的方法，为大家详细介绍一下。
1. 收集水样我们需要准备好需要测定的水样。
这些水样可以来自自来水、地表水、井水或者其他水源。
在收集水样的过程中，需要注意使用无菌瓶或者消毒过的玻璃瓶，避免外界细菌的污染。
在收集水样的过程中，也需要避免使用含氯的消毒剂，以免对后续操作产生影响。
2. 制备稀释液收集好水样之后，接下来需要制备稀释液。
一般来说，我们会选择生理盐水或者蒸馏水作为稀释液的基质。
在制备稀释液的过程中，需要进行严格的无菌操作，以确保稀释液不会受到外界细菌的污染。
3. 进行稀释将收集到的水样加入到制备好的稀释液中，进行适当的稀释。
一般情况下，我们会选择进行多次等比稀释，以确保在测定范围内可以准确计数。
稀释完成后，需要进行摇匀，确保水样和稀释液充分混合。
4. 填充平板接下来，我们需要将稀释后的水样填充到已经准备好的平板上。
填充平板的过程中，需要采用无菌技术，避免细菌污染。
填充完成后，需要在平板上进行横向和纵向的晃动，以确保水样均匀分布在平板表面。
5. 孵育培养填充好水样的平板需要置于培养箱中进行孵育。
一般情况下，会选择在35-37摄氏度下进行孵育，孵育的时间一般为24小时。
在孵育过程中，需要注意防止平板干燥，以免影响细菌的生长。
6. 计数和分析经过孵育后，我们可以观察到在平板上形成的菌落。
这时候就需要进行计数和分析了。
一般来说，我们会选择菌落计数板或者显微镜进行观察和计数。
通过计数和分析，我们就可以得到水样中细菌的总数。
测定水中细菌总数的步骤主要包括收集水样、制备稀释液、进行稀释、填充平板、孵育培养和计数分析。
这些步骤需要严格遵守无菌操作和实验室安全规范，以确保测定结果的准确性和可靠性。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。
2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。
所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。
3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。
采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。
大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。
4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。
②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。
4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
水质菌落总数检测方法
水质菌落总数检测方法一、引言水质菌落总数是评估水体卫生质量的重要指标之一，它能够反映水体中细菌的数量，进而判断水质是否合格。
因此，准确测定水质菌落总数对于保障水源安全、防止水传播疾病具有重要意义。
1. 培养法培养法是目前最常用的水质菌落总数检测方法之一。
其基本原理是将水样涂布在含有营养物质的琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间，观察并计数菌落的数量。
这种方法简单易行，可以检测各种类型的细菌，但需要较长的时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
2. 膜过滤法膜过滤法是一种快速测定水质菌落总数的方法。
其原理是将水样通过一块细孔膜滤膜，过滤掉水中的微生物，然后将滤膜放置在含有营养物质的琼脂平板上进行培养。
菌落在滤膜上生长并形成可见的斑点，通过计数斑点的数量来测定水质菌落总数。
相比于培养法，膜过滤法缩短了检测时间，通常只需要6-12小时即可得到结果。
3. 流式细胞仪法流式细胞仪法是一种高效准确的水质菌落总数检测方法。
它利用光散射和荧光染色技术，将水样中的微生物分为不同的群体并进行计数。
流式细胞仪能够快速检测大量样品，并提供详细的菌落分布数据，具有高灵敏度和准确性。
但是，流式细胞仪法的设备较为昂贵，需要专业操作人员进行操作。
4. PCR法PCR法是一种基于DNA扩增的水质菌落总数检测方法。
它利用特定的引物和酶，在聚合酶链反应的条件下，扩增水样中细菌的DNA片段。
通过测定扩增产物的数量，可以间接测定水质菌落总数。
PCR 法具有高灵敏度和高特异性，并且可以快速得到结果，但需要专业的实验室设备和技术支持。
三、不同方法的优缺点比较1. 培养法的优点是操作简单，可以检测不同种类的细菌。
缺点是需要较长时间，无法实时监测水质。
2. 膜过滤法的优点是快速，可以在较短时间内得到结果。
缺点是只能检测活菌，对于耐热菌等特殊菌种的检测效果较差。
3. 流式细胞仪法的优点是高效准确，可以实时监测水质。
缺点是设备昂贵，需要专业操作人员。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。
6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。
43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测
POPULAR SCIENCE大众科普近年来，上海建科检验微生物实验室参加了由中国国家认证认可监督管理委员会组织的、中国检验检疫科学研究院测试评价中心负责实施的饮用水中微生物的检测能力验证。
能力验证是指利用实验室间比对来确定实验室检测/校准能力的活动，它是确保实验室维持较高的校准和检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动[1]。
为了提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，并顺利通过国家组织的能力验证考核，上海建科检验微生物实验室从“人、机、料、法、环、测”几个方面，制定了一份全新的符合检测项目考核的实施方案，并最终顺利通过了能力验证考核。
本文就如何提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，制定特殊方案，以及解决能力验证考核过程中遇到的难点。
1 细菌总数和总大肠菌群检测方案1.1 明确岗位职责（1）在检测项目考核前，对仪器设备做好调试，确保状态稳定。
（2）在检测项目考核过程中，时刻做好自身安全的防护，检查冲眼器和冲淋器能否使用，并在试验结束后做好试验场所消杀工作。
（3）检测人员必须仔细地填写数据和原始记录，确保出具的结果准确无误。
作者简介：吴丽萍，工程师，主要研究方向为环境工程检测。
对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测吴丽萍上海建科检验有限公司，上海 201108科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION样和上述稀释度的水样1 mL 分别注入灭菌平板内，且做平行样。
倾注约12～15 mL 营养琼脂，并立即旋摇平板，使水样和培养基充分混匀。
同时，做空白对照。
在36 ℃±1 ℃的培养箱中，培养48 h [3]。
检测计数时，可用眼睛直接观察，或用放大镜检查，以防遗漏。
选择适当 稀释倍数的平板，读取菌落数量，求出同稀释度的平均菌落数[4]。
表2 生活饮用水样品中细菌总数检测实验操作（3）总大肠菌群检测实验操作（多管发酵法）[5]在做总大肠菌群检测实验操作（表3）时，先用10 mL 无菌移液管吸取待测样品到双料乳糖蛋白胨，再用1 mL 无菌移液管吸取待测液到10 mL 单料乳糖蛋白胨。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定一、实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水的平板菌落技术的原则。
二、实验材料1、无菌培养皿、无菌吸管、无菌锥形瓶、无菌水（每管有9mL灭菌过的自来水）2、营养琼脂培养基（已灭菌的）3、酒精灯、恒温箱（培养箱）等。
三、实验步骤1、平板的制作1）将无菌培养皿编号0、1、2、3。
其中0#培养皿作为空白对照，1、2、3#培养皿作为平行实验。
2）另取一支1mL的无菌吸管从自来水中吸取1mL水样注入灭菌培养皿中。
每次吸取时，吸管都应在水样中反复吸洗几次，其中0#培养皿中不注入水样，只倾注营养琼脂培养基作空白对照。
3）在每个灭菌培养皿中倾注15mL（每一个培养皿内加入的培养基量需根据培养皿的大小决定，以能使培养皿底部铺满培养基而形成厚约2~3mm的薄层为适当）已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基（温度不可过高，否则微生物容易被烫死；温度过低，培养基容易凝固，平板不平。
如果经验不足，可以将培养基瓶置于45℃水浴锅中降温，但所需时间较长），倾入后迅速盖上皿盖，平放桌上，轻轻转动，使培养基和水样充分混合均匀，冷却后，即成平板。
4）待冷却凝固后，翻转平皿，使底面朝上，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱内培养24小时，观察有无菌落长出，并进行计数，即为1mL水样中细菌总数。
培养皿所以要倒置是为了防止培养基内水分蒸发到皿盖上而使皿盖变干。
2、菌落计数及报告方法作培养皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落计数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同一稀释度的平均计数时，若其中一个平皿优较大片状菌落生长，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半菌落数分布又很均匀，则可将此半平皿计数后乘以2以代表全皿菌落数。
四、实验结果（我国应用水的卫生学指标：在1mL自来水中细菌总数不得超过100个）平板菌落数1mL自来水中细菌总数1#2#3#。
生活饮用水中菌落总数检测与能力验证分析
分析检测生活饮用水中菌落总数检测与能力验证分析李艳飞，孙祖丽（防城港市检验检测中心，广西防城港 538021）摘 要：依据《生活饮用水标准检验方法微生物指标》（GB/T 5750.12—2006）对饮用水能力验证中盲样的菌落总数进行测定和计数，并进行实验室能力验证。
结果表明，本次能力验证检测中，A和B样品生活饮用水的菌落总数分别为840 CFU·mL-1和290 CFU·mL-1，其Z值分别为0.1和-0.3，评定结果为合格。
该实验可为生活饮用水菌落总数结果测量及能力验证提供参考。
关键词：生活饮用水；菌落总数；能力验证Detection and Ability Verification Analysis of Total Number ofColonies in Drinking WaterLI Yanfei, SUN Zuli(Fangchenggang Inspection and Testing Center, Fangchenggang 538021, China) Abstract: According to GB/T 5750.12—2006, the total bacterial count of blind samples in the validation of drinking water capacity was measured and counted, and laboratory capacity validation was conducted. The results showed that in this proficiency test, the total number of bacterial colonies in the drinking water of samples A and B were 840 CFU·mL-1 and 290 CFU·mL-1, respectively, with Z values of 0.1 and -0.3, indicating satisfactory results. This experiment can provide reference for measuring the total number of bacterial colonies in drinking water and verifying their ability.Keywords: drinking water; total number of colonies; proficiency testing生活饮用水是我国居民日常饮食的基础保障，与人们的生活息息相关。
水 中 细 菌 总 数 的 检 测
水中细菌总数的检测之吉白夕凡创作一、二、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性.二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中, 于37℃经24h培养后, 所生长的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染水平的主要卫生指标.我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染, 但不能说明污染的来源.因此必需结合总年夜肠菌群数来判断水污染的来源和平安水平.本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数.由于水中细菌种类繁多, 它们对营养和其他生长条件的要求分歧很年夜, 不成能找到一种培养基在一种条件下, 使水中所有的细菌均能生长繁殖, 因此, 以一定的培养基平板上生长出来的菌落, 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.目前一般是采纳普通牛肉膏卵白胨琼脂培养基.平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数.此法经常使用于某些制品和生物制品检定以及食品、水源的污染水平的检定等.缺点：手续较繁, 而且测定值常受各种因素的影响.生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤ 3个年夜肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和资料1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间.2、消鸩酒精、消毒水.3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处置好备用）4、培养基卵白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备方法：依照实际的需要量, 按上述配方称取各成份混合后, 加热溶解, 调整pH为, , 分装于玻璃容器中, 用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min, 倒制成平板后贮存于冷处备用.5、水样：自来水、中水.四、实验内容：（一）、培养基的制备：实验前事先准备好培养基平板（方法见上）, 每小组2-4个平板.（二）、取水样：1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭, 再用酒精灯火焰灭菌, 翻开龙头放水1-2分钟, 用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2、纯洁水取样：用消鸩酒精棉擦拭纯水机出口后, 先放走部份水, 再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样, 先将灭菌的带玻璃塞瓶, 瓶口向下浸入水中, 然后翻转过来,除去玻璃塞, 水即流入瓶中, 盛满后, 将瓶塞盖好, 再从水中取出, 最好立即检查, 否则需放入冰箱中保管.（三）、接种培养：（要求无菌把持）用无菌吸管吸取1毫升水样, 加入平板中（每个水样平行做两个平板）, 用无菌涂布器涂抹均匀, 在培养皿正面标注清楚后, 置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后, 统计细菌菌落的总数.（四）、菌落记数：菌落计数及陈说方法作平皿菌落计数时, 可用眼睛直接观察, 需要时用放年夜镜检查以防遗漏.在记下各平皿的菌落数后, 应求出同稀释度的平均菌落数, 供下一步计算时应用.在求同稀释度的平均数时, 若其中一个平皿有较年夜片状菌落发生时, 则不宜采纳, 而应以无片状菌落发生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半, 而其余一半中菌落数分布又很均匀, 则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五、实验注意事项六、实验陈说内容；1、记录实验方法和步伐.2、列表说明检测结果.（1）自来水（2）饮用水3、思考题：（1）从自来水的细菌总数结果来看, 是否合乎饮用水的标准？（2）你所测的水样污秽水平。
水中细菌总数的测定
琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，
放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻
璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微 生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水 滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37度培养箱中培养24h。
一.实验目的：
1.学习水样的采取方法和水样细菌 总数测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原 则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细 菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其 他生长条件的要求差别很大，不可能找到 一种培养基在一种条件下，使水中所有的 细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养 基平板上生长出来的菌落，计算出水中细 菌总数仅是一种近似值。
2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用
烧杯接取自来水。
3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连 续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混 匀）、自来水样不稀释。
注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入 9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河 水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。
目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂 培养基，采用平板菌落计数技 术来分别测定自来水和河水中 的细菌总数。
三、实验操作
1.水体取样： 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌
的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转 过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出。
实验十一水中细菌总数的测定
根据菌落计数结果，计算每毫升水样中的细菌总数。计算公式 为：细菌总数（cfu/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体 积。同时，计算标准差和变异系数，评估结果的可靠性。
04 实验结果与数据分析
菌落形态描述及数量统计
菌落形态
在培养皿中观察到不同形态的菌落， 包括圆形、不规则形状等。菌落表面 光滑或粗糙，颜色也有所不同，从白 色到黄色不等。
结果分析与讨论
结果分析
根据实验结果，可以对水样中的细菌总数进行评估。如果细菌总数超过了相应的卫生标准，则说明水 样受到了污染，需要采取相应的措施进行处理。
结果讨论
在实验过程中，可能会受到一些因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。这些因素可能会导致实验 结果的偏差。因此，在讨论实验结果时，需要考虑这些因素的影响，并对实验结果进行合理的解释和 讨论。同时，也可以提出改进实验方法的建议，以提高实验的准确性和可靠性。
时一般采用平板计数法，选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，
以确保结果的准确性。
03 实验步骤与操作
样品稀释与接种
样品稀释
取1mL水样，加入9mL无菌水中，充分混匀，得到10^-1稀释液。以此类推， 制备10^-2、10^-3等稀释液。
接种
分别取不同稀释度的水样1mL，倾注于无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样。 同时，以无菌水作空白对照。
计数误差
在细菌计数过程中，可能因计数不准确或视野选择不当导 致误差。为减小误差，应采用合适的计数方法，如平板计 数法，并选择具有代表性的视野进行计数。
提高实验准确性的建议
严格控制实验条件
在实验过程中，应严格控制温度、湿 度、光照等实验条件，确保实验结果 的准确性和可重复性。
水中细菌总数和大肠杆菌检测
（EMB）、牛肉膏蛋白胨培养基
四、实验步骤-细菌总数测定
1.以1ml无菌吸管吸取样品1ml加入9ml 无菌生理盐水， 使样品（自来水、饮用水、饮料等）成 1：10 、1： 100 、1：1000 等几个稀释度；样品（下水道水、牛 奶）稀释度要适当高。 2.分别在无菌平皿内加入1：100、1：10、原样的样品 各1ml，每个稀释度均做一个平板。 注意 ：先加浓度低的样品，再加浓度高的样品 3.将冷却45℃的营养琼脂倾注于平皿中，摇匀，置37 ℃培养24小时。
3
2,890
271 60
2.2 27，100 27，000或2.7×104
4
不可计 4，650 513
— 513，000 510，000或5.1 ×105
5
27 11 5 —
270
270或2.7 ×102
6Leabharlann 不可计 305 12— 30，500 31，000或3.1 ×104
7
不可计 不可计 不可计 —
200
70
890
2
1
2
270
2
1
3
340
2
2
0
210
40
470
2
2
1
280
100
1500
2
2
2
350
2
2
3
420
2
3
0
290
2
3
1
360
2
3
2
440
2
3
3
530
3
0
0
230
40
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水中细菌总数的检测
一、实验的目的要求
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
二、实验原理
细菌总数就是指1ml水样在营养琼脂培养基中,于37℃经24h培养后,所生长的细菌菌落的总数。
细菌总数就是评价水质污染程度的主要卫生指标。
我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定就是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。
所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染,但不能说明污染的来源。
因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源与安全程度。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多,它们对营养与其她生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅就是一种近似值。
目前一般就是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
平板菌落计数法的优点:
能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品与生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
缺点:手续较繁,而且测定值常受各种因素的影响。
生活饮用水细菌卫生标准
我国饮用水卫生标准:
≤3个大肠菌群/1L饮水, ≤100个细菌总数/1ml饮水
三、实验仪器与材料
1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。
2、消毒酒精、消毒水。
3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等(实验前包扎灭菌处理好备用)
4、培养基
蛋白胨10g 牛肉膏3g 氯化钠5g 琼脂10~20g 蒸馏水1000ml 制备方法:
按照实际的需要量,按上述配方称取各成分混合后,加热溶解,调整pH为
7、4~7、6,,分装于玻璃容器中,用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min,倒制
成平板后储存于冷处备用。
5、水样: 自来水、中水。
四、实验内容:
(一)、培养基的制备:
实验前事先准备好培养基平板(方法见上),每小组2-4个平板。
(二)、取水样:
1、自来水的取样:先将自来水龙头用酒精棉擦拭,再用酒精灯火焰灭菌,
打开龙头放水1-2分钟,用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
2、纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后,先放走部分水,再用无菌
空三角瓶接取水样200毫升。
3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃
塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛
满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保
存。
(三)、接种培养:(要求无菌操作)
用无菌吸管吸取1毫升水样,加入平板中(每个水样平行做两个平板),用无菌涂布器涂抹均匀,在培养皿侧面标注清楚后,置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后,统计细菌菌落的总数。
(四)、菌落记数:
菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时,可用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时,若其中一个平皿有较大片状菌落产生时,则不宜采用,而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的平均菌落数。
五、实验注意事项
六、实验报告内容;
1、记录实验方法与步骤。
2、列表说明检测结果。
(1)自来水
(2)饮用水
3、思考题:
(1)从自来水的细菌总数结果来瞧,就是否合乎饮用水的标准？
(2)您所测的水样污秽程度。